本發(fā)明涉及一種咪唑二羧酸鈷配合物、制備方法及其應(yīng)用，屬于配位化學領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

配合物因其在生物、醫(yī)藥、磁性材料、光儲存材料、手性催化劑、不對稱合成、電致發(fā)光材料等方面的巨大應(yīng)用前景，而成為無機化學最熱門的研究領(lǐng)域之一。咪唑二羧酸作為一種多齒螯合配體，同時含有雜環(huán)咪唑環(huán)和羧基，具有不同功能的配位原子N與O，可與多種金屬配位形成配合物。含咪唑環(huán)的天然產(chǎn)物在高性能的復合材料、感光材料、生物、醫(yī)藥等方面都顯示出了非常獨特的性能。以咪唑環(huán)構(gòu)筑的咪唑類衍生物在抗菌、抗病毒、調(diào)節(jié)血糖及治療生理紊亂等多種疾病有廣泛應(yīng)用。鈷作為機體的必需微量元素，具有重要的生理作用，鈷是維生素B12組成部分，鈷元素能刺激人體骨髓的造血系統(tǒng)，促使血紅蛋白的合成及紅細胞數(shù)目的增加；鈷對甲狀腺的功能可能有作用，動物實驗結(jié)果顯示，甲狀腺素的合成可能需要鈷，鈷能拮抗碘缺乏產(chǎn)生的影響；胰腺也含有大量鈷，用以合成胰島素及一些對糖、脂肪代謝所必需的酶；鈷與鋅、銅、錳有協(xié)同作用，能促進鋅的吸收并改善鋅的生物活性。因此對咪唑二羧酸鈷配合物的生物活性的研究具有重要的意義。

血清白蛋白是血漿中含量最豐富的重要載體蛋白，它能與許多內(nèi)源及外源性化合物結(jié)合，是藥物發(fā)揮藥效的重要載體和靶點。另外，藥物與白蛋白作用后，可使藥物暫留在血漿中以減弱藥物的最大作用強度，防止其大幅波動從而延長藥物的作用時間。因此，研究血清白蛋白與藥物的相互作用不僅可以在獲得蛋白質(zhì)與藥物結(jié)合反應(yīng)機理，分析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，而且有助于研究藥物的藥理和毒理的微觀機理，為藥物的設(shè)計、篩選及新藥的開發(fā)提供依據(jù)。

將具有生物活性的咪唑二羧酸配體與鈷離子配位，獲得配合物，研究配合物與白蛋白相互作用的機制尚未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種咪唑二羧酸類鈷配合物、制備方法及其應(yīng)用，所述的合成方法簡單，反應(yīng)條件溫和，純度高。利用熒光光譜法研究咪唑二羧酸鈷配合物與血清白蛋白的相互作用，結(jié)果表明配合物與白蛋白(牛血清白蛋白BSA、人血清白蛋白HSA)具有較強的相互作用，尤其與HSA的結(jié)合能力更強。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種咪唑二羧酸鈷配合物，所述的咪唑二羧酸鈷配合物的分子式為C₁₂H₂₀CoN₄O₁₅。

一種咪唑二羧酸鈷配合物的制備方法，包括以下步驟：

(1)將2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸分散于溶劑中，配制成2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸濃度為0.05mol/L的配體溶液；

將CoSO₄·7H₂O溶解于溶劑中，配制成CoSO₄·7H₂O濃度為0.05mol/L的鈷鹽溶液；

(2)將鈷鹽溶液和配體溶液按照2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸和CoSO₄·7H₂O物質(zhì)的量比1:1的比例混合；

(3)在步驟(2)的混合液中加入N,N-二甲基甲酰胺，并調(diào)節(jié)pH為3.2-3.8，然后置于反應(yīng)容器中，在110-140℃條件下反應(yīng)72h，再以5℃/h的速率降溫至室溫，自然干燥，即得。

所述的溶劑為去離子水。

所述的N,N-二甲基甲酰胺的用量為每1mmol 2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸用5mL N,N-二甲基甲酰胺。

