本發(fā)明涉及一種新型甾族化合物及其在治療中的用途，例如在治療肝性腦病、唐氏綜合征、阿爾茨海默病和一般性認(rèn)知功能障礙中的用途，以及包含所述化合物的藥物組合物。本發(fā)明還涉及已知的甾族化合物在治療肝性腦病、唐氏綜合征和阿爾茨海默病中的用途。
背景技術(shù)：
在本說(shuō)明書中列出或討論明顯先前公開的文件當(dāng)然不應(yīng)被認(rèn)為是承認(rèn)該文件是現(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)的一部分或者是一般常識(shí)。
內(nèi)源性類固醇激素如孕烷醇酮(包括孕烯醇酮、孕酮、脫氧皮質(zhì)酮、可的松和皮質(zhì)醇)、睪酮、雄烯二酮和脫氫表雄甾酮的代謝物，已成為各種研究的對(duì)象。
已知3-α-羥基-5-α/β-類固醇的許多實(shí)例作用于γ-氨基丁酸受體-氯離子載體(gabaa-r)復(fù)合物并因此被稱為gabaa受體調(diào)節(jié)類固醇(gams)。由于gabaa-r復(fù)合物的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性，在受體位點(diǎn)的相互作用機(jī)制尚未得到充分闡明。然而，gaba受體家族包括幾個(gè)亞基組分，其中一些已知與cns的特定功能和病癥有關(guān)。
3-α-羥基-5-α/β-類固醇在數(shù)天/周內(nèi)大量產(chǎn)生，并且可以直接造成cns功能的抑制。由3-α-羥基-5-α/β-類固醇的直接作用引起的病癥和癥狀的實(shí)例包括經(jīng)前煩躁癥，經(jīng)前綜合征，癡呆癥，阿爾茨海默病，唐氏綜合征，鎮(zhèn)靜，疲倦，慢性疲勞綜合征，記憶障礙，學(xué)習(xí)障礙，運(yùn)動(dòng)功能障礙，骨折，笨拙，食欲和食物渴求增加，肥胖癥，酒精或藥物濫用復(fù)發(fā)，消極情緒如緊張、煩躁不安、抑郁，聽(tīng)力和視力下降，小癲癇發(fā)作(petitmalepilepsy)惡化和心身耗竭綜合征。
連續(xù)和/或長(zhǎng)期暴露于3-α-羥基-5-α/β-類固醇導(dǎo)致在gabaa受體系統(tǒng)中產(chǎn)生耐受性。這種耐受性是可能最終導(dǎo)致應(yīng)激敏感性、注意力集中困難以及喪失沖動(dòng)控制和抑郁的過(guò)程中的第一步。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)3-α-羥基-5-α/β-類固醇的作用是增強(qiáng)藥物依賴性的因素。
另一方面，連續(xù)但較短期的暴露導(dǎo)致當(dāng)暴露終止時(shí)的戒斷作用。例如在月經(jīng)期間，當(dāng)卵巢黃體的3-α-羥基-5-α/β-類固醇產(chǎn)生中斷時(shí)，發(fā)生這種現(xiàn)象。這種戒斷現(xiàn)象也發(fā)生在分娩后當(dāng)其通過(guò)胎盤的產(chǎn)生中斷時(shí)，或者在應(yīng)激期結(jié)束時(shí)(在應(yīng)激期間腎上腺產(chǎn)生3-α-羥基-5-α/β-類固醇)。
受這種戒斷和/或禁戒影響的病狀的實(shí)例包括部分性癲癇、“月經(jīng)性癲癇”、偏頭痛、情緒變化和“周末”頭痛。
gabaa受體是一種氯離子通道并且通過(guò)改變穿過(guò)所述通道的氯離子流入而發(fā)揮作用。本領(lǐng)域已知當(dāng)gabaa受體開放并且大量的氯離子流入細(xì)胞時(shí)，腦中的神經(jīng)元活性降低。還已知氯離子移入量與gabaa受體活性藥物的臨床效果之間存在關(guān)系。
苯二氮卓類、巴比妥類和在一定程度上的酒精經(jīng)由這種機(jī)制發(fā)揮作用。然而，這也造成了這些藥物的不利作用。
gabaa受體的一個(gè)問(wèn)題是它在大腦的大部分部位發(fā)揮作用。鑒于此，gaba作用的完全阻斷劑是危險(xiǎn)的，并且可能導(dǎo)致精神病性癥狀和抽搐。也就是說(shuō)，當(dāng)3-α-羥基-5-α/β-孕甾烷-類固醇的作用被拮抗時(shí)，需要使用特異性拮抗3-α-羥基-5-α/β-孕甾烷-類固醇作用而不拮抗gaba本身的作用的化合物。
因此，本發(fā)明致力于解決提供能夠阻斷gaba受體的特異性藥劑的問(wèn)題，所述化合物因此可用于治療gaba受體或與gaba受體相關(guān)的其它神經(jīng)遞質(zhì)的激發(fā)中的異常。
國(guó)際專利申請(qǐng)wo2008/063128公開了3-α-羥基類固醇和3-β-羥基類固醇。國(guó)際專利申請(qǐng)wo99/45931公開了類固醇3-β-oh-5α-孕甾烷-20-酮的拮抗作用。國(guó)際專利申請(qǐng)wo03/059357公開了3-β-羥基類固醇及其對(duì)gabaa受體的拮抗作用。
美國(guó)專利us5,232,917、us5,925630、us5,939,545、us6,143,736和us6,277,838公開了作為gabaa受體的激動(dòng)調(diào)節(jié)劑的3-α-羥基類固醇和3-β-羥基類固醇，其中特別關(guān)注于3-α-羥基類固醇及其苯二氮卓類似作用。在美國(guó)專利申請(qǐng)us2004/0242549中，公開了多種類固醇。
wang等(《斯堪的納維亞生理學(xué)報(bào)(actaphysiol.scand.)》,169,334(2000)和《神經(jīng)科學(xué)雜志(j.neurosci.)》,22,3366(2002))討論了3-β-oh-5-α-孕甾烷-20-酮和其它3-β-oh-5-α/β孕甾烷-類固醇的拮抗作用。
包括上述那些的現(xiàn)有技術(shù)化合物對(duì)于某些gabaa-r亞型不具特異性。因此，需要對(duì)受體亞型更具選擇性的化合物。
另外，現(xiàn)有技術(shù)和天然存在的類固醇經(jīng)歷代謝，通常不適合于口服施用，并且通常具有不良滲透性。這使得施用這些化合物非常困難。因此，還需要在體內(nèi)不太容易代謝/降解和/或具有改善的滲透性/生物利用度的化合物。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
