本發(fā)明涉及水環(huán)境生態(tài)修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種固定化溶藻細(xì)菌微球的制備和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
由于人類活動，含氮、磷等營養(yǎng)物質(zhì)的工業(yè)廢水、農(nóng)田排水和生活污水大量進(jìn)入河流、湖泊，導(dǎo)致水體中氮、磷等營養(yǎng)物質(zhì)增加，水中藻類暴發(fā)性增長，給水體生態(tài)環(huán)境、用水安全、景觀效應(yīng)甚至人類健康帶來不利影響。
控制水體中藻類過度繁殖的方法主要有物理方法、化學(xué)方法和生物方法。物理方法有人工打撈、超聲波除藻、絮凝劑投加(聚合氯化鋁，聚硅硫酸鋁，磷酸鹽粘土)等；化學(xué)方法是指直接向水體中投加殺藻劑來除藻，常用的無機(jī)物殺藻劑有含銅無機(jī)鹽（CuSO4和CuCl2等）、高錳酸鉀和臭氧等，這些物質(zhì)易對水體造成二次污染。有機(jī)殺藻劑主要指從天然植物中提取的化感物質(zhì)，或者根據(jù)這些化感物質(zhì)的結(jié)構(gòu)而人工合成的有機(jī)物。生物法是近些年受關(guān)注比較多的方法，主要有種植水生植物，利用植物的化感作用控制水華；或通過人為構(gòu)筑的水生生態(tài)鏈來控制水華；或向水體中投入食藻蟲攝食藻類而控制水華。生物方法因為其高效性、專一性和環(huán)境友好等優(yōu)點成為藻類水華治理的熱點。
溶藻菌是指一類以直接或間接方式抑制藻類生長、殺死藻類或溶解藻細(xì)胞的細(xì)菌和真菌的統(tǒng)稱，是水生生態(tài)系統(tǒng)生物種群結(jié)構(gòu)和功能的重要組成部分，對維持藻類生物量平衡具有非常重要的作用。目前，溶藻細(xì)菌主要以游離細(xì)胞的形式被應(yīng)用，但游離溶藻細(xì)胞在流水條件下易被水流沖走，在靜水條件下易被其他生物所食用，由于缺乏細(xì)菌附著和生長繁殖的載體，溶藻細(xì)菌難以穩(wěn)定長期發(fā)揮抑制藻類生長或殺死藻類的功能。另外，藻類可利用水中無機(jī)類的碳氮磷化合物作為生長所需要的物質(zhì)和能量來源，而溶藻細(xì)菌必須攝取有機(jī)碳源作為物質(zhì)和能量的來源，因此，為了維持溶藻細(xì)胞的生長以及溶藻活動，在向水中施加游離的溶藻細(xì)胞時，往往需要添加有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)，而這些營養(yǎng)物質(zhì)的加入又反過來會對水體的水質(zhì)帶來影響。
固定化微生物技術(shù)是用化學(xué)或物理手段將游離微生物定位于限定的空間區(qū)域內(nèi)，增大微生物密度并使其保持活性的方法，能夠避免微生物流失，提高穩(wěn)定性、耐毒害和抗沖擊能力。本發(fā)明提出將具有抑藻溶藻性能的細(xì)菌細(xì)胞固定于包埋體材料中，并在包埋體中加入溶藻細(xì)菌生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，建立了一種固定化溶藻細(xì)菌微球的制備方法，并提出了其應(yīng)用方式，在既能夠維持溶藻細(xì)菌活性前提下，滿足固定化溶藻細(xì)菌微球長達(dá)4-6個月的使用要求，同時又能降低溶藻細(xì)菌微球在使用過程對水質(zhì)帶來的影響。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種固定化的溶藻細(xì)菌微球。
本發(fā)明的再一目的是提供一種固定化溶藻細(xì)菌微球的制備方法。
本發(fā)明的再一目的是提供一種利用固定化溶藻細(xì)菌微球抑制藻類過度生長的方法。
為了實現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：以聚乙烯醇、海藻酸鈉為包埋劑，以含有氯化鈣的飽和硼酸溶液作為交聯(lián)劑，在一定包埋比例、交聯(lián)時間、溫度、細(xì)菌培養(yǎng)基加入比例的條件下，將溶藻細(xì)菌進(jìn)行固定化，進(jìn)而進(jìn)行抑藻。
一種固定化溶藻細(xì)菌微球的制備方法，具體包括以下步驟：
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基；
（2）將溶藻細(xì)菌接種于步驟（1）溶液中，培養(yǎng)，得到培養(yǎng)菌液；
（3）將步驟（2）培養(yǎng)菌液中的菌體細(xì)胞分離，并重懸于溶液（1）中；
（4）配制聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液；
（5）配制氯化鈣-硼酸交聯(lián)劑；
（6）將步驟（4）中溶液與步驟（3）中菌液混合，滴加入步驟（5）溶液中，固定化交聯(lián)得到溶藻細(xì)菌微球。
進(jìn)一步，步驟（1）中培養(yǎng)基為細(xì)菌培養(yǎng)常用的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g/L、蛋白胨10g/L、牛肉膏5g/L，配制于蒸餾水中，所配培養(yǎng)基用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值為7.2-7.5，在120℃、110kPa下滅菌，得到無菌液體培養(yǎng)基。
進(jìn)一步，步驟（2）中溶藻菌為缺陷短波單胞菌（Brevundimonas diminuta，CGMCC No.11571）、短波單胞菌（Brevundimonas olei，CGMCC No.11572）、黏著劍菌（Ensifer adhaerens，CGMCC No.12458）和糞產(chǎn)堿菌（Alcaligenes faecalis，CGMCC No.12457），培養(yǎng)溫度為28-37℃下，培養(yǎng)時間為48-96小時，優(yōu)選60-80小時。
進(jìn)一步，步驟（3）中菌液分離后所獲得的菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積20-80%的培養(yǎng)基中，優(yōu)選40-60%。
進(jìn)一步，步驟（4）中聚乙烯醇的質(zhì)量濃度為10-12%，海藻酸鈉質(zhì)量濃度為0.25-1.0%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在80-90℃下溶解，并保持溶液最終溫度為25-40℃。
進(jìn)一步，在步驟（5）中，在25-35℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度15-30%碳酸鈉調(diào)節(jié)溶液pH值為6.7-7.2；按氯化鈣質(zhì)量濃度1.5-2.5%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
進(jìn)一步，在步驟（6）中，步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液的體積比2:1-1:1，在35-40℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，并在4℃下固定化交聯(lián)16-32小時，優(yōu)選20-24小時。
上述藻類為藍(lán)藻中的微囊藻屬，優(yōu)選銅綠微囊藻、中華微囊藻、水華微囊藻、放射微囊藻、堅實微囊藻、魚害微囊藻、挪氏微囊藻、假絲微囊藻、史密斯微囊藻、綠色微囊藻、惠氏微囊藻。
上述所制備的細(xì)菌微球為直徑為3-15mm的類球形顆粒，所得溶藻細(xì)菌微球可用無菌水清洗干凈后，在4℃保存于生理鹽水中，備用。使用時，將溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器中，直接投放于含藻水體中。
針對細(xì)胞密度為1×108-8×1012個/L的含微囊藻水，投加量N根據(jù)下面公式進(jìn)行估算：
