本發(fā)明屬于抗除草劑蛋白質(zhì)領(lǐng)域，具體涉及具有抗除草劑活性的水稻蛋白質(zhì)、其編碼基因及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

近年來，雜草在稻田中的危害愈演愈烈。隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展和人力成本的提高，水稻種植方式由費人工的插秧逐步向省人工的直播轉(zhuǎn)變，而直播方式的推廣使雜草在田間蔓延，成為影響水稻產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素之一。尤其是雜草稻，在水稻田不斷自生、延續(xù)，危害水稻生產(chǎn)，是水稻田中僅次于稗草、千金子的第三大惡性雜草。由于雜草稻與栽培稻親緣關(guān)系密切，尚沒有理想的除草劑可以區(qū)別雜草稻和栽培稻。而種植抗除草劑水稻則可以避免這個問題。

水稻內(nèi)源的抗除草劑乙酰羥基酸合成酶(acetohydroxyacidsynthase，簡稱ahas)蛋白質(zhì)由ahas基因突變產(chǎn)生，表達抗除草劑ahas蛋白質(zhì)可以使植物獲得抗除草劑活性，解決田塊中的雜草問題。ahas蛋白質(zhì)主要分布在微生物和植物中，在動物中幾乎不存在，ahas抑制除草劑對人畜無害因此，發(fā)掘和研究具有抗除草劑活性的水稻ahas蛋白質(zhì)具有良好的創(chuàng)新性和經(jīng)濟價值。

目前，培育抗ahas抑制除草劑水稻的方法為以水稻種子或者植株為材料進行化學(xué)或者物理誘變，進行植物體內(nèi)基因組突變。這種方法獲得抗除草劑水稻的試驗時間長(大于3年)，獲得新突變體難，突變結(jié)果為核苷酸單個堿基變化引起單個氨基酸的替換，容易與已經(jīng)存在的突變重復(fù)，而且成功幾率小，通常突變成功率小于百萬分之一，很多實驗室進行超過5年的研發(fā)無法獲得新的突變體。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供具有抗除草劑活性的水稻蛋白質(zhì)、其編碼基因及應(yīng)用，其為抗多類型除草劑活性的水稻ahas突變體蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)具有抗咪唑啉酮類、磺酰脲類或者嘧啶類等多類型除草劑的活性，其編碼基因轉(zhuǎn)化的植物具有抗咪唑啉酮類、磺酰脲類或者嘧啶類等多類型除草劑的活性。

與目前通過體內(nèi)突變獲得的氨基酸替換突變體不同，本發(fā)明采用氨基酸刪除策略，通過基因體外突變，改造水稻ahas蛋白質(zhì)，獲得水稻ahas突變體蛋白質(zhì)，使其具有抗除草劑活性。

為了達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

具有抗除草劑活性的水稻蛋白質(zhì)，其為水稻ahas突變體蛋白質(zhì)，其氨基酸序列如如seqidno.1、seqidno.2、seqidno.5或seqidno.6所示。

本發(fā)明其氨基酸序列如seqidno.1或seqidno.2所示的抗除草劑活性的蛋白質(zhì)為前體全長蛋白質(zhì),該前體全長蛋白質(zhì)刪除信號肽后成為成熟蛋白質(zhì)，與氨基酸序列seqidno.1、seqidno.2對應(yīng)，其成熟氨基酸序列分別如seqidno.5、seqidno.6所示。

一種具有抗除草劑活性的基因，其為編碼所述具有抗除草劑活性的水稻蛋白質(zhì)的核苷酸序列。

進一步，所述核苷酸序列如seqidno.3、seqidno.4、seqidno.7或seqidno.8所示。

本發(fā)明所述具有抗除草劑活性的水稻蛋白質(zhì)用于培育抗咪唑啉酮類、磺酰脲類和嘧啶類除草劑植物。

一種獲得抗咪唑啉酮類、磺酰脲類和嘧啶類等多類型除草劑植物的方法，包括，將所述水稻ahas突變體蛋白質(zhì)的編碼基因轉(zhuǎn)化到植物中,使所述植物產(chǎn)生具有抗除草劑活性的水稻乙酰羥基酸合成酶的突變體蛋白質(zhì)。