我們發(fā)現(xiàn)化合物3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟可以充當(dāng)gabaa受體的拮抗劑，并且可以通過(guò)調(diào)節(jié)gabaa-r復(fù)合物的類固醇增強(qiáng)，例如通過(guò)調(diào)節(jié)gams信號(hào)傳導(dǎo)作用作為gaba受體亞基α5的拮抗劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。
根據(jù)本發(fā)明，提供了化合物3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述化合物和鹽在下文中統(tǒng)稱為“本發(fā)明化合物”。
藥學(xué)上可接受的鹽包括酸加成鹽和堿加成鹽。
這樣的酸加成鹽和堿加成鹽可通過(guò)常規(guī)方法形成，例如通過(guò)將式i化合物的游離酸或游離堿形式與一個(gè)或更多個(gè)當(dāng)量的適當(dāng)?shù)乃峄驂A任選地在溶劑中或在使鹽不溶的介質(zhì)中反應(yīng)，接著使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(例如在真空中，通過(guò)冷凍干燥或通過(guò)過(guò)濾)除去所述溶劑或所述介質(zhì)。也可以通過(guò)例如使用合適的離子交換樹脂使呈鹽形式的本發(fā)明化合物的抗衡離子與另一種抗衡離子進(jìn)行交換來(lái)制備鹽。
可提及的酸加成鹽的實(shí)例包括羧酸鹽(例如甲酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、異丁酸鹽、庚酸鹽、癸酸鹽(decanoate)、癸酸鹽(caprate)、辛酸鹽、硬脂酸鹽、丙烯酸酯、己酸鹽、丙炔酸鹽、抗壞血酸鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、羥乙酸鹽、α-羥基丁酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、苯乙酸鹽、扁桃酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、鄰乙酰氧基苯甲酸鹽、水楊酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、肉桂酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、蘋果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、羥基馬來(lái)酸鹽、馬尿酸鹽、鄰苯二甲酸鹽或?qū)Ρ蕉姿猁})，鹵化物鹽(例如氯化物、溴化物或碘化物鹽)，氫鹵酸鹽(例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽或氫碘酸鹽)，磺酸鹽(例如苯磺酸鹽、甲基苯磺酸鹽、溴苯磺酸鹽或氯苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、丙磺酸鹽、羥基乙磺酸鹽、1-萘磺酸鹽或2-萘磺酸鹽或者1,5-萘二磺酸鹽)，或硫酸鹽，焦硫酸鹽，硫酸氫鹽，亞硫酸鹽，亞硫酸氫鹽，磷酸鹽，磷酸一氫鹽，磷酸二氫鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽或硝酸鹽等。
可提及的堿加成鹽的實(shí)例包括與酸如hcl、堿金屬(例如na和k鹽)、堿土金屬(例如mg和ca鹽)、有機(jī)堿(例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇和賴氨酸)和無(wú)機(jī)堿(例如氨和氫氧化鋁)形成的鹽。更具體地，可提及的堿加成鹽包括mg鹽、ca鹽，更特別是k鹽，最特別是na鹽。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟鹽酸鹽。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟鈉鹽。
本發(fā)明的化合物可例如如下文所述來(lái)制備。
醫(yī)藥用途
本發(fā)明化合物被指示為藥物。因此，根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了如上文所定義的化合物，其用作藥物和/或用于療法中，例如在醫(yī)學(xué)中。
如下文所述，令人驚奇地表明，本發(fā)明的化合物當(dāng)單獨(dú)施用于含有α1,β2,γ2的gabaa受體時(shí)，可增強(qiáng)gaba在含有亞基組成α1,β2,γ2的gabaa受體中的作用，同時(shí)自身對(duì)氯離子通量沒(méi)有直接影響。
特別是，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物可增強(qiáng)gaba對(duì)α1,β2,γ2受體的作用，而同時(shí)是α5,β3,γ2受體的拮抗劑。令人驚奇的是，當(dāng)在通過(guò)3-α-羥基-孕甾烷-類固醇誘導(dǎo)的hek細(xì)胞(人類胚胎腎，hek)中重組表達(dá)時(shí)，用3-α-羥基-孕甾烷-類固醇和本發(fā)明化合物同時(shí)處理可抑制通過(guò)人類α5型gabaa受體的氯離子通量，但對(duì)僅gaba誘導(dǎo)的氯離子通量影響較小。
此外已發(fā)現(xiàn)，該作用可以在藥理學(xué)和生理學(xué)上合適的濃度下實(shí)現(xiàn)。
因此，由于本發(fā)明的化合物可能會(huì)阻斷3-α-羥基-孕甾烷-類固醇對(duì)人類gabaa受體的作用，因此它們可能通常在人類受試者中用于治療類固醇相關(guān)cns病癥。