式中，N：投加溶藻細(xì)菌微球的個數(shù)；α×10n：藻細(xì)胞密度，個/L；r：溶藻細(xì)菌微球的半徑（mm）；V：所需處理的含藻水體積（L）。
本發(fā)明提供的一種溶藻細(xì)菌微球的固定化的制備方法，它的原理是將游離的溶藻細(xì)菌，通過聚乙烯醇和海藻酸鈉包埋體包埋在固定化微球中，而且微球中添加了一定量的培養(yǎng)基成份，在增加了溶藻細(xì)菌的密度的同時，保持了細(xì)菌的活性，能夠避免細(xì)菌細(xì)胞在自然水體中流失，提高溶藻細(xì)菌的穩(wěn)定性、耐毒害和抗沖擊的能力，保證溶藻細(xì)菌在多種不利的外界條件下，仍然能穩(wěn)定發(fā)揮抑藻殺藻的功效。同時，由于溶藻細(xì)菌被包埋在微球內(nèi)部多孔的結(jié)構(gòu)內(nèi)，微球能夠向外界緩慢的釋放溶藻細(xì)菌，致使溶藻細(xì)菌能長期持續(xù)抑制藻類生長，持續(xù)時間可達(dá)4-6個月。實際水體中，藻類水華爆發(fā)的時長大約為4-6個月，這樣固定化的溶藻細(xì)菌微球持續(xù)釋放溶藻細(xì)菌的時間能夠滿足實際水體水華控制的需要，從而解決了游離溶藻細(xì)菌不能夠長期持續(xù)抑制藻類過度生長的問題，能夠有效控制藻類過度生長。同時，本發(fā)明通過改進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的添加方式，在既能保證溶藻細(xì)菌溶藻抑藻效能的前提下，減少營養(yǎng)物質(zhì)的投加量，避免了營養(yǎng)物質(zhì)的過量加入對水質(zhì)帶來的影響。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比顯著優(yōu)點是：
（1）本發(fā)明制備的固定化溶藻細(xì)菌微球，能夠長期持續(xù)抑制藻類過度生長，持續(xù)時間可達(dá)4-6個月，實現(xiàn)溶藻細(xì)胞的一次性投加，避免了游離溶藻細(xì)菌的反復(fù)多次投加，從而能夠有效控制藻類水華的爆發(fā)；
（2）利用聚乙烯醇和海藻酸鈉作為包埋劑，制備的固定化溶藻細(xì)菌微球，抗微生物分解性好，機(jī)械強(qiáng)度高，化學(xué)穩(wěn)定性好，從而保證溶藻細(xì)菌微球在水體環(huán)境中有較好的穩(wěn)定性，為實現(xiàn)溶藻細(xì)菌微球長期持續(xù)抑制藻類過度生長提供了有力的保障；
（3）本發(fā)明所制備的固定化溶藻細(xì)菌微球用于抑制藻類生長，可以克服傳統(tǒng)投加游離態(tài)溶藻細(xì)菌的弱點，在靜水條件下不易被其他生物所吞噬，維持溶藻細(xì)菌數(shù)量穩(wěn)定，有助于其穩(wěn)定地長期發(fā)揮功效；
（4）以聚乙烯醇和海藻酸鈉作為包埋材料制備的固定化微球，內(nèi)部具有多孔結(jié)構(gòu)和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)適宜微生物的生長和附著，為物質(zhì)交換提供了空間和條件，而且這種外密內(nèi)疏的結(jié)構(gòu)可以有效的防止包埋微生物的流失，保證溶藻細(xì)胞的生物量維持在相對穩(wěn)定的水平，有助于其長期持續(xù)穩(wěn)定的抑藻殺藻；
（5）本發(fā)明通過改進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的添加方式，在保證溶藻細(xì)菌在水體環(huán)境生長所需物質(zhì)和能量的前提下，既保證了溶藻細(xì)菌能夠長期持續(xù)溶藻抑藻，又減少了營養(yǎng)物質(zhì)的投加量，降低了營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入水體帶來的水質(zhì)影響；
（6）本發(fā)明處理方法中采用的固定化溶藻細(xì)菌微球制備方法中，采用的原材料不含有害物質(zhì)，不會對水體造成二次污染；
（7）本發(fā)明使用的原料來源豐富，生產(chǎn)工藝簡單，容易加工，價格低廉，易于大范圍推廣。
具體實施方式
實施例1
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，在120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌缺陷短波單胞菌（Brevundimonas diminuta，CGMCC No.11571）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)72h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，將所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積40%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為0.25%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在86℃下溶解，并保持溶液最終溫度為35℃。
（5）在25℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸飽和溶液；用質(zhì)量濃度15%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)飽和硼酸溶液的pH值為6.7；按氯化鈣質(zhì)量濃度1.5%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比2:1混合，在35℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)16h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的5000個直徑為3mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為4.02×109個/L的10L銅綠微囊藻水中，5天后，微球的溶藻率為54%，20天后，微球的溶藻率為90%。
實施例2
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.3，在120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌缺陷短波單胞菌（Brevundimonas diminuta，CGMCC No.11571）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)80h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，將所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積50%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)11%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為0.50%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在88℃下溶解，并保持溶液最終溫度為37℃。
（5）在26℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度20%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)飽和硼酸溶液pH值為6.9；按氯化鈣質(zhì)量濃度2.0%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:1混合，在35℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)24h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的20000個直徑為5mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為9.02×109個/L的20L中華微囊藻水中，4天后，微球的溶藻率為75%，20天后，微球的溶藻率為96%。
