本發(fā)明涉及可用于使溶液中的有機化合物(例如寡核苷酸、肽等)沉淀的沉淀促進劑以及使用其的沉淀方法。

背景技術：

寡核苷酸的合成方法包括磷酸三酯法、h-膦酸酯法、亞磷酰胺法(phosphoramiditemethod)等，而使用亞磷酰胺法的固相合成(固相方法)是目前最廣泛使用的方法。此外，作為肽的合成方法，固相合成是廣泛使用的。固相方法就速度方面而言是有利的，因為已對工藝進行優(yōu)化并且已取得自動化進展。然而，與其相關的缺陷在于：由于設備限制而限制了規(guī)模放大，使用過量的試劑和起始材料，并且難以在中間步驟中確定反應進展狀態(tài)、分析中間體結構等。另一方面，還已對通過液相方法的寡核苷酸和肽的合成方法進行了研究。然而，由于操作復雜且收率低，難以大規(guī)?？焖俸铣砷L寡核苷酸和肽。

近年來，在解決固相方法和液相方法的各自缺陷的嘗試中，在液相方法中，已報道使用被具有一個或多個長鏈脂族烴基的有機基團(假固相保護基，pseudosolidphaseprotectinggroup)保護的核苷的寡核苷酸合成方法(專利文獻1和2)和使用具有假固相保護基的肽的肽合成方法(專利文獻3、4和5)。在這些合成方法中，例如，通過如下方式回收目標產(chǎn)物：通過向溶解于非極性溶劑中的具有疏水假固相保護基的寡核苷酸或肽中添加極性溶劑以讓這些化合物從非極性溶劑和極性溶劑的混合溶劑中沉淀(固液分離)。

[文獻清單]

[專利文獻]

專利文獻1：wo2012/157723

專利文獻2：wo2014/189142

專利文獻3：wo2010/104169

專利文獻4：wo2010/113939

專利文獻5：wo2011/078295

技術實現(xiàn)要素：

[發(fā)明要解決的問題]

在使用這種假固相保護基的有機化合物如寡核苷酸、肽等的液相合成中，期望更有效地使這些化合物從溶劑中沉淀以提高所述化合物的回收率。

本發(fā)明已經(jīng)注意到上述情形并旨在當使具有假固相保護基的有機化合物從溶劑中沉淀時提高所述有機化合物的回收率。

[用于解決問題的手段]

本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)進行深入研究，試圖達到上述目的并發(fā)現(xiàn)通過使用特定沉淀促進劑可促進具有疏水基或假固相保護基的有機化合物的沉淀，并且可提高其回收率。以這些發(fā)現(xiàn)為基礎的本發(fā)明如下所述。

[1]沉淀促進劑，其用于使被有機基團保護的有機化合物從溶劑中沉淀，所述有機基團具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基，其中，

所述沉淀促進劑是，具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基、并且所述沉淀促進劑所具有的所述脂族烴基的碳原子總數(shù)為20以上的有機化合物。

[2]上述[1]的沉淀促進劑，其中，沉淀促進劑所具有的碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基是選自直鏈c10-40烷基和直鏈c10-40烯基的基團。

[3]上述[1]或[2]的沉淀促進劑，其中，有機基團所具有的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基是直鏈型。

[4]上述[1]或[2]的沉淀促進劑，其中，有機基團所具有的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基是選自直鏈c10-40烷基和直鏈c10-40烯基的基團。

[5]上述[1]-[4]中任一項的沉淀促進劑，該沉淀促進劑為

(1)具有一個以上的式(g)所示結構的有機化合物；或者

(2)經(jīng)由選自-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-和-nhc(＝o)-中的基團而具有一個以上的直鏈c10-40烷基，并且進一步任選取代的c1-10烷烴，

其中，所述式(g)為：

式中，

r¹各自獨立地表示直鏈c10-40烷基；

x¹各自獨立地表示單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-；

環(huán)a¹表示任選取代的c3-14烴環(huán)；

n表示1至4的整數(shù)。

[6]上述[1]-[4]中任一項的沉淀促進劑，該沉淀促進劑為

(1)式(i)所示的化合物；或者

(2)經(jīng)由選自-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-和-nhc(＝o)-中的基團而具有一個以上的直鏈c10-40烷基，并且進一步任選取代的c1-10烷烴，

其中，所述式(i)為：

式中，

r¹各自獨立地表示直鏈c10-40烷基；

x¹各自獨立地表示單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-；

環(huán)a¹和環(huán)b¹各自獨立地表示任選取代的c3-14烴環(huán)；

x²各自獨立地表示-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-、-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)nh-(ch2)q-或-(ch2)p-nhc(＝o)-(ch2)q-，其中p和q各自獨立地表示0至3的整數(shù)；

x³表示單鍵、-(ch2)r-o-、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-、-(ch2)r-oc(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)nh-或-(ch2)r-nhc(＝o)-，其中r表示0至3的整數(shù)；

r²表示氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基、任選取代的單環(huán)雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基；

n和m各自獨立地表示1至4的整數(shù)；

當m為1時，m’表示0或1；當m為2、3或4時，m’表示1。

[7]上述[6]的沉淀促進劑，其中，r²為氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基或任選取代的單環(huán)雜環(huán)基。

[8]上述[1]-[4]中任一項的沉淀促進劑，該沉淀促進劑為式(ii)所示的化合物，

式中，

r¹各自獨立地表示直鏈c10-40烷基；

x¹各自獨立地表示單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地表示任選取代的c3-14烴環(huán)；

x²各自獨立地表示-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-、-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)nh-(ch2)q-或-(ch2)p-nhc(＝o)-(ch2)q-，其中p和q各自獨立地表示0至3的整數(shù)；

x³表示單鍵、-(ch2)r-o-、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-、-(ch2)r-oc(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)nh-或-(ch2)r-nhc(＝o)-，其中r表示0至3的整數(shù)；

r²表示氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基、任選取代的單環(huán)雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基；

m表示1至4的整數(shù)；

當m為1時，m’表示0或1；當m為2、3或4時，m’表示1。

[9]上述[8]的沉淀促進劑，其中，r²為氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基或任選取代的單環(huán)雜環(huán)基。

[10]上述[5]-[9]中任一項的沉淀促進劑，其中，c3-14烴環(huán)選自苯環(huán)和環(huán)己烷環(huán)。

[11]上述[1]-[10]中任一項的沉淀促進劑，其中，有機基團表示式(iii)所示的基團，

^**l-y-z(iii)

式中，

^**表示與被保護的基團的鍵合位置；

l表示單鍵、或者式(a1)或(a1’)所示的基團：

式中，

^*表示與y的鍵合位置；

^**與前述的定義相同；

r⁸和r⁹各自獨立地表示c1-22烴基；

l1表示二價c1-22烴基；并且

l2表示單鍵，或者表示^**c(＝o)n(r^2’)-r^1’-n(r³)^***所示的基團，式中^**表示與l1的鍵合位置，^***表示與c＝o的鍵合位置，r^1’表示c1-22亞烷基，r^2’和r³各自獨立地表示氫原子或c1-22烷基，或者r^2’和r³任選地一起形成環(huán)；

y表示單鍵、氧原子或nr，其中r表示氫原子、烷基或芳烷基；以及

z表示式(a2)、式(a2’)或式(a2”)所示的基團：

式中，

^*表示鍵合位置；

r⁴為氫原子，或者當rb為下述式(a3)所示的基團時，r⁴任選地與環(huán)c的r⁶一起表示單鍵或-o-、并與環(huán)a或環(huán)b及環(huán)c一起形成稠環(huán)；

k個q各自獨立地表示-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-；

k個r⁵各自獨立地表示經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的烴基；

k表示1至4的整數(shù)；

環(huán)a和環(huán)b各自獨立地除了具有k個qr⁵以外，任選地進一步具有取代基，所述取代基選自鹵素原子、任選被鹵素原子取代的c1-6烷基、和任選被鹵素原子取代的c1-6烷氧基；

ra表示氫原子、或任選被鹵素原子取代的苯基；以及

rb表示氫原子、或式(a3)所示的基團：

式中，^*表示鍵合位置；

j表示0至4的整數(shù)；

j個q各自獨立地表示與前述相同的含義；

j個r⁷各自獨立地表示經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的烴基；

r⁶表示氫原子，或者任選地與環(huán)a或環(huán)b的r⁴一起表示單鍵或-o-、并且與環(huán)a或環(huán)b及環(huán)c一起形成稠環(huán)；并且

環(huán)c除了具有j個or⁷以外，任選地進一步具有取代基，所述取代基選自鹵素原子、任選被鹵素原子取代的c1-6烷基、和任選被鹵素原子取代的c1-6烷氧基，或者

ra和rb一起形成羰基(oxogroup)。

[12]上述[11]的沉淀促進劑，其中，z為式(a2)或式(a2’)所示的基團，稠環(huán)為芴環(huán)或呫噸環(huán)，k個r⁵各自獨立地為經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的烴基，j個r⁷各自獨立地為經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的烴基，并且ra為氫原子、或者ra和rb一起形成羰基。

[13]上述[11]或[12]的沉淀促進劑，其中，l為式(a1)所示的基團，l1表示二價c1-22烴基，并且l2表示單鍵。

[14]上述[11]或[12]的沉淀促進劑，其中，l為式(a1’)所示的基團，l1表示亞苯基，并且l2表示單鍵。

[15]上述[11]-[14]中任一項的沉淀促進劑，其中，y為氧原子。

[16]上述[11]-[15]中任一項的沉淀促進劑，其中，z為式(a2)所示的基團，r⁴為氫原子。

[17]上述[11]-[16]中任一項的沉淀促進劑，其中，z為式(a2)所示的基團，ra和rb為氫原子。

[18]上述[11]或[12]的沉淀促進劑，其中，l和y為單鍵，z為式(a2)所示的基團，r⁴為氫原子，并且ra和rb一起形成羰基。

[19]上述[1]-[18]中任一項的沉淀促進劑，其中，被有機基團保護的有機化合物為任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護的核苷、核苷酸或寡核苷酸，或者任選地進一步被肽合成中所用的保護基保護的氨基酸或肽。

[20]上述[1]-[18]中任一項的沉淀促進劑，其中，被有機基團保護的有機化合物為任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護的核苷、核苷酸或寡核苷酸。

[21]上述[1]-[18]中任一項的沉淀促進劑，其中，被有機基團保護的有機化合物為核苷或寡核苷酸，

所述核苷或寡核苷酸中，選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的2’位和3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團被有機基團保護，并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護。

[22]上述[1]-[21]中任一項的沉淀促進劑，其中，溶劑是包含極性溶劑的溶劑。

[23]上述[22]的沉淀促進劑，其中，包含極性溶劑的溶劑是極性溶劑和非極性溶劑的混合溶劑。

[24]上述[22]或[23]的沉淀促進劑，其中，極性溶劑為乙腈。

[25]上述[1]-[24]中任一項的沉淀促進劑，其中，使用相對于被有機基團保護的有機化合物為0.1摩爾當量以上的所述沉淀促進劑，使被有機基團保護的有機化合物沉淀。

[26]沉淀混合物，其包含上述[1]-[25]中任一項的沉淀促進劑、以及被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團保護的有機化合物。

[27]上述[26]的沉淀混合物，其中，有機基團所具有的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基是直鏈型。

[28]使被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團保護的有機化合物從溶劑中沉淀的方法，該方法使用上述[1]-[25]中任一項的沉淀促進劑。

[29]上述[28]的方法，其中，溶劑是包含極性溶劑的溶劑。

[30]上述[29]的方法，其中，極性溶劑為乙腈。

[31]上述[28]-[30]中任一項的方法，其中，有機基團所具有的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基是直鏈型。

[32]寡核苷酸的制備方法，該方法包括：在非極性溶劑中包含寡核苷酸和上述[1]-[25]中任一項的沉淀促進劑的反應液中添加極性溶劑，從反應液中分離包含寡核苷酸和沉淀促進劑的沉淀混合物的步驟，

所述寡核苷酸中，至少一個基團被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團保護、并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護。

[33]上述[32]的制備方法，其中，極性溶劑為乙腈。

[34]上述[32]或[33]的制備方法，其中，有機基團所具有的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基是直鏈型。

[35]上述[32]-[34]中任一項的制備方法，該方法通過亞磷酰胺法進行。

[36]寡核苷酸的制備方法，其是利用亞磷酰胺法的寡核苷酸的制備方法，所述亞磷酰胺法中進行一次或重復多次包括下述步驟(1)至(3)的制備循環(huán)，

其中，在第一次循環(huán)中包含下述步驟(4)，在各循環(huán)中包含下述步驟(5)，并且在除最終循環(huán)外的各循環(huán)中包含下述步驟(6)，

(1)在非極性溶劑中包含核苷或寡核苷酸的反應液中添加酸，將5’位羥基的臨時保護基脫保護，利用堿進行中和，得到包含5’位羥基游離體的反應液的步驟，

所述核苷或寡核苷酸中，選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的2’位和3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團保護，5’位羥基被在酸性條件下可除去的臨時保護基保護，并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護；

(2)在非極性溶劑中包含5’位羥基游離體的反應液中添加核苷或寡核苷酸，得到包含亞磷酸三酯化合物的反應液的步驟，

所述核苷或寡核苷酸中，3’位羥基被亞磷酰胺化，并且5’位羥基被在酸性條件下可除去的臨時保護基保護，并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護；

(3)在非極性溶劑中包含亞磷酸三酯化合物的反應液中添加氧化劑或硫化劑，得到包含寡核苷酸的反應液的步驟，

所述寡核苷酸中，選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的2’位和3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團保護，并且5’位羥基被在酸性條件下可除去的臨時保護基保護，并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護；

(4)在步驟(1)之前、步驟(1)和(2)之間、步驟(2)和(3)之間、以及步驟(3)之后的任何時候，在反應液中加入上述[1]-[25]中任一項的沉淀促進劑的步驟；

(5)在步驟(4)之后且為步驟(1)和(2)之間、步驟(2)和(3)之間、以及步驟(3)之后的任何時候，在包含沉淀促進劑的反應液中添加極性溶劑，從反應液中分離包含5’位羥基游離體、亞磷酸三酯化合物或寡核苷酸、和沉淀促進劑的沉淀混合物的步驟；

(6)在步驟(5)中得到的沉淀混合物中加入非極性溶劑，制成反應液的步驟。

[37]上述[36]的制備方法，其中，極性溶劑為乙腈。

[38]上述[36]或[37]的制備方法，其中，有機基團所具有的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基是直鏈型。

[39]上述[36]-[38]中任一項的方法，其中，步驟(5)和(6)在步驟(3)之后執(zhí)行。

[40]上述[36]-[39]中任一項的方法，該方法進一步包含下述步驟(7)：

(7)除去寡核苷酸的全部保護基，分離寡核苷酸的步驟。

[41]上述[36]-[40]中任一項的方法，其中，非極性溶劑是選自鹵系溶劑、芳族系溶劑、酯系溶劑、脂族系溶劑、以及它們的組合中的溶劑。

[發(fā)明的效果]

使用本發(fā)明的沉淀促進劑，可促進具有假固相保護基(其為疏水基)的有機化合物從溶劑中沉淀，并可提高其回收率。

具體實施方式

[術語]

除非在文中另外指明，在本說明書中使用的任何技術術語和科學術語具有與本發(fā)明所屬技術領域的普通技術人員通常所理解的相同的含義。與本說明書所描述的那些方法和材料相似或等效的任何方法和材料均可用于本發(fā)明的實施或試驗中，并且優(yōu)選的方法和材料在后文進行記載。本說明書引用的所有出版物和專利通過引用的方式引入本文中，以便描述和公開在例如關于所述發(fā)明有用的出版物中所描述的構建產(chǎn)品和方法論。

在本說明書中，將為寡核苷酸的構成單元的“核苷”是指這樣的化合物，其中通過n-苷化使核酸堿基與糖(例如，其中2-脫氧核糖、核糖、核糖環(huán)或脫氧核糖環(huán)的2位碳原子和4位碳原子通過二價有機基團鍵合的核糖或脫氧核糖等)的1’位鍵合。其中核糖環(huán)或脫氧核糖環(huán)的2位碳原子和4位碳原子通過二價有機基團鍵合的核糖或脫氧核糖實例包括以下化合物。

在本說明書中，“核苷酸”是指其中磷酸基與核苷鍵合的化合物。

在本說明書中，“寡核苷酸”是指其中一個或多個核苷酸與核苷鍵合的化合物。盡管對本發(fā)明中的寡核苷酸的核苷的數(shù)目沒有特別限定，它優(yōu)選為3–50，更優(yōu)選為5–30。

在本說明書中，“核苷”和“核苷酸”包括具有替代核糖殘基或脫氧核糖殘基的嗎啉殘基的嗎啉代核苷和嗎啉代核苷。

在本說明書中，“嗎啉代核苷”是下式(1)所示的化合物。在本說明書中，式(1)所示的嗎啉代核苷稱為嗎啉代核苷(1)。其它式所示的化合物也可以相同方式提及。

其中堿基表示任選被保護的核酸堿基。

嗎啉代核苷(1)可以按照本身公知的方法(例如wo91/09033a1中描述的方法)或者與其類似的方法進行制備。具體而言，如以下方案所示，利用高碘酸鈉等使相應核糖核苷(2)氧化開環(huán)以形成相應2’,3’-二醛(3)，利用氨使該二醛(3)閉環(huán)以形成2’,3’-二羥基嗎啉代核苷(4)，和利用還原劑(例如氰基硼氫化鈉、三乙酰氧基硼氫化鈉等)將該二羥基嗎啉代核苷(4)還原，由此可得到嗎啉代核苷(1)。

在本說明書中，嗎啉代核苷的位置編號(1’、2’等)對應作為原料核糖核苷(2)的核糖的碳原子的位置編號。在本說明書中，按照核酸化學的慣例，將嗎啉代寡核苷酸的具有游離5’位羥基一側的末端的嗎啉代核苷稱為“5’-末端”、相反側的末端的嗎啉代核苷稱為“3’-末端”。

在本說明書中，對“核酸堿基”沒有特別限制，只要其可用于合成核酸即可，并且包括例如嘧啶堿基如胞嘧啶基、尿嘧啶基、胸腺嘧啶基等，以及嘌呤堿基如腺嘌呤基、鳥嘌呤基等。“任選被保護的核酸堿基”是指，例如在腺嘌呤基、鳥嘌呤基或胞嘧啶基(其為具有氨基的核酸堿基)中，氨基可被保護，優(yōu)選其中核酸堿基的氨基被可耐受核苷酸的5’位的脫保護條件或嗎啉代核苷酸的嗎啉環(huán)氮原子的脫保護條件的保護基保護的核酸堿基。所述“氨基的保護基”沒有特別限制，其實例包括greene的有機合成中的保護基(greene'sprotectivegroupsinorganicsynthesis)，第4版，wiley-interscience，2006等中描述的保護基。該“氨基的保護基”的具體實例包括新戊?；⑿挛祯Ｑ跫谆?、三氟乙酰基、苯氧基乙?；?、4-異丙基苯氧基乙?；?-叔丁基苯氧基乙?；?、乙?；?、苯甲酰基、異丁酰基、二甲基甲脒基、9-芴甲氧羰基等。其中，優(yōu)選苯氧基乙酰基、4-異丙基苯氧基乙?；?、乙?；⒈郊柞；惗□；约岸谆纂呋?。另外，核酸堿基的羰基任選被保護，例如可通過使苯酚、2,5-二氯苯酚、3-氯苯酚、3,5-二氯苯酚、2-甲?；椒?、2-萘酚、4-甲氧基苯酚、4-氯苯酚、2-硝基苯酚、4-硝基苯酚、4-乙酰基氨基苯酚、五氟苯酚、4-新戊酰氧基苯甲醇、4-硝基苯乙醇、2-(甲磺酰基)乙醇、2-(苯磺?；?乙醇、2-氰基乙醇、2-(三甲基甲硅烷基)乙醇、二甲基氨基甲酰氯、二乙基氨基甲酰氯、乙基苯基氨基甲酰氯、1-吡咯烷碳酰氯、4-嗎啉碳酰氯、二苯基氨基甲酰氯等進行反應來保護羰基。在一些情況下，無需特別引入羰基的保護基。此外，除了上述基團之外，該“核酸堿基”還包括修飾的核酸堿基(例如，8-溴腺嘌呤基、8-溴鳥嘌呤基、5-溴胞嘧啶基、5-碘胞嘧啶基、5-溴尿嘧啶基、5-碘尿嘧啶基、5-氟尿嘧啶基、5-甲基胞嘧啶基、8-氧代鳥嘌呤基、次黃嘌呤基(hypoxanthinyl)等)，其是在任意位置被任意1至3個取代基(例如，鹵素原子、烷基、芳烷基、烷氧基、?；⑼檠趸榛?、羥基、氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、羧基、氰基、硝基等)取代的核酸堿基。