“類固醇相關(guān)cns病癥”包括癲癇、月經(jīng)周期依賴性癲癇、抑郁癥、應(yīng)激相關(guān)抑郁癥、偏頭痛、疲倦并且特別是應(yīng)激相關(guān)疲倦、經(jīng)前綜合征、經(jīng)前煩躁癥、月經(jīng)周期相關(guān)情緒變化、認(rèn)知功能障礙(包括輕度認(rèn)知功能障礙)、月經(jīng)周期相關(guān)記憶變化、應(yīng)激相關(guān)記憶變化、應(yīng)激相關(guān)學(xué)習(xí)困難、肝性腦病、唐氏綜合征、阿爾茨海默病、月經(jīng)周期相關(guān)注意力集中困難、月經(jīng)周期相關(guān)睡眠障礙和疲倦。還有強(qiáng)烈的跡象表明，肥胖和食欲增加，以及酒精和/或藥物濫用的復(fù)發(fā)，某些形式的平衡紊亂/障礙、時(shí)刻障礙(momentdisorder)和協(xié)調(diào)困難也與類固醇相關(guān)或是類固醇誘導(dǎo)的，并且“類固醇相關(guān)cns病癥”因此還包括食欲增加，暴食和肥胖，酒精和藥物濫用復(fù)發(fā)。因此，本發(fā)明提供了用于治療、減輕或預(yù)防這些病狀的化合物和方法。
可能具體提及的病癥包括唐氏綜合征和阿爾茨海默病，特別是肝性腦病。
肝性腦病可能表現(xiàn)為如下癥狀和/或以如下癥狀為特征，所述癥狀包括睡眠-覺(jué)醒周期、認(rèn)知、記憶、學(xué)習(xí)、運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)和/或意識(shí)中的一種或多種的障礙，以及能量水平降低、個(gè)性變化、認(rèn)知功能障礙、定向力障礙和/或昏迷，并且包括a型肝性腦病、b型肝性腦病、c型肝性腦病、輕微型肝性腦病和顯性肝性腦病。
“a型肝性腦病”通常是指與急性肝衰竭相關(guān)，通常與腦水腫相關(guān)的肝性腦病。
“b型肝性腦病”通常是指由門-體分流引起而無(wú)相關(guān)內(nèi)在性肝病的肝性腦病(旁路)。
“c型肝性腦病”通常是指在肝硬化患者中發(fā)生的肝性腦病。這種類型通常細(xì)分為“發(fā)作型”、“持續(xù)型”和“輕微型”肝性腦病。
“輕微型肝性腦病”通常是指不會(huì)導(dǎo)致臨床上明顯的認(rèn)知功能障礙但可以用神經(jīng)心理學(xué)研究證實(shí)的肝性腦病。
“顯性肝性腦病”通常是指表現(xiàn)為具有大量精神和運(yùn)動(dòng)障礙的神經(jīng)精神綜合征的臨床上明顯的肝性腦病。顯性肝性腦病可能在先前穩(wěn)定的患者或可能呈現(xiàn)持續(xù)的神經(jīng)精神異常的患者中在數(shù)小時(shí)或數(shù)天的時(shí)期內(nèi)間歇性發(fā)作。
除了上述以外，盡管大多數(shù)肝移植手術(shù)使用來(lái)自其它方面健康的死亡供體的肝臟，但肝臟也可能來(lái)自活的供體(健康人肝臟的一部分)。具有例如肝硬化的患者通常經(jīng)歷肝性腦病和術(shù)前肝性腦病，這是移植后神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥的重要預(yù)測(cè)因素。在將要進(jìn)行肝移植的患者中治療肝性腦病包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
術(shù)語(yǔ)“高氨血癥”通常是指以血液中的氨進(jìn)入為特征的代謝紊亂。
術(shù)語(yǔ)“急性或慢性肝衰竭”通常是指肝硬化急性代償失調(diào)，至少一種器官衰竭，或?qū)儆诙唐谒劳雎矢叩膩喗M。
術(shù)語(yǔ)“失代償性肝硬化”通常意在包括具有一系列臨床證據(jù)如黃疸、腹水、水腫、肝性腦病、胃腸道出血、門靜脈高壓、細(xì)菌感染或其任何組合的晚期肝硬化。它與“代償性肝硬化”形成對(duì)照，“代償性肝硬化”通常是指沒(méi)有任何臨床證據(jù)但可能包括無(wú)癥狀食管或胃靜脈曲張以及早期癥狀如疲勞和缺乏活力、食欲不振和體重減輕、惡心或腹部疼痛的肝硬化。
術(shù)語(yǔ)“門靜脈高壓”通常是指肝硬化后的肝靜脈壓力梯度，其中存在或不存在相關(guān)的經(jīng)頸靜脈肝內(nèi)門體分流(tips)。
本發(fā)明的化合物指示用于治療性和/或預(yù)防性治療所有上述病狀。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種治療如上文所提及的類固醇相關(guān)cns病癥的方法，所述方法包括向需要這種治療的患者施用藥學(xué)上有效量的本發(fā)明化合物。
此外提供了一種治療和/或預(yù)防類固醇相關(guān)或類固醇誘導(dǎo)的記憶和學(xué)習(xí)障礙、認(rèn)知功能障礙、癡呆癥和/或情緒障礙的方法，例如上述通過(guò)將本發(fā)明化合物施用至有需要的患者的那些方法。
本發(fā)明的化合物可具有如下優(yōu)點(diǎn)：它們可預(yù)防gabaa受體的耐受性發(fā)展和/或下調(diào)。本發(fā)明的化合物可具有如下優(yōu)點(diǎn)：它們可阻止一旦類固醇被戒斷時(shí)的戒斷作用。以這種方式，本發(fā)明的化合物可具有如下優(yōu)點(diǎn)：它們可保留gabaa系統(tǒng)的敏感性，并且抑制在例如月經(jīng)周期的黃體期內(nèi)不太敏感的狀態(tài)的發(fā)展，因此預(yù)防諸如偏頭痛和/或癲癇發(fā)作的癥狀。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是通過(guò)將本發(fā)明的化合物施用至有需要的患者來(lái)治療或預(yù)防類固醇耐受性發(fā)展病狀或癥狀和/或類固醇戒斷病狀或癥狀的方法。
可提及的這些癥狀和/或病狀的實(shí)例包括鎮(zhèn)靜，疲倦，記憶障礙，學(xué)習(xí)障礙，運(yùn)動(dòng)功能障礙，笨拙(例如肝性腦病中的癥狀)，食欲和食物渴求增加，酒精或藥物濫用的復(fù)發(fā)，消極情緒如緊張、煩躁和抑郁(這是經(jīng)前綜合征的主要癥狀)以及小癲癇發(fā)作的惡化。
在較長(zhǎng)時(shí)間框架(例如數(shù)天)暴露于3-α-羥基-5-α/β-類固醇之后的耐受性發(fā)展引起的病狀和癥狀是例如應(yīng)激敏感性、注意力集中困難、應(yīng)激或月經(jīng)周期相關(guān)的注意力集中困難、睡眠障礙、疲倦、喪失沖動(dòng)控制和抑郁、記憶和學(xué)習(xí)障礙。3-α-羥基-5-α/β-類固醇也增強(qiáng)藥物依賴性。根據(jù)本發(fā)明，可以通過(guò)將本發(fā)明的化合物施用至有需要的患者來(lái)預(yù)防、減輕或治療這些病狀或癥狀。
