本發(fā)明涉及藥物制造領(lǐng)域，具體涉及一種糠酸莫米松的制備方法。

背景技術(shù)：

糠酸莫米松為一合成的糖皮質(zhì)激素，具有抗炎、抗過敏等作用，其特點表現(xiàn)在作用強度增加而副作用不成比例地增加，且每天僅使用一次?？匪崮姿墒且环N原料藥，針對不同病情，可以制備成不同劑型，糠酸莫米松乳膏對如神經(jīng)性皮炎、濕疹、異位性皮炎、脂溢性皮炎及銀屑病等引起的皮膚炎癥和皮膚瘙癢有良好的治療效果；糠酸莫米松凝膠具有抗炎、抗過敏、止癢及減少滲出作用，對濕疹﹑神經(jīng)性皮炎﹑異位性皮炎及皮膚瘙癢癥有良好的治療效果；糠酸莫米松鼻噴霧劑對于成人、青少年和3至11歲兒童季節(jié)性或常年性鼻炎的治療，季節(jié)性過敏性鼻炎癥狀的患者的預防治療有良好的效果。因此，市場前景很好，但現(xiàn)有糠酸莫米松的制備方法存在雜質(zhì)多、收率低、成本高等問題。

如中國專利CN201510996544.2公開了一種合成糠酸莫米松的方法，該方法以9β，11β-環(huán)氧-17α,21-乙酰氧基-16α-甲基-1,4-孕(甾)二烯-3,2-二酮為起始原料，反應(yīng)如下：

該方法有效解決了原工藝路線長、反應(yīng)體系復雜、耗時長等不足，但本公司生產(chǎn)該產(chǎn)品以9β,11β-環(huán)氧-17α,21-乙酰氧基-16α-甲基-1,4-孕(甾)二烯-3,2-二酮為起始原料，成本較高。

本公司發(fā)明人經(jīng)大量試驗研究，發(fā)現(xiàn)以21-氯-17α-羥基-9β,11β-環(huán)氧-16α-甲基孕甾-4-烯-3,20-二酮作為起始原料，能制備21-氯-17α-羥基-9β,11β-環(huán)氧-16α-甲基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮化合物，該化合物經(jīng)進一步合成，能制備成糠酸莫米松。目前，該合成路線在國內(nèi)外尚未見相關(guān)報道。

以上背景技術(shù)內(nèi)容的公開僅用于輔助理解本發(fā)明的發(fā)明構(gòu)思及技術(shù)方案，其并不必然屬于本專利申請的現(xiàn)有技術(shù)，在沒有明確的證據(jù)表明上述內(nèi)容在本專利申請的申請日已經(jīng)公開的情況下，上述背景技術(shù)不應(yīng)當用于評價本申請的新穎性和創(chuàng)造性。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提出一種對發(fā)酵菌種毒性低、收率高、雜質(zhì)少、生產(chǎn)成本低的糠酸莫米松的制備方法，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的對發(fā)酵菌種毒性高、收率低、雜質(zhì)多、生產(chǎn)成本高的問題。

一種糠酸莫米松的制備方法，具體技術(shù)方案如下：

一種糠酸莫米松的制備方法，以化合物Ⅰ為起始原料，包括以下步驟：

S1：發(fā)酵脫氫，化學反應(yīng)式為：

S2：糠?；瘜W反應(yīng)式為：

S3：開環(huán)，化學反應(yīng)式為：

進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述S1發(fā)酵脫氫步驟為：以化合物體Ⅰ作為原料配置發(fā)酵培養(yǎng)基，在發(fā)酵培養(yǎng)基中接入諾卡氏菌種，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化，提取，純化，即得化合物Ⅱ。

再進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含有溶解或分散在水中的如下物質(zhì)：

所述發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為6.5-8.5。

再進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述發(fā)酵培養(yǎng)基還包含有溶解或分散在水中的第一催化劑，所述第一催化劑為硫酸鹽。

更進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述硫酸鹽為硫酸鋅、硫酸鎂、硫酸銅的一種或兩種以上組合；所述硫酸鹽用量為化合物Ⅰ重量的0.01％-0.05％。

