本發(fā)明涉及腫瘤的藥物領(lǐng)域。具體地講，本發(fā)明涉及對(duì)上述疾病具有治療作用的一類含芳基硼酸結(jié)構(gòu)的新型苯并喹唑啉類衍生物的酪氨酸激酶抑制劑、其制備方法，以及在制藥上的用途。
背景技術(shù)：
：腫瘤是嚴(yán)重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一，據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，全世界每年死于腫瘤的患者約690萬。由于生存環(huán)境和生活習(xí)性的改變，在不良環(huán)境和一些不利因素的作用下，腫瘤的發(fā)病率和死亡率近年呈快速上升趨勢(shì)。蛋白質(zhì)激酶組成人類酶的最大家族之一，并且通過添加磷酸基團(tuán)到蛋白質(zhì)上來調(diào)節(jié)許多不同的信號(hào)傳導(dǎo)過程。特別地，酪氨酸激酶磷酸化蛋白質(zhì)在酪氨酸殘基的酚部分。酪氨酸激酶家族包括控制細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和分化的成員。異常的激酶活性已經(jīng)涉及許多人類疾病，包括癌癥、自身免疫疾病和炎性疾病。由于蛋白質(zhì)激酶屬于細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，它們提供用小分子激酶抑制劑來調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的目標(biāo)，并且因此成為了良好的藥物設(shè)計(jì)靶標(biāo)。除了激酶介導(dǎo)的疾病過程的治療，激酶活性的選擇性和有效抑制劑還可用于研究細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)過程和鑒定其它具有治療意義的細(xì)胞靶標(biāo)。以往對(duì)腫瘤的治療是通過發(fā)現(xiàn)腫瘤并破壞來實(shí)現(xiàn)的，現(xiàn)在隨著對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑研究的不斷深入，人們對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)部的癌基因及抗癌基因的作用了解的越來越深入，針對(duì)腫瘤的特異性分子靶點(diǎn)設(shè)計(jì)新的抗腫瘤藥物越來越受到關(guān)注，成為研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域，而靶向抗腫瘤藥物作為一種新的治療方法也已經(jīng)應(yīng)用于臨床，并在短短幾年內(nèi)得到了顯著的進(jìn)展?，F(xiàn)在已知，蛋白酪氨酸激酶(Proteintyrosinekinases,PTK)信號(hào)通路與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、遷移和凋亡有密切關(guān)系，利用PTK抑制劑干擾或阻斷酪氨酸激酶通路可以用于腫瘤治療。PTK是在正常和異常增殖過程中起重要作用的癌蛋白和原癌蛋白家族中的成員，是一種能選擇性地使不同底物的酪氨酸殘基磷酸化的一種酶，它們催化ATP的γ-磷酸基轉(zhuǎn)移到許多重要蛋白質(zhì)的酪氨酸殘基上，使酚羥基磷酸化。蛋白酪氨酸激酶分為受體酪氨酸激酶(receptortyrosinekinase,RTK)，非受體酪氨酸激酶以及IR和Janus激酶等(RobinsonD.R.,etal,Oncogene,2000,19,5548-5557)，其中多數(shù)為受體型酪氨酸激酶(RTK)。RTK是一類具有內(nèi)源性蛋白酪氨酸激酶，參與多種細(xì)胞活動(dòng)的調(diào)控，在啟動(dòng)細(xì)胞復(fù)制的促有絲分裂信號(hào)的傳導(dǎo)中具有極其重要的地位，調(diào)控著細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化。所有的RTK都屬于I型膜蛋白，其分子具有相似的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)：一個(gè)大的糖基化的胞外配體結(jié)合區(qū)，一個(gè)疏水的單次跨膜區(qū)，以及一個(gè)細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶催化結(jié)構(gòu)域及調(diào)控序列。配體的結(jié)合(如表皮生長(zhǎng)因子(EGF)與EGFR的結(jié)合)導(dǎo)致受體細(xì)胞內(nèi)部分編碼的受體激酶活性激活，使靶蛋白中的關(guān)鍵酪氨酸磷酸化，導(dǎo)致增生信號(hào)跨越細(xì)胞質(zhì)膜轉(zhuǎn)導(dǎo)。近年來，人們致力于抑制細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以開發(fā)新型靶點(diǎn)抗腫瘤藥物。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑下調(diào)腫瘤的生存和增殖信號(hào)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，而不是通過細(xì)胞毒作用，因此選擇性較高、毒副作用較小。目前已有十幾種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑應(yīng)用于臨床治療腫瘤，主要為酪氨酸激酶抑制劑類抗腫瘤藥物，其中4-(取代苯胺基)喹唑啉結(jié)構(gòu)類型的化合物開發(fā)的比較成熟，如針對(duì)EGFR酪氨酸激酶靶點(diǎn)的小分子抑制劑吉非替尼(Iressa)、埃羅替尼(Tarceva)和拉帕替尼(Lapatinib)等。