在本說明書中，“鹵素原子”是指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。

在本說明書中，“烷基(基團)”的實例包括具有一個或多個碳原子的直鏈或支鏈烷基。當未特別限制碳數(shù)時，其優(yōu)選為c1-10烷基，更優(yōu)選為c1-6烷基。當未特別限制碳數(shù)時，優(yōu)選為例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等，特別優(yōu)選為甲基、乙基。

在本說明書中，“ca-b”是指碳數(shù)為a以上且b以下(a、b各自表示整數(shù))。

在本說明書中，“芳烷基(基團)”的實例包括c7-20芳烷基，優(yōu)選c7-16芳烷基(c6-10芳基-c1-6烷基)。優(yōu)選的具體實例包括芐基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、1-苯基丙基、萘基甲基、1-萘基乙基、1-萘基丙基等，特別優(yōu)選芐基。

在本說明書中，“烷氧基(基團)”的實例包括具有一個或多個碳原子的烷氧基。當未特別限制碳數(shù)時，它優(yōu)選為c1-10烷氧基，更優(yōu)選為c1-6烷氧基。當未特別限制碳數(shù)時，優(yōu)選為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等，特別優(yōu)選為甲氧基、乙氧基。

在本說明書中，“酰基(基團)”的實例包括直鏈或支鏈c1-6烷?；7-13芳?；取Ｆ渚唧w實例包括甲?；⒁阴；?、正丙?；惐；⒄□；?、異丁?；?、新戊?；?、戊酰基、己酰基、苯甲酰基、萘?；?、乙酰丙?；?levulinyl)等，其每個任選地被取代。

在本說明書中，作為“烯基(基團)”，優(yōu)選直鏈或支鏈c2-6烯基等。其實例包括乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、異丙烯基、丁烯基、異丁烯基等。其中，優(yōu)選c2-4烯基。

在本說明書中，作為“炔基(基團)”，優(yōu)選包括c2-6炔基等。其優(yōu)選實例包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基等。其中，優(yōu)選c2-4炔基。

在本說明書中，“環(huán)烷基(基團)”是指環(huán)狀烷基，其實例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基等。其中，優(yōu)選c3-6環(huán)烷基如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等，特別優(yōu)選環(huán)己基。

在本說明書中，“芳基(基團)”是指芳族單環(huán)烴基或多環(huán)(稠合)烴基。其具體實例包括c6-14芳基如苯基、1-萘基、2-萘基、聯(lián)苯基、2-蒽基等等。其中，更優(yōu)選c6-10芳基，特別優(yōu)選苯基。

在本說明書中，“烴基”的實例包括脂族烴基、芳族脂族烴基、單環(huán)飽和烴基、芳族烴基等。其具體實例包括一價基團，例如烷基、烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、芳烷基等和由它們衍生的二價基團。

在本說明書中，“三烷基甲硅烷基(基團)”中的三個烷基可相同或不同。所述烷基可獨立地為直鏈和支鏈中的任一種。作為“三烷基甲硅烷基(基團)”，優(yōu)選三(c1-6烷基)甲硅烷基，例如可提及三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基。

在本說明書中，“亞烷基(基團)”可為直鏈和支鏈中的任一種。作為“亞烷基(基團)”，可提及具有一個或多個碳原子的亞烷基。當未特別限制碳數(shù)時，其優(yōu)選為c1-10亞烷基，更優(yōu)選為c1-6亞烷基。具體的優(yōu)選實例包括亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基和亞己基，特別優(yōu)選亞甲基和亞乙基。

在本說明書中，“連接基”的實例包括-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-、-nhc(＝o)-、-s-、-so-、-so2-、-si(r)(r’)o-、-si(r)(r’)-(r、r’各自獨立地為氫原子或c1-22烴基)等。

在本說明書中，“任選取代”中的“取代基”包括上述鹵素原子、烷基、芳烷基、烷氧基、酰基、烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基以及羥基、硝基、氰基、胍基、羧基、烷氧基羰基(烷氧基部分與上述烷氧基相同)、磺基(sulfogroup)、磷?；?phosphogroup)、烷基硫基(烷基部分與上述烷基相同)、烷基亞硫?；?烷基部分與上述烷基相同)、烷基磺?；?烷基部分與上述烷基相同)、氨基、單烷基氨基(烷基部分與上述烷基相同)、二烷基氨基(烷基部分與上述烷基相同)、羰基(oxogroup)、?；被?酰基部分與上述烷基相同)等。

在本說明書中，“c3-14烴環(huán)”(包括“任選取代的c3-14烴環(huán)”中的“c3-14烴環(huán)”)的實例包括c3-10環(huán)烷烴、c3-10環(huán)烯烴、c6-14芳族烴環(huán)。

該“c3-10環(huán)烷烴”的實例包括環(huán)丙烷、環(huán)丁烷、環(huán)戊烷、環(huán)己烷、環(huán)庚烷、環(huán)辛烷。

該“c3-10環(huán)烯烴”的實例包括環(huán)丙烯、環(huán)丁烯、環(huán)戊烯、環(huán)己烯、環(huán)庚烯、環(huán)辛烯。

該“c6-14芳族烴環(huán)”的實例包括苯、萘。

在本說明書中，“單環(huán)雜環(huán)基”(包括“任選取代的單環(huán)雜環(huán)基”中的“單環(huán)雜環(huán)基”)的實例包括單環(huán)芳族雜環(huán)基和單環(huán)非芳族雜環(huán)基，各自包含1–4個選自氮原子、硫原子和氧原子的雜原子作為除了碳原子以外的構成環(huán)的原子。

該“單環(huán)芳族雜環(huán)基”的實例包括5或6元單環(huán)芳族雜環(huán)基如噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、三唑基、四唑基、三嗪基等。

該“單環(huán)非芳族雜環(huán)基”的實例包括3至8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基如氮丙啶基、環(huán)氧乙烷基、硫雜環(huán)丙烷基、氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基、硫雜環(huán)丁烷基、四氫噻吩基、四氫呋喃基，吡咯啉基、吡咯烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、四氫異噻唑基、四氫噁唑基、四氫異噁唑基、哌啶基、哌嗪基、四氫吡啶基、二氫吡啶基、二氫噻喃基、四氫嘧啶基、四氫噠嗪基、二氫吡喃基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、嗎啉基(例如，嗎啉-4-基)、硫代嗎啉基、氮雜環(huán)庚烷基(azepanyl)、二氮雜環(huán)庚烷基、氮雜基(azepinyl)、氧雜環(huán)庚烷基、氮雜環(huán)辛烷基(azocanyl)、二氮雜環(huán)辛烷基(diazocanyl)等。

[沉淀促進劑]

本發(fā)明的沉淀促進劑是具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基、且所述脂族烴基的碳原子總數(shù)為20以上的有機化合物，所述沉淀促進劑用于使被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團(下文中有時稱為“本發(fā)明的假固相保護基”)保護的有機化合物從溶劑中沉淀。本發(fā)明的沉淀促進劑可使用僅一種，或其兩種或多種可組合使用。

上述溶劑優(yōu)選為包含極性溶劑的溶劑，更優(yōu)選極性溶劑和非極性溶劑的混合溶劑。上述極性溶劑優(yōu)選為乙腈。

本發(fā)明的沉淀促進劑所具有的碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的碳原子總數(shù)需要為20以上，優(yōu)選為22以上。當該碳原子總數(shù)低于20時，液相中的被假固相保護基保護的有機化合物不能充分沉淀，且該有機化合物的回收率降低。盡管未特別限制上限，該碳原子總數(shù)優(yōu)選不超過220，更優(yōu)選不超過100，進一步優(yōu)選不超過70。

本發(fā)明的沉淀促進劑所具有的碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基優(yōu)選為選自直鏈c10-40烷基和直鏈c10-40烯基的基團，更優(yōu)選為直鏈c10-40烷基，進一步優(yōu)選為直鏈c10-30烷基，特別優(yōu)選為直鏈c12-28烷基，最優(yōu)選為直鏈c14-26烷基。本發(fā)明的沉淀促進劑所具有的碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的數(shù)目優(yōu)選為1–12，更優(yōu)選為1–9。

本發(fā)明的沉淀促進劑的一個實施方案為具有一個以上的下式(g)所示結構的有機化合物：

式中，

r¹各自獨立地表示直鏈c10-40烷基；

x¹各自獨立地表示單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-；

環(huán)a¹表示任選取代的c3-14烴環(huán)；

n表示1至4的整數(shù)。

在式(g)中，x¹的鍵合方向對應上述化學式的方向。例如，當x¹為-c(＝o)o-時，其在-c(＝o)o-的左側與r¹鍵合，并在-c(＝o)o-的右側與環(huán)a¹鍵合。

當式(g)中存在多個r¹時，它們可相同或不同。同樣適用于x¹。

本發(fā)明的沉淀促進劑的一個優(yōu)選實施方案是下式(i)所示的化合物?！笆?i)所示的化合物”有時縮寫為“化合物(i)”。其它式所示的化合物也可類似地縮寫。

式中，

r¹各自獨立地表示直鏈c10-40烷基；

x¹各自獨立地表示單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-；

環(huán)a¹和環(huán)b¹各自獨立地表示任選取代的c3-14烴環(huán)；

x²各自獨立地表示-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-、-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)nh-(ch2)q-或-(ch2)p-nhc(＝o)-(ch2)q-，其中p和q各自獨立地表示0至3的整數(shù)；

x³表示單鍵、-(ch2)r-o-、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-、-(ch2)r-oc(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)nh-或-(ch2)r-nhc(＝o)-，其中r表示0至3的整數(shù)；

r²表示氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基、任選取代的單環(huán)雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基(優(yōu)選氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基或任選取代的單環(huán)雜環(huán)基)；

n和m各自獨立地表示1至4的整數(shù)；

當m為1時，m’表示0或1；當m為2、3或4時，m’表示1。

在式(i)中，x¹、x²和x³的鍵合方向各自對應上述化學式的方向。例如，當x³為-(ch2)r-o-時，它在-(ch2)r-o-的左側與環(huán)b¹鍵合、并在-(ch2)r-o-的右側與r²鍵合。

當式(i)中存在多個r¹時，它們可相同或不同。同樣適用于x¹、環(huán)a¹和x²。

本發(fā)明的沉淀促進劑的更優(yōu)選的一個實施方案是下式(ii)所示的化合物。

式中，

r¹各自獨立地表示直鏈c10-40烷基；

x¹各自獨立地表示單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地表示任選取代的c3-14烴環(huán)；

x²各自獨立地表示-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-、-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)nh-(ch2)q-或-(ch2)p-nhc(＝o)-(ch2)q-，其中p和q各自獨立地表示0至3的整數(shù)；

x³表示單鍵、-(ch2)r-o-、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-、-(ch2)r-oc(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)nh-或-(ch2)r-nhc(＝o)-，其中r表示0至3的整數(shù)；

r²表示氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基、任選取代的單環(huán)雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基(優(yōu)選氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基或任選取代的單環(huán)雜環(huán)基)；

m表示1至4的整數(shù)；

當m為1時，m’表示0或1；當m為2、3或4時，m’表示1。

在式(ii)中，x¹、x²和x³的鍵合方向各自對應上述化學式的方向。例如，當x³為-(ch2)r-o-時，它在-(ch2)r-o-的左側與環(huán)b¹鍵合、并在-(ch2)r-o-的右側與r²鍵合。

當式(ii)中存在多個r¹時，它們可相同或不同。同樣適用于x¹。當式(ii)中存在多個環(huán)a²時，它們可相同或不同。同樣適用于x²。

當存在多個r¹時，它們可相同或不同。各r¹獨立地優(yōu)選為直鏈c10-30烷基，更優(yōu)選為直鏈c12-28烷基，進一步優(yōu)選為直鏈c14-26烷基。

在本發(fā)明的一個實施方案中，r²優(yōu)選為氫原子、任選取代的c3-8環(huán)烷基、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基或任選取代的單環(huán)雜環(huán)基，更優(yōu)選為氫原子、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基或任選取代的c6-14芳基，進一步優(yōu)選為氫原子或任選取代的c1-6烷基，特別優(yōu)選為氫原子或c1-6烷基。

在本發(fā)明的另一實施方案中，r²優(yōu)選為氫原子、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基或任選取代的c6-14芳基、任選取代的3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基，更優(yōu)選為氫原子或任選取代的c1-6烷基或3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基，進一步優(yōu)選為氫原子、任選被c1-6烷?；被?例如，乙酰氨基)取代的c1-6烷基或3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基(例如，嗎啉-4-基)或三(c1-6烷基)甲硅烷基(例如，三異丙基甲硅烷基)。

x¹各自獨立地優(yōu)選為單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-，更優(yōu)選為-o-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-，進一步優(yōu)選為-o-。

x²各自獨立地優(yōu)選為-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-(p和q各自獨立地為0–3的整數(shù))，更優(yōu)選為-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-(p和q各自獨立地為0–3的整數(shù))，進一步優(yōu)選為單鍵、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))。

x³優(yōu)選為單鍵、-(ch2)r-o-、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-或-(ch2)r-oc(＝o)-(r為0–3的整數(shù))，更優(yōu)選為單鍵、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-或-(ch2)r-oc(＝o)-(r為0–3的整數(shù))，進一步優(yōu)選為單鍵、-c(＝o)-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-。

n優(yōu)選為1–3的整數(shù)。

m優(yōu)選為1–3的整數(shù)，更優(yōu)選為1或3。

c3-14烴環(huán)優(yōu)選選自苯環(huán)和環(huán)己烷環(huán)，更優(yōu)選為苯環(huán)。

優(yōu)選的化合物(i)是這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c10-30烷基；

x¹各自獨立地為單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地為苯環(huán)或環(huán)己烷環(huán)；

x²各自獨立地為-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-(p和q各自獨立地為0–3的整數(shù))；

x³為單鍵、-(ch2)r-o-、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-或-(ch2)r-oc(＝o)-(r為0–3的整數(shù))；

r²為氫原子、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基、任選取代的3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基；

n為1-3的整數(shù)；

m為1-3的整數(shù)；和

當m為1時，m’為0或1；當m為2或3時，m’為1。

在此實施方案中，更優(yōu)選r²為氫原子、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基或任選取代的c6-14芳基。

更優(yōu)選化合物(i)是這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c12-28烷基；

x¹各自獨立地為-o-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地為苯環(huán)或環(huán)己烷環(huán)；

x²各自獨立地為-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-(p和q各自獨立地為0–3的整數(shù))；

x³為單鍵、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-或-(ch2)r-oc(＝o)-(r為0–3的整數(shù))；

r²為氫原子、任選取代的c1-6烷基或3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基；

n為1-3的整數(shù)；

m為1-3的整數(shù)；和

當m為1時，m’為0或1；當m為2或3時，m’為1。

在此實施方案中，更優(yōu)選r²為氫原子或任選取代的c1-6烷基。

還更優(yōu)選的化合物(i)是這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c12-28烷基；

x¹各自獨立地為-o-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地為苯環(huán)或環(huán)己烷環(huán)；

x²各自獨立地為-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-(p和q各自獨立地為0–3的整數(shù))；

x³為單鍵、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-或-(ch2)r-oc(＝o)-(r為0–3的整數(shù))；

r²為氫原子、任選被c1-6烷?；被?例如，乙?；被?取代的c1-6烷基或3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基(例如，嗎啉-4-基)或三(c1-6烷基)甲硅烷基(例如，三異丙基甲硅烷基)；

n為1-3的整數(shù)；

m為1-3的整數(shù)；和

當m為1時，m’為0或1；當m為2或3時，m’為1。

進一步優(yōu)選的化合物(i)是這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c14-26烷基；

x¹為-o-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地為苯環(huán)或環(huán)己烷環(huán)；

x²各自獨立地為單鍵、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))；

x³為單鍵、-c(＝o)-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

r²為氫原子、任選被c1-6烷?；被?例如，乙酰基氨基)取代的c1-6烷基或3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基(例如，嗎啉-4-基)或三(c1-6烷基)甲硅烷基(例如，三異丙基甲硅烷基)；

n為1-3的整數(shù)；

m為1或3；和

當m為1時，m’為0或1；當m為3時，m’為1。

在上述進一步優(yōu)選的化合物(i)中，更優(yōu)選r²為氫原子或c1-6烷基。

在上述進一步優(yōu)選的化合物(i)中，進一步更優(yōu)選當m為1且m’為0時，x²各自獨立地為單鍵、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))，r²為c1-6烷基。

在上述進一步優(yōu)選的化合物(i)中，進一步更優(yōu)選當m為1或3且m’為1時，x²各自獨立地為-(ch2)p-o-(ch2)q-或-c(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))，x³為單鍵或-c(＝o)o-，且r²為氫原子或c1-6烷基。

特別優(yōu)選的化合物(i)是這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c14-26烷基；

x¹為-o-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自為苯環(huán)；

x²各自獨立地為單鍵、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))；

x³為單鍵、-c(＝o)-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

r²為氫原子或c1-6烷基；

n為1-3的整數(shù)；

m為1或3；和

當m為1時，m’為0或1；當m為3時，m’為1。

在上述特別優(yōu)選的化合物(i)中，更優(yōu)選當m為1且m’為0時，x²為單鍵、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))，且r²為c1-6烷基。

在上述特別優(yōu)選的化合物(i)中，更優(yōu)選當m為1或3且m’為1時，x²為-(ch2)p-o-(ch2)q-或-c(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))，且x³為單鍵或-c(＝o)o-。

優(yōu)選的化合物(ii)為這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c10-30烷基；

x¹各自獨立地為單鍵、-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地為苯環(huán)或環(huán)己烷環(huán)；

x²各自獨立地為-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-(p和q各自獨立地為0–3的整數(shù))；

x³為單鍵、-(ch2)r-o-、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-或-(ch2)r-oc(＝o)-(r為0–3的整數(shù))；

r²為氫原子、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基、任選取代的c6-14芳基、任選取代的3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基；

m為1-3的整數(shù)；和

當m為1時，m’為0或1；當m為2或3時，m’為1。

在此實施方案中，更優(yōu)選r²為氫原子、任選取代的c1-6烷基、任選取代的c2-6烯基、任選取代的c2-6炔基或任選取代的c6-14芳基。

更優(yōu)選的化合物(ii)是這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c12-28烷基；

x¹各自獨立地為-o-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地為苯環(huán)或環(huán)己烷環(huán)；

x²各自獨立地為-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-(p和q各自獨立地為0–3的整數(shù))；

x³為單鍵、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-或-(ch2)r-oc(＝o)-(r為0–3的整數(shù))；

r²為氫原子、任選取代的c1-6烷基或3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基或三(c1-6烷基)甲硅烷基；

m為1-3的整數(shù)；和

當m為1時，m’為0或1；當m為2或3時，m’為1。

在此實施方案中，更優(yōu)選r²為氫原子或任選取代的c1-6烷基。

還更優(yōu)選的化合物(ii)是這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c12-28烷基；

x¹各自獨立地為-o-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自獨立地為苯環(huán)或環(huán)己烷環(huán)；

x²各自獨立地為-(ch2)p-、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)-(ch2)q-、-(ch2)p-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(ch2)q-(p和q各自獨立地為0–3的整數(shù))；

x³為單鍵、-(ch2)r-c(＝o)-、-(ch2)r-c(＝o)o-或-(ch2)r-oc(＝o)-(r為0–3的整數(shù))；

r²為氫原子、任選被c1-6烷?；被?例如，乙酰氨基)取代的c1-6烷基或3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基(例如，嗎啉-4-基)或三(c1-6烷基)甲硅烷基(例如，三異丙基甲硅烷基)；

m為1-3的整數(shù)；和

當m為1時，m’為0或1；當m為2或3時，m’為1。

進一步優(yōu)選的化合物(ii)為這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c14-26烷基；

x¹為-o-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自為苯環(huán)或環(huán)己烷環(huán)；

x²各自獨立地為單鍵、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))；

x³為單鍵、-c(＝o)-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

r²為氫原子、任選被c1-6烷?；被?例如，乙酰氨基)取代的c1-6烷基或3-8元單環(huán)非芳族雜環(huán)基(例如，嗎啉-4-基)或三(c1-6烷基)甲硅烷基(例如，三異丙基甲硅烷基)；

m為1或3；和

當m為1時，m’為0或1；當m為3時，m’為1。

在上述進一步優(yōu)選的化合物(ii)中，更優(yōu)選r²為氫原子或c1-6烷基。

在上述進一步優(yōu)選的化合物(ii)中，進一步更優(yōu)選當m為1且m’為0時，x²各自獨立地為單鍵、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))，且r²為c1-6烷基。