再進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述提取步驟包括：將培養(yǎng)轉(zhuǎn)化后得到的諾卡氏菌種滅活，滅活后加入三氯甲烷，65℃加熱回流攪拌萃取20-40min，靜置，分出三氯甲烷層，同樣的方法再萃取兩次，合并三氯甲烷層，減壓濃縮至干，得到化合物Ⅱ粗品。

再進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述純化步驟包括：將所述化合物Ⅱ粗品加低級芳香烴加熱回流20-40min，-5-0℃冷凍2h，過濾，干燥，即得。

再進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述糠酰化步驟為：化合物Ⅱ在糠?；軇┲?，加入有機堿，在第二催化劑作用下，與糠酰氯反應(yīng)，得到化合物Ⅲ。

再進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述的糠?；軇槎燃淄?、三氯甲烷、四氫呋喃、低級芳香烴中的一種或兩種以上組合；所述有機堿為4-二甲氨基吡啶、咪唑、三乙胺、DBU的一種或兩種以上組合；所述第二催化劑為氯化鋰、氯化鈣、氯化鎂中的一種或兩種以上組合；所述糠?；磻?yīng)的反應(yīng)溫度為0-50℃。

再進一步地，所述的糠酸莫米松的制備方法，所述開環(huán)步驟為：在含有化合物Ⅲ的糠?；磻?yīng)液中，加入冰醋酸，再加入37％鹽酸，然后通入氯化氫氣體，作用開環(huán)，得到糠酸莫米松；

所述冰醋酸的用量為化合物Ⅱ的用量的0.1-1倍重量比；

所述氯化氫氣體的用量為化合物Ⅱ的用量的0.01-0.2倍重量比。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有如下優(yōu)點：

1.本發(fā)明提供了糠酸莫米松新的制備方法，該方法以化合物Ⅰ21-氯-17α-羥基-9β,11β-環(huán)氧-16α-甲基孕甾-4-烯-3,20-二酮為起始原料，為合成糖皮質(zhì)激素類藥品糠酸莫米松提供新的途徑。

2..本發(fā)明在發(fā)酵脫氫的過程中加入第一催化劑，減小21-Cl對發(fā)酵菌種的毒性，提高化合物Ⅱ收率至88％以上。

3.本發(fā)明在糠?；倪^程中加入第二催化劑，能有效的抑制雜質(zhì)的產(chǎn)生，提高純度；開環(huán)的過程中通入HCl氣體，有效提高轉(zhuǎn)化率，本發(fā)明提出的方法重量收率能達到110％，HPLC含量96.5％以上。

4.本發(fā)明采用成本更低的地塞米松中間體化合物Ⅰ原料來合成糠酸莫米松，合成步驟少，有效縮短工時，有效降低生產(chǎn)成本，更利于工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實施方式

實施例1

S1：發(fā)酵脫氫

按照配方：酵母膏4g/L、蛋白胨4g/L、磷酸二氫鉀2g/L、葡萄糖10g/L、瓊脂粉20g/L，配制斜面種子培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至27℃接種。

按照配方：牛肉膏3g/L、蛋白胨3g/L、PPE消泡劑0.5g/L，配制一級液體種子瓶的培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至25℃待接種。使用斜面種子培養(yǎng)基直接進行接種。刮取1支斜面的全部菌種苔，接種到一級液體種子瓶中，接種后控制環(huán)境溫度30±0.5℃，180rpm振蕩培養(yǎng)48h后待轉(zhuǎn)種。

按照20％的移種量，將一級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入二級液體種子瓶中，二級液體種子瓶的培養(yǎng)基的配比和配制方法與一級液體種子瓶的培養(yǎng)基相同，接種后，將二級種子瓶的溫度控制在30±1℃，壓力控制在0.02-0.05MPa，轉(zhuǎn)速控制在180rpm,空氣流量控制在0.5vvm，通常培養(yǎng)24±6h后待轉(zhuǎn)種。

按照配方：葡萄糖45g、玉米漿36g、蛋白胨12g、PPE消泡劑3g、大豆油45g、吐溫-80 1.5g、磷酸二氫鉀7.5g、化合物Ⅰ90g、硫酸鋅0.009g，配制發(fā)酵培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至27℃得培養(yǎng)成熟的諾卡氏菌種，待轉(zhuǎn)種。

按照20％的移種量，將二級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐中，控制發(fā)酵過程溫度32±1℃，空氣流量控制在0.5vvm，轉(zhuǎn)化48h，原料可全部轉(zhuǎn)化完。

