本發(fā)明涉及基因工程
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及用于檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列的引物、試劑盒及方法。
背景技術(shù)：
：短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeats，STR)是一類(lèi)廣泛存在于人類(lèi)基因組中、核心序列為2～6個(gè)堿基的DNA串聯(lián)重復(fù)序列。短串聯(lián)重復(fù)序列在不同個(gè)體間具有極高的識(shí)別率，據(jù)統(tǒng)計(jì)，無(wú)關(guān)個(gè)體間12個(gè)STR位點(diǎn)完全相同的概率為10-14，同胞之間完全相同的概率為10-4，是識(shí)別不同個(gè)體DNA的有力指標(biāo)，且這種差異在遺傳過(guò)程中遵循孟德?tīng)栠z傳規(guī)律。因此，STR擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)被廣泛用于個(gè)體識(shí)別、親緣鑒定、群體遺傳學(xué)研究和嵌合率檢測(cè)等方面。隨著毛細(xì)管電泳設(shè)備的高度自動(dòng)化，大量的STR位點(diǎn)被各大人類(lèi)身份認(rèn)定的標(biāo)準(zhǔn)所定義(歐洲STR標(biāo)準(zhǔn)ESS，國(guó)際刑警組織采用的DNA標(biāo)準(zhǔn)基因座ISSOL，美國(guó)聯(lián)邦調(diào)查局的聯(lián)合DNA索引系統(tǒng)CODIS等)，越來(lái)越多的研究學(xué)者投入該領(lǐng)域?qū)ζ溥M(jìn)行開(kāi)發(fā)性研究。目前，國(guó)內(nèi)在進(jìn)行STR檢測(cè)時(shí)多依賴(lài)于進(jìn)口的STR試劑盒。大量的研究報(bào)道，短串聯(lián)重復(fù)序列基因座的遺傳多態(tài)性在種族之間存在一定的差異。有鑒于此，迫切需要研發(fā)出更多適用于中國(guó)人群并能夠與現(xiàn)代普遍使用的檢測(cè)儀器相適應(yīng)的STR檢測(cè)方法和試劑盒。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺陷，針對(duì)中國(guó)人群遺傳多態(tài)性高的基因座，重新設(shè)計(jì)了適于檢測(cè)中國(guó)人群短串聯(lián)重復(fù)序列的引物以及檢測(cè)方法。本發(fā)明的檢測(cè)方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、直觀，且實(shí)驗(yàn)成本低。為此，本發(fā)明一方面提供了一種用于檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列的引物組合，其由序列1-36所示的引物組成，分別針對(duì)基因座THO1、D21S11、D2S1338、PentaE、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Amelogenin、vWA、D8S1179、TPOX、FGA、D6S1043、D12S391、D10S1248、PentaD進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明檢測(cè)的短串聯(lián)重復(fù)序列除了包含了人類(lèi)遺傳多態(tài)性高的基因座之外，還包含了中國(guó)人群遺傳多態(tài)性高的基因座D2S1338、D12S391、D6S1043和D10S1248。這幾個(gè)基因座均屬于中國(guó)人群中高鑒別、高雜合度、高信息量的基因座。因此，本發(fā)明所設(shè)計(jì)的檢測(cè)方法更適用于中國(guó)人群，有利于該技術(shù)的推廣與應(yīng)用。除此之外，本發(fā)明選擇的STR基因座的串聯(lián)重復(fù)單位為四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)，能夠有效降低滑移峰比例，獲得的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性更高。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，該引物組合進(jìn)一步由第1-4組引物組成，其中第1組由序列1-8所示的引物組成，針對(duì)基因座THO1、D21S11、D2S1338、PentaE進(jìn)行檢測(cè)，第2組由序列9-18所示的引物組成，針對(duì)基因座D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO進(jìn)行檢測(cè)，第3組由序列19-28所示的引物組成，針對(duì)基因座Amelogenin、vWA、D8S1179、TPOX、FGA進(jìn)行檢測(cè)，第4組由序列29-36所示的引物組成，針對(duì)基因座D6S1043、D12S391、D10S1248、PentaD進(jìn)行檢測(cè)。在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，檢測(cè)每個(gè)基因座的引物對(duì)中有一條引物進(jìn)行熒光染料標(biāo)記，以用于毛細(xì)管電泳檢測(cè)，進(jìn)而得出其等位基因型別和大小。同時(shí)，上述4組引物分別采用4種不同顏色的熒光染料進(jìn)行標(biāo)記，分別標(biāo)記于引物的5’端。在本發(fā)明更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，第1組引物采用藍(lán)色熒光染料標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為6-FAM，第2組引物采用綠色熒光染料標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為HEX，第3組引物采用黃色熒光染料標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為T(mén)AMRA，第4組引物采用紅色熒光染料標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為ROX，同時(shí)選用橙色熒光標(biāo)記作為內(nèi)標(biāo)，熒光標(biāo)記物為SIZ。