本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種抗體保存液及其制備方法。

背景技術(shù)：

抗體指機(jī)體的免疫系統(tǒng)在抗原的刺激下，由B淋巴細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。由于抗體能夠特異、穩(wěn)定地結(jié)合特異性抗原，因此被廣泛應(yīng)用。在抗體利用過(guò)程中，其保存得當(dāng)與否，直接影響抗體的活性和使用效果，對(duì)于多數(shù)抗體而言，通常進(jìn)行低溫保存，利用此方式保存，由于抗體進(jìn)行反復(fù)凍融，會(huì)導(dǎo)致抗體變性、多聚體產(chǎn)生，從而降低抗體活性。

如何提供一種可在室溫下長(zhǎng)期保存的抗體保存液，是抗體應(yīng)用領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題之一。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種抗體保存液及其制備方法，可在室溫下長(zhǎng)期保存抗體，且可使抗體保持較高的活性。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種抗體保存液，抗體保存液包括：緩沖液、4-6%海藻糖、0.005-0.01%疊氮鈉、30%-50%甘油、0.002-0.0025%第一多肽、0.002-0.0025%第二多肽，其中，緩沖液為pH7.0-7.5、40-100mmol/L Tris-HCl緩沖液，海藻糖、疊氮鈉、甘油、第一多肽、第二多肽的濃度均為質(zhì)量比，第一多肽的氨基酸序列為Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列為Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。

其中，抗體保存液包括：緩沖液、4.5-5.5%海藻糖、0.006-0.009%疊氮鈉、35%-45%甘油、0.0021-0.0024%第一多肽、0.0021-0.0024%第二多肽，緩沖液為pH7.0-7.5、45-90mmol/L Tris-HCl緩沖液，海藻糖、疊氮鈉、甘油、第一多肽、第二多肽的濃度均為質(zhì)量比，第一多肽的氨基酸序列為Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列為Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。

其中，抗體保存液包括：緩沖液、5%海藻糖、0.007%疊氮鈉、40%甘油、0.0022%第一多肽、0.0022%第二多肽，緩沖液為pH7.2、50mmol/L Tris-HCl緩沖液，海藻糖、疊氮鈉、甘油、第一多肽、第二多肽的濃度均為質(zhì)量比，第一多肽的氨基酸序列為Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列為Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。

其中，質(zhì)量比為g/L。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種抗體保存液的制備方法，包括以下步驟：在pH7.0-7.5、40-100mmol/L Tris-HCl緩沖液中加入4-6%海藻糖、0.005-0.01%疊氮鈉、30%-50%甘油、0.002-0.0025%第一多肽、0.002-0.0025%第二多肽，混合均勻，制備得到抗體保存液；其中，海藻糖、疊氮鈉、甘油、第一多肽、第二多肽的濃度均為質(zhì)量比，第一多肽的氨基酸序列為Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列為Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。

其中，抗體保存液包括：緩沖液、4.5-5.5%海藻糖、0.006-0.009%疊氮鈉、35%-45%甘油、0.0021-0.0024%第一多肽、0.0021-0.0024%第二多肽；緩沖液為pH7.0-7.5、45-90mmol/L Tris-HCl緩沖液。

其中，抗體保存液包括：緩沖液、5%海藻糖、0.007%疊氮鈉、40%甘油、0.0022%第一多肽、0.0022%第二多肽；緩沖液為pH7.2、50mmol/L Tris-HCl緩沖液。

其中，質(zhì)量比為g/L。

本發(fā)明的有益效果是：區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)的情況，本發(fā)明的抗體保存液包括：緩沖液、4-6%海藻糖、0.005-0.01%疊氮鈉、30%-50%甘油、0.002-0.0025%第一多肽、0.002-0.0025%第二多肽，其中，緩沖液為pH7.0-7.5、40-100mmol/L Tris-HCl緩沖液，第一多肽的氨基酸序列為Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列為Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。上述組分的保存液具有以下特點(diǎn)：可在室溫下長(zhǎng)期保存抗體，且抗體保持較高的活性，其中，室溫為26-29℃，保存期限為7年以上；第一多肽和第二多肽的加入，可防止保存液中的物質(zhì)水解、酶解，使保存液中的物質(zhì)保持穩(wěn)定，具體為，第一多肽用于防止水解，第二多肽用于防止蛋白酶解。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