滅活后加0.5倍體積的三氯甲烷，65℃回流攪拌萃取20min，靜置1h，分出三氯甲烷層，同樣的方法萃取兩次，合并有機層濃縮至干得到化合物Ⅱ粗品，再加3倍體積的甲苯加熱回流20min，-5℃冷卻2h，過濾料液、干燥濾餅得到化合物Ⅱ,重量收率88.7％，HPLC純度大于98％。

S2：糠酰化

向反應(yīng)釜中加入二氯甲烷250ml、化合物Ⅱ50g、氯化鋰0.5g，4-二甲氨基吡啶16.88g，降溫0℃，滴加糠酰氯19ml，0℃攪拌糠?；磻?yīng)20h至反應(yīng)完。

S3：開環(huán)

上述糠?；磻?yīng)液再降溫0℃，滴加5ml冰醋酸，維持溫度5℃攪拌10min后滴加35ml 35％鹽酸，升溫至25℃，通入5g氯化氫氣體，攪拌2h，反應(yīng)完全，分液，萃取3次，合并有機相，減壓回收有機相至無溶劑流出，加30g純化水繼續(xù)回收，過濾，濾餅水洗到中性，濾餅烘干得到糠酸莫米松，重量收率121.3％，HPLC含量：96.5％。

實施例2

S1：發(fā)酵脫氫

按照配方：酵母膏4g/L、蛋白胨4g/L、磷酸二氫鈉2g/L、葡萄糖10g/L、瓊脂粉20g/L，配制斜面種子培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至30℃接種。

按照配方：牛肉膏3g/L、蛋白胨3g/L、PPE消泡劑0.5g/L，配制一級液體種子瓶的培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至30℃待接種。使用斜面培養(yǎng)基直接進行接種。刮取1支斜面的全部菌種苔，接種到一級液體種子瓶中，接種后控制環(huán)境溫度30±0.5℃，180rpm振蕩培養(yǎng)48h后待轉(zhuǎn)種。

按照20％的移種量，將一級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入二級液體種子瓶中，二級液體種子瓶的培養(yǎng)基的配比和配制方法與一級液體種子瓶的培養(yǎng)基相同，接種后，將二級種子瓶的溫度控制在30±1℃，壓力控制在0.02-0.05MPa，轉(zhuǎn)速控制在180rpm,空氣流量控制在0.5vvm，通常培養(yǎng)24±6h后得培養(yǎng)成熟的諾卡氏菌種，待轉(zhuǎn)種。

按照配方：葡萄糖45g、玉米漿40g、蛋白胨8g、PPE消泡劑1.2g、大豆油1.1g、吐溫-80 1、磷酸二氫鉀4.8g、化合物Ⅰ100g、硫酸鎂0.005g、硫酸鋅0.04g、硫酸銅0.005g，配制發(fā)酵培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.5，然后升溫至121-123℃，蒸汽滅菌30min，降溫至30℃待接種。

按照20％的移種量，將二級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐中，控制發(fā)酵過程溫度32±1℃，空氣流量控制在0.5vvm，轉(zhuǎn)化48h，原料可全部轉(zhuǎn)化完全。

滅活后加0.5倍體積的三氯甲烷，65℃回流攪拌萃取30min,靜置1h，分出三氯甲烷層，同樣的方法萃取兩次，合并有機層濃縮至干得到化合物Ⅱ粗品，再加3倍體積的甲苯加熱回流30min，-3℃冷卻2h，過濾料液、干燥濾餅得到化合物Ⅱ，重量收率89.5％，HPLC純度大于98％。

S2：糠?；?/p>

向反應(yīng)釜中加入三氯甲烷250ml、化合物Ⅱ50g、氯化鈣2.5g，咪唑9.33g，降溫0℃，滴加糠酰氯19ml，15℃攪拌糠?；磻?yīng)15h至反應(yīng)完。

S3：開環(huán)

上述糠酰化反應(yīng)液降溫至5℃，滴加10ml冰醋酸，維持溫度5℃攪拌10min后滴加30ml 35％鹽酸，升溫至25℃，通入10g氯化氫氣體，攪拌約3h；分液，萃取3次，合并有機相，減壓回收有機相至無溶劑流出，加60ml純化水繼續(xù)回收，過濾，濾餅水洗到中性，濾餅烘干得到糠酸莫米松，重量收率122.5％，HPLC含量：96.8％。