連續(xù)但較短的暴露于3-α-羥基-5-α/β-類固醇在暴露結(jié)束時(shí)產(chǎn)生戒斷作用。這種現(xiàn)象在月經(jīng)期間當(dāng)卵巢黃體的3-α-羥基-5-α/β-類固醇產(chǎn)生中斷時(shí)發(fā)生。在分娩后(產(chǎn)后)當(dāng)胎盤的3-α-羥基-5-α/β-類固醇產(chǎn)生中斷時(shí)，也可出現(xiàn)這種戒斷現(xiàn)象。當(dāng)應(yīng)激期結(jié)束并且在應(yīng)激期間由腎上腺產(chǎn)生的3-α-羥基-5-α/β-類固醇中斷時(shí)，也注意到相同的現(xiàn)象。受這種戒斷/禁戒現(xiàn)象影響的病狀的實(shí)例是部分性癲癇，其中患者在大腦皮質(zhì)中具有癲癇病灶，在月經(jīng)期間的戒斷期時(shí)在其中出現(xiàn)惡化。這種現(xiàn)象被稱為“月經(jīng)性癲癇”。其它實(shí)例是月經(jīng)相關(guān)偏頭痛和應(yīng)激相關(guān)偏頭痛和產(chǎn)后情緒變化。戒斷現(xiàn)象是早期發(fā)展的耐受性的跡象。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案是解決困擾眾多婦女的問(wèn)題，是一種在人類患者中治療和/或預(yù)防抗炎類固醇和絕經(jīng)后治療的副作用的方法。根據(jù)本發(fā)明，可以通過(guò)將本發(fā)明的化合物施用至有需要的患者來(lái)預(yù)防、減輕或治療這些病狀或癥狀。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是治療和/或預(yù)防口服避孕藥在人類患者中的副作用。根據(jù)本發(fā)明，可以通過(guò)將本發(fā)明的化合物施用至有需要的患者來(lái)預(yù)防、減輕或治療這些病狀或癥狀。在這方面，本發(fā)明的化合物可與口服避孕藥一起施用，所述口服避孕藥可能已被患者服用。經(jīng)鼻和經(jīng)皮施用也是合適的施用途徑。
換句話說(shuō)，本發(fā)明的化合物可用于治療由類固醇作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的三種可能機(jī)制中的一種或多種引起的應(yīng)激相關(guān)和/或應(yīng)激誘導(dǎo)的病狀：即通過(guò)：
(a)直接作用，
(b)耐受性誘導(dǎo)，和/或
(c)戒斷作用。
此外，在上述實(shí)施方案的范圍內(nèi)，本發(fā)明的化合物的劑量在應(yīng)激或月經(jīng)期內(nèi)可調(diào)節(jié)至內(nèi)源性類固醇的水平。
“患者”包括哺乳動(dòng)物(特別是人類)患者。
術(shù)語(yǔ)“有效量”是指對(duì)所治療的患者賦予治療效果的化合物的量。所述效果可以是客觀的(即可通過(guò)某些測(cè)試或標(biāo)志物測(cè)量)或主觀的(即，受試者給出效果指示或感覺(jué)到效果)。
本發(fā)明的化合物通常將以藥學(xué)上可接受的劑型經(jīng)口、經(jīng)靜脈內(nèi)、經(jīng)皮下、經(jīng)頰、經(jīng)直腸、經(jīng)皮膚(例如經(jīng)皮)、經(jīng)鼻、經(jīng)氣管、經(jīng)支氣管、經(jīng)舌下、通過(guò)任何其它胃腸外途徑或經(jīng)由吸入施用。
本發(fā)明的化合物可如下施用：以片劑、膠囊或酏劑的形式供口服施用，以栓劑形式供直腸施用，以無(wú)菌溶液或懸浮液的形式供胃腸外(包括靜脈內(nèi)或肌內(nèi))施用等。
包含本發(fā)明化合物以及本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)使用和眾所周知的合適的佐劑、載體、稀釋劑和媒介物的組合物的制劑，可以適合于所選途徑的化學(xué)形式，根據(jù)正常的藥理學(xué)程序進(jìn)行改適或調(diào)整。因此，這樣的制劑可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)和/或公認(rèn)的制藥實(shí)踐來(lái)制備。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，因此提供了包括如上文所定義的本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體的混合物的藥物制劑。
取決于例如本發(fā)明化合物(即活性成分)的效力和物理特性，可提及的藥物制劑包括其中活性成分以至少1重量％(或至少10重量％、至少30重量％或至少50重量％)存在的那些。也就是說(shuō)，藥物組合物的活性成分與其它組分(即添加佐劑、稀釋劑和載體)的比率以重量計(jì)為至少1:99(或至少10:90、至少30:70或至少50:50)。
本發(fā)明還提供了如上文所定義的藥物制劑的制備方法，所述方法包括使如上文所定義的本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體相結(jié)合。
本發(fā)明的化合物也可與可用于以下中的一種或多種的其它治療劑組合：
(a)治療類固醇相關(guān)cns病癥；
(b)治療在暴露于3-α-羥基-5-α/β-類固醇后的耐受性發(fā)展造成的病狀或癥狀；
(c)治療受到暴露于3-α-羥基-5-α/β-類固醇的戒斷/禁戒影響的病狀；
(d)治療抗炎類固醇的一種或多種副作用；
(e)治療絕經(jīng)后治療的一種或多種副作用；和/或
(f)治療口服避孕藥的一種或多種副作用，
或與口服避孕藥本身組合。這些治療劑或口服避孕藥在下文中一起被稱為其它或另一種“如上文所定義的治療劑”。
例如，本發(fā)明的化合物可與口服避孕藥一起包括在制劑或治療方案中，以減輕和/或消除：
(i)口服避孕藥的副作用；和/或
(ii)內(nèi)源性類固醇的周期性變化的任何不良作用。
本發(fā)明的其它方面提供藥物組合物和多部分試劑盒，其包含治療合適劑量的如上文所定義的其它治療劑與治療合適劑量的本發(fā)明化合物。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種組合產(chǎn)品，其包含：