吉非替尼(Gefitinib)，商品名Iressa(易瑞沙)，AstraZeneca開發(fā)的EGFR酪氨酸激酶抑制劑，是最早進(jìn)入臨床研究的表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑，于2002年在日本上市，次年在美國(guó)上市，用于治療既往接受過化療的晚期或轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。埃羅替尼(Erlotinib)，商品名Tarceva(特羅凱)，OSI公司開發(fā)的EGFR酪氨酸激酶抑制劑，受讓于Genentech和羅氏公司。2004年在美國(guó)上市，用于治療NSCLC和胰腺癌。屬于第一代治療NSCLC的苯胺喹唑啉類小分子抑制劑，也是目前唯一被證實(shí)的對(duì)晚期非小細(xì)胞肺癌具有生存優(yōu)勢(shì)的EGFR酪氨酸激酶抑制劑，對(duì)各類非小細(xì)胞肺癌患者均有效，且耐受性好，無骨髓抑制和神經(jīng)毒性，能顯著延長(zhǎng)生存期，改善患者生活質(zhì)量。小分子酪氨酸激酶抑制劑作為新的靶向抗腫瘤藥物，為腫瘤的治療和預(yù)防打開了一扇新窗口，而且其副作用輕微，有良好的耐受性。雖然目前已有10多個(gè)小分子酪氨酸激酶抑制劑為臨床腫瘤治療作出了很大貢獻(xiàn)，但仍然需要發(fā)現(xiàn)一些較之現(xiàn)有的酪氨酸激酶抑制劑具有更好的體內(nèi)活性和/或改良的藥理學(xué)特性的另外的化合物。因此開發(fā)新的改進(jìn)的或更高效的酪氨酸激酶抑制劑，更深入地了解該類藥物與已知靶蛋白之間的關(guān)系以及其發(fā)揮抗腫瘤作用的機(jī)理對(duì)腫瘤臨床治療具有重要的意義。本發(fā)明公開了一類含芳基硼酸結(jié)構(gòu)的新型苯并喹唑啉類酪氨酸激酶抑制劑，這些化合物可用于制備腫瘤的治療藥物。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種具有通式I的酪氨酸激酶抑制劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供制備具有通式I的化合物的方法。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供含有通式I的化合物作為有效成分，及其在治療腫瘤方面的應(yīng)用。現(xiàn)結(jié)合本發(fā)明的目的對(duì)本
發(fā)明內(nèi)容進(jìn)行具體描述。本發(fā)明具有通式(I)的化合物具有下述結(jié)構(gòu)式：其中，R1選自C1-C6的烷基、C3-C8的環(huán)烷基、苯基。更加優(yōu)選的具有通式(I)的化合物如下，本發(fā)明所述通式(I)化合物可以通過以下路線合成：化合物II與3,5-二溴苯胺III在堿存在下加熱反應(yīng)，得到化合物IV；化合物IV先用1當(dāng)量n-BuLi處理轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)應(yīng)的單芳基鋰，后者在BF3·Et2O催化下與環(huán)氧化物V反應(yīng)，得到化合物VI；化合物VI先用3當(dāng)量n-BuLi處理轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)應(yīng)的單芳基鋰，后者再與硼酸三甲酯反應(yīng)，而后經(jīng)過酸水解，得到化合物I；R的定義如前所述。本發(fā)明所述通式I化合物具有酪氨酸激酶抑制作用，可作為有效成分用于制備腫瘤的治療藥物。本發(fā)明所述通式I化合物的活性是通過體外抑制EGFR和HER2激酶和抑制細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。需要說明的是，下述實(shí)施例僅是用于說明，而并非用于限制本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的教導(dǎo)所做出的各種變化均應(yīng)在本申請(qǐng)權(quán)利要求所要求的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例1化合物I-1的合成步驟1.中間體IV-1的合成化合物II(2.25g,10mmol)、化合物III(2.51g,10mmol)和二異丙基乙基胺(DIPEA,3.88g,30mmol)溶于50mL干燥的二甲苯中，而后在氮?dú)獗Ｗo(hù)下升溫回流，直到反應(yīng)完成(通常5小時(shí))。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，依次用1％稀鹽酸(200mL)和鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物IV，白色固體，ESI-MS,m/z＝440([M+H]+)。步驟2.中間體VI-1的合成化合物IV(3.51g,8mmol)溶于50mL干燥的THF中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌，用液氮-乙醇冷卻至-78℃，用注射器慢慢滴加1.6M的n-BuLi的正己烷溶液(10mL,16mmol)，滴加完畢后，反應(yīng)混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1h，而后再用注射器依次慢慢滴加BF3·Et2O(1.42g,10mmol)和V-1(0.58g,10mmol)溶于3mL干燥的THF制成的溶液。