在上述進一步優(yōu)選的化合物(ii)中，進一步更優(yōu)選當m為1或3且m’為1時，x²各自獨立地為-(ch2)p-o-(ch2)q-或-c(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))，x³為單鍵或-c(＝o)o-，且r²為氫原子或c1-6烷基。

特別優(yōu)選的化合物(ii)是這樣的化合物，其中：

r¹各自獨立地為直鏈c14-26烷基；

x¹為-o-；

環(huán)a²和環(huán)b¹各自為苯環(huán)；

x²各自獨立地為單鍵、-(ch2)p-o-(ch2)q-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))；

x³為單鍵、-c(＝o)-、-c(＝o)o-或-oc(＝o)-；

r²為氫原子或c1-6烷基；

m為1或3；和

當m為1時，m’為0或1；當m為3時，m’為1。

在上述特別優(yōu)選的化合物(ii)中，更優(yōu)選當m為1且m’為0時，x²為單鍵、-c(＝o)o-(ch2)q-或-(ch2)p-oc(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))，且r²為c1-6烷基。

在上述特別優(yōu)選的化合物(ii)中，更優(yōu)選當m為1或3且m’為1時，x²為-(ch2)p-o-(ch2)q-或-c(＝o)-(p和q各自獨立地為0或1的整數(shù))，且x³為單鍵或-c(＝o)o-。

上述化合物(i)中包括的具體實例包括下式(iv-a)-(iv-n)所示的化合物。在所述具體實例中，優(yōu)選化合物(iv-a)-化合物(iv-l)，更優(yōu)選化合物(iv-a)-化合物(iv-j)，進一步優(yōu)選化合物(iv-a)-化合物(iv-g)，特別優(yōu)選化合物(iv-a)-化合物(iv-e)，最優(yōu)選化合物(iv-a)和化合物(iv-b)。

本發(fā)明的沉淀促進劑的另一實施方案為經(jīng)由選自-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-和-nhc(＝o)-中的基團而具有一個以上的直鏈c10-40烷基、并且進一步任選取代的c1-10烷烴(下文中有時被稱為“烷烴化合物”)。

c1-10烷烴可為直鏈或支鏈。c1-10烷烴的碳數(shù)優(yōu)選為1–8，更優(yōu)選為2–6，進一步優(yōu)選為3–6。

烷烴化合物所具有的直鏈c10-40烷基優(yōu)選為直鏈c10-30烷基，更優(yōu)選為直鏈c12-28烷基，進一步優(yōu)選為直鏈c14-26烷基。烷烴化合物所具有的直鏈c10-40烷基的數(shù)目優(yōu)選為2–6，更優(yōu)選為2–4，進一步優(yōu)選為3或4。

將直鏈c10-40烷基和c1-10烷烴鍵合的基團優(yōu)選為選自-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-和-oc(＝o)-中的基團，更優(yōu)選為-o-。

優(yōu)選的烷烴化合物為經(jīng)由選自-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-和-oc(＝o)-中的基團而具有2–6個的直鏈c10-30烷基并進而任選取代的c1-8烷烴。更優(yōu)選的烷烴化合物為經(jīng)由-o-而具有2–4個的直鏈c10-30烷基并進而任選取代的c2-6烷烴。進一步優(yōu)選的烷烴化合物為經(jīng)由-o-而具有3或4個的直鏈c14-26烷基并進而任選取代的c3-6烷烴。

烷烴化合物的具體實例包括下式(v-a)或(v-b)所示的化合物：

[本發(fā)明的沉淀促進劑的制備方法]

例如，其中x¹為-o-、m為1且m’為0的化合物(i)可如下制備：通過使用下式中所示的具有鹵素原子(x^a)的化合物(ia-1)將化合物(ia-2)的羥基烷基化來制備。烷基化是有機合成領域中眾所周知的，本領域普通技術人員可通過合適地設定針對其的條件進行烷基化。

其中x^a為鹵素原子(優(yōu)選氯離子或溴離子)，且其它符號如上所定義。

例如，其中x²為-ch2-o-且m’為1的化合物(i)可如下制備：通過使用下式中所示的具有鹵素原子(x^a)的化合物(ia-3)將化合物(ib)的羥基烷基化來制備。

其中各符號如上所定義。

本發(fā)明的其它沉淀促進劑也可按照本身已知的方法(例如，烷基化、酯化、酰胺化等)或與其類似的方法由起始化合物制備。作為起始化合物，可使用商業(yè)上可獲得的產(chǎn)品，或可使用按照本身已知的方法或與其類似的方法制備的化合物。

[本發(fā)明的假固相保護基]

本發(fā)明的沉淀促進劑用于使被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團(即，本發(fā)明的假固相保護基)保護的有機化合物從包含該化合物的溶劑中沉淀。本發(fā)明的假固相保護基和被所述假固相保護基保護的有機化合物的具體實例包括wo2012/157723、wo2012/157723、wo2014/189142、jp-a-2010-116418等中公開的核苷、核苷酸等，和wo2010/104169、wo2010/113939、wo2011/078295、wo2012/029794、jp-a-2009-185063、jp-a-2010-275254等中公開的氨基酸、肽等。本發(fā)明的假固相保護基優(yōu)選為在酸性條件下不被除去但在堿性條件下可被除去的有機基團。

本發(fā)明的假固相保護基的一個實施方案為例如，具有c6-14芳族烴環(huán)的有機基團，所述c6-14芳族烴環(huán)經(jīng)由連接基與“經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的烴基”鍵合。作為上述烴基，可重述上述那些，且優(yōu)選脂族烴基、芳脂族烴基(例如，芐基)和其中單環(huán)飽和烴基與脂族烴基鍵合的基團(例如，環(huán)己基甲基)?！敖?jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的烴基”還包括“碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基”本身(即，“經(jīng)由單鍵鍵合有脂族烴基的脂族烴基”)。

盡管本發(fā)明的假固相保護基所具有的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基可為直鏈或支鏈，它優(yōu)選為直鏈以充分發(fā)揮本發(fā)明的沉淀促進劑的效果。碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基更優(yōu)選為選自直鏈c10-40烷基和直鏈c10-40烯基的基團，還更優(yōu)選為直鏈c10-40烷基，進一步優(yōu)選為直鏈c10-30烷基，特別優(yōu)選為直鏈c12-28烷基，且最優(yōu)選為直鏈c14-26烷基。

上述連接基優(yōu)選選自-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-、-nhc(＝o)-、-s-、-so-、-so2-、-si(r)(r’)o-、-si(r)(r’)-(r、r’各自獨立地為氫原子或c1-22烴基)，更優(yōu)選選自-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-和-nhc(＝o)-，且更優(yōu)選為-o-。

上述c6-14芳族烴環(huán)優(yōu)選選自苯環(huán)和萘環(huán)，且更優(yōu)選為苯環(huán)。

上述“c6-14芳族烴環(huán)，其經(jīng)由連接基與‘經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的烴基’鍵合”優(yōu)選為“c6-14芳族烴環(huán)，其經(jīng)由連接基與碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基鍵合”，更優(yōu)選為“c6-14芳族烴環(huán)，其經(jīng)由連接基與選自直鏈c10-40烷基和直鏈c10-40烯基的基團鍵合”，還更優(yōu)選為“c6-14芳族烴環(huán)，其經(jīng)由連接基與直鏈c10-40烷基鍵合”，進一步優(yōu)選為“c6-14芳族烴環(huán)，其經(jīng)由連接基與直鏈c10-30烷基鍵合”，特別優(yōu)選為“c6-14芳族烴環(huán)，其經(jīng)由連接基與直鏈c12-28烷基鍵合”，且最優(yōu)選“c6-14芳族烴環(huán)，其經(jīng)由連接基與直鏈c14-26烷基鍵合”。在這些基團中，所述連接基優(yōu)選為-o-。在這些基團中，所述c6-14芳族烴環(huán)優(yōu)選為苯環(huán)。

上述假固相保護基優(yōu)選為“具有苯環(huán)的有機基團，所述苯環(huán)經(jīng)由-o-與‘經(jīng)由單鍵或-o-鍵合有直鏈c10-40烷基的烴基’鍵合”，更優(yōu)選為“具有苯環(huán)的有機基團，所述苯環(huán)經(jīng)由-o-與直鏈c10-40烷基鍵合”，進一步優(yōu)選為“具有苯環(huán)的有機基團，所述苯環(huán)經(jīng)由-o-與直鏈c10-30烷基鍵合”，特別優(yōu)選為“具有苯環(huán)的有機基團，所述苯環(huán)經(jīng)由-o-與直鏈c12-28烷基鍵合”，最優(yōu)選為“具有苯環(huán)的有機基團，所述苯環(huán)經(jīng)由-o-與直鏈c14-26烷基鍵合”。

本發(fā)明的假固相保護基為，例如，下式(iii)所示的基團(下文中被稱為“假固相保護基(iii)”)：

^**l-y-z(iii)

式中，

^**表示與被保護的基團的鍵合位置；

l表示單鍵、或者式(a1)或(a1’)所示的基團：

式中，

^*表示與y的鍵合位置；

^**與前述的定義相同；

r⁸和r⁹各自獨立地表示c1-22烴基；

l1表示二價c1-22烴基；并且

l2表示單鍵，或者表示^**c(＝o)n(r^2’)-r^1’-n(r³)^***所示的基團，式中^**表示與l1的鍵合位置，^***表示與c＝o的鍵合位置，r^1’表示c1-22亞烷基，r^2’和r³各自獨立地表示氫原子或c1-22烷基，或者r^2’和r³任選地一起形成環(huán)；

y表示單鍵、氧原子或nr，其中r表示氫原子、烷基或芳烷基；以及

z表示式(a2)、式(a2’)或式(a2”){優(yōu)選式(a2)或式(a2’)}所示的基團：

式中，

^*表示鍵合位置；

r⁴為氫原子，或者當rb為下述式(a3)所示的基團時，r⁴任選地與環(huán)c的r⁶一起表示單鍵或-o-、并與環(huán)a或環(huán)b及環(huán)c一起形成稠環(huán)(優(yōu)選芴環(huán)或呫噸環(huán))；

k個q各自獨立地表示-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-；

k個r⁵各自獨立地表示經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的烴基(優(yōu)選經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的烴基)；

k表示1至4的整數(shù)；

環(huán)a和環(huán)b各自獨立地除了具有k個qr⁵以外，任選地進一步具有取代基，所述取代基選自鹵素原子、任選被鹵素原子取代的c1-6烷基、和任選被鹵素原子取代的c1-6烷氧基；

ra表示氫原子、或任選被鹵素原子取代的苯基(優(yōu)選氫原子)；以及

rb表示氫原子、或式(a3)所示的基團：

式中，^*表示鍵合位置；

j表示0至4的整數(shù)；

j個q各自獨立地表示與前述相同的含義；

j個r⁷各自獨立地表示經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的烴基(優(yōu)選經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的烴基)；

r⁶表示氫原子，或者任選地與環(huán)a或環(huán)b的r⁴一起表示單鍵或-o-、并且與環(huán)a或環(huán)b及環(huán)c一起形成稠環(huán)(優(yōu)選芴環(huán)或呫噸環(huán))；并且

環(huán)c除了具有j個or⁷以外，任選地進一步具有取代基，所述取代基選自鹵素原子、任選被鹵素原子取代的c1-6烷基、和任選被鹵素原子取代的c1-6烷氧基，或者

ra和rb一起形成羰基。

被假固相保護基(iii)保護的基團的實例包括羥基、氨基、羧基。

式(a2)、式(a2’)和式(a2”)中的r⁵、以及式(a3)中的r⁷所具有的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基各自獨立地優(yōu)選為選自直鏈c10-40烷基和直鏈c10-40烯基的基團，更優(yōu)選為直鏈c10-40烷基，進一步優(yōu)選為直鏈c10-30烷基，特別優(yōu)選為直鏈c12-28烷基，最優(yōu)選為直鏈c14-26烷基。

式(a2)、式(a2’)和式(a2”)中的r⁵、以及式(a3)中的r⁷所具有的連接基各自獨立地優(yōu)選為-o-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nh-或-nhc(＝o)-，更優(yōu)選為-o-。

式(a2)、式(a2’)和式(a2”)中的r⁵、以及式(a3)中的r⁷(即，經(jīng)由單鍵或連接基鍵合有碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的烴基)各自獨立地優(yōu)選為選自直鏈c10-40烷基和直鏈c10-40烯基的基團，更優(yōu)選為直鏈c10-40烷基，進一步優(yōu)選為直鏈c10-30烷基，特別優(yōu)選為直鏈c12-28烷基，最優(yōu)選為直鏈c14-26烷基。

式(a2)、式(a2’)、式(a2”)和式(a3)中的q為優(yōu)選-o-。

在式(iii)中，式(a1)所示的l的優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

l1為二價c1-22烴基或ch2-o-1,4-亞苯基-o-ch2；和

l2為單鍵，或^**c(＝o)n(r^2’)-r^1’-n(r³)^***所示的基團，其中^**表示與l1的鍵合位置，^***表示與c＝o的鍵合位置，r^1’為c1-6亞烷基，r^2’和r³各自獨立地為氫原子或任選取代的c1-6烷基，或r^2’和r³任選地一起形成任選取代的c1-6亞烷基鍵。

式(a1)所示的l的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

l1為二價c1-22烴基；和

l2為單鍵。

式(a1)所示的l的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

l1為亞乙基；和

l2為^**c(＝o)n(r^2’)-r^1’-n(r³)^***所示的基團，其中^**表示與l1的鍵合位置，^***表示與c＝o的鍵合位置，r^1’為c1-22亞烷基，r^2’和r³各自獨立地為氫原子或c1-22烷基，或r^2’和r³任選地一起形成環(huán)。

式(a1)所示的l的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

l1為亞乙基；和

l2為^**c(＝o)n(r^2’)-r^1’-n(r³)^***所示的基團，其中^**表示與l1的鍵合位置，^***表示與c＝o的鍵合位置，并且n(r^2’)-r^1’-n(r³)部分形成哌嗪二基(例如，1,4-哌嗪二基)。

式(a1)所示的l的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

l1為亞乙基；和

l2為^**c(＝o)n(r^2’)-r^1’-n(r³)^***所示的基團，其中^**表示與l1的鍵合位置，^***表示與c＝o的鍵合位置，r^1’為亞戊基或亞己基，且r^2’和r³各自獨立地為氫原子或甲基。

式(a1)所示的l的特別優(yōu)選的實施方案是琥珀?；?，其可以低成本容易地獲得。

現(xiàn)在，解釋式(iii)中式(a1’)所示的l。

式(a1’)中的l1優(yōu)選為二價c6-10芳族烴基，更優(yōu)選為亞苯基。

式(a1’)中的l2優(yōu)選為單鍵。

式(a1’)中l(wèi)1和l2的優(yōu)選組合是l1為二價c6-10芳族烴基和l2為單鍵的組合。式(a1’)中l(wèi)1和l2的更優(yōu)選組合是l1為亞苯基和l2為單鍵的組合。

式(a1’)中r⁸和r⁹各自獨立地優(yōu)選為c1-22烷基，更優(yōu)選為c1-10烷基。

式(a1’)所示的l的優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

r⁸和r⁹各自獨立地為c1-22烷基；

l1為二價c6-10芳族烴基；和

l2為單鍵。

式(a1’)所示的l的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基；

l1為亞苯基；和

l2為單鍵。

式(iii)中的y為單鍵、氧原子或nr(r為氫原子、烷基或芳烷基)。當y為單鍵時，l為單鍵，z為式(a2)所示的基團，r⁴為氫原子，并且ra和rb優(yōu)選一起形成羰基。

式(iii)中的y優(yōu)選為氧原子或nr(r為氫原子、烷基或芳烷基)，r優(yōu)選為氫原子、c1-6烷基或c7-16芳烷基，更優(yōu)選為氫原子、甲基、乙基或芐基，特別優(yōu)選為氫原子。y特別優(yōu)選為氧原子。

式(iii)中的z優(yōu)選為式(a2)或式(a2’)所示的基團，更優(yōu)選為式(a2)所示的基團。在式(a2)中，r⁴優(yōu)選為氫原子。在式(a2)中，ra和rb各自優(yōu)選為氫原子。

式(a2)所示的z的優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

ra和rb各自為氫原子；

r⁴為氫原子；

k為1-3的整數(shù)；

k個q各自為-o-；和

k個r⁵各自獨立地為直鏈c10-40烷基。

當z為此實施方案時，更優(yōu)選l為琥珀?；?，或式(a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基、l1為二價亞苯基，l2為單鍵)，且y為氧原子，或l-y為單鍵，并且進一步優(yōu)選l為琥珀酰基，或式(a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，且l2為單鍵)，且y為氧原子。

式(a2)所示的z的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

ra和rb各自為氫原子；

r⁴為氫原子；

k為1–3的整數(shù)；

k個q各自為-o-；和

k個r⁵各自獨立地為經(jīng)由-o-鍵合有1至3個直鏈c10-40烷基的芐基、或經(jīng)由-o-鍵合有1至3個直鏈c10-40烷基的環(huán)己基甲基；并且

環(huán)a除了具有k個qr⁵以外，任選地進一步具有取代基，所述取代基選自鹵素原子、任選被鹵素原子取代的c1-6烷基、和任選被鹵素原子取代的c1-6烷氧基。

當z為此實施方案時，更優(yōu)選l為琥珀酰基或式(a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，且l2為單鍵)，且y為氧原子，或l-y為單鍵，并且進一步優(yōu)選l為琥珀?；蚴?a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，且l2為單鍵)，且y為氧原子。

式(a2)所示的z的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

ra和r⁴各自為氫原子；和

rb為式(a3)所示的基團，其中^*為鍵合位置，j為0–3的整數(shù)，j個q為-o-，j個r⁷各自獨立地為c10-40烷基，r⁶為氫原子。

當z為此實施方案時，更優(yōu)選l為琥珀?；蚴?a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，且l2為單鍵)，且y為氧原子，或l-y為單鍵，并且進一步優(yōu)選l為琥珀?；蚴?a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，且l2為單鍵)，且y為氧原子。

式(a2)所示的z的還有另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

ra為氫原子；和

rb為式(a3)所示的基團，其中^*為鍵合位置，j為0–3的整數(shù)，j個q為-o-，j個r⁷各自獨立地為直鏈c10-40烷基，且r⁶與環(huán)a的r⁴一起形成單鍵或-o-，由此環(huán)a和環(huán)c一起形成芴環(huán)或呫噸環(huán)。

當z為此實施方案時，更優(yōu)選l為琥珀?；蚴?a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，且l2為單鍵)，且y為氧原子，或l-y為單鍵，并且進一步優(yōu)選l為琥珀?；蚴?a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，且l2為單鍵)，并且y為氧原子。

式(a2)所示的z的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

ra和rb一起形成羰基；

r⁴為氫原子；

k為1–3的整數(shù)；

k個q為-o-；且

k個r⁵各自獨立地為直鏈c10-40烷基。

當z為此實施方案時，更優(yōu)選l-y為單鍵或琥珀酰-1,4-哌嗪二基，并且進一步優(yōu)選l-y為單鍵。

式(a2)所示的z的另一優(yōu)選實施方案為這樣的基團，其中：

ra和rb一起形成羰基；

r⁴為氫原子；

k為1–3的整數(shù)；

k個q各自為-o-；并且

k個r⁵各自獨立地為經(jīng)由-o-鍵合有1至3個直鏈c10-40烷基的芐基、或經(jīng)由-o-鍵合有1至3個直鏈c10-40烷基的環(huán)己基甲基；和