(a)如上文所定義的本發(fā)明化合物；和
(b)至少一種如上文所定義的其它治療劑，
其中組分(a)和(b)中的每一種與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體混合配制。
這種組合產(chǎn)品提供了本發(fā)明化合物與其它治療劑一起施用，并且因此可以作為單獨(dú)的制劑呈現(xiàn)，其中這些制劑中的至少一種包含本發(fā)明化合物，并且至少一種包含另一種治療劑，或者可以作為組合制劑(即作為包括本發(fā)明化合物和另一種治療劑的單一制劑呈現(xiàn))而呈現(xiàn)(即配制)。
因此，還提供了：
(1)包括如上文所定義的本發(fā)明化合物、至少一種如上文所定義的其它治療劑和藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體的藥物制劑；和
(2)多部分試劑盒，其包含如下組分：
(a)包括如上文所定義的本發(fā)明化合物與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體的混合物的藥物制劑；和
(b)包括至少一種如上文所定義的其它治療劑與藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體的混合物的藥物制劑，
所述組分(a)和(b)各自以適合彼此結(jié)合施用的形式提供。
本發(fā)明還提供了一種用于制備如上文所定義的組合產(chǎn)品的方法，所述方法包括使如上文所定義的本發(fā)明化合物與至少一種如上文所定義的其它治療劑和至少一種藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體相結(jié)合。
“相結(jié)合”是指使兩種組分適合彼此結(jié)合施用。本發(fā)明化合物可用作涉及至少一種如上文所定義的其它治療劑的治療中的“添加治療”的一部分。
因此，關(guān)于通過(guò)使兩種組分彼此“相結(jié)合”的如上文所定義的多部分試劑盒的制備方法，所述多部分試劑盒的兩種組分可能：
(i)以單獨(dú)的制劑(即彼此獨(dú)立地)提供，其隨后在組合療法中彼此結(jié)合在一起使用；或
(ii)作為在組合療法中彼此結(jié)合使用的“組合包”的單獨(dú)組分包裝或呈現(xiàn)在一起。
本發(fā)明的化合物可以不同劑量施用。對(duì)于例如胃腸外(例如靜脈內(nèi))劑量，合適的間隔是約0.2至200mg/kg體重，例如約20至100mg/kg體重。劑量可以持續(xù)給予或以分開的劑量每日一次、兩次、三次或四次或更多次給予。
無(wú)論如何，醫(yī)生或技術(shù)人員將能夠確定最適合于個(gè)體患者的實(shí)際劑量，其可能隨著以下因素而改變：施用途徑，待治療的病狀的類型和嚴(yán)重程度，以及待治療的特定患者的物種、年齡、體重、性別、腎功能、肝功能和反應(yīng)。上述劑量是平均情況的示例；當(dāng)然，可能存在需要更高或更低劑量范圍的個(gè)別情況，并且這些在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本發(fā)明的化合物具有如下優(yōu)點(diǎn)：它們能夠阻斷3-α-羥基-孕甾烷-類固醇對(duì)人類gabaa受體的作用。
術(shù)語(yǔ)“阻斷”在本文中用于定義本發(fā)明化合物阻止3-α-羥基-5-α/β-類固醇作用于gaba-r受體的作用。因此，“阻斷”是與“調(diào)節(jié)”或“壓制”或類似術(shù)語(yǔ)通常意義不同的術(shù)語(yǔ)，后者表明藥理作用仍然發(fā)生，但程度較低或速度較慢。以這種方式，“拮抗劑”是指阻礙另一種物質(zhì)(例如激動(dòng)劑)誘導(dǎo)其作用的物質(zhì)。在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”和“阻斷劑”可互換使用。
如上文所討論，本發(fā)明的化合物還具有如下優(yōu)點(diǎn)：它們通過(guò)同時(shí)施用而選擇性阻斷3-α-羥基-5α/β-孕甾烷-類固醇對(duì)gabaa受體的作用，其中對(duì)gaba效應(yīng)僅具有有限作用(至多部分拮抗劑)。
除了上述優(yōu)點(diǎn)之外，本發(fā)明的化合物還可以具有如下優(yōu)點(diǎn)：相比于現(xiàn)有技術(shù)中已知的化合物，它們可能更有效，毒性更小，作用時(shí)間更長(zhǎng)，更有效力，產(chǎn)生更少副作用，更容易吸收，和/或具有更好的藥代動(dòng)力學(xué)概況(例如更高的生物利用度，例如來(lái)自于在水性溶劑中的改善的溶解性和/或較低的清除率)，和/或具有其它有用的藥理學(xué)、物理或化學(xué)性質(zhì)，無(wú)論是用于上述適應(yīng)癥還是其它方面。
無(wú)論何時(shí)在本文中使用術(shù)語(yǔ)“約”，例如在量(例如活性成分的劑量)或時(shí)間段的上下文中，應(yīng)當(dāng)理解，這些變量是近似值并且因此相比于本文中指定的數(shù)字改變±10％，例如±5％并且優(yōu)選地±2％(例如±1％)。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，而不以任何方式進(jìn)行限制。
實(shí)施例1
3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟的合成
已經(jīng)確定乙炔基格氏試劑與3,20/17二酮類固醇的反應(yīng)在大多數(shù)情況下對(duì)于3位具選擇性，并且不需要對(duì)于其它酮官能團(tuán)的保護(hù)/脫保護(hù)。形成α和β異構(gòu)體，其可以通過(guò)色譜法分離并重結(jié)晶。