實施例3
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.5，在120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌缺陷短波單胞菌（Brevundimonas diminuta，CGMCC No.11571）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)90h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，將所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積60%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)12%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為1.0%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在90℃下溶解，并保持溶液最終溫度為37℃。
（5）在25℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度30%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)飽和硼酸溶液pH值為6.9；按氯化鈣質(zhì)量濃度2.5%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:2混合，在39℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)30h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的5000個直徑為8mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為1.20×1010個/L的5L水華微囊藻水中，6天后，微球的溶藻率為58%，20天后，微球的溶藻率為91%。
實施例4
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.4，在120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌短波單胞菌（Brevundimonas olei，CGMCC No.11572）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)96h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，將所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積45%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為1.0%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在88℃下溶解，并保持溶液最終溫度為36℃。
（5）在27℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度20%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH值為7.0；按氯化鈣質(zhì)量濃度2.0%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:1混合，在37℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)24h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的60000個直徑為15mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為4.50×1010個/L的20L放射微囊藻水中，6天后，微球的溶藻率為72%，20天后，微球的溶藻率為95%。
實施例5
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.2，在120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌短波單胞菌（Brevundimonas olei，CGMCC No.11572）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)92h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，將所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積50%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為1.0%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在90℃下溶解，并保持溶液最終溫度為35℃。
（5）在27℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度30%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)飽和硼酸溶液pH值為7.0；按氯化鈣質(zhì)量濃度1.5%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:1混合，在38℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)16h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的4000個直徑為5mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為3.62×109個/L的15L堅實微囊藻水中，6天后，微球的溶藻率為62%，20天后，微球的溶藻率為88%。
實施例6
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.5，在120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌短波單胞菌（Brevundimonas olei，CGMCC No.11572）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)72h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積60%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為0.50%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在88℃下溶解，并保持溶液最終溫度為37℃。
（5）在25℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度10%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)飽和硼酸溶液pH值為7.2；按氯化鈣質(zhì)量濃度2.0%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:2混合，在36℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)20h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的60000個直徑為3mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為1.50×1011個/L的15L魚害微囊藻水中，7天后，微球的溶藻率為62%，20天后，微球的溶藻率為98%。