環(huán)a除了具有k個qr⁵以外，任選地進一步具有取代基，所述取代基選自鹵素原子、任選被鹵素原子取代的c1-6烷基、和任選被鹵素原子取代的c1-6烷氧基。

當z為此實施方案時，更優(yōu)選l-y為單鍵或琥珀酰-1,4-哌嗪二基，并且進一步優(yōu)選l-y為單鍵。

假固相保護基(iii)優(yōu)選為在酸性條件下不被除去但在堿性條件下可被除去的基團。

具有碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的假固相保護基(iii)(其用于保護羥基)的具體實例1包括

這樣的基團，其中：

l為琥珀?；蚴?a1’)所示的基團(式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基、l¹為二價亞苯基，且l²為單鍵)，并且y-z為3,4,5-三(十八烷氧基)芐氧基、2,4-二(十八烷氧基)芐氧基、2,4-二(二十二烷氧基)芐氧基、3,5-二(二十二烷氧基)芐氧基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)芐基氨基、2,4-二(二十二烷氧基)芐基氨基、3,5-二(二十二烷氧基)芐基氨基、雙(4-二十二烷氧基苯基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]芐基氨基、2,4-雙(十二烷氧基)芐基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基、雙[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)苯基]甲基氨基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、3,4,5-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基、3,5-二(二十二烷氧基)環(huán)己基甲氧基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]環(huán)己基甲氧基、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]環(huán)己基甲氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲基氨基、2,4-二(二十二烷氧基)環(huán)己基甲基氨基、3,5-二(二十二烷氧基)環(huán)己基甲基氨基、雙(4-二十二烷氧基苯基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]環(huán)己基甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]環(huán)己基甲基氨基、2,4-雙(十二烷氧基)環(huán)己基甲基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基、雙[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)苯基]甲基氨基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]環(huán)己基甲基氨基、或3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]環(huán)己基甲基氨基；

這樣的基團，其中：

l-y為琥珀酰-1,4-哌嗪二基，并且z為3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰基、2,4-二(十八烷氧基)苯甲?；?、2,4-二(二十二烷氧基)苯甲?；?、3,5-二(二十二烷氧基)苯甲?；?、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲?；?、或3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲?；?；和

這樣的基團，其中：

l-y為單鍵，并且z為(3,5-雙二十二烷氧基苯基)二苯基甲基或雙(4-氯苯基)(3,5-雙二十二烷氧基苯基)甲基。

具有碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的假固相保護基(iii)(其用于保護氨基或亞氨基)的具體實例2包括這樣的基團，其中l(wèi)-y為單鍵，且z為3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰基、2,4-二(十八烷氧基)苯甲酰基、2,4-二(二十二烷氧基)苯甲?；?,5-二(二十二烷氧基)苯甲?；?,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲?；?、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲?；?3,5-雙二十二烷氧基苯基)二苯基甲基、或雙(4-氯苯基)(3,5-雙二十二烷氧基苯基)甲基。

具有碳原子數(shù)為10以上的直鏈脂族烴基的假固相保護基(iii)(其用于保護羧基)的具體實例3包括這樣的基團，其中l(wèi)-y為單鍵，并且z為3,4,5-三(十八烷氧基)芐基、2,4-二(十八烷氧基)芐基、2,4-二(二十二烷氧基)芐基、3,5-二(二十二烷氧基)芐基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基、(3,5-雙二十二烷氧基苯基)二苯基甲基、或雙(4-氯苯基)(3,5-雙二十二烷氧基苯基)甲基。

具有碳原子數(shù)為10以上的支鏈脂族烴基的假固相保護基(iii)(其用于保護羥基)的具體實例4包括這樣的基團，其中l(wèi)為琥珀?；蚴?a1’)所示的基團(在式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l¹為二價亞苯基，且l²為單鍵)，且y-z為4-(2’,3’-二氫植基氧基)芐氧基、4-(3,7,11-三甲基十二烷氧基)芐氧基、4-[2,2,4,8,10,10-六甲基-5-十二酰基氨基]芐氧基、4-(2’,3’-二氫植基氧基)-2-甲基芐氧基、4-(2’,3’-二氫植基氧基)-2-甲氧基芐氧基、2,4-二(2’,3’-二氫植基氧基)芐氧基、3,5-二(2’,3’-二氫植基氧基)芐氧基、2-[3’,4’,5’-三(2”,3”-二氫植基氧基)芐氧基]-4-甲氧基芐氧基、3,4,5-三(2’,3’-二氫植基氧基)芐氧基、3,4,5-三[3,4,5-三(2’,3’-二氫植基氧基)芐氧基]芐氧基、2,4-二(2-癸基十四烷氧基)芐氧基、4-(2’,3’-二氫植基氧基)芐基氨基、4-(3,7,11-三甲基十二烷氧基)芐基氨基、4-[2,2,4,8,10,10-六甲基-5-十二?；被鵠芐基氨基、4-(2’,3’-二氫植基氧基)-2-甲基芐基氨基、4-(2’,3’-二氫植基氧基)-2-甲氧基芐基氨基、2,4-二(2’,3’-二氫植基氧基)芐基氨基、3,5-二(2’,3’-二氫植基氧基)芐基氨基、2-[3’,4’,5’-三(2”,3”-二氫植基氧基)芐氧基]-4-甲氧基芐基氨基、3,4,5-三(2’,3’-二氫植基氧基)芐基氨基、3,4,5-三[3,4,5-三(2’,3’-二氫植基氧基)芐氧基]芐基氨基、{[(2-氯-5-(2’,3’-二氫植基氧基)苯基)]苯基甲基}氨基、{[2,3,4-三(2’,3’-二氫植基氧基)苯基]苯基甲基}氨基、或{雙[4-(2’,3’-二氫植基氧基)苯基]甲基}氨基。

在此，2,3-二氫植基是指3,7,11,15-四甲基十六烷基。同樣適用于2’,3’-二氫植基和2”,3”-二氫植基。

具有碳原子數(shù)為10以上的支鏈脂族烴基的假固相保護基(iii)(其用于保護氨基或亞氨基)的具體實例5包括這樣的基團，其中l(wèi)-y為單鍵，且z為4-(2’,3’-二氫植基氧基)苯甲?；?、4-(3,7,11-三甲基十二烷氧基)苯甲?；?、4-[2,2,4,8,10,10-六甲基-5-十二?；被鵠苯甲?；?、4-(2’,3’-二氫植基氧基)-2-甲基苯甲?；?、4-(2’,3’-二氫植基氧基)-2-甲氧基苯甲?；?、2,4-二(2’,3’-二氫植基氧基)苯甲酰基、3,5-二(2’,3’-二氫植基氧基)苯甲酰基、2-[3’,4’,5’-三(2”,3”-二氫植基氧基)芐氧基]-4-甲氧基苯甲?；?,4,5-三(2’,3’-二氫植基氧基)苯甲?；?,4,5-三[3,4,5-三(2’,3’-二氫植基氧基)芐氧基]苯甲?；⒒?,4-二(2-癸基十四烷氧基)苯甲?；?/p>

具有碳原子數(shù)為10以上的支鏈脂族烴基的假固相保護基(iii)(其用于保護羧基)的具體實例6包括這樣的基團，其中l(wèi)-y為單鍵，且z為4-(2’,3’-二氫植基氧基)芐基、4-(3,7,11-三甲基十二烷氧基)芐基、4-[2,2,4,8,10,10-六甲基-5-十二?；被鵠芐基、4-(2’,3’-二氫植基氧基)-2-甲基芐基、4-(2’,3’-二氫植基氧基)-2-甲氧基芐基、2,4-二(2’,3’-二氫植基氧基)芐基、3,5-二(2’,3’-二氫植基氧基)芐基、2-[3’,4’,5’-三(2”,3”-二氫植基氧基)芐氧基]-4-甲氧基芐基、3,4,5-三(2’,3’-二氫植基氧基)芐基、3,4,5-三[3,4,5-三(2’,3’-二氫植基氧基)芐氧基]芐基、或2,4-二(2-癸基十四烷氧基)芐基。

假固相保護基(iii)優(yōu)選為上述假固相保護基(iii)的具體實例1-具體實例6的任一種，更優(yōu)選為具體實例1-具體實例3的任一種。

假固相保護基(iii)還更優(yōu)選

這樣的基團，其中l(wèi)為琥珀?；蚴?a1’)所示的基團(式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，l2為單鍵)，且y-z為3,4,5-三(十八烷氧基)芐氧基、2,4-二(十八烷氧基)芐氧基、2,4-二(二十二烷氧基)芐氧基、3,5-二(二十二烷氧基)芐氧基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)芐基氨基、2,4-二(二十二烷氧基)芐基氨基、3,5-二(二十二烷氧基)芐基氨基、二(4-二十二烷氧基苯基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]芐基氨基、2,4-二(十二烷氧基)芐基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基、雙[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)苯基]甲基氨基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、或3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基；

這樣的基團，其中l(wèi)-y為琥珀酰-1,4-哌嗪二基，并且z為3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰基、2,4-二(十八烷氧基)苯甲酰基、2,4-二(二十二烷氧基)苯甲?；?、3,5-二(二十二烷氧基)苯甲?；?,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲?；⒒?,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲?；?；或

這樣的基團，其中l(wèi)-y為單鍵，并且z為3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲?；?、2,4-二(十八烷氧基)苯甲?；?、2,4-二(二十二烷氧基)苯甲?；?、3,5-二(二十二烷氧基)苯甲酰基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲?；?、或3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲?；?/p>

假固相保護基(iii)進一步優(yōu)選

這樣的基團，其中l(wèi)為琥珀酰基或式(a1’)所示的基團(式(a1’)中，r⁸和r⁹各自獨立地為c1-10烷基，l1為二價亞苯基，l2為單鍵)，并且y-z為3,4,5-三(十八烷氧基)芐氧基、3,5-二(二十二烷氧基)芐氧基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)芐基氨基、2,4-二(二十二烷氧基)芐基氨基、3,5-二(二十二烷氧基)芐基氨基、二(4-二十二烷氧基苯基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]芐基氨基、2,4-二(十二烷氧基)芐基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基、雙[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)苯基]甲基氨基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、或3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基；或

這樣的基團，其中l(wèi)-y為單鍵，并且z為3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲?；?。

假固相保護基(iii)特別優(yōu)選為

這樣的基團，其中l(wèi)為琥珀?；?，并且y-z為3,4,5-三(十八烷氧基)芐氧基、3,5-二(二十二烷氧基)芐氧基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)芐基氨基、2,4-二(二十二烷氧基)芐基氨基、3,5-二(二十二烷氧基)芐基氨基、二(4-二十二烷氧基苯基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]芐基氨基、2,4-二(十二烷氧基)芐基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基、雙[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)苯基]甲基氨基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、或3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基；或

這樣的基團，其中l(wèi)-y為單鍵，并且z為3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲?；?。

假固相保護基(iii)最優(yōu)選為這樣的基團，其中l(wèi)為琥珀酰基，并且y-z為3,4,5-三(十八烷氧基)芐氧基、3,5-二(二十二烷氧基)芐氧基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐氧基、3,4,5-三(十八烷氧基)芐基氨基、2,4-二(二十二烷氧基)芐基氨基、3,5-二(二十二烷氧基)芐基氨基、二(4-二十二烷氧基苯基)甲基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、4-甲氧基-2-[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)環(huán)己基甲氧基]芐基氨基、2,4-二(十二烷氧基)芐基氨基、苯基(2,3,4-三(十八烷氧基)苯基)甲基氨基、雙[4-(12-二十二烷氧基十二烷氧基)苯基]甲基氨基、3,5-雙[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基、或3,4,5-三[3’,4’,5’-三(十八烷氧基)芐氧基]芐基氨基。

用于形成假固相保護基的化合物可通過本身已知的方法(例如，上述專利文獻1或2中所述的方法、酯化、甲硅烷基化等)或與其類似的方法制備。例如，用于形成假固相保護基的式：z-y-h所示的醇化合物或胺化合物可通過以下步驟或與其類似的步驟制備。

其中q’為-o-、-s-、-c(＝o)o-或-nh-，rg為氫原子、orh基團(其中rh為烷基如c1-6烷基等、芳烷基如芐基等，以及類似基團)或式(a3)所示的基團：

其中各符號如上所定義，

y1為離去基團如鹵素原子等，并且其它符號如上所定義。

步驟(a)

在此步驟中，將r⁵引入式(x)所示的化合物的q’h(其中q’為-o-、-s-、-c(＝o)o-或-nh-)中以制備式(x-a)所示的化合物。當q’為-o-、-s-或-nh-時，使用對應于r⁵的鹵化物(氯化物，溴化物或碘化物)、對應于r⁵的羧酸或酰鹵或對應于r⁵的烷基磺酰氧基化產(chǎn)物(例如，甲烷磺酰氧基化產(chǎn)物等)或芳基磺酰氧基化產(chǎn)物(例如，對甲苯磺酰氧基化產(chǎn)物等)，在存在或不存在堿的情況下，在不影響反應的溶劑中進行該反應。此外，當q’為-o-時，該反應可在光延(mitsunobu)反應條件下進行，其中使化合物(x)與對應于r⁵的氫氧化物在三苯基膦和偶氮二羧酸二異丙酯的存在下進行反應。此外，當q’為-c(＝o)o-時，例如，化合物(x-a)可通過使化合物(x)與對應于r⁵的胺或氫氧化物在縮合劑的存在下進行反應來合成。

堿的實例包括堿金屬鹽如碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、叔丁醇鉀等；堿金屬氫化物如氫化鈉、氫化鉀等；胺如吡啶、三乙胺、n,n-二甲基苯胺、1,8-二氮雜二環(huán)[5.4.0]-7-十一碳烯等，以及類似物，其中優(yōu)選碳酸鈉、碳酸鉀、氫化鈉等。

溶劑的實例包括芳族烴如甲苯、二甲苯等；醚如四氫呋喃、二噁烷等；酰胺如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等；鹵代烴如氯仿、二氯甲烷等；腈如乙腈等、n-甲基吡咯烷酮等或其混合物，其中，優(yōu)選的是二甲基甲酰胺、四氫呋喃、甲苯、n-甲基吡咯烷酮等。

反應溫度優(yōu)選為50-150℃，更優(yōu)選為60-130℃。反應時間優(yōu)選為2-30hr，更優(yōu)選為3-10hr。

步驟(b)

在此步驟中，將化合物(x-a)還原，得到由式(xi-a)所示的化合物?？赏ㄟ^使用還原劑的方法進行此還原反應。

待用于此還原反應的還原劑的實例包括金屬氫化物(硼氫化鈉、硼氫化鋰、氰基硼氫化鈉、三乙酰氧基硼氫化鈉、二丁基氫化鋁、氫化鋁、氫化鋁鋰等)等，其中，優(yōu)選的是硼氫化鈉、二丁基氫化鋁等。

此反應在不影響反應的溶劑中進行。溶劑的實例包括醇如甲醇、乙醇等；醚如二乙醚、四氫呋喃、二噁烷等；芳族烴如甲苯、二甲苯等；及其混合物，其中，優(yōu)選的是四氫呋喃、甲苯等。反應溫度優(yōu)選為0-100℃，更優(yōu)選為30-70℃。反應時間優(yōu)選為1-24hr，更優(yōu)選為2-5hr。

步驟(c)

在此步驟中，通過與上述步驟(b)類似的方法將化合物(x-a)(其中rg不是氫原子或orh基團)還原。

步驟(d-1)

在此步驟中，將化合物(x-a)(其中rg為氫原子)肟化以制備式(xi’-a)所示的化合物。

該肟化反應通過如下進行：使化合物(x-a)與羥胺的酸加成鹽在堿的存在下在不影響反應的溶劑中進行反應。

羥胺的酸加成鹽的實例包括無機酸鹽如鹽酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽等；有機酸鹽如乙酸鹽、三氟乙酸鹽、甲磺酸鹽、三氟甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等以及類似物，特別優(yōu)選為鹽酸鹽。

所述堿的實例包括堿金屬鹽如氫氧化鉀、氫氧化鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀等；有機胺如吡啶、三乙胺、二異丙基乙胺、n,n-二甲基苯胺、1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯等以及類似物，其中，優(yōu)選的是三乙胺、二異丙基乙胺等。

溶劑的實例包括鹵代烴如氯仿、二氯甲烷等；芳族烴如甲苯、二甲苯等；醚如四氫呋喃、二噁烷等；和/或其混合物，其中，優(yōu)選的是二氯甲烷、氯仿、甲苯等。

反應溫度優(yōu)選為10-100℃，更優(yōu)選為20-60℃。反應時間優(yōu)選為0.5-30hr，更優(yōu)選為2-20hr。

步驟(d-2)

在此步驟中，通過將化合物(xi’-a)利用在諸如鈀-碳、阮內鎳等金屬催化劑存在下的催化氫化反應、或利用與上述步驟(b)中的那些類似的諸如金屬氫化物等還原劑來進行還原，以制備由式(xi-b)所示的化合物。

化合物(xi-b)也可通過步驟(d-3)、步驟(d-4)和步驟(d-5)制備。

步驟(d-3)

在此步驟中，將化合物(xi-a)用例如氯化劑如乙酰氯、亞硫酰氯等或溴化劑如乙酰溴、三溴化磷、二苯基膦/溴等進行鹵化，以制備由式(xi’-b)表示的化合物。

溶劑的實例包括鹵代烴如氯仿、二氯甲烷等；芳族烴如甲苯、二甲苯等；醚如四氫呋喃、二噁烷等；及其混合物，其中，優(yōu)選的是氯仿、四氫呋喃、甲苯等。反應溫度優(yōu)選為10-150℃，更優(yōu)選為30-80℃。反應時間優(yōu)選為0.5-30hr，更優(yōu)選為2-20hr。

步驟(d-4)

在此步驟中，將化合物(xi’-b)用諸如疊氮化鈉等疊氮化劑進行疊氮化，以制備由式(xi’-c)所示的化合物。此反應通過使化合物(xi’-b)與疊氮化劑在不影響反應的溶劑中反應來進行。

溶劑的實例包括鹵代烴如氯仿、二氯甲烷等；芳族烴如甲苯、二甲苯等；醚如四氫呋喃、二噁烷等；酰胺如n,n-二甲基甲酰胺等；及其混合物，其中，優(yōu)選的是氯仿、n,n-二甲基甲酰胺等。反應溫度優(yōu)選為10-150℃，更優(yōu)選為20-100℃。反應時間優(yōu)選為0.5-30hr，更優(yōu)選為2-20hr。

步驟(d-5)

在此步驟中，將化合物(xi’-c)胺化，以制備化合物(xi-b)。此反應通過在不影響反應的溶劑中在水的存在下使化合物(xi’-c)與三苯基膦反應或者通過催化氫化還原來進行。

待使用的三苯基膦的量，相對于每1mol化合物(xi’-c)優(yōu)選為1-10mol，特別優(yōu)選為1-5mol。待使用的水的量，相對于每1mol化合物(xi’-c)優(yōu)選為1-10mol，特別優(yōu)選為1-5mol。

溶劑的實例包括芳族烴如甲苯、二甲苯等；醚如四氫呋喃、二噁烷等；及其混合物，其中，優(yōu)選的是甲苯、四氫呋喃等。反應溫度優(yōu)選為10-150℃，更優(yōu)選為20-100℃。反應時間優(yōu)選為0.5-30hr，更優(yōu)選為2-20hr。

步驟(d-6)

在此步驟中，使化合物(xi’-b)與rnh2(r如上所定義)反應，以制備由式(xi-c)(其中y為-nhr基團)表示的化合物。在此步驟中，使化合物(xi’-b)與由r-nh2所示的胺，在(必要時)例如堿如叔胺等(三乙胺、二異丙基乙胺等)的存在下，在不影響反應的溶劑中進行反應。

溶劑的實例包括芳族烴如甲苯、二甲苯等；醚如四氫呋喃、二噁烷等；以及鹵代烴如氯仿、二氯甲烷等及其混合物，其中，優(yōu)選的是甲苯、四氫呋喃、氯仿等。反應溫度優(yōu)選為10-100℃，更優(yōu)選為20-60℃。反應時間優(yōu)選為0.5-30hr，更優(yōu)選為2-20hr。

步驟(d-7)