滴加完畢后，反應(yīng)化合物在是室溫下繼續(xù)攪拌3小時(shí)，TLC顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，攪拌，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物VI-1，灰白色固體，ESI-MS,m/z＝418、420([M+H]+)。步驟3.產(chǎn)物I-1的合成化合物VI-1(2.10g,5mmol)溶于25mL干燥的THF中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下攪拌，用液氮-乙醇冷卻至-78℃，用注射器慢慢滴加1.6M的n-BuLi的正己烷溶液(9.4mL,15mmol)，滴加完畢后，反應(yīng)混合物在該溫度下繼續(xù)攪拌1h，而后再用注射器慢慢滴加硼酸三甲酯(0.62g,6mmol)。滴加完畢后，反應(yīng)化合物在是室溫下繼續(xù)攪拌3小時(shí)，TLC顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物小心傾倒入200mL冰水中，使用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH＝2，攪拌1小時(shí)，再調(diào)節(jié)pH＝5，用50mL×3CH2Cl2萃取，合并萃取相，用鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥。抽濾除去干燥劑，濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，得到化合物I-1，白色固體，ESI-MS,m/z＝382([M-H]-)。實(shí)施例2-4參照實(shí)施例1的方法，合成了下表所列化合物。實(shí)施例5化合物體外抑制EGFR和HER2分析可使用以下實(shí)驗(yàn)來測(cè)定本發(fā)明所述化合物在體外對(duì)erbB家族酪氨酸激酶(EGFR和HER2)的活性抑制作用。體外激酶分析用CellSignalingTechnology公司的HTScanEGFReceptorKinaseAssayKit和HTScanHER2/ErbB2KinaseAssayKit檢測(cè)。操作步驟參照試劑盒說明書，該方法在體外檢測(cè)待測(cè)化合物對(duì)EGFR或Her2受體酪氨酸激酶對(duì)底物肽磷酸化的抑制作用。室溫下激酶反應(yīng)緩沖液中溫育ATP和底物肽以及待測(cè)化合物，孵育一段時(shí)間后，加入終止液終止反應(yīng)并將樣品轉(zhuǎn)移到鏈霉親和素包被的96孔板中，洗板并用HRP標(biāo)記的抗底物磷酸化抗體檢測(cè)底物肽上的磷酸化水平，用TMB顯色，2M硫酸中止反應(yīng)。檢測(cè)450nm吸收波長(zhǎng)，計(jì)算IC50值(nM)。結(jié)果見下表?；衔顴GFRIC50(nM)HER2IC50(nM)實(shí)施例1化合物11.921.4實(shí)施例2化合物15.722.5實(shí)施例3化合物23.819.6實(shí)施例4化合物6.315.2從上表結(jié)果可以看出，本發(fā)明的化合物對(duì)EGFR和HER2具有很強(qiáng)的抑制作用，可以作為制備抗腫瘤的藥物。實(shí)施例6化合物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)采用人乳腺癌細(xì)胞BT474、人胃癌細(xì)胞系NCI-N87、人肺癌細(xì)胞Calu-3和人皮膚癌細(xì)胞A431，其中BT474高表達(dá)Her2受體，N87高表達(dá)EGFR和Her2受體。在含10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺和非必需氨基酸的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中，在37℃、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞，應(yīng)用胰蛋白酶/乙二胺四乙酸(EDTA)從細(xì)胞培養(yǎng)瓶中收獲細(xì)胞。細(xì)胞以4000/孔(0.1mL培養(yǎng)基)加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板貼壁過夜，加入0.1mL待測(cè)化合物的稀釋液，DMSO的最終濃度為0.25％，將細(xì)胞培養(yǎng)板在37℃，5％的CO2條件下溫育72h。然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，然后每孔加入50％(質(zhì)量/體積)的三氯乙酸(TCA)50μL固定細(xì)胞。TCA的終濃度為10％，靜置5min后在4℃冰箱中放置1h，培養(yǎng)板各孔用去離子水沖洗5遍，以去除TCA，甩干，空氣干燥至無濕跡。每孔加0.4％(質(zhì)量/體積)的SRB100μL，室溫放置10min，棄去各孔內(nèi)液體后用1％乙酸沖洗5遍，空氣干燥后用pH為10.5，10mMTris(三羥甲基氨基甲烷)150μL萃取，檢測(cè)540nm的吸收波長(zhǎng)。結(jié)果IC50值(nM)見下表。由上表可以看出，本發(fā)明的化合物對(duì)EGFR和HER2高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞具有很高的抑制活性，可以作為制備抗腫瘤的藥物。當(dāng)前第1頁1 2 3