抗體保存液的制備方法如下：在pH7.2、50mmol/L Tris-HCl緩沖液中加入5%海藻糖、0.007%疊氮鈉、40%甘油、0.0022%第一多肽、0.0022%第二多肽，混合均勻，制備得到抗體保存液。其中，海藻糖、疊氮鈉、甘油、第一多肽、第二多肽的濃度均為質(zhì)量比，具體為g/L；第一多肽的氨基酸序列為Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列為Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。

下面對(duì)不同方式保存的抗體的活性進(jìn)行檢測(cè)，以說(shuō)明本實(shí)施例抗體保存液的效用?？贵w保存方式有：采用實(shí)施例1制備的抗體保存液保存抗體；現(xiàn)有室溫抗體保存液保存抗體；現(xiàn)有低溫（-20℃）抗體保存液保存抗體。其中，抗體為生長(zhǎng)激素單克隆抗體，各保存方式均保存抗體1年。對(duì)于抗體活性的檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)方法具體為：將生長(zhǎng)激素抗原用含5ppm Proclin300的0.05mol/L、pH9.6的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液進(jìn)行稀釋?zhuān)垣@得包被液，其中，包被液中生長(zhǎng)激素抗原的濃度為10μg/ml；封閉液為含5.0g/L海藻糖、0.5%BSA的0.05mol/L、pH9.6的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液；在空白反應(yīng)板中加入包被液90μl/孔，37℃溫箱中孵育2h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入封閉液200μl/孔，25℃孵育過(guò)夜，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入上述不同方式保存的抗體90μl/孔，37℃溫箱中孵育1h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入酶標(biāo)抗體90μl/孔，37℃溫箱中孵育1h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入新鮮配制的顯色液90μl/孔，避光置37℃溫箱20min；加入硫酸終止反應(yīng)；在酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)處各孔的吸光值。其中，不同方式保存的抗體的濃度相同，抗體的稀釋度均為1:4000。

檢測(cè)結(jié)果：實(shí)施例1制備的抗體保存液保存的抗體的吸光值為1.9，現(xiàn)有室溫抗體保存液保存的抗體的吸光值為0.5，現(xiàn)有低溫（-20℃）抗體保存液保存的抗體的吸光值為1.1。

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，說(shuō)明在同等條件下，實(shí)施例1制備的抗體保存液保存的抗體的活性高于其他方式保存的抗體的活性。

實(shí)施例2

抗體保存液的制備方法如下：在pH7.2、50mmol/L Tris-HCl緩沖液中加入5.3%海藻糖、0.008%疊氮鈉、43%甘油、0.0023%第一多肽、0.0023%第二多肽，混合均勻，制備得到抗體保存液。其中，海藻糖、疊氮鈉、甘油、第一多肽、第二多肽的濃度均為質(zhì)量比，具體為g/L；第一多肽的氨基酸序列為Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro，第二多肽的氨基酸序列為Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。

下面對(duì)不同方式保存的抗體的活性進(jìn)行檢測(cè)，以說(shuō)明本實(shí)施例抗體保存液的效用。抗體保存方式有：采用實(shí)施例2制備的抗體保存液保存抗體；現(xiàn)有室溫抗體保存液保存抗體；現(xiàn)有低溫（-20℃）抗體保存液保存抗體。其中，抗體為生長(zhǎng)激素單克隆抗體，各保存方式均保存抗體1年。對(duì)于抗體活性的檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)方法具體為：將生長(zhǎng)激素抗原用含5ppm Proclin300的0.05mol/L、pH9.6的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液進(jìn)行稀釋?zhuān)垣@得包被液，其中，包被液中生長(zhǎng)激素抗原的濃度為10μg/ml；封閉液為含5.0g/L海藻糖、0.5%BSA的0.05mol/L、pH9.6的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液；在空白反應(yīng)板中加入包被液90μl/孔，37℃溫箱中孵育2h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入封閉液200μl/孔，25℃孵育過(guò)夜，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入上述不同方式保存的抗體90μl/孔，37℃溫箱中孵育1h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入酶標(biāo)抗體90μl/孔，37℃溫箱中孵育1h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入新鮮配制的顯色液90μl/孔，避光置37℃溫箱20min；加入硫酸終止反應(yīng)；在酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)處各孔的吸光值。其中，不同方式保存的抗體的濃度相同，抗體的稀釋度均為1:4000。