用于合成3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟的原料是具有3-羥基取代基和在20位具有酮基的相應(yīng)類固醇。它們可以通過(guò)用ibx試劑氧化而轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的二酮。反應(yīng)順利進(jìn)行并且完全轉(zhuǎn)化。其它適宜類固醇可以根據(jù)需要用作原料。在適宜溶劑如甲醇、乙醇、水、thf、二乙醚、二氯甲烷或本領(lǐng)域技術(shù)人員可公認(rèn)為適宜的其它溶劑中進(jìn)行反應(yīng)。選擇反應(yīng)物以避免在可能的情況下使用諸如重金屬的反應(yīng)物，其即使痕量也是有毒的或者在處理程序中難以完全除去。
涉及空氣或濕氣敏感試劑或產(chǎn)物的反應(yīng)在惰性氣氛如氮?dú)饣驓鍤庀略跓o(wú)水溶劑存在下進(jìn)行。二乙醚和四氫呋喃在二苯甲酮的存在下經(jīng)na干燥。用惰性氣體吹掃的注射器用于轉(zhuǎn)移試劑和無(wú)水溶劑。通過(guò)使用合適的色譜技術(shù)如tlc或gc/ms監(jiān)測(cè)產(chǎn)物形成和原料損失來(lái)確定優(yōu)化的反應(yīng)時(shí)間和溫度。
通過(guò)使用色譜技術(shù)如快速二氧化硅色譜法或利用hplc儀器的制備型高效液相色譜法(hplc)來(lái)進(jìn)行純化。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以認(rèn)識(shí)到，可以采用替代的純化方法，并且實(shí)驗(yàn)室色譜技術(shù)可以通過(guò)使用用于規(guī)模制備的色譜柱而適應(yīng)于工業(yè)規(guī)模。通過(guò)使用合適的分析技術(shù)如1h-nmr、13c-nmr、質(zhì)譜法、ir光譜法、x射線光譜法和本領(lǐng)域技術(shù)人員可以公認(rèn)為適宜3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟的結(jié)構(gòu)鑒定和純度測(cè)定的任何其它測(cè)定法來(lái)進(jìn)行產(chǎn)物鑒定。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，取決于底物，可以在反應(yīng)中使用類似的試劑、溶劑、條件和參數(shù)。使用bruker400mhz光譜儀記錄nmr數(shù)據(jù)。
3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-酮
在室溫(rt)下在氮?dú)庀聦?,20-5α-孕二酮(1.580g，5.0mmol)溶解在50ml無(wú)水thf中。在室溫下在攪拌下滴加乙炔基溴化鎂(1.1當(dāng)量)，并將溶液在室溫下在氮?dú)饬飨聰嚢柽^(guò)夜。
然后用飽和nh4cl(水溶液)淬滅黃色溶液，并且用二氯甲烷(3×30ml)萃取水相。收集的有機(jī)相在減壓下蒸發(fā)，將所得黃色油狀物溶解在二氯甲烷中，用鹽水洗滌并經(jīng)mgso4干燥。在真空下縮減溶液，并且通過(guò)二氧化硅快速柱色譜法(1:4二乙醚:二氯甲烷)純化殘余物。典型產(chǎn)率為72％?？赏ㄟ^(guò)從二乙醚進(jìn)一步重結(jié)晶來(lái)消除最終痕量的副產(chǎn)物。
1hnmr(400mhz,cdcl3-d6):δ2.51(t,1h)；2.47(s,3h)；2.14(m,1h)；2.11(s,3h)；0.81(s,1h)；0.60(s,3h)。
3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-酮
該化合物作為來(lái)自上述反應(yīng)的副產(chǎn)物獲得并通過(guò)二氧化硅快速柱色譜法分離。典型產(chǎn)率為13％。
1hnmr(400mhz,cdcl3-d6):δ2.52(t,1h)；2.43(s,1h)；2.11(s,3h)；0.80(s,3h),0.60(s,3h)。
3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟
在室溫和空氣氣氛下將3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-酮(10mmol)溶解在250ml圓底燒瓶中的5ml二氯甲烷和50ml乙醇中。將4當(dāng)量的nh2oh鹽酸鹽和4當(dāng)量的乙酸鈉溶解在5mlh2o中，然后添加至類固醇溶液中。添加20ml乙醇并且使混合物回流過(guò)夜。然后將混合物冷卻并且減壓除去溶劑。然后用50mlh2o和50ml二氯甲烷處理白色殘余物，用3×30ml二氯甲烷萃取水相。收集的有機(jī)相然后經(jīng)mgso4干燥，過(guò)濾并且減壓除去溶劑。通過(guò)二氧化硅快速柱色譜(二氯甲烷:二乙醚4:1)純化最終殘余物，典型產(chǎn)率為95-100％。
1hnmr(400mhz,cdcl3-d6):δ2.47(s,1h)；2.22(t,1h)；2.05(m,1h)；1.88(s,3h)；1.86(m,1h)；0.81(s,3h),0.62(s,3h)。
實(shí)施例2
3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)gabaa受體亞型α5和α1的作用
使用利用表達(dá)功能性α1β2γ2l和α5β3γ2lgabaa受體的人類α1β2γ2gabaa和α5β3γ2gabaa受體永久轉(zhuǎn)染的hek-293細(xì)胞。在以下步驟中制備永久表達(dá)功能性人類gabaa受體的細(xì)胞系。將在緊鄰起始密碼子之前包括引入的kozac序列的gabaa受體亞基α1(308-1727nm_000806)、β2(214-1679nm_000813)和γ2l(290-1785nm_198904)分別亞克隆到含有遺傳霉素、潮霉素b和博來(lái)霉素(zeocin)抗性的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體中。通過(guò)每次轉(zhuǎn)染一個(gè)亞基來(lái)產(chǎn)生穩(wěn)定表達(dá)三種gabaa受體亞基的hek-293細(xì)胞系。轉(zhuǎn)染之后接著是用適當(dāng)?shù)目股剡x擇，使用亞基特異性抗體(β2和γ2)進(jìn)行細(xì)胞分離，并產(chǎn)生單細(xì)胞集落。利用免疫細(xì)胞化學(xué)分析所產(chǎn)生細(xì)胞系的三種gabaa受體亞基，接著選擇在針對(duì)gaba和gams四氫脫氧皮質(zhì)酮(thdoc)的膜片鉗分析(見(jiàn)下文)中對(duì)gabaa受體顯示正常和良好反應(yīng)性的合適細(xì)胞系。