進一步，所述編碼基因的核苷酸序列如seqidno.3、seqidno.4、seqidno.7或seqidno.8所示。

進一步，所述咪唑啉酮類除草劑為咪唑乙煙酸、甲氧咪草煙或者甲基咪草煙，但不限于這幾種咪唑啉酮類除草劑。

又，所述磺酰脲類除草劑為氯磺隆、氯嘧磺隆、甲嘧磺隆，但不限于這幾種磺酰脲類除草劑。

優(yōu)選地，所述嘧啶類除草劑為雙草醚，但不限于這種嘧啶類除草劑。

進一步，所述植物為水稻、玉米或棉花，但不限于這幾種植物。

本發(fā)明抗除草劑活性的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)為水稻(粳稻或秈稻)中經(jīng)過人工改造的ahas突變體蛋白質(zhì)，源于其基因組中ahas基因的表達，將水稻ahas通過體外突變，獲得ahas突變體蛋白質(zhì)，其氨基酸序列的特點為：與野生型水稻ahas蛋白質(zhì)相比，缺失trp548位點氨基酸，該突變體蛋白質(zhì)對咪唑啉酮類、磺酰脲類和嘧啶類等多類型除草劑具有抗性。

將本發(fā)明獲得的ahas突變體蛋白質(zhì)的編碼基因轉(zhuǎn)化到植物中，在植物中進行表達，使植物中含有ahas突變體蛋白質(zhì)，可使植物具有抗咪唑啉酮類、磺酰脲類和嘧啶羧酸類等多類型除草劑的活性。

本發(fā)明的ahas突變體蛋白質(zhì)的編碼基因的核苷酸序列不限于水稻內(nèi)源序列，可以是表達所述蛋白質(zhì)的人工合成核苷酸序列。

在水稻、玉米或者棉花中表達水稻ahas突變體，得到轉(zhuǎn)基因水稻r-ajm5和r-aim5、轉(zhuǎn)基因玉米m-ajm5和m-aim5、轉(zhuǎn)基因棉花c-ajm5和c-aim5，在轉(zhuǎn)基因植物和野生型植物苗期噴灑抗咪唑啉酮類、磺酰脲類或者嘧啶羧酸類等多類型除草劑，野生型植物植株全部死亡，轉(zhuǎn)基因植物全部存活。說明表達本發(fā)明水稻ahas突變體的植物具有抗咪唑啉酮類、磺酰脲類或者嘧啶羧酸類等多類型除草劑活性。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

1)本發(fā)明采用氨基酸刪除策略，對氨基酸進行定點突變，對刪除氨基酸后的突變體蛋白質(zhì)進行體外抗除草劑活性測定，為開發(fā)更多新型抗除草劑ahas突變體蛋白質(zhì)提供基礎(chǔ)，具有操作簡單，篩選過程簡單、創(chuàng)新性強等優(yōu)點，發(fā)掘了水稻內(nèi)源抗除草劑基因，增加抗除草劑基因的種類。

2)本發(fā)明的ahas突變體蛋白質(zhì)是通過體外突變獲得的，體外突變具有可設(shè)計性強、試驗時間短、創(chuàng)新性強等體內(nèi)突變無法比擬的優(yōu)點，獲得突變體時間小于2個月，同時，通過特定的突變設(shè)計，避免與已報道ahas突變體蛋白質(zhì)重復(fù)。

3)將本發(fā)明ahsa突變體蛋白質(zhì)的編碼基因表達后，獲得的ahas全長突變體蛋白質(zhì)和ahas無信號肽成熟突變體蛋白質(zhì)均具有抗咪唑啉酮類、磺酰脲類和嘧啶羧酸類等多類型除草劑的活性。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1中純化后的ahas蛋白質(zhì)sds-page電泳圖；

其中，泳道1：純化后ajm5s的蛋白質(zhì)；泳道2：純化后的aim5s蛋白質(zhì)；泳道3：純化后的ajws蛋白質(zhì)；泳道4：純化后的aiws蛋白質(zhì)；mk：蛋白質(zhì)marker，分子量已在圖上標(biāo)出。