在此步驟中，使化合物(xi-d)與具有-conh2基團或-oconh2基團的化合物反應，然后用堿處理，以制備化合物(xi-e)?；衔?xi-d)與具有-conh2基團或-oconh2基團的化合物的反應在酸催化劑下在不影響反應的溶劑中進行。

酸催化劑的實例包括甲磺酸、三氟甲磺酸、甲苯磺酸等，其中，優(yōu)選的是甲磺酸、甲苯磺酸。待使用的酸催化劑的量，相對于每1mol化合物(xi-d)優(yōu)選為0.05-0.5mol，特別優(yōu)選為0.1-0.3mol。

具有-conh2基團或-oconh2基團的化合物的實例包括fmoc-nh2、hconh2、cf3conh2、acnh2、etoconh2、cbz-nh2等，其中，優(yōu)選的是fmoc-nh2、etoconh2等。如本文中所使用的，“fmoc-”是指9-芴甲氧基羰基(在下文中也稱為fmoc基團)，“cbz-”是指芐氧基羰基(在下文中也稱為cbz基團)。

作為待用作步驟(a)的原料的試劑[即，對應于r⁵的氫氧化物、鹵化物、烷基磺酰氧基化產(chǎn)物(例如甲磺酰氧基化產(chǎn)物等)或芳基磺酰氧基化產(chǎn)物(例如對甲苯磺酰氧基化產(chǎn)物等)，在下文中簡稱為“步驟(a)的試劑”]，可使用商業(yè)上可獲得的產(chǎn)品。此外，步驟(a)的試劑可通過例如以下方式制備：

(1)對應于r⁵的氫氧化物的鹵化、烷基磺酰氧基化或芳基磺酰氧基化，或

(2)對應于r⁵的不飽和氫氧化物的還原反應(例如在金屬催化劑如鉑-碳(pt/c)、鈀-碳(pd/c)、銠-碳(rh/c)、阮內鎳等的存在下的催化氫化反應等)，隨后鹵化、烷基磺酰氧基化或芳基磺酰氧基化。

在步驟(a)的試劑的制備中，用于由羥基轉換成離去基團的試劑的實例包括鹵化劑例如氯化劑(亞硫酰氯、n-氯代琥珀酰亞胺(ncs)等)、溴化劑(氫溴酸、乙酰溴、n-溴代琥珀酰亞胺(nbs)、三溴化磷、二苯基膦/溴等)等，除此之外，還包括烷基磺?；瘎?如甲磺酰氯、三氟甲磺酰氯等)、芳基磺?；瘎?如苯磺酰氯、對甲苯磺酰氯等)以及類似物，其中，優(yōu)選的是鹵化劑如亞硫酰氯、氫溴酸等。

此反應在不影響反應的溶劑中進行，且所述溶劑的實例包括水；鹵代烴如氯仿、二氯甲烷等；芳族烴如苯、甲苯、二甲苯等；腈如乙腈、丙腈等；醚如四氫呋喃、1,4-二噁烷、二乙醚等，其中，優(yōu)選的是水、鹵代烴如氯仿等。反應溫度優(yōu)選為10-120℃，更優(yōu)選為50-100℃。反應時間優(yōu)選為1-72hr，更優(yōu)選為3-24hr。

由式：z-y-h(其中q’為單鍵)所示的化合物還可通過例如以下方法來制備。即，苯環(huán)上r⁵的引入可通以下方式來進行：

(1)使用對應于r⁵的鹵化物(氯化物、溴化物或碘化物)、或對應于r⁵的羧酸或酰鹵的弗瑞德-克來福特(friedel-crafts)反應，

(2)包括使對應于上述化合物(x)的化合物(其中q’h被-cho基團置換的化合物)通過維蒂希(wittig)反應而碳同系化(carbonhomologation)，然后催化氫化等的方法，或

(3)使用金屬催化劑的交叉偶聯(lián)等的常規(guī)使用的有機合成反應。

在上述每種方案中，反應試劑等為了方便起見而示出，并且可在上述定義的范圍內適當變化。

[本發(fā)明的被假固相保護基保護的有機化合物]

被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團(本發(fā)明的假固相保護基)保護的有機化合物沒有特別限制，只要它可從溶劑中沉淀即可，并且可使用具有官能團如羥基(-oh)、硫基(-sh)、羧基(-cooh)、氨基(-nhr)、亞氨基(-nh-)、羧酰胺基(-conhr”)(其中r”為氫原子或烴基)等(其中所述官能團被本發(fā)明的假固相保護基保護)的有機化合物(下文中有時稱為“被保護的有機化合物”)。被保護的有機化合物可進一步被不同于所述假固相保護基的保護基(例如，用于核酸合成的保護基)保護。被保護的有機化合物的實例包括wo2012/157723、wo2012/157723、wo2014/189142、jp-a-2010-116418、wo2010/104169、wo2010/113939、wo2011/078295、wo2012/029794、jp-a-2009-185063、jp-a-2010-275254等中公開的核苷、核苷酸、氨基酸、肽等。

優(yōu)選的被保護的有機化合物是任選進一步被用于核酸合成的保護基保護的核苷、核苷酸或寡核苷酸，或任選進一步被用于肽合成的保護基保護的氨基酸或肽。優(yōu)選的是，在上述核苷、核苷酸或寡核苷酸中，選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的2’位和3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團被本發(fā)明的假固相保護基保護。當上述核苷、核苷酸或寡核苷酸為嗎啉代核苷、嗎啉代核苷酸或嗎啉代寡核苷酸時，嗎啉殘基的5’位羥基而不是上述羥基可被假固相保護基保護。

更優(yōu)選的被保護的有機化合物是核苷或寡核苷酸，其中選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的2’位和3’位羥基、脫氧核糖殘基的3’位羥基、以及嗎啉殘基的5’位羥基中的至少一個基團被本發(fā)明的假固相保護基保護，且其它基團任選進一步被用于核酸合成的保護基保護。

進一步優(yōu)選的被保護的有機化合物是核苷或寡核苷酸，其中選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的2’位和3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團被本發(fā)明的假固相保護基保護，且其它基團任選進一步被用于核酸合成的保護基保護。

特別優(yōu)選的被保護的有機化合物是核苷或寡核苷酸，其中選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團被本發(fā)明的假固相保護基保護，且其它基團任選進一步被用于核酸合成的保護基保護。

最優(yōu)選的被保護的有機化合物是核苷或寡核苷酸，其中核糖殘基的3’位羥基或脫氧核糖殘基的3’位羥基被本發(fā)明的假固相保護基保護，且其它基團任選進一步被用于核酸合成的保護基保護。

[沉淀]

本發(fā)明還提供通過使用本發(fā)明的沉淀促進劑使被保護的有機化合物從溶劑中沉淀的方法(下文中有時被稱為“本發(fā)明的沉淀方法”)以及通過這種方法獲得的沉淀混合物，所述沉淀混合物包含所述沉淀促進劑和所述被保護的有機化合物。上述溶劑優(yōu)選為包含極性溶劑的溶劑，更優(yōu)選極性溶劑和非極性溶劑的混合溶劑。

由于假固相保護基(其為疏水基團)，被本發(fā)明的假固相保護基保護的有機化合物在非極性溶劑中顯示提高的溶解性并在極性溶劑中顯示降低的溶解性。被這種假固相保護基保護的有機化合物例如通過將極性溶劑添加到所述有機化合物溶解于非極性溶劑中的溶液中來沉淀，以實現(xiàn)固液分離。本發(fā)明的沉淀促進劑可促進被假固相保護基保護的有機化合物從溶劑中沉淀，并可提高其回收率。此外，還可通過在獲得目標產(chǎn)物(即被假固相保護基保護的有機化合物)之后除去假固相保護基來獲得脫保護的有機化合物。

所述極性溶劑的實例包括醇溶劑如甲醇、乙醇、異丙醇等；腈溶劑如乙腈、丙腈等；酮溶劑如丙酮、2-丁酮等；極性醚溶劑如1,4-二噁烷、四氫呋喃等；酰胺溶劑如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、n-甲基哌啶酮等；亞砜溶劑如二甲基亞砜等；水等。極性溶劑可使用僅一種或可組合使用其中的兩種或多種。作為極性溶劑，特別優(yōu)選乙腈。在寡核苷酸的合成中，從沉淀效率方面來看，當甲醇用作極性溶劑時有回收率提高的趨勢。由于甲醇抑制亞磷酰胺法中的偶聯(lián)反應，需要將甲醇從沉淀的寡核苷酸中完全除去。然而，干燥花費長時間并且成問題的是難以判斷甲醇是否殘留在體系中。另一方面，乙腈有降低沉淀效率的趨勢，但是不會抑制亞磷酰胺法中的偶聯(lián)反應。因此，使用乙腈而沉淀的寡核苷酸不要求嚴格干燥和殘留溶劑的判斷。使用本發(fā)明的沉淀促進劑，目標產(chǎn)品可以高產(chǎn)率沉淀并回收，即使在使用乙腈時。

所述非極性溶劑的實例包括鹵系溶劑如氯仿、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷等；芳族系溶劑如苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯等；酯系溶劑如乙酸乙酯、乙酸異丙酯等；脂族系溶劑如己烷、戊烷、庚烷、辛烷、壬烷、環(huán)己烷等；非極性醚溶劑如二乙醚、環(huán)戊基甲基醚、叔丁基甲基醚等。非極性溶劑可使用僅一種或可組合使用其中的兩種或多種。作為非極性溶劑，優(yōu)選鹵系溶劑、芳族系溶劑、酯系溶劑、脂族系溶劑及它們的組合；更優(yōu)選二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、苯、甲苯、二甲苯、均三甲苯、己烷、戊烷、庚烷、壬烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯、乙酸異丙酯及它們的組合；更優(yōu)選氯仿、二氯甲烷、甲苯及它們的組合。

為了使被保護的有機化合物充分沉淀，待使用的本發(fā)明的沉淀促進劑的量相對于所述被保護的有機化合物優(yōu)選不低于0.1摩爾當量，更優(yōu)選不低于0.5摩爾當量，進一步優(yōu)選不低于1摩爾當量。盡管上限沒有特別限定，從成本方面考慮，待使用的本發(fā)明的沉淀促進劑的量相對于所述被保護的有機化合物優(yōu)選不超過10摩爾當量，更優(yōu)選不超過5摩爾當量，進一步優(yōu)選不超過2.5摩爾當量。

包含極性溶劑(優(yōu)選乙腈)的溶劑中的極性溶劑的量，相對每1ml除極性溶劑以外的溶劑，優(yōu)選不低于0.5ml，更優(yōu)選不低于1ml，進一步優(yōu)選不低于2ml，優(yōu)選不超過20ml，更優(yōu)選不超過10ml，進一步優(yōu)選不超過8ml，以提高被保護的有機化合物的回收率。所述極性溶劑的量是使被保護的有機化合物沉淀時的優(yōu)選范圍。例如，將包含被保護的有機化合物和除極性溶劑以外的溶劑的溶液濃縮后，在上述范圍內添加極性溶劑，可使有機化合物沉淀。此外，制備包含被保護的有機化合物、除極性溶劑以外的溶劑、和極性溶劑的溶液，使得所述極性溶劑的量低于上述下限，對其進行濃縮，以將所述極性溶劑的量調節(jié)至不低于上述下限，從而可使有機化合物沉淀。

被保護的有機化合物的沉淀時的溫度優(yōu)選不低于-10℃，更優(yōu)選不低于0℃，進一步優(yōu)選不低于5℃，優(yōu)選不超過40℃，更優(yōu)選不超過30℃，進一步優(yōu)選不超過25℃。

在調節(jié)至上述優(yōu)選的溫度之后，被保護的有機化合物的懸浮液的放置時間(即用于沉淀的時間)優(yōu)選不低于5min，更優(yōu)選不低于15min，進一步優(yōu)選不低于30min，優(yōu)選不超過72hr，更優(yōu)選不超過16hr，進一步優(yōu)選不超過3hr。

[寡核苷酸的制備方法]

本發(fā)明的沉淀方法對于寡核苷酸的制備方法特別有用。因此，本發(fā)明還提供包括本發(fā)明的沉淀方法的寡核苷酸的制備方法。這種制備方法的實例包括包含以下步驟的方法：在包含寡核苷酸和本發(fā)明的沉淀促進劑的反應液中添加極性溶劑(優(yōu)選乙腈)，從反應液中分離包含寡核苷酸和沉淀促進劑的沉淀混合物的步驟，所述寡核苷酸中，至少一個基團被本發(fā)明的假固相保護基保護、并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護。本發(fā)明的寡核苷酸的制備方法優(yōu)選通過亞磷酰胺法進行。

本發(fā)明的寡核苷酸的制備方法的優(yōu)選實施方案是寡核苷酸的制備方法，包括通過亞磷酰胺法進行一次或重復多次包括下述步驟(1)至(3)的制備循環(huán)，其中，在第一次循環(huán)中包含下述步驟(4)，在各循環(huán)中包含下述步驟(5)，并且在除最終循環(huán)外的各循環(huán)中包含下述步驟(6)，

(1)在非極性溶劑中包含核苷或寡核苷酸(下文中有時被稱為“含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸”)的反應液中添加酸，將5’位羥基的臨時保護基脫保護，利用堿進行中和，得到包含5’位羥基游離體的反應液的步驟(脫保護步驟)，

所述核苷或寡核苷酸中，選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的2’位和3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團被本發(fā)明的假固相保護基保護，5’位羥基被在酸性條件下可除去的臨時保護基保護，并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護；

(2)在非極性溶劑中包含5’位羥基游離體的反應液中添加核苷或寡核苷酸(下文中有時被稱為“亞磷酰胺化的核苷或寡核苷酸”)，得到包含亞磷酸三酯化合物的反應液的步驟(縮合步驟)，

所述核苷或寡核苷酸中，3’位羥基被亞磷酰胺化，并且5’位羥基被在酸性條件下可除去的臨時保護基保護，并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護；

(3)在非極性溶劑中包含亞磷酸三酯化合物的反應液中添加氧化劑或硫化劑，得到包含寡核苷酸(下文中有時被稱為“生成物寡核苷酸”)的反應液的步驟(氧化或硫化步驟)，

所述寡核苷酸中，選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的2’位和3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團被本發(fā)明的假固相保護基保護，并且5’位羥基被在酸性條件下可除去的臨時保護基保護，并且其它基團任選地進一步被核酸合成中所用的保護基保護；

(4)在步驟(1)之前、步驟(1)和(2)之間、步驟(2)和(3)之間、以及步驟(3)之后的任何時候，在反應液中加入本發(fā)明的沉淀促進劑的步驟(沉淀促進劑的添加步驟)；

(5)在步驟(4)之后，且為步驟(1)和(2)之間、步驟(2)和(3)之間、以及步驟(3)之后的任何時候，在包含沉淀促進劑的反應液中添加極性溶劑(優(yōu)選乙腈)，從反應液中分離包含5’位羥基游離體、亞磷酸三酯化合物或寡核苷酸、和沉淀促進劑的沉淀混合物的步驟(沉淀和固液分離步驟)；

(6)在步驟(5)中得到的沉淀混合物中加入非極性溶劑，制成反應液的步驟(溶解步驟)。

下面按照以上順序解釋各步驟。

步驟(1)(脫保護步驟)

在此步驟中，通過添加酸從含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸中將臨時保護基脫保護，以得到5’位羥基游離體。這里，臨時保護基是指在本發(fā)明的假固相保護基不被除去的酸性條件下可被除去的保護基。

此步驟在非極性溶劑中進行。作為非極性溶劑，可提及上述非極性溶劑。同樣適用于在此步驟之后的步驟中將使用的非極性溶劑。

盡管在此步驟中含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸在溶液中的濃度沒有特別限制，只要它們溶解于溶劑中即可，其優(yōu)選為1-30wt％。

盡管對待用于此步驟中的酸沒有特別限制，只要可實現(xiàn)良好的脫保護即可，優(yōu)選使用三氟乙酸、二氯乙酸、三氟甲磺酸、三氯乙酸、甲磺酸、鹽酸、乙酸、對甲苯磺酸等。由于可實現(xiàn)良好的反應，更優(yōu)選三氟乙酸、二氯乙酸、三氟甲磺酸、三氯乙酸，進而優(yōu)選三氟乙酸、二氯乙酸、三氟甲磺酸，還更優(yōu)選三氟乙酸、三氟甲磺酸，特別優(yōu)選三氟乙酸?？梢杂蒙鲜龇菢O性溶劑稀釋這些酸。當使用上述酸時，其可在使用之前與特定的堿組合以適當?shù)卣{節(jié)酸度。待用于此步驟中的酸的量，相對于每1mol含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸，例如為1至100mol，優(yōu)選為1至40mol。

盡管對此步驟中的反應溫度沒有特別限制，只要反應進行即可，但其優(yōu)選為-10℃至50℃，更優(yōu)選為0℃至40℃。反應時間根據(jù)待使用的含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸、酸的種類、非極性溶劑的種類、反應溫度等而變化，但其例如為5min-5hr。

為了在溶液中連續(xù)進行此步驟、隨后的縮合步驟和氧化或硫化步驟，優(yōu)選在此步驟中，在含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸的5’位羥基的臨時保護基的除去反應過程中、或者除去反應之后，使用陽離子清除劑。

盡管對陽離子清除劑沒有特別限制，只要不會被已除去的臨時保護基再保護(返回到起始材料)并且不會對已脫保護的官能團進行副反應即可，可使用吡咯衍生物如吡咯、2-甲基吡咯、3-甲基吡咯、2,3-二甲基吡咯、2,4-二甲基吡咯等；以及吲哚衍生物如吲哚、4-甲基吲哚、5-甲基吲哚、6-甲基吲哚、7-甲基吲哚、5,6-二甲基吲哚、6,7-二甲基吲哚等。由于可以獲得良好的陽離子捕捉效果，因此優(yōu)選吡咯、3-甲基吡咯、2,4-二甲基吡咯、吲哚、4-甲基吲哚、5-甲基吲哚、6-甲基吲哚、7-甲基吲哚、5,6-二甲基吲哚、6,7-二甲基吲哚，更優(yōu)選吡咯、3-甲基吡咯、吲哚，進一步優(yōu)選吡咯、吲哚，特別優(yōu)選吡咯。

待用于此步驟中的陽離子清除劑的量，相對于每1mol含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸，例如為1-50mol，優(yōu)選為5-20mol。

當作為下一步驟的縮合步驟中存在待用作脫保護劑的酸時，它引發(fā)步驟(2)中使用的亞磷酰胺化的核苷或寡核苷酸的臨時保護基的脫保護。因此，該酸需要被中和并除去。

在此步驟中，有機堿優(yōu)選用于該酸的中和。作為有機堿，優(yōu)選吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑、1,2,4-三唑、n-苯基咪唑、2-氨基-4,6-二甲基嘧啶、1,10-菲咯啉、咪唑、n-甲基咪唑、2-氯苯并咪唑、2-溴苯并咪唑、2-甲基咪唑、2-苯基苯并咪唑、n-苯基苯并咪唑、5-硝基苯并咪唑，更優(yōu)選吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑、1,2,4-三唑、n-苯基咪唑、n-甲基咪唑、2-氨基-4,6-二甲基嘧啶、1,10-菲咯啉，進一步優(yōu)選吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑、1,2,4-三唑、n-苯基咪唑，特別優(yōu)選吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑、1,2,4-三唑，并且最優(yōu)選吡啶、2,4,6-三甲基吡啶、苯并咪唑。

待用于此步驟中的堿的量，相對于每1mol酸，例如為1-10mol，優(yōu)選為1-3mol。

在此步驟中，酸和有機堿的特別優(yōu)選的組合是三氟乙酸與吡啶、三氟乙酸和2,4,6-三甲基吡啶、或三氟甲磺酸和苯并咪唑。

對待用于此步驟中的含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸中所含的臨時保護基沒有特別限制，只要其可在酸性條件下脫保護且可用作羥基保護基即可?？商峒袄缛郊谆?、9-(9-苯基)呫噸基、9-苯硫基呫噸基、二(c1-6烷氧基)三苯甲基如1,1-雙(4-甲氧基苯基)-1-苯基甲基(二甲氧基三苯甲基)等、單(c1-18烷氧基)三苯甲基如1-(4-甲氧基苯基)-1,1-二苯基甲基(單甲氧基三苯甲基)等及類似基團。其中，考慮到脫保護的容易程度和容易獲得性，臨時保護基優(yōu)選為單甲氧基三苯甲基、二甲氧基三苯甲基，更優(yōu)選二甲氧基三苯甲基。

