1.一種能特異性結(jié)合人喉癌細(xì)胞的核酸適配體,其特征在于序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示。
2.如權(quán)利要求1所述的核酸適配體,其中所述喉癌細(xì)胞為Hep-2細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的核酸適配體,其中適配體的核苷酸序列上的某一位置可被修飾。
4.一種喉癌的診斷試劑盒,其包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的核酸適配體。
5.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的核酸適配體在制備用于檢測喉癌細(xì)胞的試劑中的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用,其中檢測喉癌細(xì)胞的試劑為用于喉癌組織切片中喉癌細(xì)胞成像的試劑。
7.如權(quán)利要求5-6任一項(xiàng)所述的應(yīng)用,所述喉癌細(xì)胞為Hep-2細(xì)胞。
8.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的核酸適配體在制備治療靶向喉癌的藥物中的應(yīng)用,所述適配體作為抗腫瘤藥物的載體使用。
9.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的核酸適配體在制備喉癌的腫瘤標(biāo)志物中的應(yīng)用。
10.一種鑒定權(quán)利要求1所述的特異性結(jié)合人喉癌細(xì)胞的核酸適配體的方法,包括如下步驟:
(1)合成以下序列所示的隨機(jī)單鏈DNA文庫和引物:
隨機(jī)文庫:5’
-ACAATGATCGAGTCGAGCAC(40N)CTGCTTGCCTCATCCGTCCA-3’;上游引物:
5’-FAM-ACAATGATCGAGTCGAGCAC-3’;
下游引物:5’-Biotin-TGGACGGATGAGGCAAGCAG-3’;
(2)SELEX篩選特異核酸適體文庫:
(3)PCR擴(kuò)增文庫;
(4)DNA單鏈文庫的制備;
(5)反向篩選:以鼻咽癌細(xì)胞5-8F為對(duì)照,進(jìn)行反向篩選;
(6)正向篩選;
(7)多輪篩選:將步驟6得到的DNA單鏈文庫替代步驟4中的DNA單鏈文庫,重復(fù)上述步驟5-6的操作;最終可得到富集度高的序列,即為可用于檢測人喉癌細(xì)胞株Hep-2的核酸適配體。