所述的反應(yīng)容器為聚四氟乙烯內(nèi)襯不銹鋼反應(yīng)釜。

優(yōu)選的，所述的反應(yīng)溫度為120℃。

一種所述的咪唑二羧酸鈷配合物與牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)的相互作用。

一種所述的咪唑二羧酸鈷配合物在作為研究生物活性試劑方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果：

1、本發(fā)明以2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸作為橋連配體，與金屬離子鈷構(gòu)建配位聚合物，得到一種全新的咪唑二羧酸鈷配合物，該配合物為三斜晶系，P-1空間群；晶胞參數(shù)α＝80.891(5)°，β＝87.715(5)°，γ＝69.027(5)°；V＝977.5(5)A³；Z＝2；Dc＝1.764Mg/m³；R₁＝0.0332，ωR2＝0.0932。

2、本發(fā)明采用水熱法，將CoSO₄·7H₂O與2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸進行反應(yīng)，使配體與相應(yīng)的金屬離子發(fā)生配位，從而得到一種新的咪唑二羧酸鈷配合物。該合成方法簡單、方便、安全，反應(yīng)條件溫和，純度高，有利于后續(xù)的活性研究。

3、本發(fā)明采用熒光光譜法研究配合物與BSA、HSA的相互作用。結(jié)果表明，該配合物與BSA、HSA均具有較強的結(jié)合能力。

附圖說明

圖1為咪唑二羧酸鈷配合物的配位環(huán)境圖。

圖2為咪唑二羧酸鈷配合物的一維超分子鏈狀結(jié)構(gòu)圖。

圖3為咪唑二羧酸鈷配合物的三維超分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)圖。

圖4為咪唑二羧酸鈷配合物的模擬與實測的PXRD圖譜對比圖。

圖5為不同溫度下，BSA/HSA溶液隨著咪唑二羧酸鈷配合物濃度的增加熒光光譜的變化(箭頭所指方向表示咪唑二羧酸鈷配合物濃度增加的方向)。a為298K時BSA的熒光光譜變化圖，b為308K時BSA的熒光光譜變化圖，c為298K時HSA的熒光光譜變化圖，d為308K時HSA的熒光光譜變化圖；插圖為340nm處熒光強度隨咪唑二羧酸鈷配合物濃度的增加的變化圖。

圖6為不同溫度下，咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的Stern-volmer曲線圖。a為配合物對BSA的Stern-volmer曲線圖，b為配合物對HSA的Stern-volmer曲線圖。

圖7為不同溫度下，咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的雙對數(shù)圖。a為配合物對BSA的雙對數(shù)圖，b為配合物對HSA的雙對數(shù)圖。

圖8為不同溫度下，咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的同步熒光光譜圖(箭頭所指方向表示咪唑二羧酸鈷配合物濃度增加的方向)。a、b、c、d為不同溫度時，BSA的同步熒光光譜圖；e、f、g、h為不同溫度時，HSA的同步熒光光譜圖。

圖9為不同溫度下，咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的3D熒光光譜圖。a、c、e、g分別為不同溫度時，BSA、HSA的3D熒光光譜圖；b、d、f、h為不同溫度時，配合物與白蛋白的物質(zhì)的量比為20：1時的3D熒光光譜圖。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細說明。

本發(fā)明的配體2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸的合成方法參照論文Sheng-Run Zheng,Song-Liang Cai,Mei Pan,Jun Fan,Tian-Tian Xiao,Wei-Guang Zhang,The construction of coordination networks based on imidazole-based dicarboxylate ligand containing hydroxymethyl group,CrystEngComm,2011,13,883–888。

實施例1咪唑二羧酸鈷配合物的合成

(1)將2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸分散于去離子水中，配制成2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸濃度為0.05mol/L的配體溶液；

將CoSO₄·7H₂O溶解于去離子水中，配制成CoSO₄·7H₂O濃度為0.05mol/L的鈷鹽溶液；

(2)將鈷鹽溶液和配體溶液按照2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸和CoSO₄·7H₂O物質(zhì)的量比1:1的比例混合；