待用于此步驟中的含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸中，選自核酸堿基的氨基和亞氨基、核糖殘基的3’位羥基、以及脫氧核糖殘基的3’位羥基中的至少一個基團優(yōu)選被本發(fā)明的假固相保護基保護，并且核糖殘基的3’位羥基或脫氧核糖殘基的3’位羥基更優(yōu)選被本發(fā)明的假固相保護基保護。

待用于此步驟中的含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸進一步優(yōu)選為下式(vi)所示的化合物：

其中：

m”為不低于0的整數(shù)，

m”+1個堿基各自獨立地為任選被保護的核酸堿基，

q’為在酸性條件下可除去的臨時保護基，

m”+1個x各自獨立地為氫原子、鹵素原子、任選被保護的羥基、或與核糖環(huán)或脫氧核糖環(huán)的2位碳原子和4位碳原子鍵合的二價有機基團(優(yōu)選氫原子、鹵素原子或任選被保護的羥基)，

m”個r¹⁰各自獨立地為氧原子或硫原子，

m”個wg各自獨立地為吸電子基團，和

l-y-z如上所定義。

當m”為0時，化合物(vi)為含有臨時保護基的核苷；而當m”為1以上時，化合物(vi)為含有臨時保護基的寡核苷酸。在式(vi)中，m”優(yōu)選不超過49，更優(yōu)選不超過29，進一步優(yōu)選不超過19，特別優(yōu)選不超過4，最優(yōu)選不超過2。

作為式(vi)中的鹵素原子，優(yōu)選氟原子、氯離子，并且更優(yōu)選氟原子。

盡管對式(vi)中“任選被保護的羥基”的保護基沒有特別限制，可提及例如,protectivegroupsinorganicsynthesis,第3版，johnwilly&sons(1999)等中描述的任何保護基。具體地，可提及甲基、芐基、對甲氧基芐基、叔丁基、甲氧基甲基、甲氧基乙基、2-四氫吡喃基、乙氧基乙基、氰乙基、氰乙氧基甲基、苯基氨甲?；?、1,1-二氧代硫代嗎啉-4-硫代氨甲酰基、乙?；?、新戊?；⒈郊柞；?、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、[(三異丙基甲硅烷基)氧基]甲基(tom)、1-(4-氯苯基)-4-乙氧基哌啶-4-基(cpep)等。其中，優(yōu)選三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基、或叔丁基二甲基甲硅烷基。就經(jīng)濟效率和容易獲得性方面而言，特別優(yōu)選叔丁基二甲基甲硅烷基。

在式(vi)中，對“與核糖環(huán)或脫氧核糖環(huán)的2位碳原子和4位碳原子鍵合的二價有機基團”沒有特別限制，只要它與相同核糖環(huán)或脫氧核糖環(huán)的2位碳原子和4位碳原子鍵合即可。所述二價有機基團的實例包括任選取代的c2-7亞烷基、以及由選自-o-、-nr¹³-(r¹³為氫原子或c1-6烷基)、-s-、-co-、-coo-、-oconr¹⁴-(r¹⁴為氫原子或c1-6烷基)和-conr¹⁵-(r¹⁵為氫原子或c1-6烷基)的二價連接基和任選取代的c1-7亞烷基形成的二價有機基團等。c1-7亞烷基和c2-7亞烷基任選具有的取代基的實例包括亞甲基(ch2＝)。

作為“與2位碳原子和4位碳原子鍵合的二價有機基團”，優(yōu)選任選取代的c2-7亞烷基、-ori-(ri為與4位碳原子鍵合的c1-6亞烷基)、-o-nr¹³-rj-(rj為與4位碳原子鍵合的c1-6亞烷基，且r¹³如上所定義)、-o-rk-o-rl-(rk為c1-6亞烷基，且rl為與4位碳原子鍵合并交聯(lián)的c1-6亞烷基)，并且更優(yōu)選-ori-(ri如上所定義)、-o-nr¹³-rj-(rj和r¹³如上所定義)、-o-rk-o-rl-(rk和rl如上所定義)。ri、rj、rk或rl的c1-6亞烷基各自獨立地優(yōu)選為亞甲基或亞乙基。

作為“與2位碳原子和4位碳原子鍵合的二價有機基團”，更優(yōu)選-o-ch2-、-o-ch2-ch2-、-o-nr¹³-ch2-(r¹³如上所定義)、-o-ch2-o-ch2-，并且進一步優(yōu)選-o-ch2-、-o-ch2-ch2-、-o-nh-ch2-、-o-n(ch3)-ch2-、-o-ch2-o-ch2-(其中左側與2位碳原子鍵合，而右側與4位碳原子鍵合)。

在式(vi)中，m”+1個x各自獨立地優(yōu)選為氫原子、鹵素原子或任選被保護的羥基，更優(yōu)選為氫原子或任選被保護的羥基。

m”個r¹⁰各自優(yōu)選為氧原子。

wg的吸電子基團的實例包括氰基、硝基等，優(yōu)選氰基。

化合物(vi)可通過本身已知的方法(例如，上述專利文獻1或2中描述的方法、酯化、甲硅烷基化等)或與其類似的方法合成。例如，其中m”為0且l為琥珀?；幕衔?vi)可通過例如，如下式中所示，使其中5’位羥基被臨時保護基保護的核苷(a)與琥珀酸酐在堿存在下反應以得到其中琥珀酸被引入3’位羥基的化合物(b)，接著在縮合劑的存在下使所得的化合物(b)與z-y-h的脫水縮合來合成。

由核苷(a)向化合物(b)的轉化反應有利地在對所述反應呈惰性的溶劑中進行。盡管對這種溶劑沒有特別限制，只要反應進行即可，優(yōu)選鹵系溶劑如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳等、芳族系溶劑如苯、甲苯、二甲苯等、脂族系溶劑如戊烷、己烷、庚烷、辛烷等、醚系溶劑如二乙醚、四氫呋喃、環(huán)戊基甲基醚等以及它們的混合溶劑。其中，特別優(yōu)選為二氯甲烷或氯仿。

盡管對待用于化合物(vi)的合成的堿沒有特別限制，優(yōu)選有機堿，且更優(yōu)選三乙胺等。

用于化合物(vi)的合成的脫水縮合反應有利地在對所述反應呈惰性的溶劑中進行。盡管對此類溶劑沒有特別限制，只要反應進行即可，優(yōu)選鹵系溶劑如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、氯仿、四氯化碳等、芳族系溶劑如苯、甲苯、二甲苯等、或脂族系溶劑如戊烷、己烷、庚烷、辛烷等以及它們的組合。其中，特別優(yōu)選二氯甲烷、氯仿。

化合物(b)與z-y-h的縮合反應中所用的縮合劑的實例包括二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)、二異丙基碳二亞胺(dic)、n-乙基-n’-3-二甲基氨丙基碳二亞胺及其鹽酸鹽(edchcl)、六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻(pybop)、o-(苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲四氟硼酸鹽(tbtu)、1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-5-氯-1h-苯并三唑鎓-3-氧化物六氟磷酸鹽(hctu)、o-苯并三唑-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸鹽(hbtu)等。其中，優(yōu)選hbtu、hctu、n-乙基-n’-3-二甲基氨丙基碳二亞胺及其鹽酸鹽(edchcl)。

待使用的縮合劑的量，相對于每1mol化合物(b)，例如為1至10mol，優(yōu)選為1至5mol。待使用的z-y-h的量，相對于每1mol化合物(b)，為1至10mol，優(yōu)選為1至5mol。盡管對反應溫度沒有特別限制，只要反應進行即可，它優(yōu)選為-10℃至50℃，更優(yōu)選為0℃至30℃。反應時間例如為30min至70hr。

其中l(wèi)不是琥珀?；幕衔?vi)也可通過進行與上述合成方法類似的反應來合成，不同的是使用相應酸酐、相應二羧酸鹵化物、相應二羧酸的活化酯等來代替琥珀酸酐。此外，其中m”為1以上的化合物(vi)可使用其中m”為0的化合物(vi)作為起始原料通過重復5’末端延伸過程來合成。

步驟(2)(縮合步驟)

在此步驟中，使步驟(1)中獲得的5’位羥基游離體和亞磷酰胺化的核苷或寡核苷酸縮合以得到亞磷酸三酯化合物。

待用于此步驟中的亞磷酰胺化的核苷或寡核苷酸可通過已知方法(m.h.caruthers等，methodinenzymology1987，154，287-313；s.l.beaucage和m.h.caruthers，tetrahedronletters1981，22，1859-1862)合成，所述方法包括使亞磷酰胺化試劑反應。亞磷酰胺化試劑是商業(yè)上可獲得的且可容易地獲得。

待用于此步驟中的亞磷酰胺化的核苷或寡核苷酸優(yōu)選為下式(vii)所示的化合物：

其中

q’為不低于0的整數(shù)；

r¹¹和r¹²各自獨立地為烷基、或與相鄰氮原子一起形成的5或6元飽和環(huán)氨基。所述飽和環(huán)氨基任選具有1個氧原子或硫原子作為除了氮原子以外的環(huán)構成原子；和

其它符號如上所定義。

當q’為0時，化合物(vii)是亞磷酰胺化的核苷，當q’為1以上時，化合物(vii)是亞磷酰胺化的寡核苷酸。在此步驟中待使用的化合物(vii)中，q’優(yōu)選不超過49，更優(yōu)選不超過29，進一步優(yōu)選不超過19，特別優(yōu)選不超過4，并且最優(yōu)選不超過2。

當此步驟中的縮合反應進行緩慢時，可加入縮合劑(例如，吡啶-三氟乙酸鹽、四唑、5-芐硫基-1h-四唑、4,5-二氰基咪唑等)。

在此步驟中，當反應液的酸度變高時，可發(fā)生臨時保護基脫去的副反應。因此，優(yōu)選添加n-甲基咪唑以抑制反應液的酸化。待加入以調節(jié)酸度的n-甲基咪唑的量，相對于每1mol用于中和的有機堿，優(yōu)選為0.1至1mol，更優(yōu)選為0.5mol左右。

與步驟(1)類似，此步驟在非極性溶劑中進行。非極性溶劑的解釋與步驟(1)中相同。

此步驟中待使用的亞磷酰胺化的核苷或寡核苷酸的量，相對于每1mol步驟(1)中獲得的5’位羥基游離體，例如為1-10mol，優(yōu)選為1-5mol。

盡管對此步驟中的反應溫度沒有特別限制，只要反應進行即可，優(yōu)選為0℃-100℃，且更優(yōu)選為20℃-50℃。盡管反應時間根據(jù)待使用的原料的種類、反應溫度等而變化，它例如為5min至24hr。

步驟(3)(氧化或硫化步驟)

在此步驟中，使步驟(2)中獲得的亞磷酸三酯化合物與氧化劑或硫化劑反應以將其亞磷酸三酯鍵轉化成磷酸三酯鍵或硫代磷酸三酯鍵，以得到生成物寡核苷酸。

盡管對待用于此步驟中的“氧化劑”沒有特別限制，只要其可將亞磷酸三酯鍵氧化為磷酸三酯鍵而不氧化其它部分即可，優(yōu)選使用碘、(1s)-(+)-10-樟腦磺啞嗪((1s)-(+)-(10-camphorsulfonyl)oxaziridine)、叔丁基過氧化氫(tbhp)、過氧化2-丁酮、1,1-二氫過氧環(huán)十二烷、雙(三甲基甲硅烷基)過氧化物、間氯過苯甲酸。由于可實現(xiàn)良好的氧化反應，因此更優(yōu)選碘、(1s)-(+)-10-樟腦磺啞嗪、叔丁基過氧化氫，過氧化2-丁酮、1,1-二氫過氧環(huán)十二烷，進一步優(yōu)選碘、(1s)-(+)-10-樟腦磺啞嗪、叔丁基過氧化氫、過氧化2-丁酮，還更優(yōu)選碘、叔丁基過氧化氫，特別優(yōu)選為碘。該氧化劑可在用合適溶劑稀釋以達到0.05至2m的濃度之后使用。盡管對該稀釋溶劑沒有特別限制，只要其對反應呈惰性即可，可提及吡啶、thf、二氯甲烷、水或它們的組合。其中，優(yōu)選使用例如碘/水/吡啶-thf或碘/吡啶-乙酸、過氧化物(tbhp)/二氯甲烷或叔丁基過氧化氫/壬烷。

對待用于此步驟中的“硫化劑”沒有特別限制，只要其可將亞磷酸三酯鍵轉化成硫代磷酸三酯鍵即可，優(yōu)選使用3-[(n,n-二甲基氨基亞甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑-5-硫酮(ddtt)、3h-1,2-苯并二硫醇-3-酮-1,1-二氧化物(beaucage試劑)、3h-1,2-苯并二硫醇-3-酮、苯乙酰二硫化物(pads)、二硫化四乙基秋蘭姆(tetd)、3-氨基-1,2,4-二噻唑-5-硫酮(adtt)、硫。由于可進行良好的反應，更優(yōu)選3-[(n,n-二甲基氨基亞甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑-5-硫酮(ddtt)、3h-1,2-苯并二硫醇-3-酮-1,1-二氧化物(beaucage試劑)、3h-1,2-苯并二硫醇-3-酮、苯乙酰二硫化物(pads)，進一步優(yōu)選3-[(n,n-二甲基氨基亞甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑-5-硫酮、3h-1,2-苯并二硫醇-3-酮-1,1-二氧化物，并且特別優(yōu)選3-[(n,n-二甲基氨基亞甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑-5-硫酮。該硫化劑可在用合適溶劑稀釋以獲得0.05至2m的濃度之后使用。盡管對該稀釋溶劑沒有特別限制，只要其對反應呈惰性即可，可提及例如二氯甲烷、乙腈、吡啶或它們的任意混合溶劑。

待使用的氧化劑或硫化劑的量，相對每1mol步驟(2)中獲得的亞磷酸三酯化合物，例如為1至50mol，優(yōu)選為1至5mol。

盡管對反應溫度沒有特別限制，只要反應進行即可，優(yōu)選為0℃至100℃，并且更優(yōu)選為20℃至50℃。盡管反應時間根據(jù)亞磷酸三酯化合物的種類、待使用的氧化劑或硫化劑的種類、反應溫度等而變化，它為1min至3hr。

步驟(4)(沉淀促進劑的添加步驟)

在此步驟中，在步驟(5)之前，且為步驟(1)之前、步驟(1)和(2)之間、步驟(2)和(3)之間、以及步驟(3)之后的任何時候，在反應液中加入本發(fā)明的沉淀促進劑，以促進步驟(5)(沉淀和固液分離步驟)中的沉淀，所述步驟(5)中，通過在步驟(1)(脫保護步驟)和步驟(2)(縮合步驟)之間、步驟(2)和步驟(3)(氧化或硫化步驟)之間、步驟(3)之后的任何時候，在反應液中添加極性溶劑(優(yōu)選乙腈)使沉淀的寡核苷酸從反應液分離。

在此步驟中，可添加僅一種本發(fā)明的沉淀促進劑或可添加其中的兩種或多種。在此步驟中待使用的本發(fā)明的沉淀促進劑的量，相對于起始步驟(1)中所用的含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸，優(yōu)選不低于0.1摩爾當量，更優(yōu)選不低于0.5摩爾當量，進一步優(yōu)選不低于1摩爾當量。盡管對其上限沒有特別限制，從成本方面來看，待使用的本發(fā)明的沉淀促進劑的量，相對于起始步驟(1)中所用的含有臨時保護基的核苷或寡核苷酸，優(yōu)選不超過10摩爾當量，更優(yōu)選不超過5摩爾當量，進一步優(yōu)選不超過2.5摩爾當量。

步驟(5)(沉淀和固液分離步驟)

在此步驟中，在步驟(4)(沉淀促進劑的添加步驟)之后，且為步驟(1)(脫保護步驟)和步驟(2)(縮合步驟)之間、步驟(2)和步驟(3)(氧化或硫化步驟)之間、步驟(3)之后的任何時候，在含有沉淀促進劑的反應液中添加極性溶劑(優(yōu)選乙腈)，以從反應液中分離包含步驟(1)中獲得的5’位羥基游離體、步驟(2)中獲得的亞磷酸三酯化合物或步驟(3)中獲得的生成物寡核苷酸(下文中，5’位羥基游離體、亞磷酸三酯化合物和生成物寡核苷酸有時被統(tǒng)稱為“目標產(chǎn)物”)和沉淀促進劑的沉淀混合物。

作為極性溶劑，可提及上述極性溶劑。作為待用于此步驟中的極性溶劑，特別優(yōu)選乙腈。

為了提高目標產(chǎn)物的回收率，待用于此步驟中的極性溶劑(優(yōu)選乙腈)的量，相對于每1ml含目標產(chǎn)物的反應液中所含的非極性溶劑，優(yōu)選不低于0.5ml，更優(yōu)選不低于1ml，進一步優(yōu)選不低于2ml，優(yōu)選不超過20ml，更優(yōu)選不超過10ml，進一步優(yōu)選不超過8ml。

當使用乙腈時，它可包含水以使乙腈中的目標產(chǎn)物的損失最小化。在這種情況下，乙腈中水的含量優(yōu)選為1-10％(v/v)，更優(yōu)選為3-8％(v/v)。當水含量太低時，乙腈中的目標產(chǎn)物的損失會提高，并且當水含量太高時，進入乙腈中的不必要物質的除去會不充分。

步驟(6)(溶解步驟)

在此步驟中，在步驟(5)(沉淀和固液分離步驟)中得到的沉淀混合物中加入非極性溶劑，制成反應液。在此步驟中，可重復包括上述步驟(1)-(3)的制備循環(huán)。

可用于此步驟中的非極性溶劑的解釋與步驟(1)中的解釋相同。盡管對此步驟中獲得的反應液中沉淀混合物的濃度沒有特別限制，只要該沉淀混合物溶解于所述非極性溶劑中即可，它優(yōu)選為1-30wt％。

在本發(fā)明的寡核苷酸的制備方法中，步驟(5)(沉淀和固液分離步驟)和步驟(6)(溶解步驟)優(yōu)選在步驟(3)(氧化或硫化步驟)之后執(zhí)行。

本發(fā)明的寡核苷酸的制備方法可包含以下步驟(7)：

(7)除去寡核苷酸的全部保護基，分離寡核苷酸(下文中有時被稱為“非被保護的寡核苷酸”)的步驟(脫保護和分離步驟)。

步驟(7)(脫保護和分離步驟)

在本發(fā)明的寡核苷酸的制備方法中，根據(jù)保護基的種類和性質，優(yōu)選在步驟(5)之后進行脫保護，并分離寡核苷酸。作為脫保護的方法，例如根據(jù)protectivegroupsinorganicsynthesis，第3版，johnwilly&sons(1999)等中描述的脫保護方法，可進行將寡核苷酸的全部保護基除去的步驟。具體地，本發(fā)明的假固相保護基、以及核酸堿基的保護基如苯氧基乙酰基、乙?；⒑捅Ｗo磷酸骨架的氰乙基等，都可用氨水、氨水/乙醇溶液、或氨水和甲胺水溶液的混合液進行處理，從而全部除去。此外，5’羥基的保護基可通過用步驟(1)中所用的酸或將這種酸適當稀釋后的溶液進行處理來除去。由于沒有保護基的寡核苷酸容易被酶降解，因此優(yōu)選在合適的空氣清潔度控制下分離寡核苷酸。

可通過與常規(guī)液相有機合成反應類似的方法來確定上述各步驟的反應進展。即，可通過薄層硅膠色譜法、高效液相色譜法等來跟蹤反應。

由步驟(5)(沉淀和固液分離步驟)獲得的5’位羥基游離體、亞磷酸三酯化合物或生成物寡核苷酸、或由步驟(7)(脫保護和分離步驟)獲得的非被保護的寡核苷酸，也可通過進一步經(jīng)過有機合成反應而產(chǎn)生所需的衍生物。由本發(fā)明所制備的寡核苷酸等可用于各種用途，例如用于人或動物的各種藥品(rna、dna、寡核酸藥物等)、食品(功能性食品、特定保健用食品)、化學產(chǎn)品、生物體或工業(yè)用的高分子材料等。

[實施例]

