1.一種黃牛ADNCR基因單核苷酸多態(tài)性的四引物擴增受阻突變體系PCR檢測方法,其特征在于:包括以下步驟:
以待測黃牛全基因組DNA為模板,以引物對P1為四引物擴增受阻突變體系PCR引物,通過PCR擴增黃牛長鏈非編碼RNA ADNCR基因片段;再對PCR擴增得到的片段進行瓊脂糖凝膠電泳;根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定所述ADNCR基因單核苷酸多態(tài)位點的基因型;所述引物對P1為:
上游內(nèi)引物:5'-ATGTACTCCTATTTCCTTGTGTTCGCAT-3';
下游內(nèi)引物:5'-CAAAGTGCCCTGTAAAATGTAAAGTGTTT-3';
上游外引物:5'-GTCTTTATCTGGTTTTACATGCCCCTAC-3';
下游外引物:5'-GACATGCCTGGTCTCTTACTGTTTGTAC-3'。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種黃牛ADNCR基因單核苷酸多態(tài)性的四引物擴增受阻突變體系PCR檢測方法,其特征在于:所述單核苷酸多態(tài)性為長鏈非編碼RNA ADNCR基因g.1263T>A突變。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種黃牛ADNCR基因單核苷酸多態(tài)性的四引物擴增受阻突變體系PCR檢測方法,其特征在于:所述瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果為:所述ADNCR基因單核苷酸多態(tài)位點的基因型TT表現(xiàn)為429bp和194bp兩條帶紋,基因型TA表現(xiàn)為429bp、291bp和194bp三條帶紋;基因型AA表現(xiàn)為429bp和291bp兩條帶紋。
4.一種如權(quán)利要求1所述的黃牛ADNCR基因單核苷酸多態(tài)性的四引物擴增受阻突變體系PCR檢測方法在黃牛分子標記輔助選擇育種中的應用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用,其特征在于:所述單核苷酸多態(tài)位點的TT基因型可作為秦川牛坐骨端寬的DNA標記。
6.一種黃牛ADNCR基因單核苷酸多態(tài)的檢測試劑盒,其特征在于:該試劑盒包括用于四引物擴增受阻突變體系PCR擴增黃牛ADNCR基因中T>A單核苷酸多態(tài)位點的引物對P1;
所述的引物對P1為:
上游內(nèi)引物:5'-ATGTACTCCTATTTCCTTGTGTTCGCAT-3';
下游內(nèi)引物:5'-CAAAGTGCCCTGTAAAATGTAAAGTGTTT-3';
上游外引物:5'-GTCTTTATCTGGTTTTACATGCCCCTAC-3';
下游外引物:5'-GACATGCCTGGTCTCTTACTGTTTGTAC-3'。