(3)在步驟(2)的混合液中加入N,N-二甲基甲酰胺，并調(diào)節(jié)pH為3.5，然后置于聚四氟乙烯內(nèi)襯不銹鋼反應(yīng)釜中，在120℃條件下反應(yīng)72h，再以5℃/h的速率降溫至室溫，自然干燥，得到紅色塊狀晶體，即為咪唑二羧酸鈷配合物。

N,N-二甲基甲酰胺的用量為每1mmol配體2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸用5mL N,N-二甲基甲酰胺。

實施例2咪唑二羧酸鈷配合物的結(jié)構(gòu)表征

1、單晶結(jié)構(gòu)解析

采用Bruker APEX-II CCD型單晶衍射儀對實施例1得到的咪唑二羧酸鈷配合物進行晶體結(jié)構(gòu)測試，測試結(jié)果為：

該配合物為三斜晶系，P-1空間群；晶胞參數(shù)α＝80.891(5)°，β＝87.715(5)°，γ＝69.027(5)°；V＝977.5(5)A³；Z＝2；Dc＝1.764Mg/m³；R₁＝0.0332，ωR2＝0.0932。

采用經(jīng)石墨單色器單色化的MoK_α射線收集衍射數(shù)據(jù)。晶體結(jié)構(gòu)采用直接法解出，并且用傅立葉技術(shù)擴展，按各向異性進行修正。最后采用全矩陣最小二乘法，依據(jù)可觀察的衍射數(shù)據(jù)和可變參數(shù)進行校正，所有數(shù)據(jù)經(jīng)Lp因子校正。用直接法得到全部非氫原子坐標，氫原子坐標由差值Fourier合成法得到，除氫原子采用各向同性熱參數(shù)外，其它原子均采用各向異性熱參數(shù)法，所有的計算均使用程序SHELX-97。得到如圖1所示咪唑二羧酸鈷配合物的配位環(huán)境圖，如圖2所示的咪唑二羧酸鈷配合物的一維超分子鏈狀結(jié)構(gòu)圖，如圖3所示的咪唑二羧酸鈷配合物的三維超分子結(jié)構(gòu)圖。

由圖1可知，所述咪唑二羧酸鈷配合物的組成為{[Co(H₃hmIDC)₂(H₂O)₂·3H₂O]}_n(n為大于等于1的整數(shù)，大括號內(nèi)為最小不對稱單元的組成)，分子式為C₁₂H₂₀CoN₄O₁₅。配合物的單元結(jié)構(gòu)包含一個Co(II)離子、兩個脫質(zhì)子的H₃hmIDC^-陰離子、兩個配位水分子和三個游離水分子。在配合物中Co(II)為六配位，與來自兩個H₃hmIDC^-配體上的兩個氧原子(O1、O6)和兩個氮原子(N1、N3)，兩個配位水分子上的兩個氧原子(O11、O12)配位。Co(II)處于稍扭曲的八面體CoN₂O₄配位構(gòu)型中。八面體的赤道面由O1、O6、N1、N3和Co(II)組成，O11、O12占據(jù)八面體的頂點位置，鍵角O(11)-Co(1)-O(12)為175.10(6)°。Co(II)周圍的Co-O配位鍵長為Co(1)-O(11)：Co(1)-O(6)：Co(1)-O(1)：Co-N配位鍵長為Co(1)-N(1)：Co(1)-N(3)：

如圖2所示，在b方向上，超分子鏈通過羧基與羥基之間的分子內(nèi)的O-H···O和羧基與配位水分子之間的分子間O-H···O延伸。相鄰鏈通過羧基、羥基、配位水分子、晶格水分子間的氫鍵相連。如圖3所示，超分子鏈通過氫鍵堆積形成超分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。

2、紅外光譜分析

采用美國賽默飛公司(Thermo SCIENTIFIC)公司生產(chǎn)的NICOLET iS50傅里葉變換紅外光譜儀對實施例1得到的咪唑二羧酸鈷配合物進行紅外光譜測試(采用KBr壓片法，室溫下掃描，測試范圍為400-4000cm^-1)。紅外光譜中的特征吸收峰(cm^-1)：3749，3230，1556，1456，1388，1268，1215，1075，865，777，663，546。