實施例3

S1：發(fā)酵脫氫

按照配方：酵母膏4g/L、蛋白胨4g/L、磷酸二氫鈉2g/L、葡萄糖10g/L、瓊脂粉20g/L，配制斜面種子培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至32℃接種。

按照配方：牛肉膏3g/L、蛋白胨3g/L、PPE消泡劑0.5g/L，配制一級液體種子瓶的培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至32℃待接種。使用斜面培養(yǎng)基直接進行接種。刮取1支斜面的全部菌種苔，接種到一級液體種子瓶中，接種后控制環(huán)境溫度30±0.5℃，180rpm振蕩培養(yǎng)48h后待轉(zhuǎn)種。

按照20％的移種量，將一級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入二級液體種子瓶中，二級液體種子瓶的培養(yǎng)基的配比和配制方法與一級液體種子瓶的培養(yǎng)基相同，接種后，將二級種子瓶的溫度控制在30±1℃，壓力控制在0.02-0.05MPa，轉(zhuǎn)速控制在180rpm,空氣流量控制在0.5vvm，通常培養(yǎng)24±6h后得培養(yǎng)成熟的諾卡氏菌種，待轉(zhuǎn)種。

按照配方：葡萄糖55g、玉米漿53g、蛋白胨10g、PPE消泡劑1.6g、大豆油1.7g、吐溫-80 1.3g、磷酸二氫鉀5.9g、化合物Ⅰ110g、硫酸銅0.05g，配制發(fā)酵培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，然后升溫至121-123℃，蒸汽滅菌30min，降溫至32℃待接種。

按照20％的移種量，將二級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐中，控制發(fā)酵過程溫度32±1℃，空氣流量控制在0.5vvm，轉(zhuǎn)化48h，原料可全部轉(zhuǎn)化完全。

滅活后加0.5倍體積的三氯甲烷，65℃回流攪拌萃取30min,靜置1h，分出三氯甲烷層，同樣的方法萃取兩次，合并有機層濃縮至干得到化合物Ⅱ粗品，再加3倍體積的甲苯加熱回流30min，0℃冷卻2h，過濾料液、干燥濾餅得到化合物Ⅱ,重量收率90.3％，HPLC純度大于98％。

S2：糠酰化

向反應(yīng)釜中加入四氯甲烷250ml、化合物Ⅱ50g、氯化鎂1g，三乙胺19ml，降溫0℃，滴加糠酰氯19ml，30℃攪拌糠酰化反應(yīng)5h至反應(yīng)完。

S3：開環(huán)

上述糠酰化反應(yīng)液再降溫0℃，滴加15ml冰醋酸，維持溫度5℃攪拌10min后滴加35ml 35％鹽酸，升溫至25℃，通入3g氯化氫氣體，攪拌2h，反應(yīng)完全，分液，萃取3次，合并有機相，減壓回收有機相至無溶劑流出，加30g純化水繼續(xù)回收，過濾，濾餅水洗到中性，濾餅烘干得到糠酸莫米松，重量收率123.7％，HPLC含量：96.8％。

實施例4

S1：發(fā)酵脫氫

按照配方：酵母膏4g/L、蛋白胨4g/L、磷酸二氫鈉2g/L、葡萄糖10g/L、瓊脂粉20g/L，配制斜面種子培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至34℃接種。

按照配方：牛肉膏3g/L、蛋白胨3g/L、PPE消泡劑0.5g/L，配制一級液體種子瓶的培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至34℃待接種。使用斜面培養(yǎng)基直接進行接種。刮取1支斜面的全部菌種苔，接種到一級液體種子瓶中，接種后控制環(huán)境溫度30±0.5℃，180rpm振蕩培養(yǎng)48h后待轉(zhuǎn)種。

按照20％的移種量，將一級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入二級液體種子瓶中，二級液體種子瓶的培養(yǎng)基的配比和配制方法與一級液體種子瓶的培養(yǎng)基相同，接種后，將二級種子瓶的溫度控制在30±1℃，壓力控制在0.02-0.05MPa，轉(zhuǎn)速控制在180rpm,空氣流量控制在0.5vvm，通常培養(yǎng)24±6h后得培養(yǎng)成熟的諾卡氏菌種，待轉(zhuǎn)種。

