本發(fā)明涉及蒽醌類化合物，具體是1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮及其制備方法，以及1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮在制備治療阿爾茨海默癥藥物中應(yīng)用。

背景技術(shù)：

阿爾茨海默癥(Alzheimer’s disease,AD)，俗稱老年癡呆，是一種神經(jīng)退行性疾病，進(jìn)行性高級(jí)認(rèn)知功能障礙和學(xué)習(xí)、記憶功能喪失是其主要特征。有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道：高同型半胱氨酸(Hcy)和AD的發(fā)生與發(fā)展關(guān)系密切。目前已證明高Hcy血癥是AD的一個(gè)重要的獨(dú)立因素，而蒽醌類化合物中的丙烯酸酯官能團(tuán)可以與Hcy反應(yīng)，該原理在Hcy熒光探針的設(shè)計(jì)中也被廣泛采用。目前，市場(chǎng)上主要應(yīng)用丙烯酰氯合成蒽醌類化合物，就價(jià)格而言，丙烯酰氯每克的價(jià)格要比3-氯丙酰氯的價(jià)格高出2倍多，所以開發(fā)一種利用3-氯丙酰氯替代丙烯酰氯來制備蒽醌類化合物，且經(jīng)濟(jì)、低能耗、制備時(shí)間短的新方法是很有實(shí)際意義的。由于大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤(PC12)具有類似神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能，因此本申請(qǐng)選用高濃度Hcy作用于PC12細(xì)胞建立起AD體外模型，探究1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮對(duì)AD體外模型的改善作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮及其制備方法，這種方法具有操作簡(jiǎn)單、快速及成本低優(yōu)點(diǎn)，此外，1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮能夠減弱Hcy誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷，可在制備治療阿爾茨海默癥藥物中應(yīng)用。

本發(fā)明提供的1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮(1,4-diacrylateanthracene-9,10-dione)(縮寫為DAAD)，其結(jié)構(gòu)式為：

本發(fā)明提供的一種利用3-氯丙酰氯制備1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮的方法，步驟包括：按摩爾比將1,4-二羥基蒽醌和3-氯丙酰氯溶解在二氯甲烷中，再加入一定量的三乙胺，室溫下避光攪拌3-8小時(shí),將反應(yīng)液減壓蒸干，用V_乙酸乙酯/V_石油醚＝1:15過色譜柱，可得到黃色的1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮；其中1,4-二羥基蒽醌、3-氯丙酰氯和三乙胺的摩爾比為1.5-2∶3.5-5.5∶9-12。反應(yīng)式：

上述步驟中的合成條件進(jìn)一步優(yōu)選為：

所述1,4-二羥基蒽醌、3-氯丙酰氯和三乙胺的摩爾比為2∶4.5∶11。

所述反應(yīng)條件為室溫避光攪拌5小時(shí)。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)和效果：合成過程簡(jiǎn)單、時(shí)間短、成本低。

本發(fā)明提供了一種利用1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮來改善高濃度Hcy所致PC12細(xì)胞損傷，進(jìn)而可為治療阿爾茨海默癥提供了一種潛在的藥物。

附圖說明：

圖1：實(shí)施例1中制備的1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮的核磁氫譜圖

圖2：實(shí)施例1中制備的1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮的核磁碳譜圖

圖3：實(shí)施例1中制備的1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮的質(zhì)譜圖

圖4：5—100μM的DAAD對(duì)PC12細(xì)胞存活率沒有影響

圖5：100μM的DAAD對(duì)Hcy誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的改善作用

具體實(shí)施方式：

實(shí)施例1

將1,4-二羥基蒽醌(0.4804g,2mmol)溶解在40ml二氯甲烷中，滴加3-氯丙酰氯(0.5714g,4.5mmol)，再滴加三乙胺(1.5ml,11mmol)，在室溫下避光攪拌5小時(shí)，將反應(yīng)液減壓蒸干，用V_乙酸乙酯/V_石油醚＝1:15過色譜柱，可得到0.1320g黃色1,4-二丙烯酸酯蒽-9,10-二酮(產(chǎn)率：18.95％)。¹H NMR(600MHz,25℃,DMSO-d₆):δ8.05(dd,J＝5.3,3.4Hz,2H),7.88(dd,J＝5.4,3.3Hz,2H),7.78(s,2H),6.60(dt,J＝17.3,13.6Hz,4H),6.27(d,J＝10.2Hz,2H)(圖1)；¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆):δ181.14,164.14,147.56,134.71,134.16,133.05,131.77,127.75,126.57,125.89(圖2)；質(zhì)譜，理論值：[M-1]^-，347.06；實(shí)際值：346.51(圖3)。

實(shí)施例2

MTT是一種常用于檢測(cè)細(xì)胞活力的淡黃色染料，能夠穿透細(xì)胞膜，與活細(xì)胞內(nèi)線粒體中的琥珀酸脫氫酶反應(yīng)生成不溶于水但易溶于DMSO的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚。而死細(xì)胞的線粒體中不含有琥珀酸脫氫酶，因此在加入MTT后不會(huì)生成甲瓚結(jié)晶。用DMSO溶解甲瓚結(jié)晶，并用酶標(biāo)儀檢測(cè)490nm波長(zhǎng)處的吸光度值(A值)可間接得到活細(xì)胞的數(shù)量。取指數(shù)生長(zhǎng)期的PC12細(xì)胞，配制4×10⁵個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，取200μl接種于96孔板中，細(xì)胞貼壁后，吸去上清，對(duì)照組的細(xì)胞不加任何藥物，直接加入200μl正常培養(yǎng)液。其余實(shí)驗(yàn)組分為兩組，一組分別給予細(xì)胞不同濃度的DAAD；另一組先用DAAD作用于細(xì)胞6h，再加入Hcy繼續(xù)培養(yǎng)24h后，每孔中加入20μl濃度為5mg·ml^-1的MTT，在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后，吸去上清，每孔中加入150μl DMSO，振蕩10min，在酶標(biāo)儀上于490nm波長(zhǎng)處檢測(cè)其吸光度值A(chǔ)。細(xì)胞的存活率(％)＝(A_{實(shí)驗(yàn)組}-A_{調(diào)零孔})/(A_{正常對(duì)照組}-A_{調(diào)零孔})×100％。結(jié)果表明，5—100μM的DAAD對(duì)細(xì)胞沒有損傷，即對(duì)細(xì)胞沒有毒性(圖4)。此外，100μM的DAAD能夠顯著改善Hcy(5mM)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞AD體外模型(圖5)。與對(duì)照組相比，***p<0.001；與Hcy組相比，^###p<0.001。