由此，每組擴(kuò)增后的產(chǎn)物和橙色熒光標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)混合后即可在同一毛細(xì)管中進(jìn)行電泳，實(shí)現(xiàn)了對(duì)18個(gè)STR基因座同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)分析。采用6-FAM、HEX、TAMRA、ROX和SIZ五種熒光標(biāo)記物進(jìn)行熒光標(biāo)記，熒光素標(biāo)記技術(shù)成熟，成本低。但是，本發(fā)明采用的熒光標(biāo)記物并不限于此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)實(shí)際情況選擇其他可替換的熒光標(biāo)記物。在本發(fā)明提供的檢測(cè)方法中，18個(gè)STR基因座采用的特異性擴(kuò)增引物序列信息如表1所示。表1、本發(fā)明檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列的引物情況表在本發(fā)明提供的檢測(cè)方法中，可以將18個(gè)基因座的所有引物混合在一起，在一個(gè)PCR反應(yīng)中完成這18個(gè)基因座等位基因的復(fù)合擴(kuò)增。因此，該復(fù)合擴(kuò)增體系操作簡(jiǎn)單、效率高，成本低，更有利于該方法的推廣與應(yīng)用。此外，在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，每個(gè)引物的濃度為0.05-0.4μmol/L，更加優(yōu)選為0.06-0.2μmol/L。在一些具體的實(shí)施方式中，該18個(gè)基因座的引物濃度如表2所示。表2、本發(fā)明檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列的引物濃度表本發(fā)明另一方面提供了一種用于檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列的試劑盒，其包含本發(fā)明所述的引物組合。本發(fā)明另一方面提供了本發(fā)明所述的引物組合在制備用于檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列的試劑盒中的應(yīng)用。本發(fā)明再一方面提供了本發(fā)明所述的引物組合，或者本發(fā)明所述的試劑盒在檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列中的應(yīng)用。本發(fā)明最后一方面提供了一種檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列的方法，其包含以下步驟：1、獲取待測(cè)樣品DNA。2、采用本發(fā)明所述的引物組合，或采用本發(fā)明所述的試劑盒，以步驟1中獲取的DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，優(yōu)選采用熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行擴(kuò)增。3、對(duì)步驟2中獲取的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)和分型分析，獲得待測(cè)樣品各基因座的型別，其中優(yōu)選采用毛細(xì)管電泳檢測(cè)。在本發(fā)明提供的檢測(cè)方法中，擴(kuò)增所采用的PCR擴(kuò)增體系包括緩沖體系。該緩沖體系包括：KCl，Tris-HCl，MgCl2、dNTP、甘油和吐溫20，其中dNTP為四種脫氧核糖核苷酸(dATP、dTTP、dCTP和dGTP)等摩爾混合物。該擴(kuò)增方法中所用的DNA聚合酶為T(mén)aqDNA聚合酶，可選擇熱啟動(dòng)DNA聚合酶、抗體封閉修飾和/或化學(xué)修飾的DNA聚合酶。在本發(fā)明進(jìn)一步提供的實(shí)施例中，本發(fā)明擴(kuò)增所用的PCR擴(kuò)增體系包括如下含量的各成分：50mmol/LKCl，20mmol/LTris-HCl，2.5mmol/LMgCl2、0.3mmol/LdNTP(每種脫氧核糖核苷酸的濃度均為0.3mmol/L)、3.2％甘油和0.07％吐溫20、100units/mLTaqDNA聚合酶、0.05μmol/L-0.4μmol/L的引物。擴(kuò)增體積為10μL-50μL，優(yōu)選為10μL-25μL。在本發(fā)明提供的檢測(cè)方法中，PCR擴(kuò)增所采用的程序分為三個(gè)步驟：第一步：95℃，2min-5min；第二步：95℃，20s；58℃-60℃，20s-2min30s；68℃-72℃，30s-2min；25-30個(gè)循環(huán)；第三步：68℃-72℃，25min-45min。在本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明PCR擴(kuò)增所用的程序具體為：第一步：95℃，5min；第二步：95℃，20s；60℃，2min；68℃，1min；25個(gè)循環(huán)；第三步：68℃，25min。在本發(fā)明提供的檢測(cè)方法中，當(dāng)采用帶有熒光標(biāo)記的引物進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增獲得的產(chǎn)物也帶有熒光標(biāo)記物。在毛細(xì)管電泳過(guò)程中，所帶有的熒光標(biāo)記物可以在激光激發(fā)下發(fā)出熒光信號(hào)，該熒光信號(hào)可被測(cè)序儀(如3730、3730XL等)或遺傳分析儀(如3130等)識(shí)別，并收集，可以應(yīng)用于現(xiàn)代普遍使用的檢測(cè)儀器中。由上述描述可知，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具備如下優(yōu)點(diǎn)。