用于測(cè)試3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)gabaa受體的作用的方法
在hek-293細(xì)胞上，通過(guò)dynaflowtm系統(tǒng)，在不存在和存在gams四氫脫氧皮質(zhì)酮(thdoc)的情況下，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以研究3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)gabaa受體功能的作用。在這些測(cè)試中，方案被優(yōu)化為與突觸間隙中的生理?xiàng)l件相似。
細(xì)胞培養(yǎng)：將用人類α1β2γ2gabaa和α5β3γ2gabaa受體亞型永久轉(zhuǎn)染的hek-293細(xì)胞以3×104/25cm2的密度接種在cellbind培養(yǎng)燒瓶中。在接種后3天將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞用于膜片鉗實(shí)驗(yàn)。當(dāng)使用細(xì)胞進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)時(shí)，用o2鼓泡的ec溶液(見(jiàn)下文)將細(xì)胞洗滌兩次。然后添加約5mlec并且將細(xì)胞在溫育箱中保持約15分鐘。15分鐘后，細(xì)胞從燒瓶底部松開，并通過(guò)用pasteur吸管仔細(xì)抽吸幾次來(lái)分離。
dynaflowtm系統(tǒng)：具有分析芯片的dynaflowtm系統(tǒng)用于所有膜片鉗實(shí)驗(yàn)。所述分析芯片由非粘性材料制成。通道寬度為150μm并且高度為50μm?？左w積為280μl。在26μl/min的流速下的運(yùn)行時(shí)間為180分鐘。泵設(shè)置如下：使用內(nèi)徑為9.65mm的omnifix2ml注射器。芯片的注射泵流速為26μl/min。
類固醇和gaba：在室溫中通過(guò)超聲將gaba溶解在ec溶液中持續(xù)約40分鐘至濃度為10mm。所有類固醇都在乙醇中溶解至濃度為6mm。所有最終溶液(包括洗滌溶液(ec)和僅具有g(shù)aba的溶液)中的乙醇濃度為0.1％。最終溶液是添加至芯片孔中的溶液。
電生理學(xué)：從不具有長(zhǎng)絲的1.5mmo.d.、0.86mmi.d.硼硅酸鹽毛細(xì)管玻璃拉制膜片電極。當(dāng)填充細(xì)胞內(nèi)溶液時(shí)，典型的電極具有2-5mω的電阻。所述細(xì)胞內(nèi)溶液由以下組成(以mm計(jì))：140葡萄糖酸銫、3.0nacl、1.2mgcl2、1.0egta、10hepes。用csoh將ph調(diào)節(jié)至7.2。在記錄期間使用的細(xì)胞外(ec)溶液含有(以mm計(jì))：137nacl、5.0kcl、1.0cacl2、1.2mgcl2、10hepes、10葡萄糖。用naoh將ph調(diào)節(jié)至7.4。在補(bǔ)償液體接界電位后，所有實(shí)驗(yàn)中都使用-17mv的穩(wěn)定保持電位。在生理?xiàng)l件下，hek-293具有-40mv的靜息電位和細(xì)胞內(nèi)的低濃度氯離子。通過(guò)使用-17mv的保持電位和具有低氯離子濃度的細(xì)胞內(nèi)溶液，當(dāng)受體被激活時(shí)，氯離子流入細(xì)胞。所有實(shí)驗(yàn)都在室溫(21至23℃)下進(jìn)行。所有實(shí)驗(yàn)都使用標(biāo)準(zhǔn)方案。
方案
gaba施加：通過(guò)使用dynaflow設(shè)備，可在幾乎生理學(xué)條件下期間研究轉(zhuǎn)染的hek-293。dynaflow系統(tǒng)允許在短達(dá)40毫秒至數(shù)分鐘的時(shí)間內(nèi)施加溶液。在生理上，在突觸間隙中，gaba以mm范圍釋放約2毫秒，這對(duì)于α1受體是有效的。在額外的突觸位點(diǎn)中，gaba水平較低，但保持較長(zhǎng)時(shí)間，這對(duì)于α5受體是有效的。在利用α1β2γ2l的實(shí)驗(yàn)中，我們施加gaba±類固醇達(dá)40毫秒；在利用α5β3γ2l的實(shí)驗(yàn)中，施加gaba±類固醇達(dá)6秒。發(fā)現(xiàn)在幾乎所有的細(xì)胞中，第一次gaba施加比第二次gaba施加產(chǎn)生較小的響應(yīng)。第二次gaba施加與第三次gaba施加之間的響應(yīng)無(wú)差異。因此，第一次gaba施加總是重復(fù)兩次，并且將第二次響應(yīng)用于分析。
洗脫：gaba極易溶于水并且容易從受體中洗脫。洗脫時(shí)間設(shè)定為在僅gaba施加后1分鐘。另一方面，類固醇難溶于水并且也難以從受體中洗脫。在實(shí)驗(yàn)中，我們使用thdoc作為gaba激動(dòng)劑。利用2分鐘洗脫時(shí)間，200nmthdoc已完全洗脫，如通過(guò)既無(wú)累積也無(wú)脫敏效應(yīng)所示。
溫育：為了解類固醇的作用并獲得穩(wěn)定的結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)在施加gaba之前，必須在受體上溫育類固醇。這一發(fā)現(xiàn)得到thdoc的結(jié)合位點(diǎn)位于受體上細(xì)胞內(nèi)的暗示的支持(hosie等,2006)。研究不同的溫育時(shí)間以獲得達(dá)到穩(wěn)定結(jié)果的最佳時(shí)間并最小化洗脫時(shí)間。20秒的溫育時(shí)間顯示是2分鐘洗脫時(shí)間的最佳時(shí)間。
優(yōu)化結(jié)論：優(yōu)化方案如下：20秒類固醇溫育，40毫秒或6秒gaba±類固醇施加，2分鐘洗脫。第一次gaba施加重復(fù)兩次，第一次施加與第二次施加之間的洗脫時(shí)間為1分鐘。