實施例7
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.4，在120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌黏著劍菌（Ensifer adhaerens，CGMCC No.12458）接種于步驟（1）溶液中，于28℃下培養(yǎng)96h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積40%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為1.0%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在90℃下溶解，并保持溶液最終溫度為28℃。
（5）在25℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度30%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)飽和硼酸溶液pH值為6.9；按氯化鈣質(zhì)量濃度2.5%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:1混合，在35℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)24h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的50000個直徑為4mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為4.53×1010個/L的15L挪氏微囊藻水中，7天后，微球的溶藻率為62%，20天后，微球的溶藻率為94%。
實施例8
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.4，120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌糞產(chǎn)堿菌（Alcaligenes faecalis，CGMCC No.12457）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)90h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積50%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)12%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為0.25%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在86℃下溶解，并保持溶液最終溫度為40℃。
（5）在28℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度15%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)溶液pH值為6.8；按氯化鈣質(zhì)量濃度2.0%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:2混合，在40℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)32h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的360000個直徑為10mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為3.50×1012個/L的5L假絲微囊藻水中，5天后，微球的溶藻率為53%，20天后，微球的溶藻率為95%。
實施例9
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.2，120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌糞產(chǎn)堿菌（Alcaligenes faecalis，CGMCC No.12457）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)80h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積50%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為0.50%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在88℃下溶解，并保持溶液最終溫度為37℃。
（5）在28℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度30%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)飽和硼酸溶液pH值為6.9；按氯化鈣質(zhì)量濃度2.0%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:2混合，在38℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)24h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的2000個直徑為5mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為8.52×108個/L的50L史密斯微囊藻水中，3天后，微球的溶藻率為67%，20天后，微球的溶藻率為93%。
實施例10
（1）配制無菌液體培養(yǎng)基，組成為：氯化鈉5g、蛋白胨10g、牛肉膏5g，用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至7.3，120℃、110kPa下滅菌30min。
（2）將溶藻細(xì)菌糞產(chǎn)堿菌（Alcaligenes faecalis，CGMCC No.12457）接種于步驟（1）溶液中，于37℃下培養(yǎng)90h，得到培養(yǎng)菌液。
（3）將步驟（2）中培養(yǎng)菌液在4800r/min條件下離心10min，所獲得菌體細(xì)胞重懸于原取樣體積40%的步驟（1）中培養(yǎng)基。
（4）配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)11%的聚乙烯醇溶液，海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為0.25%，配制于蒸餾水中，先加入聚乙烯醇，再加入海藻酸鈉，在86℃下溶解，并保持溶液最終溫度為40℃。
（5）在25℃溫度下，將硼酸溶解于蒸餾水中至有結(jié)晶析出，所得為硼酸的飽和溶液；用質(zhì)量濃度20%碳酸鈉溶液調(diào)節(jié)飽和硼酸溶液pH值為7.0；按氯化鈣質(zhì)量濃度2.0%，將氯化鈣加入到硼酸飽和溶液中。
（6）將步驟（4）聚乙烯醇-海藻酸鈉溶液與步驟（3）中菌液按照體積比1:2混合，在37℃下攪拌均勻，然后滴加入步驟（5）溶液中，在4℃下固定化交聯(lián)16h，得到溶藻細(xì)菌微球。
（7）將上述制備的2000個直徑為8mm的溶藻細(xì)菌微球填充于鏤空容器，直接投入藻細(xì)胞密度為1.50×109個/L的50L惠氏微囊藻水中，4天后，微球的溶藻率為51%，20天后，微球的溶藻率為88%。