3、X射線粉末衍射分析

采用PANalytical公司生產(chǎn)的X’Pert PRO型粉末衍射儀，通過使用Cu-Kα1射線采集實施例1得到的咪唑二羧酸鈷配合物的衍射數(shù)據(jù)(見圖4)。

從圖4分析可知，測得的咪唑二羧酸鈷配合物的PXRD的圖譜與模擬圖譜基本吻合，這說明所述咪唑二羧酸鈷配合物的純度很高，可用于性能研究。

實施例3咪唑二羧酸鈷配合物與血清白蛋白的相互作用

試驗儀器：熒光分光光度計型號為F7000，日本日立公司生產(chǎn)。

試劑的配制及測試條件設(shè)置：

1、樣品液的配制

2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸鈷配合物溶液：稱取0.0052g 2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸鈷配合物，配制成濃度為1×10^-3mol/L的DMSO溶液。

Tris-HCl緩沖溶液：取Tris(三羥甲基氨基甲烷)3.0285g，氯化鈉7.3124g，用蒸餾水定容至250mL，搖勻。然后用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7.40。

牛血清白蛋白(BSA)溶液：稱取牛血清白蛋白0.0333g，用Tris-HCl溶液溶解，配制成濃度為5×10^-5mol/L的牛血清白蛋白溶液。

人血清白蛋白(HSA)溶液：稱取人血清白蛋白0.0331g，用Tris-HCl溶液定容，配制成濃度為5×10^-5mol/L的人血清白蛋白溶液。

2、熒光光譜測試條件的設(shè)置

設(shè)定激發(fā)波長為280nm，激發(fā)和發(fā)射狹峰均為5nm，分別在298K、308K條件下，掃描285～450nm范圍的熒光光譜；在發(fā)射波長250～550nm，激發(fā)波長200～400nm范圍內(nèi)掃描其3D熒光光譜。并分別在波長差Δλ＝15nm和Δλ＝60nm時，掃描其同步熒光光譜。

3、熒光光譜的測定

移取0.3mL牛血清白蛋白溶液(0.6mL人血清白蛋白溶液)，14.7mL(14.4mL)Tris-HCl緩沖溶液于50mL圓底燒瓶中，配制成濃度為1×10^-6mol/L的牛血清白蛋白溶液(濃度為2×10^-6mol/L的人血清白蛋白溶液)。加入不同體積的配合物溶液，測定熒光光譜的變化(與BSA相互作用時，配合物濃度范圍：0～4.31×10^-4mol/L；與HSA相互作用時，配合物濃度范圍：0～3.83×10^-4mol/L)。

熒光光譜法測定配合物與血清白蛋白的相互作用：

1、熒光猝滅

對實施例1所合成的配合物，用熒光光譜法研究其與BSA、HSA的相互作用，如圖5。BSA的濃度為1×10^-6mol/L，隨著配合物濃度的增加，BSA的內(nèi)源性熒光逐漸減弱，當配合物濃度為4.31×10^-4mol/L時，配合物與BSA的相互作用基本達到平衡；HSA的濃度為2×10^-6mol/L，隨著配合物濃度的增加，HSA的內(nèi)源性熒光逐漸減弱，當配合物濃度為3.83×10^-4mol/L時，配合物對HSA內(nèi)源性熒光的猝滅基本達到平衡。說明在這298K、308K兩個溫度下，BSA、HSA的內(nèi)源性熒光能有效的被配合物猝滅，而發(fā)射峰的形狀和位置并沒有發(fā)生變化，表明配合物與BSA、HSA之間形成了熒光較弱或者無熒光的復合物而造成BSA、HSA內(nèi)源性熒光被猝滅。