圖2-圖3本發(fā)明實施例2中ajm5s和aim5s及其對照ajws和aiws對咪唑啉酮類除草劑(咪唑乙煙酸和甲氧咪草煙)的抗性曲線圖

圖4本發(fā)明實施例2中ajm5s和aim5s及其對照ajws和aiws對嘧啶羧酸類除草劑(雙草醚)的抗性曲線圖。

圖5-圖7為本發(fā)明實施例2中ajm5s和aim5s及其對照ajws和aiws對磺酰脲類除草劑(氯磺隆、氯嘧磺隆、甲嘧磺隆)的抗性曲線圖。

具體實施方式

以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。

以下實施例中，如無特殊說明為《分子克隆實驗指南》(科學(xué)出版社，2002年)所記載方法。

引物合成和測序委托生工上海生物工程股份有限公司進行，試劑、菌株、載體等實驗用品從杭州西格瑪生物技術(shù)公司購買。

咪唑煙乙酸除草劑為山東先達公司的“豆說好”，稀釋濃度為稀釋200倍。甲基咪草煙除草劑為德國巴斯夫公司的“百壟通”，稀釋濃度為稀釋1000倍。甲氧咪草煙除草劑為美國氰胺公司的“金豆”，稀釋濃度為稀釋100倍。氯磺隆除草劑為江蘇省激素研究所股份有限公司的“氯磺隆”，稀釋濃度為稀釋20000倍。氯嘧磺隆除草劑為江蘇省激素研究所股份有限公司的“氯嘧磺隆”，稀釋濃度為稀釋5000倍。甲嘧磺隆除草劑為江蘇瑞邦農(nóng)藥廠的“森草凈”，稀釋濃度為稀釋5000倍。雙草醚除草劑為江蘇省激素研究所股份有限公司的“雙草醚”，稀釋濃度為稀釋1000倍。

實施例1獲得水稻(粳稻及秈稻)ahas突變體蛋白質(zhì)，包括以下步驟：

1.利用粳稻構(gòu)建刪除trp548氨基酸的ahas基因

(1)通過多聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(pcr)的方法，從粳稻基因組中擴增出ahas基因ajw(ncbi序列號：nc_029257.1)。

其中，進行pcr反應(yīng)使用的引物為：

ra1f：5'atggctacgaccgccgcggc；

ra1r：5'ttaatacacagtcctgccatcacca。

pcr反應(yīng)體系為：2×高保真聚合酶預(yù)混液50μl、引物ra1f(10μm)4μl、引物ra1r(10μm)4μl、野生型水稻基因組dna1μl和去離子水41μl，總體積為100μl。

pcr程序：a)95℃，10分鐘；b)95℃，40秒；c)52℃，40秒；d)68℃，2分鐘；e)循環(huán)步驟2-4，25次；f)68℃，10分鐘；g)16℃，保存。

(2)通過瓊脂糖電泳分離、純化出pcr產(chǎn)物，即ajw基因，將pcr產(chǎn)物進行t克隆(pgemt，美國promega公司)，獲得t-ajw。

(3)以t-ajw為模板，使用引物osa548f和osa548r，進行pcr反應(yīng)，將pcr產(chǎn)物進行t克隆，獲得刪除trp548氨基酸的突變體克隆t-ajm5。

其中，pcr反應(yīng)體系和程序中，除模板和引物外其它條件與步驟1)相同。

引物的具體序列為：

osa548f：5'catttgggtatggtggtgcaagaggataggttttacaaggc；

osa548r：5'gccttgtaaaacctatcctcttgcaccaccatacccaaatg。

其中，ajm5的dna序列如seqidno.3所示，氨基酸序列如seqidno.1所示。

(4)同理，利用秈稻構(gòu)建刪除trp548氨基酸的ahas基因：

使用與上述利用粳稻構(gòu)建刪除trp548氨基酸的ahas基因時，所使用的引物及實驗過程，通過pcr方法，使用引物ra1f和ra1r從秈稻基因組中擴增出ahas基因aiw(ncbi序列號：eu548084)，獲得t-aiw，再以t-aiw為模板，使用引物osa548f和osa548r，進行pcr反應(yīng)，將pcr產(chǎn)物進行t克隆，獲得刪除trp548氨基酸的突變體克隆t-aim5，其中，aim5的dna序列如seqidno.4所示，氨基酸序列如seqidno.2所示。

2.表達、純化刪除信號肽的ahas成熟蛋白質(zhì)

(1)以上述步驟1中獲得的t-ajw為模板，使用引物osabam和osaeco進行pcr反應(yīng)，將pcr產(chǎn)物進行t克隆，獲得刪除信號肽的粳稻克隆t-ajws。