3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)于gabaa受體α1β2γ2l和α5β3γ2的測(cè)試結(jié)果
3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟在兩種不同的gabaa受體亞型α1β2γ2l和α5β3γ2l中的膜片鉗測(cè)試結(jié)果給出了意想不到且令人驚訝的結(jié)果。如表2所示，在α1β2γ2l受體中，3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟針對(duì)thdoc(實(shí)驗(yàn)中使用的gams)的增強(qiáng)效果沒(méi)有拮抗作用。僅3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)氯離子通量沒(méi)有增強(qiáng)或拮抗作用。3α-乙炔基,3β-羥基,5α--孕甾烷-20-肟對(duì)α1β2γ2lgabaa受體的gaba開放具有輕微的激動(dòng)作用。這種激動(dòng)作用如此小，以致于其不具有相關(guān)性并且在媒介物范圍內(nèi)。
令人驚訝的是，在所用利用gams和gaba的測(cè)試情況(表2)下，3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)于α5β3γ2l受體亞型都是一種拮抗劑。3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟因此顯示取決于受體亞型的特異性。3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟因此在其作用中顯示出選擇性并且因此適合作為藥物。因?yàn)?α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟具特異性并且對(duì)α1β2γ2l受體無(wú)活性，所以3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟由于更一般的α1受體而具有較少的副作用。作為拮抗劑的作用的抑制比作為激動(dòng)劑的類似的陽(yáng)性變化具有更大的影響。
表2.關(guān)于由穿過(guò)表達(dá)α1和α5亞基的gabaa受體的氯離子通量介導(dǎo)的電流響應(yīng)的研究。本研究中使用了膜片鉗技術(shù)與dynaflowtm施用系統(tǒng)，該系統(tǒng)提供物質(zhì)的快速施用和去除。“化合物”是指3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟。“gams”是指“gabaa受體調(diào)節(jié)類固醇”，在這種情況下是四氫脫氧皮質(zhì)酮(thdoc)。
α1β2γ2-gabaa受體
1μm3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟將α1β2γ2l-gabaa受體的gaba介導(dǎo)的電流響應(yīng)增加約10％(表2)。在不存在gaba的情況下，1μm3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟沒(méi)有直接激活gabaa受體。本研究結(jié)果表明，3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟不會(huì)針對(duì)α1β2γ2-gabaa受體負(fù)性調(diào)節(jié)gaba誘發(fā)電流。此外，針對(duì)α1亞基類型所觀察到的gaba誘發(fā)電流的10％增加應(yīng)被認(rèn)為是較小影響。總之，針對(duì)α1β2γ2l-gabaa受體，3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)gaba誘發(fā)電流沒(méi)有任何重大影響。
α5β3γ2-gabaa受體
檢測(cè)到3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)于200nmgams(thdoc)和0.3μmgaba誘發(fā)電流的明顯的濃度依賴性拮抗作用(表3)。3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟對(duì)于200nmthdoc誘發(fā)電流也具有拮抗作用，即gams直接激活gabaa受體。該拮抗作用與針對(duì)200nmthdoc和0.3μmgaba誘發(fā)電流的拮抗作用具有相同量值。
表3.在200nmthdoc+0.3μmgaba存在下的0.1-3μm3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟(“化合物”)。相對(duì)于對(duì)照200nmthdoc+0.3μmgaba(設(shè)定為0)的相對(duì)作用。
實(shí)施例3
3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟及其差向異構(gòu)體對(duì)于gabaa受體亞型α5的比較作用
通過(guò)使用上文實(shí)施例2中所述的程序，對(duì)3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟及其差向異構(gòu)體3β-乙炔基,3α-羥基,5α-孕甾烷-20-肟測(cè)試其對(duì)于gabaa受體亞型α5的作用。
與實(shí)施例2相比，所用程序中唯一的方法差異在于，將類固醇溶解在乙醇中至儲(chǔ)備溶液中濃度為2mm，所有溶液中最終乙醇濃度都是0.1％。結(jié)果列于下表4中。
表4.測(cè)試濃度為1μm的所測(cè)試uc-類固醇3α-乙炔基,3β-羥基,5α-孕甾烷-20-肟(“化合物”)和3β-乙炔基,3α-羥基,5α-孕甾烷-20-肟(“比較物”)針對(duì)gaba-類固醇thdoc的作用，以流過(guò)α5β3γ2lgabaa受體的氯離子變化測(cè)量。
結(jié)果表明，本發(fā)明化合物充當(dāng)gaba受體亞基α5的拮抗劑，而差向異構(gòu)體充當(dāng)激動(dòng)劑。