檢測(cè)結(jié)果：實(shí)施例2制備的抗體保存液保存的抗體的吸光值為1.95，現(xiàn)有室溫抗體保存液保存的抗體的吸光值為0.5，現(xiàn)有低溫（-20℃）抗體保存液保存的抗體的吸光值為1.1。

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，說(shuō)明在同等條件下，實(shí)施例2制備的抗體保存液保存的抗體的活性高于其他方式保存的抗體的活性。

對(duì)比例1

抗體保存液的制備方法如下：在pH7.2、50mmol/L Tris-HCl緩沖液中加入5%海藻糖、0.007%疊氮鈉、40%甘油、0.0022%第一多肽，混合均勻，制備得到抗體保存液。其中，海藻糖、疊氮鈉、甘油、第一多肽的濃度均為質(zhì)量比，具體為g/L；第一多肽的氨基酸序列為Val-Pro-Thr-Gly-Ala-Pro。

對(duì)比例2

抗體保存液的制備方法如下：在pH7.2、50mmol/L Tris-HCl緩沖液中加入5%海藻糖、0.007%疊氮鈉、40%甘油、0.0022%第二多肽，混合均勻，制備得到抗體保存液。其中，海藻糖、疊氮鈉、甘油、第二多肽的濃度均為質(zhì)量比，具體為g/L；第二多肽的氨基酸序列為Ile-Pro-Gly-Pro-Val-Gly。

下面對(duì)不同抗體保存液保存的抗體的活性進(jìn)行檢測(cè)，以說(shuō)明本發(fā)明抗體保存液的效用?？贵w保存液有：實(shí)施例1制備的抗體保存液；實(shí)施例2制備的抗體保存液；對(duì)比例1制備的抗體保存液；對(duì)比例2制備的抗體保存液。其中，保存的抗體為生長(zhǎng)激素單克隆抗體，各抗體保存液保存抗體1年。對(duì)于抗體活性的檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)方法具體為：將生長(zhǎng)激素抗原用含5ppm Proclin300的0.05mol/L、pH9.6的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液進(jìn)行稀釋?zhuān)垣@得包被液，其中，包被液中生長(zhǎng)激素抗原的濃度為10μg/ml；封閉液為含5.0g/L海藻糖、0.5%BSA的0.05mol/L、pH9.6的碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液；在空白反應(yīng)板中加入包被液90μl/孔，37℃溫箱中孵育2h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入封閉液200μl/孔，25℃孵育過(guò)夜，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入上述不同保存液保存的抗體90μl/孔，37℃溫箱中孵育1h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入酶標(biāo)抗體90μl/孔，37℃溫箱中孵育1h，倒去殘液，在洗板機(jī)上用洗滌液PBST洗滌3次，拍干；加入新鮮配制的顯色液90μl/孔，避光置37℃溫箱20min；加入硫酸終止反應(yīng)；在酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)處各孔的吸光值。其中，不同保存液保存的抗體的濃度相同，抗體的稀釋度均為1:4000。

檢測(cè)結(jié)果：實(shí)施例1制備的抗體保存液保存的抗體的吸光值為1.9，實(shí)施例2制備的抗體保存液保存的抗體的吸光值為1.95，對(duì)比例1制備的抗體保存液保存的抗體的吸光值為1.2，對(duì)比例2制備的抗體保存液保存的抗體的吸光值為1.26。

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，說(shuō)明在同等條件下，本發(fā)明制備的抗體保存液保存的抗體的活性高于其他抗體保存液保存的抗體的活性。

綜上所述，本發(fā)明抗體保存液具有以下特點(diǎn)：可在室溫下長(zhǎng)期保存抗體，且抗體保持較高的活性，其中，室溫為26-29℃，保存期限為7年以上；第一多肽和第二多肽的加入，可防止保存液中的物質(zhì)水解、酶解，使保存液中的物質(zhì)保持穩(wěn)定，具體為，第一多肽用于防止水解，第二多肽用于防止蛋白酶解。

以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專(zhuān)利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書(shū)內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專(zhuān)利保護(hù)范圍內(nèi)。

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<110> 廣州桂雨生物科技有限公司

<120> 一種抗體保存液及其制備方法

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<170> PatentIn version 3.5

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<213> 人工序列

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