其中，pcr反應(yīng)體系和程序中，除模板和引物外其它條件與上述步驟1相同，引物的具體序列為：

osabam：5'ggatccacgccgctccggccgtgggggcc；

osaeco：5'gaattcttaatacatagtcctgccatcac。

(2)構(gòu)建蛋白質(zhì)表達載體，將ajws克隆入pgex4t2(pgex4t2，美國ge生命科學(xué)公司)，獲得表達無信號肽的ahas野生型蛋白質(zhì)的載體4t2-ajws。

(3)將表達無信號肽的ahas野生型蛋白質(zhì)的載體4t2-ra1ws轉(zhuǎn)入表達菌株rosetta中，培養(yǎng)、收獲細胞，超聲波破碎細胞，將離心獲得上清液通過gst柱，清洗gst柱，洗脫，獲得成熟的粳稻野生型蛋白質(zhì)ajws。

用與上述步驟2(1)-2(3)同樣的方法，以t-aiw為模板，使用引物osabam和osaeco，進行pcr反應(yīng)，將pcr產(chǎn)物進行t克隆，構(gòu)建蛋白質(zhì)表達載體，獲得無信號肽的秈稻野生型ahas蛋白質(zhì)的載體4t2-aiws，再通過表達菌株rosetta進行表達，獲得無信號肽的成熟秈稻野生型蛋白質(zhì)aiws。

用與上述步驟2(1)-2(3)同樣的方法，以t-ajm5為模板，使用引物osabam和osaeco，進行pcr反應(yīng)，將pcr產(chǎn)物進行t克隆，構(gòu)建蛋白質(zhì)表達載體，獲得無信號肽而且刪除trp548氨基酸的表達成熟粳稻ahas突變體蛋白質(zhì)的載體4t2-ajm5s，再通過表達菌株rosetta進行表達，獲得無信號肽而且刪除trp548氨基酸的成熟粳稻ahas突變體蛋白質(zhì)ajm5s，其氨基酸序列如seqidno.5所示，dna序列如seqidno.7所示。

用與上述步驟2(1)-2(3)同樣的方法，以t-aim5為模板，使用引物osabam和osaeco，進行pcr反應(yīng)，將pcr產(chǎn)物進行t克隆，構(gòu)建蛋白質(zhì)表達載體，獲得無信號肽且刪除trp548氨基酸的表達成熟秈稻ahas突變體蛋白質(zhì)的載體4t2-aim5s，再通過表達菌株rosetta進行表達，獲得無信號肽且刪除trp548氨基酸的成熟秈稻ahas突變體蛋白質(zhì)aim5s，其氨基酸序列如seqidno.6所示，dna序列如seqidno.8所示。

將獲得的野生型蛋白質(zhì)ajws、aiws和成熟的ahas突變體蛋白質(zhì)ajm5s、aim5s進行sds-page電泳檢測，獲得蛋白質(zhì)膠，蛋白質(zhì)膠參見圖1。

由圖1可見，泳道1至泳道4中的ahas蛋白質(zhì)在90kda位置具有明顯條帶，此位置與蛋白質(zhì)理論大小相符。此外，該蛋白質(zhì)條帶在整個泳道的蛋白質(zhì)條帶中占主要比例，說明獲得了高純度的ahas蛋白質(zhì)。

實施例2檢測ahas突變體蛋白質(zhì)對除草劑的抗性

分別以實施例1獲得的變體蛋白質(zhì)ajm5s和aim5s、野生型蛋白質(zhì)ajws和aiws為檢測主體，水為空白對照處理，以濃度在0-100μm的不同品種除草劑(咪唑煙乙酸、甲氧咪草煙、雙草醚、氯磺隆、氯嘧磺隆、甲嘧磺隆)為影響因素，進行抗除草劑生物測定。

在2ml離心管中配置溶液反應(yīng)體系：450μl測定緩沖液，10μlahas蛋白質(zhì)(ajm5s、aim5s、ajws或aiws，0.5μg/μl)，40μl影響因素溶液(水為空白對照處理，除草劑為影響因素)，總體積500μl。

ahas活性測定緩沖液：100mm丙酮酸鈉，10mm氯化鎂，1mmtpp，50μmfad，50mm磷酸鹽，ph7.4。

反應(yīng)程序：將含有不同影響因素反應(yīng)體系的離心管置于37℃反應(yīng)1小時；20μl30％硫酸終止反應(yīng)，60℃反應(yīng)0.5小時，加入250μl1.7％α-萘酚，0.17％肌酸，60℃顯色0.5小時。從離心管中取出200μl，檢測含有不同影響因素的溶液在525nm吸光度值。