下文通過參照實施例對本發(fā)明進行更詳細地說明，這些實施例不應理解為限制本發(fā)明的范圍。除非另外指明，下面描述的溶劑比例表示體積比。除非另外指明，本發(fā)明中使用的試劑、設備和材料可商購獲得。在本說明書中，當通過縮寫表示如氨基酸等時，各表示基于iupac-iubcommissiononbiochemicalnomenclature的縮寫或本領域的常規(guī)縮寫。

實施例等中所用的基團和化合物的縮寫如下。

me：甲基

dmtr：4,4’-二甲氧基三苯甲基

tbdms：叔丁基二甲基甲硅烷基

boc：叔丁氧基羰基

pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并呋喃-5-磺?；?/p>

trt：三苯甲基

tob：3,4,5-三(十八烷氧基)芐基

dmf：n,n-二甲基甲酰胺

hbtu：o-(苯并三唑-1-基)-n,n,n’,n’-四甲基脲六氟磷酸鹽

參考例1：在溶液中連續(xù)合成硫代磷酸酯(phosphorthioate)二聚體

在氬氣氣氛下，將5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)脫氧胸苷-3’-基[3,4,5-三(十八烷氧基)芐基]琥珀酸酯(504mg,327μmol)溶解于二氯甲烷(7.5ml)中，加入吡咯(213μl,3.27mmol)、三氟乙酸(292μl,3.93mmol)并將混合物在室溫下攪拌15min，并通過薄層色譜法確認反應完成。用吡啶(316μl,3.93mmol)、1-甲基咪唑(156μl,1.96mmol)中和反應混合物，然后添加4,5-二氰基咪唑(116mg,982mmol)、5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)脫氧胸苷-3’-[o-(2-氰乙基)-(n,n-二異丙基)]-亞磷酰胺(609mg,818μmol)在乙腈中的溶液，并將混合物在室溫下攪拌60min，通過薄層色譜法確認反應完成。此外，添加3-[(n,n-二甲基氨基亞甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑-5-硫酮(184mg,898μmol)并將混合物在室溫下攪拌30min。將甲醇(100ml)添加至反應液中，將沉淀的固體使用桐山(kiriyama)漏斗抽濾后進行干燥，以得到呈白色固體狀的5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)脫氧胸苷-3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?phosphorothionyl)脫氧胸苷-3’-基[3,4,5-三(十八烷氧基)芐基]琥珀酸酯(567mg,產(chǎn)率91％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,j＝6.8hz,ar-ch3),1.28(br,s,90h,(ch2)15),1.30(s,3h,n1⁵-ch3),1.46(s,3h,n2⁵-ch3),1.73(m,6h,ar-och2ch2),2.28(m,2h,2’1-h),2.41(m,2h,2’2-h),2.68(m,2h,5’1-h和m,4h,琥珀酰-ch2ch2),3.44(m,2h,5’2-h),3.79(s,6h,dmtr-och3),3.95(m,6h,ar-och2),4.10(m,1h,4’1-h),4.31(m,4h,氰乙基-ch2ch2和m,1h,4’2-h),5.01(s,2h,ar-ch2-琥珀酰),5.26(m,1h,3’1-h),5.32(m,1h,3’2-h),6.27(m,1h,1’1-h),6.38(m,1h,1’2-h),6.53(s,2h,ar-h),6.84-7.29(m,13h,dmtr-ar-h),7.29(m,1h,n1⁶-h),7.56(m,1h,n2⁶-h)

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,ar-ch3),1.28(br,s,90h,(ch2)15),1.30(s,3h,n1⁵-ch3),1.46(s,3h,n2⁵-ch3),1.73(m,6h,ar-och2ch2),2.41(m,2h,2’2-h),2.68(m,2h,2’1-h和m,4h,琥珀酰-ch2ch2),2.77(m,2h,5’1-h),3.44(m,2h,5’2-h),3.79(s,6h,dmtr-och3),3.95(m,6h,ar-och2),4.17(m,1h,4’1-h),4.31(m,4h,氰乙基-ch2ch2andm,1h,4’2-h),5.01(s,2h,ar-ch2-琥珀酰),5.33(m,1h,3’1-handm,1h,3’2-h),6.27(m,1h,1’1-h),6.38(m,1h,1’2-h),6.53(s,2h,ar-h),6.84-7.29(m,13h,dmtr-ar-h),7.29(m,1h,n1⁶-h),7.56(m,1h,n2⁶-h)

參考例2:在溶液中連續(xù)合成硫代磷酸酯五聚體

將與參考例1的操作類似的操作重復4次以得到5’-o-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷-3’-基[3,4,5-三(十八烷氧基)芐基]琥珀酸酯(1.94g)。

參考例3:在溶液中連續(xù)合成硫代磷酸酯十聚體

將與參考例1的操作類似的操作重復9次以得到5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-脫氧胸苷3’-基3,4,5-三(十八烷氧基)芐基琥珀酸酯(1.41g)。

參考例4：在溶液中連續(xù)合成硫代磷酸酯二十聚體

將與參考例1的操作類似的操作重復19次以得到5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-基3,4,5-三(十八烷氧基)芐基琥珀酸酯(1.61g)。

比較例1：3,4,5-三(16-甲基十七烷-1-基氧基)苯甲酸甲酯的合成

(1)16-甲基十七烷-1-基溴的合成

將16-甲基十七烷-1-基醇(5.00g,18.5mmol)溶解于氫溴酸(50ml)中，添加濃硫酸(84μl,1.59mmol)，并將混合物在100℃攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成，然后將反應液冷卻至室溫，并添加己烷(150ml)。將反應液用飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)洗滌兩次，并用飽和鹽水(50ml)洗滌一次。然后將有機層用硫酸鎂干燥并通過短硅膠柱色譜法(己烷)純化，以得到目標化合物(5.56g,產(chǎn)率90％)。

(2)3,4,5-三(16-甲基十七烷-1-基氧基)苯甲酸甲酯的合成

將3,4,5-三羥基苯甲酸甲酯(1.03g,5.57mmol)、16-甲基-十七烷基溴(5.56g,16.7mmol)、碳酸鉀(3.85g,27.9mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(50.0ml)中，并將混合物在110℃下攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液冷卻至室溫，并添加乙酸乙酯(200ml)。將有機層用水(100ml)洗滌兩次，用飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)洗滌1次，用飽和鹽水(100ml)洗滌1次，然后用硫酸鈉干燥并減壓濃縮，以得到目標化合物(4.66g,產(chǎn)率88％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.83-0.90(m,18h,-ch3),1.05-1.51(m,81h,-o-ch2-ch2-(ch2)13-ch(ch3)2),1.70-1.84(m,6h,-o-ch2-ch2-(ch2)13-ch(ch3)2),3.88(s,3h,c(o)och3),3.99-4.02(m,6h,ar-och2),7.25(s,2h,ar-h)

比較例2：4-十八烷氧基苯甲酸甲酯的合成

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(2.72g,19.7mmol)、4-羥基苯甲酸甲酯(1.00g,6.57mmol)、1-溴十八烷(2.63g,7.88mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(60ml)中，并將混合物在90℃下攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將乙酸乙酯(100ml)和四氫呋喃(20ml)添加至反應液中，將有機層用水(100ml)洗滌3次并用飽和鹽水(100ml)洗滌1次。然后減壓蒸發(fā)有機層。向濃縮的殘余物中添加乙酸乙酯(50ml)，通過加熱至70℃使混合物溶解后，冷卻至5℃，以得到目標化合物(2.61g,產(chǎn)率98％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,3h,j＝6.8hz,-ch2ch2(ch2)15ch3),1.26-1.49(m,30h,-ch2ch2(ch2)15ch3),1.76-1.83(m,2h,-ch2ch2(ch2)15ch3),3.88(s,3h,-c(o)och3),4.00(t,2h,j＝6.4hz,-ch2ch2(ch2)15ch3),6.90(d,2h,j＝9.2hz,ar-h),7.98(d,2h,j＝9.2hz,ar-h)

實施例1：3,5-雙(十八烷氧基)苯甲酸甲酯的合成

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(19.9g,144mmol)、3,5-二羥基苯甲酸甲酯(3.60g,21.4mmol)、1-溴十八烷(15.5g,46.7mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(200ml)中，并將混合物在70℃下攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液倒入水(800ml)中以進行沉淀，得到固體。將所得固體溶解于二氯甲烷(200ml)中，通過甲醇(400ml)使固體沉淀后，通過過濾收集并干燥以得到目標化合物(13.9g,產(chǎn)率97％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,6h,j＝6.6hz,-och2ch2(ch2)15ch3),1.25-1.55(m,76h,-och2ch2(ch2)15ch3),1.77(m,4h,-och2ch2(ch2)15ch3),3.89(s,3h,c(o)o-ch3),3.96(t,4h,j＝6.6hz,-och2ch2(ch2)15ch3),6.63(s,1h,ar-h),7.15(s,2h,ar-h)

實施例2：3,5-雙(二十二烷氧基)苯甲酸甲酯的合成

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(20.0g,145mmol)、3,5-二羥基苯甲酸甲酯(3.60g,21.4mmol)、1-溴二十二烷(17.9g,46.0mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(200ml)中，并將混合物在70℃下攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液倒入水(1.00l)中以進行沉淀，得到固體。將所得固體溶解于二氯甲烷(500ml)中，通過甲醇(400ml)使固體沉淀后，通過過濾收集并干燥以得到目標化合物(16.1g,產(chǎn)率96％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,6h,j＝6.6hz,-ch3),1.25-1.55(m,76h,-och2ch2(ch2)19ch3),1.77(m,4h,-och2ch2(ch2)19ch3),3.89(s,3h,c(o)o-ch3),3.96(t,4h,j＝6.6hz,-och2ch2(ch2)19ch3),6.63(s,1h,ar-h),7.15(s,2h,ar-h)

實施例3：2,3,4-三(十八烷氧基)二苯甲酮

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(4.35g,31.5mmol)、2,3,4-三羥基二苯甲酮(1.61g,7.00mmol)、1-溴十八烷(7.32g,22.0mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(30ml)中，并將混合物在80℃下攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液倒入水(200ml)中以進行沉淀，得到固體。將所得固體溶解于二氯甲烷(200ml)中，通過甲醇(300ml)使固體沉淀后，通過過濾收集并干燥以得到目標化合物(6.31g,產(chǎn)率91％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,j＝6.7hz,-ch3),1.11-1.55(m,90h,-o-ch2ch2(ch2)15ch3),1.74-1.87(m,4h,-o-ch2ch2(ch2)15ch3),3.88(t,2h,j＝6.6hz,-o-ch2ch2(ch2)15ch3),3.99(t,2h,j＝6.6hz,-o-ch2ch2(ch2)15ch3),4.02(t,2h,j＝6.6hz,-o-ch2ch2(ch2)15ch3),6.69(d,1h,j＝8.6hz,ar-h),7.12(d,1h,j＝8.6hz,ar-h),7.41(m,2h,ar-h),7.53(m,1h,ar-h),7.77(m,2h,ar-h)

實施例4：3,4,5-三(十八烷氧基)甲苯的合成

在氫氣氣氛下，將2-三(十八烷氧基)芐氧基-4-甲氧基-苯甲醛肟(487mg,470μmol)溶解于thf(40ml)和甲醇(10ml)的混合溶劑中，添加10wt％pd/c(53.3mg)后，將混合物在室溫下攪拌64hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液通過硅藻土過濾，并將乙腈(200ml)添加至濾液以使固體沉淀。將固體通過過濾收集并干燥以得到目標化合物(391mg,產(chǎn)率93％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,j＝6.6hz,-och2ch2(ch2)19ch3),1.26-1.80(m,96h,-och2ch2(ch2)19ch3),2.27(s,3h,ar-me),3.89-3.96(m,6h,-och2ch2(ch2)19ch3),6.35(s,2h,ar-h)

實施例5：3,4,5-三[3,4,5-三(十八烷氧基)芐氧基]苯甲酸甲酯的合成

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(1.39g,10.1mmol)、3,5-羥基苯甲酸甲酯(181mg,1.00mmol)、3,4,5-三(十八烷氧基)芐基氯(2.81g,3.01mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，并將混合物在70℃攪拌18hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液倒入水(50ml)中以進行沉淀，得到固體。將所得固體溶解于二氯甲烷(50ml)中，并通過乙腈(200ml)使固體沉淀后，通過過濾收集并干燥以得到目標產(chǎn)物的粗產(chǎn)物。通過硅膠柱色譜法(二氯甲烷/己烷(體積比)＝1/2-1/1)將所得粗產(chǎn)物純化以得到目標化合物(2.31g,81％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,j＝7.0hz,-o(ch2)17ch3),1.25-1.74(m,291h,-och2(ch2+n⁵-ch3)16ch3),3.75(m,6h,-och2(ch2)16ch3),3.90(s,3h,-c(o)och3),3.86-3.94(2m,12h,-och2(ch2)16ch3),5.02(s,6h,3×-h2c-ar),6.59(s,2h,ar-h),6.62(s,4h,ar-h),7.38(s,2h,ar-h)

實施例6：3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酸甲酯的合成

將1-溴十八烷(64.0g,192mmol)、碳酸鉀(79.6g,576mmol)、3,4,5-三羥基苯甲酸甲酯(11.0g,60.0mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(600ml)中，并將混合物在90℃攪拌16hr。通過薄層色譜法(己烷/二氯甲烷(體積比)＝2/1和二氯甲烷/甲醇(體積比)＝9/1)確認反應完成后，將反應液倒入水(2.00l)中，使固體沉淀，然后進行過濾并干燥。將干燥的固體溶解于二氯甲烷(500ml)中，添加乙腈(1.50l)以使固體沉淀。通過過濾收集固體，并干燥以得到目標化合物(56.7g,100％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,j＝6.8hz,-och2(ch2)16ch3),1.21-1.51(m,90h,-o-ch2ch2(ch2)15ch3),1.70-,6h,-o-ch2-ch2-(ch2)15-ch3),3.89(s,3h,c(o)och3),3.99-4.03(m,6h,ar-och2),4.99(s,2h,ar-h),7.25(s,2h,ar-h)

實施例7：乙酸3,4,5-三(十八烷氧基)芐酯的合成

(1)3,4,5-三(十八烷氧基)芐基醇的合成

在氬氣氣氛下，將3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酸甲酯(10.0g,10.6mmol)溶解于四氫呋喃(150ml)中，添加氫化鋁鋰(810mg,21.3mmol)，并將混合物在室溫下攪拌30min。通過薄層色譜法確認反應完成后，用4m氫氧化鈉水溶液(6.0ml)驟冷(quench)，并過濾反應液。向濾液中添加甲醇(500ml)以使固體沉淀，其通過過濾收集并干燥以得到目標化合物(9.65g,產(chǎn)率99％)。

(2)乙酸3,4,5-三(十八烷氧基)芐酯的合成

將3,4,5-三(十八烷氧基)芐基醇(10.0g,10.5mmol)、乙酸酐(9.90ml,105mmol)、吡啶(8.40ml,105mmol)、4-二甲基氨基吡啶(128mg,1.05mmol)溶解于二氯甲烷(100ml)中，并將混合物在室溫下攪拌5min。通過薄層色譜法確認反應完成后，添加乙腈(500ml)以使固體沉淀，其通過過濾收集。通過硅膠柱色譜法(己烷/二氯甲烷＝2/1-1/1)純化所得固體以定量得到呈白色固體狀的目標化合物(10.4g)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,j＝6.8hz,-ch3),1.26-1.50(m,90h,-o-ch2-ch2-(ch2)15ch3),1.70-1.83(m,6h,-o-ch2-ch2-(ch2)15-ch3),2.10(s,3h,c(o)ch3),3.92-3.98(m,6h,ar-och2),4.99(s,2h,ar-ch2),6.54(s,2h,ar-h)

實施例8：1,2,3-三(十八烷氧基)丙烷的合成

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(12.4g,90.0mmol)、甘油(921mg,10.0mmol)、1-溴十八烷(11.0g,33.0mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(100ml)中，并將混合物在110℃攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液倒入水(400ml)中以進行沉淀，得到固體。通過硅膠柱色譜法(二氯甲烷)純化所得固體以得到目標化合物(4.30g,51％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,j＝6.8hz,-ch2(ch2)16ch3),1.18-1.36(m,95h,-ch2ch2(ch2)15ch3,hc(ch2)2),1.53-1.62(m,6h,-ch2ch2(ch2)15ch3),3.62-3.66(m,6h,-ch2(ch2)16ch3)

實施例9：1,3-二(十八烷氧基)-2,2-二(十八烷氧基甲基)丙烷的合成

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(6.10g,44.1mmol)、季戊四醇(501mg,3.67mmol)、1-溴十八烷(5.50g,16.5mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(35ml)中，并將混合物在110℃攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液倒入水(400ml)中以進行沉淀，得到固體。將所得固體溶解于二氯甲烷(200ml)中，并通過甲醇(300ml)使固體沉淀后，通過過濾收集并干燥以得到目標化合物(3.57g,85％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,j＝6.8hz,12h,-ch2(ch2)16ch3),1.17-1.36(m,128h,-ch2ch2(ch2)16ch3),1.53-1.60(m,8h,-c(ch2)4),3.62-3.66(m,8h,-ch2(ch2)16ch3)

實施例10：4-二十二烷氧基苯甲酸甲酯的合成

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(1.36g,9.85mmol)、4-羥基苯甲酸甲酯(500mg,3.29mmol)、1-溴十八烷(1.28g,3.62mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(30ml)中，并將混合物在90℃攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液倒入水(400ml)中以進行沉淀，得到固體。將所得固體溶解于70℃的乙酸乙酯(50ml)中之后，冷卻至室溫以使晶體沉淀，然后其通過過濾收集并干燥以得到目標化合物(1.37g,91％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,3h,j＝6.8hz,-ch2ch2(ch2)15ch3),1.26-1.58(m,38h,-ch2ch2(ch2)19ch3),1.76-1.83(m,2h,-ch2ch2(ch2)19ch3),3.88(s,3h,-c(o)och3),4.00(t,2h,j＝6.4hz,-ch2ch2(ch2)15ch3),6.90(d,2h,j＝9.5hz,ar-h),7.98(d,2h,j＝9.5hz,ar-h)

實施例11：3,4,5-三(十八烷氧基)環(huán)己烷羧酸甲酯的合成

將環(huán)己烷添加至3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酸甲酯(1.00g,10.6mmol)中，添加5％銠-碳(0.8g)，并且在80℃和10atm下進行氫還原16hr。在氫還原后向混合物中添加四氫呋喃(10ml)并過濾掉催化劑。將濾液濃縮，將甲醇(8ml)添加至濃縮的溶液中，并攪拌混合物。所得沉淀物通過過濾收集，并干燥以得到目標化合物(820mg,產(chǎn)率82％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.89(9h,t,j＝6.9hz,c17h34-me),1.25-1.44(90h,m),1.52-1.60(6h,m),1.86-1.94(4h,m),2.23(1h,m),3.09-3.14(2h,m),3,41-3.47(4h,m),3.64-3.68(5h,m),3.86(1h,s)

實施例12：2,4-二(二十二烷氧基)苯甲酸甲酯的合成

在氬氣氣氛下，將碳酸鉀(29.9g,217mmol)、2,4-二羥基苯甲酸甲酯(3.65g,21.7mmol)、1-溴二十二烷(17.33g,44.5mmol)溶解于n,n-二甲基甲酰胺(150ml)中，并將混合物在70℃攪拌16hr。通過薄層色譜法確認反應完成后，將反應液倒入水(1.00l)中以進行沉淀，得到固體。將所得固體溶解于二氯甲烷(500ml)中，并通過甲醇(400ml)使固體沉淀后，通過過濾收集并干燥以得到目標化合物(16.7g,產(chǎn)率98％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,6h,j＝6.6hz,-ch3),1.13-1.56(m,76h,-och2ch2(ch2)19ch3),1.81(m,4h,-och2ch2(ch2)19ch3),3.89(s,3h,c(o)o-ch3),4.02(dd,4h,j＝6.6,14.8hz,-och2ch2(ch2)19ch3),6.63(s,1h,ar-h),7.15(s,2h,ar-h)