2、猝滅機制

引起B(yǎng)SA、HSA熒光猝滅的機制有靜態(tài)猝滅和動態(tài)猝滅。動態(tài)猝滅是一種能量轉(zhuǎn)移或電子轉(zhuǎn)移的過程，不影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和生理活性。靜態(tài)猝滅是由于發(fā)生了配合反應(yīng)，通常是產(chǎn)生了不發(fā)熒光的配合物，對蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)可產(chǎn)生影響，并可能影響其生理活性。動態(tài)猝滅遵循Stern-volmer方程：

F₀/F＝1+K_sv[Q]＝1+K_qτ₀[Q] 公式(1)

F₀和F分別為未加入和加入猝滅劑時BSA、HSA的熒光強度；K_q為雙分子猝滅過程速率常數(shù)；K_sv為Stern-volmer方程的猝滅常數(shù)；τ₀為沒有猝滅劑存在下生物大分子平均壽命，約為10^-8s；[Q]為配合物的濃度。

由公式(1)可求得BSA、HSA猝滅過程的速率常數(shù)K_q(見表1)。

表1鈷配合物與BSA、HSA相互作用的速率常數(shù)、結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點數(shù)

表1表明，兩個溫度下猝滅過程的速率常數(shù)的數(shù)量級都大于10¹¹，而各類猝滅劑對生物大分子的最大動態(tài)猝滅速率常數(shù)約為2.0×10¹⁰L·mol^-1·s^-1，說明2-羥甲基-1H-4,5-咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的熒光猝滅速率均大于最大擴散碰撞猝滅速率，且隨著溫度的升高，猝滅速率常數(shù)降低，由此判斷2-羥甲基-4,5-咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的相互作用是因形成復合物而引起B(yǎng)SA、HSA內(nèi)源性熒光猝滅，屬于靜態(tài)猝滅。

圖6為不同溫度下，咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的Stern-volmer方程的線性擬合圖。

3、結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點數(shù)

配合物與BSA、HSA相互作用的結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點數(shù)可利用雙對數(shù)方程計算：

log[(F₀-F)/F]＝logK_b+nlog[Q] 公式(2)

圖7為不同溫度下，咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的雙對數(shù)圖。K_b為結(jié)合常數(shù)，n為結(jié)合位點數(shù)，計算結(jié)果(表1)表明鈷配合物與BSA的結(jié)合常數(shù)K_b分別為6.48×10²L·mol^-1、6.31×10²L·mol^-1，結(jié)合位點數(shù)n分別為0.84、0.78；與HSA的結(jié)合常數(shù)K_b分別為4.52×10⁴L·mol^-1、1.99×10³L·mol^-1，結(jié)合位點數(shù)n分別為1.24、1.00。以上數(shù)據(jù)表明，配合物與HSA、BSA均具有較強的相互作用，且配合物與HSA的結(jié)合能力強于BSA。

4、作用力類型

配合物與血清白蛋白相互作用的作用力類型包括范德華力、氫鍵、靜電引力、疏水作用力等。藥物與血清白蛋白之間的作用力類型的確定可根據(jù)兩者作用前后焓變ΔH和熵變ΔS來判斷，當溫度變化不大時，反應(yīng)的焓變ΔH可認為是常數(shù)。配合物與BSA、HSA相互作用的作用力類型由Van’t Hoff方程判斷：

ln(K₂/K₁)＝[1/T₁-1/T₂]ΔH/R 公式(3)

ΔG＝ΔH-TΔS＝-RTlnK 公式(4)

R為氣體常數(shù)(8.314472J K^-1mol^-1)，K₁、K₂為溫度為T₁、T₂時的結(jié)合常數(shù)，鈷配合物與BSA、HSA相互作用的熱力學參數(shù)見表2。

表2不同溫度下鈷配合物與BSA、HSA相互作用的熱力學參數(shù)

一定條件下，藥物與白蛋白的結(jié)合反應(yīng)是否能自發(fā)進行與體系的吉布斯自由能變有關(guān)，吉布斯自由能小于零時，反應(yīng)能夠自發(fā)進行。這種自發(fā)過程可以分為熵驅(qū)動和焓驅(qū)動。熵、焓的大小與作用力類型之間的關(guān)系如表3：