檢測結(jié)果：以除草劑濃度為0(影響因素溶液為水對照)的野生型蛋白質(zhì)ajws處理的525nm吸光度值為100％活性，計算野生型和突變體蛋白質(zhì)在不同影響因素條件下的活性比例，繪制曲線圖，結(jié)果參見圖2-圖7。

由圖2-圖7可見，隨著咪唑啉酮類、磺酰脲類或者嘧啶羧酸類等多類型除草劑的增加，野生型蛋白質(zhì)ajws、aiws的活性降低至0；而突變體蛋白質(zhì)ajm5s、aim5s的活性在高濃度除草劑(氯磺隆除外)中依然保持接近100％活性，在高濃度氯磺隆中保持80％活性。

因此，本發(fā)明的突變體蛋白質(zhì)ajm5s和aim5s對咪唑啉酮類、磺酰脲類或者嘧啶羧酸類等多類型除草劑具有抗性。

實施例3水稻ahas突變體基因在植物中的轉(zhuǎn)化及表達

1.構(gòu)建ahas突變體蛋白質(zhì)的表達元件

為了在單子葉及雙子葉植物中表達ahas突變體蛋白質(zhì)，以pcambia1300載體(簡稱1300)為載體，用辣椒斑駁病毒35s(簡稱35s)啟動子和終止子構(gòu)建ahas表達元件，35s啟動子和終止子dna序列見http://www.snapgene.com/resources/plasmid_files/plant_vectors/pcambia1300/，具體步驟如下：

(1)以實施例1獲得的t-ajm5為模板，使用引物rabam2和rasac，通過pcr和bamh1/sac1雙酶切，獲得ahas突變體片段ajm5t。

其中，引物序列為：

rabam2：5'gtgggatccatggctacgaccgccgcggc；

rasac：5'gtggagctcttaatacatagtcctgccatcac。

(2)以1300載體為模板，使用引物35s-hind和35s-bam，通過pcr和bamh1/hind3雙酶切，獲得啟動子片段35s；

其中，引物序列為：

35s-hind：5'gcgaagcttcatggagtcaaagattcaaa；

35s-bam：5'gtgggatccagtcccccgtgttctctccaaatgaa。

(3)以1300載體為模板，使用引物ter-sac和ter-kpn，通過pcr和bamh1/hind3雙酶切，獲得終止子片段ter；

其中，引物序列為：

ter-sac：5'gtggagctcagtagatgccgaccggatctgt；

ter-kpn：5'cagggtacccgccgaattaattcggggga。

(4)將1300進行hindiii/saci雙酶切，獲得片段1300hs，與35s和ajm5t進行連接、克隆，獲得1300-35s-ajm5。

(5)將1300-35s-ajm5進行saci/kpni雙酶切，與ter連接、克隆，獲得表達粳稻ahas突變體的載體1300-ajm5。

同理，以t-aim5為模板，通過與本實施例步驟1(1)-1(5)相同步驟和引物，獲得表達粳稻ahas突變體的載體1300-aim5。

(6)將獲得的載體1300-ajm5和載體1300-aim5分別轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌菌株lba4044中，獲得表達ahas突變體蛋白質(zhì)的植物轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌。

2.獲得表達ahas突變體蛋白質(zhì)的植物

轉(zhuǎn)基因植物的獲得方法為現(xiàn)有成熟技術(shù)，轉(zhuǎn)基因植物制備委托上海博祈生物科技有限公司進行。

使用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將載體1300-ajm5和1300-aim5分別轉(zhuǎn)入水稻、玉米和棉花中，獲得轉(zhuǎn)基因水稻r-ajm5和r-aim5、轉(zhuǎn)基因玉米m-ajm5和m-aim5、轉(zhuǎn)基因棉花c-ajm5和c-aim5。