按照配方：葡萄糖65g、玉米漿67g、蛋白胨12g、PPE消泡劑2.1g、大豆油2g、吐溫-80 1.8g、磷酸二氫鉀7.1g、化合物Ⅰ123g、硫酸鎂0.03g，配制發(fā)酵培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0，然后升溫至121-123℃，蒸汽滅菌30min，降溫至34℃待接種。

按照20％的移種量，將二級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐中，控制發(fā)酵過程溫度32±1℃，空氣流量控制在0.5vvm，轉(zhuǎn)化48h，原料可全部轉(zhuǎn)化完全。

滅活后加0.5倍體積的三氯甲烷，65℃回流攪拌萃取40min,靜置1h，分出三氯甲烷層，同樣的方法萃取兩次，合并有機層濃縮至干得到化合物Ⅱ粗品，再加3倍體積的甲苯加熱回流40min，-3℃冷卻2h，過濾料液、干燥濾餅得到化合物Ⅱ,重量收率92.7％，HPLC純度大于98％。

S2：糠?；?/p>

向反應(yīng)釜中加入四氫呋喃250ml、化合物Ⅱ50g、氯化鈣1g、氯化鋰1g，DBU20.5ml，降溫0℃，滴加糠酰氯20ml，升溫至25℃攪拌反應(yīng)8h至反應(yīng)完。

S3：開環(huán)

上述糠酰化反應(yīng)液降溫至5℃，滴加20ml冰醋酸，維持溫度5℃攪拌10min后滴加44ml 35％鹽酸，升溫至25℃，通入8g氯化氫氣體，攪拌約3h；分液，萃取3次，合并有機相，合并有機相，減壓回收有機相至無溶劑流出，加40g純化水繼續(xù)回收，過濾，濾餅水洗到中性，濾餅烘干得到糠酸莫米松，重量收率125.1％，HPLC含量：96.6％。

實施例5

S1：發(fā)酵脫氫

按照配方：酵母膏4g/L、蛋白胨4g/L、磷酸二氫鈉2g/L、葡萄糖10g/L、瓊脂粉20g/L，配制斜面種子培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至35℃接種。

按照配方：牛肉膏3g/L、蛋白胨3g/L、PPE消泡劑0.5g/L，配制一級液體種子瓶的培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至35℃待接種。使用斜面培養(yǎng)基直接進行接種。刮取1支斜面的全部菌種苔，接種到一級液體種子瓶中，接種后控制環(huán)境溫度30±0.5℃，180rpm振蕩培養(yǎng)48h后待轉(zhuǎn)種。

按照20％的移種量，將一級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入二級液體種子瓶中，二級液體種子瓶的培養(yǎng)基的配比和配制方法與一級液體種子瓶的培養(yǎng)基相同，接種后，將二級種子瓶的溫度控制在30±1℃，壓力控制在0.02-0.05MPa，轉(zhuǎn)速控制在180rpm,空氣流量控制在0.5vvm，通常培養(yǎng)24±6h后得培養(yǎng)成熟的諾卡氏菌種，待轉(zhuǎn)種。

按照配方：葡萄糖75g、玉米漿79g、蛋白胨13.5g、PPE消泡劑2.6g、大豆油2.4g、吐溫-80 2.5g、磷酸二氫鉀8g、化合物Ⅰ142g、硫酸鋅0.033g，配制發(fā)酵培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.8，然后升溫至121-123℃，蒸汽滅菌30min，降溫至35℃待接種。

按照20％的移種量，將二級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐中，控制發(fā)酵過程溫度32±1℃，空氣流量控制在0.5vvm，轉(zhuǎn)化48h，原料可全部轉(zhuǎn)化完全。

滅活后加0.5倍體積的三氯甲烷，65℃回流攪拌萃取40min,靜置1h，分出三氯甲烷層，同樣的方法萃取兩次，合并有機層濃縮至干得到化合物Ⅱ粗品，再加3倍體積的甲苯加熱回流40min，-2℃冷卻2h，過濾料液、干燥濾餅得到化合物Ⅱ,重量收率91.6％，HPLC純度大于98％。

S2：糠?；?/p>

向反應(yīng)釜中加入苯250ml、化合物Ⅱ50g、氯化鎂0.5g、氯化鈣1g，三乙胺9ml、DBU 10.5ml，降溫0℃，滴加糠酰氯17.5ml，40℃攪拌反應(yīng)10h至反應(yīng)完。