表3熵焓的大小與作用力類型之間的關(guān)系

由表2、表3可知，配合物與BSA作用的熱力學常數(shù)ΔH＜0，ΔS＞0，說明配合物與BSA之間存在較強靜電作用力；配合物與HSA相互作用的熱力學常數(shù)ΔH＜0，ΔS＜0，說明配合物與HSA之間存在氫鍵或范德華力。配合物與BSA、HSA相互作用的ΔG＜0，表明配合物與BSA、HSA的相互作用是自發(fā)進行的。

5、同步熒光光譜

同步熒光光譜可用來判斷發(fā)射團周圍環(huán)境的極性是否發(fā)生變化。而激發(fā)和發(fā)射波長差Δλ是一個重要的參數(shù)。血清白蛋白分子中因含有色氨酸、酪氨酸及苯丙氨酸等殘基而發(fā)射較強的內(nèi)源性熒光,其中色氨酸和酪氨酸的熒光強度比較大，并且兩者的激發(fā)光譜比較相似，發(fā)射光譜會嚴重重疊，利用同步熒光光譜選擇合適的Δλ可以達到簡化光譜、減少光譜重疊和窄化譜帶的目的，而通常情況下，Δλ＝60nm的同步熒光光譜只顯示色氨酸的特征光譜，Δλ＝15nm的同步光譜只顯示酪氨酸的特征光譜。根據(jù)同步熒光光譜發(fā)射波長的變化可以推測配合物的加入對BSA、HSA色氨酸和酪氨酸微環(huán)境產(chǎn)生的影響，進而可以判斷蛋白質(zhì)構(gòu)象的變化。

圖8為不同溫度下，咪唑二羧酸鈷配合物對BSA、HSA的同步熒光光譜圖，最大發(fā)射波長的位移結(jié)果列于表4。從圖8可以看出隨著配合物濃度的增加，Δλ＝60nm時BSA、HSA的最大熒光強度比Δλ＝15nm時降低更多，從表4可知，Δλ＝60nm時λmax的紅移更明顯，這表明色氨酸殘基的構(gòu)象發(fā)生變化，色氨酸殘基周圍的微環(huán)境極性增加，內(nèi)部疏水結(jié)構(gòu)有所破壞。而配合物的加入使得BSA、HSA發(fā)生如此變化，由此推測是配合物嵌入BSA、HSA內(nèi)部引起的。

表4最大發(fā)射波長的位移

6、3D光譜

三維熒光光譜能夠提供蛋白質(zhì)構(gòu)象變化的詳細信息，氨基酸殘基的最大發(fā)射波長與蛋白質(zhì)微環(huán)境的極性有密切關(guān)系。以激發(fā)波長、發(fā)射波長和熒光強度為坐標的三維空間圖譜如圖9，peak a的特征是λex＝λem(Δλ＝0)，為瑞利散射峰；peak 1、peak 2是兩種典型的光譜峰，峰1(peak 1)主要顯示了色氨酸和酪氨酸殘基的光譜特性；峰2(peak 2)主要顯示多肽鏈主鏈結(jié)構(gòu)的熒光特征，并且該峰的熒光強度與蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。

圖9為不同溫度下，隨咪唑二羧酸鈷配合物濃度增大時BSA、HSA的3D熒光光譜圖。由圖9可以看出加入配合物后，BSA、HSA的瑞利散射峰起始位置及熒光峰位置均無顯著變化，BSA熒光峰的Stokes位移不變，HSA熒光峰峰2的Stokes位移有所減小，Stokes位移發(fā)生少許的變化，說明分子內(nèi)部微環(huán)境發(fā)生變化，蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生了變化。隨著配合物的加入，BSA、HSA的兩個特征峰均被不同程度地猝滅，表明配合物與BSA、HSA發(fā)生了結(jié)合，從而導致蛋白肽鏈的伸展，分子內(nèi)部的熒光發(fā)色基團所處的微環(huán)境發(fā)生變化。

以上所述僅為本發(fā)明最佳的實施例，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。