在所獲得的轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)基因水稻r-ajm5和r-aim5、轉(zhuǎn)基因玉米m-ajm5和m-aim5、轉(zhuǎn)基因棉花c-ajm5和c-aim5和對應(yīng)野生型植物的苗期噴除草劑，十天后，統(tǒng)計死亡率，結(jié)果參見表1。

表1

備注：*水稻自身對雙草醚具有抗性，由實施例2中的蛋白質(zhì)活性測定實驗可以推斷該抗性并非來源于本發(fā)明的ahas突變體蛋白質(zhì)。

由表1可知，野生型植物植株全部死亡，而轉(zhuǎn)基因植物全部存活，說明表達本發(fā)明ahas突變體蛋白質(zhì)的植物具有抗咪唑啉酮類、磺酰脲類或者嘧啶羧酸類等多類型除草劑活性。

<110>上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院

<120>具有抗除草劑活性的水稻蛋白質(zhì)、其編碼基因及其應(yīng)用

<130>1711033

<160>8

<170>patentinversion3.5

<210>seqidno.1

<211>643

<212>prt

<213>水稻（oryzasatival.spp.japanica）

<400>1

metalathrthralaalaalaalaalaalaalaleuseralaalaala

151015

thralalysthrglyarglysasnhisglnarghishisvalleupro

202530

alaargglyargvalglyalaalaalavalargcysseralavalser

354045

provalthrproproserproalaproproalathrproleuargpro

505560

trpglyproalagluproarglysglyalaaspileleuvalgluala

65707580

leugluargcysglyvalseraspvalphealatyrproglyglyala

859095

sermetgluilehisglnalaleuthrargserprovalilethrasn

100105110

hisleuphearghisgluglnglyglualaphealaalaserglytyr

115120125

alaargalaserglyargvalglyvalcysvalalathrserglypro

130135140

glyalathrasnleuvalseralaleualaaspalaleuleuaspser

145150155160

valprometvalalailethrglyglnvalproargargmetilegly

165170175

thraspalapheglngluthrproilevalgluvalthrargserile

180185190

thrlyshisasntyrleuvalleuaspvalgluaspileproargval

195200205

ileglnglualaphepheleualaserserglyargproglyproval

210215220

leuvalaspileprolysaspileglnglnglnmetalavalproval

225230235240

trpaspthrsermetasnleuproglytyrilealaargleuprolys

245250255

proproalathrgluleuleugluglnvalleuargleuvalglyglu

260265270

serargargproileleutyrvalglyglyglycysseralasergly

275280285

aspgluleuargtrpphevalgluleuthrglyileprovalthrthr

290295300

thrleumetglyleuglyasnpheproseraspaspproleuserleu

305310315320

argmetleuglymethisglythrvaltyralaasntyralavalasp

325330335

lysalaaspleuleuleualapheglyvalargpheaspaspargval

340345350

thrglylysileglualaphealaserargalalysilevalhisile

355360365

aspileaspproalagluileglylysasnlysglnprohisvalser

370375380

ilecysalaaspvallysleualaleuglnglyleuasnalaleuleu

385390395400

glnglnserthrthrlysthrserserasppheseralatrphisasn

405410415

gluleuaspglnglnlysargglupheproleuglytyrlysthrphe

420425430

glyglugluileproproglntyralaileglnvalleuaspgluleu

435440445

thrlysglyglualaileilealathrglyvalglyglnhisglnmet

450455460

trpalaalaglntyrtyrthrtyrlysargproargglntrpleuser

465470475480

seralaglyleuglyalametglypheglyleuproalaalaalagly

485490495

alaservalalaasnproglyvalthrvalvalaspileaspglyasp

500505510

glyserpheleumetasnileglngluleualaleuileargileglu

515520525

asnleuprovallysvalmetvalleuasnasnglnhisleuglymet

530535540

valvalglngluaspargphetyrlysalaasnargalahisthrtyr

545550555560

leuglyasnproglucysglusergluiletyrproaspphevalthr

565570575

ilealalysglypheasnileproalavalargvalthrlyslysser

580585590

gluvalargalaalailelyslysmetleugluthrproglyprotyr

595600605

leuleuaspileilevalprohisglngluhisvalleuprometile

610615620

proserglyglyalaphelysaspmetileleuaspglyaspglyarg

625630635640

thrvaltyr

<210>seqidno.2

<211>643

<212>prt

<213>水稻（oryzasatival.spp.indica）

<400>2

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151015

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