實施例13：新戊?；趸谆?3,4,5-三(十八烷氧基)苯的合成

在氬氣氣氛下，將3,4,5-三(十八烷氧基)芐基醇(2.73g,2.99mmol)溶解于二氯甲烷(25ml)中，然后依次添加三乙胺(1.67ml,12.0mmol)、新戊酰氯(781μl,6.00mmol)、4-二甲基氨基吡啶(7.32mg,600μmol)，并將混合物在室溫下攪拌7hr。通過薄層色譜法確認反應完成，將乙腈(125ml)添加至反應液中以使固體沉淀，其通過過濾收集。將所得固體在減壓下干燥以定量地得到呈白色固體狀的目標化合物(2.80g)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.879(t,j＝7.06hz,9h),1.23(s,9h),1.24-1.40(m,84h),1.40-1.52(m,6h),1.70-1.81(m,6h),3.92(t,j＝6.8hz,2h),3.95(t,j＝6.8hz,4h),5.01(s,2h),6.51(s,2h)

實施例14：(2s)-2-(乙?；被?-4-甲基戊酰基氧基甲基-3,4,5-三(十八烷氧基)苯的合成

將3,4,5-三(十八烷氧基)芐基醇(1.83g,2.00mmol)、n-乙?；涟彼?700mg,4.09mmol)、2,6-二甲基氨基吡啶(2.58mg,20.0μmol)溶解于二氯甲烷(20ml)中，然后添加二異丙基乙胺(1.16ml,6.79mmol)和hbtu(1.90g,5.00mmol)，并將混合物在室溫下攪拌15hr后，在40℃進一步攪拌21hr。將反應液過濾后，將乙腈(100ml)添加至濾液中以使固體沉淀，其通過過濾收集。將所得固體減壓干燥以得到呈白色固體狀的目標化合物(1.97g)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3)：δ＝0.879(t,j＝7.06hz,9h),0.913(d,j＝3.2hz,3h),0.929(d,j＝3.2hz,3h),1.22-1.40(m,84h),1.40-1.52(m,7h),2.02(s,3h),1.60-1.82(m,8h),3.94(t,j＝6.4hz,2h),3.95(t,j＝6.8hz,4h),4.684(ddd,j＝13.6,4.8,4.8hz,1h),5.024(d,12.4hz),5.082(d,12.4hz),5.817(d,8.4hz),6.52(s,2h)

實施例15：三異丙基甲硅烷氧基甲基-3,4,5-三(十八烷氧基)苯的合成

在氬氣氣氛下，將3,4,5-三(十八烷氧基)芐基醇(4.57g,5.00mmol)和咪唑(1.36g,20.0mmol)溶解于二氯甲烷(40ml)和n,n-二甲基甲酰胺(10ml)的混合溶劑中，添加三異丙基甲硅烷基氯(2.12ml,10.0mmol)并將混合物在40℃攪拌6hr。在冷卻至室溫之后，將乙腈(250ml)添加至反應液中以使固體沉淀，其通過過濾收集。將所得固體減壓干燥以得到呈白色固體狀的目標化合物(5.23g)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.879(t,j＝7.06hz,9h),1.09(d,18h,6.0hz),1.12-1.20(m,3h),1.22-1.40(m,84h),1.40-1.52(m,6h),1.70-1.82(m,6h),3.91(t,j＝6.8hz,2h),3.97(t,j＝6.8hz,4h),4.75(s,2h),6.56(s,2h)

實施例16：4-(3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰)-嗎啉的合成

在氬氣氣氛下，將3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酸(5.00g,5.39mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)中，然后依次添加hbtu(6.13g,16.2mmol)、嗎啉(1.31ml,16.2mmol)和二異丙基乙胺(2.90ml,16.2mmol)，并將混合物在室溫下攪拌18hr。通過薄層色譜法(己烷/二氯甲烷/乙酸乙酯＝25/50/25)確認反應的終點后，將乙腈(250ml)添加至反應液中以使固體沉淀，其通過過濾收集。通過硅膠柱色譜法(二氯甲烷/甲醇＝100/0-95/5)純化所得固體，以得到呈白色固體狀的目標化合物(5.18g)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.879(t,j＝6.8hz,9h),1.26-1.47(m,84h),1.42-1.53(m,6h),1.71-1.80(m,6h),3.69(m,8h),3.95(m,6h),6.51(s,2h)

試驗例1

作為被沉淀物，使用參考例2中合成的五聚體或參考例4中合成的二十聚體，研究沉淀促進劑的添加量與被沉淀物的回收率之間的關系。將表1和2中所示量的被沉淀物和實施例6中合成的沉淀促進劑(3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酸甲酯)溶解于二氯甲烷(2ml)中，然后用表1和2中所示量的乙腈使固體沉淀，所得固體通過使用桐山漏斗(21m/m)和濾紙(no-5a)通過過濾收集，用乙腈(20ml)將固體洗滌后進行減壓干燥。從所用被沉淀物(即參考例2的五聚體或參考例4的二十聚體)的量和所用沉淀促進劑的量、以及回收的干燥后的被沉淀物和沉淀促進劑的混合物的量計算的回收率(＝100x(回收的干燥后的被沉淀物和沉淀促進劑的混合物的量(mg))/(所用被沉淀物的量(mg)+所用沉淀促進劑的量(mg)))顯示于表1和2中。

表1

^*1實施例6的沉淀促進劑相對于參考例2的五聚體的摩爾當量

表2

^*1實施例6的沉淀促進劑相對于參考例4的二十聚體的摩爾當量

試驗例2

作為被沉淀物，使用參考例3中合成的十聚體，研究沉淀促進劑的種類與被沉淀物的回收率之間的關系。將表3中所示量的參考例3的十聚體和任一比較例1及2及實施例1–12中合成的沉淀促進劑溶解于二氯甲烷(0.5ml)中，然后用乙腈(2.5ml)使固體沉淀，所得固體通過使用桐山漏斗(21m/m)和濾紙(no-5a)通過過濾收集，用乙腈(2.0ml)將固體洗滌后進行減壓干燥。從所用被沉淀物(即參考例3的十聚體)的量和所用沉淀促進劑的量、以及回收的干燥后的被沉淀物和沉淀促進劑的量計算的回收率(＝100x(回收的干燥后的被沉淀物和沉淀促進劑的混合物的量(mg))/(所用被沉淀物的量(mg)+所用沉淀促進劑的量(mg)))顯示于表3中。

表3

^*1各沉淀促進劑相對于參考例3的十聚體的摩爾當量

如表3中所示，使用實施例1–12的沉淀促進劑，可促進參考例3的十聚體的沉淀且可提高其回收率。另一方面，當使用具有支鏈脂族烴基的比較例1的沉淀促進劑、及具有直鏈脂族烴基但該基團的碳原子總數(shù)低于20的比較例2的沉淀促進劑時，與沒有使用這些沉淀促進劑的情形相比，參考例3的十聚體的回收率降低。

試驗例3

作為被沉淀物，使用參考例2中合成的五聚體，研究沉淀促進劑的種類與被沉淀物的回收率之間的關系。將表4中所示量的參考例2的五聚體和任一實施例13–15中合成的沉淀促進劑溶解于二氯甲烷中。在24℃下經(jīng)3min將表4中所示量的乙腈在攪拌下滴加至所得溶液以使固體沉淀，得到漿料。使所得漿料在冰浴中靜置10min，并且將沉淀的固體通過使用25φ桐山漏斗和5c濾紙通過過濾收集，并用表4中所示量的乙腈洗滌所得固體。將所得固體減壓干燥過夜。從所用被沉淀物(即參考例2的五聚體)的量和所用沉淀促進劑的量、以及回收的干燥后的被沉淀物和沉淀促進劑的混合物的量計算的回收率(＝100x(回收的干燥后的被沉淀物和沉淀促進劑的混合物的量(mg))/(所用被沉淀物的量(mg)+所用沉淀促進劑的量(mg)))顯示于表4中。

表4

^*1各沉淀促進劑相對于參考例2的五聚體的摩爾當量

試驗例4

作為被沉淀物，使用參考例4中合成的二十聚體，研究沉淀促進劑的種類與被沉淀物的回收率之間的關系。將表5中所示量的參考例2的五聚體和任一實施例13–15中合成的沉淀促進劑溶解于二氯甲烷中。在24℃下經(jīng)3min將乙腈(10.5ml)在攪拌下滴加至所得溶液以使固體沉淀，得到漿料。使所得漿料在冰浴中靜置10min，并且將沉淀的固體通過使用25φ桐山漏斗和5c濾紙通過過濾收集，并用乙腈(5.0ml)洗滌所得固體。將所得固體減壓干燥過夜。從所用被沉淀物(即參考例4的二十聚體)的量和所用沉淀促進劑的量、以及回收的干燥后的被沉淀物和沉淀促進劑的混合物的量計算的回收率(＝100x(回收的干燥后的被沉淀物和沉淀促進劑的混合物的量(mg))/(所用被沉淀物的量(mg)+所用沉淀促進劑的量(mg)))顯示于表5中。

表5

^*1各沉淀促進劑相對于參考例4的二十聚體的摩爾當量

試驗例5

首先，不使用沉淀促進劑進行肽的回收試驗。具體地，將其中羧基被3,4,5-三(十八烷氧基)芐基(tob)保護的肽(h-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-otob,435mg,0.166mmol)溶解于氯仿(10ml)中。將所得溶液減壓濃縮，并從溶液中除去約5ml氯仿以得到濃縮物。將乙腈(20ml)添加至該濃縮物以使固體沉淀。該沉淀物通過過濾收集并減壓干燥以得到干燥的肽。從所用肽的量以及回收的干燥后的肽的量計算的回收率(＝100x(回收的干燥后的肽的量(mg))/(所用肽的量(mg)))為71％。

接著，使用3,4,5-三(十八烷氧基)芐基醇作為沉淀促進劑，除此以外采用與上述相同的方式進行肽的回收試驗。具體地，將其中羧基被3,4,5-三(十八烷氧基)芐基(tob)保護的肽(h-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-otob,435mg,0.166mmol)和3,4,5-三(十八烷氧基)芐基醇(200mg,0.22mmol)溶解于氯仿(10ml)中。將所得溶液減壓濃縮，并從溶液中除去約5ml氯仿以得到濃縮物。將乙腈(20ml)添加至該濃縮物以使固體沉淀。該沉淀物通過過濾收集并減壓干燥以得到干燥的肽和沉淀促進劑的混合物。從所用肽的量和所用沉淀促進劑的量、以及回收的干燥后的肽和沉淀促進劑的混合物的量計算的回收率(＝100x(回收的干燥后的肽和沉淀促進劑的混合物的量(mg))/(所用肽的量(mg)+所用沉淀促進劑的量(mg)))為97％。

實施例17:通過使用沉淀促進劑在溶液中連續(xù)合成硫代磷酸酯二聚體

在氬氣氣氛下，將5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)脫氧胸苷-3’-基[3,4,5-三(十八烷氧基)芐基]琥珀酸酯(1.85g,1.2mmol)、乙酸3,4,5-三(十八烷氧基)芐酯(1.86g,1.20mmol，其為實施例7中合成的沉淀促進劑)溶解于二氯甲烷(40ml)中，添加吲哚(1.40g,12.0mmol)和三氟乙酸(88.9μl,1.20mmol)，并將混合物在室溫下攪拌2hr，通過薄層色譜法確認反應完成。用1-甲基咪唑(99.7μl,1.26mmol)中和反應混合物后，添加4,5-二氰基咪唑(476mg,4.03mmol)、5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)脫氧胸苷-3’-[o-(2-氰乙基)-(n,n-二異丙基)]-亞磷酰胺(2.00g,2.69mmol)在乙腈中的溶液，并將混合物在室溫下攪拌60min，通過薄層色譜法確認反應的完成。此外，添加3-[(n,n-二甲基氨基亞甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑-5-硫酮(608mg,2.96mmol)并將混合物在室溫下攪拌30min。然后添加乙酸酐(56.6μl,0.60mmol)、2,4,6-三甲基吡啶(79.1μl,0.60mmol)、1-甲基咪唑(47.5μl,0.60mmol)并將混合物在室溫下攪拌15min。將乙腈(200ml)添加至反應液中，將沉淀的固體使用桐山漏斗抽濾后進行干燥以得到呈白色固體狀的5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-脫氧胸苷-3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；撗跣剀?3’-基[3,4,5-三(十八烷氧基)芐基]琥珀酸酯(4.150g,產(chǎn)率99.8％)。

實施例18：通過使用沉淀促進劑在溶液中連續(xù)合成硫代磷酸酯二十聚體(序列：5’-tcccgcctgtgacatgcatt-3’)

(1)鍵合有假固相保護基的硫代磷酸酯二十聚體的合成

將與實施例17的操作類似的操作重復19次以得到5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n²-異丁酰-脫氧鳥苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?n⁴-苯甲酰-脫氧胞苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-n⁶-苯甲酰-脫氧腺苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；?脫氧胸苷3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基-脫氧胸苷3’-基3,4,5-三(十八烷氧基)芐基琥珀酸酯(8.55g)。

(2)硫代磷酸酯二十聚體的合成(脫保護)和純化

將上述(1)中合成的化合物(100mg,10.3μmol)和30wt％氨水(5.00ml)放入高壓釜中，在65℃加熱4hr后，通過針頭式過濾器(whatman25mmgd/xptfe0.45μm)過濾不溶物質。濾液進一步用0.1m乙酸銨水溶液(50ml)稀釋并經(jīng)過c-18柱純化，將所得到的洗脫液冷凍干燥以得到目標產(chǎn)物：脫氧胸苷基-[3’→5’]-脫氧胞苷基-[3’→5’]-脫氧胞苷基-[3’→5’]-脫氧胞苷基-[3’→5’]-脫氧胍基(deoxyguanidyl)-[3’→5’]-脫氧胞苷基-[3’→5’]-脫氧胞苷基-[3’→5’]-脫氧胸苷基-[3’→5’]-脫氧胍基-[3’→5’]-脫氧胸苷基-[3’→5’]-脫氧胍基-[3’→5’]-脫氧腺苷酰-[3’→5’]-脫氧胞苷基-[3’→5’]-脫氧腺苷酰-[3’→5’]-脫氧胸苷基-[3’→5’]-脫氧胍基-[3’→5’]-脫氧胞苷基-[3’→5’]-脫氧腺苷酰-[3’→5’]-脫氧胸苷基-[3’→5’]-脫氧胸苷。

hplc(shodexodp(),流速0.5ml/min，15mmtea+20mmhfip/meoh＝95/5,15mmtea+20mmhfip/meoh＝50/50梯度：0-7.4min；0-60％,7.5-11min；100％,λ＝254nm):rt＝6.26min(73％)；

tof/ms:6344.59[m-h]^-

實施例19:通過使用沉淀促進劑在溶液中連續(xù)合成硫代磷酸酯二聚體

在氬氣氣氛下，將5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)脫氧胸苷-3’-基-二異丙基-4-[3,4,5-三(十八烷氧基)芐氧基羰基]苯基硅烷(330mg,200μmol)和乙酸3,4,5-三(十八烷氧基)芐基酯(290mg,303μmol，其為實施例7中合成的沉淀促進劑)溶解于二氯甲烷(5.0ml)中，添加吲哚(469mg,4.00mmol)、三氟乙酸(30.6μl,400μmol)并將混合物在室溫下攪拌2hr，通過薄層色譜法確認反應的完成。用1-甲基咪唑(34.8μl,439μmol)中和反應混合物后，添加5-芐硫基-1h-四唑(115mg,600μmol)、5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)脫氧胸苷-3’-[o-(2-氰乙基)-(n,n-二異丙基)]-亞磷酰胺(447mg,600μmol)在乙腈中溶液，并將混合物在室溫下攪拌60min，通過薄層色譜法確認反應的完成。此外，添加3-[(n,n-二甲基氨基亞甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑-5-硫酮(136mg,662μmol)并將混合物在室溫下攪拌30min。然后將乙腈(30ml)添加至反應液中，將沉淀的固體使用桐山漏斗抽濾后進行干燥以得到呈白色固體狀的5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-脫氧胸苷-3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷酰基脫氧胸苷-3’-基[3,4,5-三(十八烷氧基)芐基]琥珀酸酯(398mg,產(chǎn)率98％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝0.88(t,9h,j＝6.6hz,-ch3),1.00-1.07(m,12h,-si-ch-(ch3)2),1.21-2.00(m,96h,-och2(ch2)15ch3),2.35-2.50(m,3h,2’-h),2.56-2.60(m,2h,2’-h+5’-h),2.71(m,1h,5’-h),3.41-3.46(m,2h,5’-h),3.78(s,6h,dmtr-och3),3.93-3.99(m,6h,-och2(ch2)15ch3),4.11-4.30(m,6h,3’-h,4’-h,-ch2ch2cn),4.51-4.60(m,1h,4’-h),5.24(s,2h,ar-ch2-o-),5.32(m,1h,3’-h),6.28(m,1h,1h’-h),6.36(m,1h,1h’-h),6.64(s,2h,ar-h),6.84(m,4h,dmtr-h),7.22-7.63(m,11h,-si-ar,dmtr-h),8.05-8.08(m,2h,-si-ar),8.58-8.95(m,2h,n³-h)

實施例20：通過使用沉淀促進劑在溶液中連續(xù)合成硫代磷酸酯二聚體

在氬氣氣氛下，將5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-n3-3,4,5-三(十八烷氧基)苯甲酰-脫氧胸苷-3’-基-叔丁基-二甲基硅烷(312mg,199μmol)和乙酸3,4,5-三(十八烷氧基)芐基酯(287mg,300μmol，其為實施例7中合成的沉淀促進劑)溶解于二氯甲烷(5.0ml)中，添加吲哚(466mg,3.98mmol)、三氟乙酸(30.6μl,398μmol)并將混合物在室溫下攪拌2hr，通過薄層色譜法確認反應的完成。用1-甲基咪唑(34.8μl,439μmol)中和反應混合物后，添加5-芐硫基-1h-四唑(115mg,600μmol)、5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)脫氧胸苷-3’-[o-(2-氰乙基)-(n,n-二異丙基)]-亞磷酰胺(447g,600μmol)在乙腈中的溶液，并將混合物在室溫下攪拌60min，通過薄層色譜法確認反應的完成。此外，添加3-[(n,n-二甲基氨基亞甲基)氨基]-3h-1,2,4-二噻唑-5-硫酮(136mg,662μmol)并將混合物在室溫下攪拌30min。然后將乙腈(30ml)添加至反應液中，將沉淀的固體使用桐山漏斗抽濾后進行干燥以得到呈白色固體狀的5’-o-(4,4’-二甲氧基三苯甲基)-脫氧胸苷-3’-[o-(2-氰乙基)]硫代磷?；撗跣剀?3’-基[3,4,5-三(十八烷氧基)芐基]琥珀酸酯(382mg,產(chǎn)率99％)。

¹h-nmr(400mhz,cdcl3):δ＝-0.01(s,3h,si-ch3),0.00(s,3h,si-ch3),0.75-0.81(m,18h,-och2(ch2)15ch3+si-c(ch3)3),1.05-1.73(m,90h,-och2(ch2)15ch3),2.08(m,1h,2’-h),2.22(m,1h,2’-h),2.34(m,1h,2’-h),2.53-2.62(m,2h,2’-h+5’-h),2.70(t,1h,j＝6.0hz,5’-h),3.25-3.51(m,2h,5’-h),3.71(d,6h,j＝1.3hz,dmtr-och3),3.87-3.98(m,7h,-och2(ch2)15ch3+3’-h),4.10-4.33(m,6h,-ch2ch2cn+2×4’-h),5.25(dt,1h,j＝7.9,15.3hz,3’-h),6.17(td,1h,j＝2.2,6.6hz,1’-h),6.30(dd,j＝5.4,8.8,23.6hz,1’-h),6.76(s,2h,ar-h),6.78(s,2h,dmtr-h),7.05-7.39(m,11h,dmtr-ar-h),7.39(s,1h,n6-h),7.47(d,1h,j＝8.0hz,n6-h),8.45(m,1h,n3-h)

[產(chǎn)業(yè)適用性]

使用本發(fā)明的沉淀促進劑，當使被具有一個以上的碳原子數(shù)為10以上的脂族烴基的有機基團保護的有機化合物從溶劑中沉淀時，可提高該有機化合物的回收率。因此，本發(fā)明的沉淀促進劑可用于所述有機化合物的合成、特別是寡核苷酸的合成。

本申請以在日本申請的專利申請?zhí)?015-009720作為基礎，其內容全部包含于本說明書中。