1.一種快速獲得綠原酸粗提物的方法,其特征在于,具體按照以下步驟進(jìn)行:
步驟1,配置培養(yǎng)基與培養(yǎng)基的滅菌;
步驟2,消毒處理烏蘇里瓦韋根莖;
步驟3,外植體的接種;
步驟4,根莖愈傷組織培養(yǎng);
a.根莖愈傷組織的誘導(dǎo);
以1/2MS為基本培養(yǎng)基,分別添加6-BA 0.3mg·L-1、2,4-D 3mg·L-1、IBA 1mg·L-1作為培養(yǎng)基生長調(diào)節(jié)劑,培養(yǎng)基瓊脂含量為7.0gL-1,蔗糖含量為30.0g·L-1,pH為5.8;將切成1cm的根莖小塊接種于培養(yǎng)基上,置于恒溫培養(yǎng)箱,在25±2℃下暗培養(yǎng),培養(yǎng)30天;
b.根莖愈傷組織的增值;
以MS為基本培養(yǎng)基,添加6-BA 0.3mg·L-1、2,4-D 3mg·L-1、IBA 1mg·L-1作為培養(yǎng)基生長調(diào)節(jié)劑,培養(yǎng)基瓊脂含量為7.0g·L-1,蔗糖含量為30.0g·L-1,pH值為5.8;將愈傷組織切成0.5cm×0.5cm的小塊接種于培養(yǎng)基上,置于恒溫培養(yǎng)箱,在25±2℃下暗培養(yǎng),增殖時(shí)間為25天;
步驟5,烏蘇里瓦韋愈傷組織中有效成分的提取;
取烏蘇里瓦韋根莖愈傷組織研碎后,加70%乙醇超聲提取1h,其中料液比1:20,濃縮,再用正丁醇萃取,然后濃縮成浸膏,即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速獲得綠原酸粗提物的方法,其特征在于,所述步驟1按照以下步驟進(jìn)行:
以1/2MS為基本培養(yǎng)基,附加6-BA 0.5mg·L-1、2,4-D 3mg·L-1、IBA 1mg·L-1作為培養(yǎng)基生長調(diào)節(jié)劑,培養(yǎng)基瓊脂含量為7.0g·L-1,蔗糖含量為30.0g·L-1,加入雙蒸水使其溶解,用NaOH和HCl溶液將培養(yǎng)基pH值調(diào)至5.8±0.2,放入加熱套中加熱并用玻璃棒不斷攪拌使培養(yǎng)基完全溶解;用封口膜封住瓶口,放入立式壓力蒸汽滅菌器中,于101kpa下滅菌20min,然后斷開電源打開放氣閥,待氣壓降至標(biāo)準(zhǔn)大氣壓后,取出培養(yǎng)基,將滅菌后的培養(yǎng)基放在無菌操作臺(tái)中;培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中要趁熱,防止培養(yǎng)基凝固,倒入培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基厚度為1.5cm,待培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基凝固冷卻以備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種快速獲得綠原酸粗提物的方法,其特征在于,無菌操作臺(tái)在使用前需用紫外燈照射30min,使無菌操作臺(tái)處于無菌狀態(tài)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速獲得綠原酸粗提物的方法,其特征在于,所述步驟2按照以下步驟進(jìn)行:
取烏蘇里瓦韋根莖自來水沖刷10min后,放入燒杯中帶入無菌接種室備用,倒入濃度75%的酒精消毒30s,無菌水沖洗1次,用0.1%HgCl2溶液對根莖進(jìn)行浸泡消毒5min,再用無菌水沖洗5~6次,將消毒完全的外植體置于鋪有無菌的濾紙中,吸干外植體表面的水分,將根莖則切成1cm的小段,即可用于無菌接種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速獲得綠原酸粗提物的方法,其特征在于,所述步驟3按照以下步驟進(jìn)行:
將所有要用到的工具進(jìn)行酒精燈消毒處理,將根莖外植體充分接觸到培養(yǎng)基上后,用蓋子蓋好,并用封口膜封嚴(yán),將接種外植體的培養(yǎng)皿放在25±2℃環(huán)境下培養(yǎng),靜等觀察。