S3：開環(huán)：

上述糠酰化反應(yīng)液降溫至5℃，滴加30ml冰醋酸，維持溫度5℃攪拌10min后滴加38ml 35％鹽酸，升溫至25℃，通入0.5g氯化氫氣體，攪拌約3h；分液，萃取3次，合并有機相，合并有機相，減壓回收有機相至無溶劑流出，加60g純化水繼續(xù)回收，過濾，濾餅水洗到中性，濾餅烘干得到糠酸莫米松，重量收率124.2％，HPLC含量：96.7％。

實施例6

S1：發(fā)酵脫氫

按照配方：酵母膏4g/L、蛋白胨4g/L、磷酸二氫鈉2g/L、葡萄糖10g/L、瓊脂粉20g/L，配制斜面種子培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.2，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至29℃接種。

按照配方：牛肉膏3g/L、蛋白胨3g/L、PPE消泡劑0.5g/L，配制一級液體種子瓶的培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.5，然后升溫至121-122℃，蒸汽滅菌30min，降溫至29℃待接種。使用斜面培養(yǎng)基直接進行接種。刮取1支斜面的全部菌種苔，接種到一級液體種子瓶中，接種后控制環(huán)境溫度30±0.5℃，180rpm振蕩培養(yǎng)48h后待轉(zhuǎn)種。

按照20％的移種量，將一級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入二級液體種子瓶中，二級液體種子瓶的培養(yǎng)基的配比和配制方法與一級液體種子瓶的培養(yǎng)基相同，接種后，將二級種子瓶的溫度控制在30±1℃，壓力控制在0.02-0.05MPa，轉(zhuǎn)速控制在180rpm,空氣流量控制在0.5vvm，通常培養(yǎng)24±6h后得培養(yǎng)成熟的諾卡氏菌種，待轉(zhuǎn)種。

按照配方：葡萄糖90g、玉米漿90g、蛋白胨15g、PPE消泡劑3g、大豆油3g、吐溫-80 3g、磷酸二氫鉀9g、化合物Ⅰ150g、硫酸銅0.015g，配制發(fā)酵培養(yǎng)基，配制時依據(jù)配比將各種原材料充分溶解，攪拌均勻，使用20％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.9，然后升溫至121-123℃，蒸汽滅菌30min，降溫至29℃待接種。

按照20％的移種量，將二級液體種子培養(yǎng)成成熟的種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐中，控制發(fā)酵過程溫度32±1℃，空氣流量控制在0.5vvm，轉(zhuǎn)化48h，原料可全部轉(zhuǎn)化完全。

滅活后加0.5倍體積的三氯甲烷，65℃回流攪拌萃取30min,靜置1h，分出三氯甲烷層，同樣的方法萃取兩次，合并有機層濃縮至干得到化合物Ⅱ粗品，再加3倍體積的甲苯加熱回流30min，0℃冷卻2h，過濾料液、干燥濾餅得到化合物Ⅱ,重量收率90.1％，HPLC純度大于98％。

S2：糠酰化

向反應(yīng)釜中加入甲苯250ml、化合物Ⅱ50g、氯化鋰0.2g、氯化鎂1g，三乙胺19ml，降溫0℃，滴加糠酰氯19ml，50℃攪拌反應(yīng)13h至反應(yīng)完。

S3：開環(huán)

上述糠?；磻?yīng)液再降溫0℃，滴加50ml冰醋酸，維持溫度5℃攪拌10min后滴加35ml 35％鹽酸，升溫至25℃，通入6g氯化氫氣體，攪拌2h，反應(yīng)完全，分液，萃取3次，合并有機相，合并有機相，減壓回收有機相至無溶劑流出，加30g純化水繼續(xù)回收，過濾，濾餅水洗到中性，濾餅烘干得到糠酸莫米松，重量收率123.5％，HPLC含量：97.1％。

以上內(nèi)容是結(jié)合具體的/優(yōu)選的實施方式對本發(fā)明所作的進一步詳細說明，不能認定本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明。對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，其還可以對這些已描述的實施例做出若干替代或變型，而這些替代或變型方式都應(yīng)當視為屬于本發(fā)明的保護范圍。