1、本發(fā)明提供的檢測(cè)方法所針對(duì)的短串聯(lián)重復(fù)序列包含了18個(gè)基因座，其選取了中國(guó)人群遺傳多態(tài)性高的基因座，該檢測(cè)方法更適用于中國(guó)人群，有利于該技術(shù)的推廣與應(yīng)用。2、本發(fā)明選擇的STR基因座的串聯(lián)重復(fù)單位為四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)，能夠有效降低滑移峰比例，獲得的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性更高。3、本發(fā)明提供的檢測(cè)方法可采用熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)進(jìn)行擴(kuò)增，獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物可在同一毛細(xì)管中進(jìn)行電泳，實(shí)現(xiàn)了對(duì)18個(gè)STR基因座同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)分析，該復(fù)合擴(kuò)增體系操作簡(jiǎn)單、效率高，成本低，更有利于該方法的推廣與應(yīng)用。4、本發(fā)明提供的檢測(cè)方法可采用FAM、HEX、TAMRA、ROX和SIZ熒光標(biāo)記物進(jìn)行熒光標(biāo)記，熒光素標(biāo)記技術(shù)成熟，成本低。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法特異性好，可用于個(gè)體識(shí)別、親緣鑒定、群體遺傳學(xué)研究等定性分析，也可用于造血干細(xì)胞移植后嵌合率檢測(cè)等定性分析。綜上所述，本發(fā)明的發(fā)明人通過(guò)大量的創(chuàng)造性勞動(dòng)確定了檢測(cè)方法中采用的18個(gè)STR基因座對(duì)應(yīng)的引物，并且對(duì)其進(jìn)行分組和組合，以滿(mǎn)足同時(shí)檢測(cè)一個(gè)樣本中18個(gè)STR基因座信息。同時(shí)，本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的探索確定了最佳的引物配比、擴(kuò)增體系和擴(kuò)增條件，獲得的檢測(cè)方法特異性好、分型結(jié)果準(zhǔn)確，可用于定性和定量分析。附圖說(shuō)明圖1：實(shí)施例1中第一組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果圖。圖2：實(shí)施例1中第二組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果圖。圖3：實(shí)施例1中第三組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果圖。圖4：實(shí)施例1中第四組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果圖。圖5：實(shí)施例2中第一組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果圖。圖6：實(shí)施例2中第二組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果圖。圖7：實(shí)施例2中第三組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果圖。圖8：實(shí)施例2中第四組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果圖。具體實(shí)施方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，旨在用于說(shuō)明本發(fā)明而非限定本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也同樣落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明提供的短串聯(lián)重復(fù)序列的檢測(cè)方法及其試劑盒中所用到的引物和原料均可由市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)獲得。為使本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明如下。實(shí)施例1：人基因組DNA樣本18個(gè)STR基因座檢測(cè)1本實(shí)施例采用磁珠法提取DNA，獲得人基因組DNA樣本；對(duì)獲得的DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中采用的引物熒光標(biāo)記分別為6-FAM、HEX、TAMRA和ROX；將所得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)；分型分析。同時(shí)，聯(lián)合Life公司的STR檢測(cè)試劑盒和Sanger測(cè)序方法確定所得人基因組DNA樣本中18個(gè)STR基因座的型別。具體如下。1、引物組合物存儲(chǔ)液的配置按照表3所示的配方配置四組5×引物儲(chǔ)存液。表3、四組5×引物儲(chǔ)存液的配方表2、PCR擴(kuò)增PCR擴(kuò)增時(shí)，一個(gè)DNA樣本分四個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增，四個(gè)反應(yīng)體系分別擴(kuò)增四組不同引物儲(chǔ)存液所對(duì)應(yīng)的STR基因座，這四個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)體系除了所用引物不同之外，其他完全相同。PCR擴(kuò)增體系如表4所示。表4、PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系具體成分表組分含量人基因組DNA2ng5×引物儲(chǔ)存液2μL5×緩沖液2μLTaqDNA聚合酶1U水補(bǔ)足至10μL其中5×緩沖液中包含如下含量的各個(gè)組分：250mmol/LKCl，100mmol/LTris-HCl，12.5mmol/LMgCl2、1.5mmol/LdNTP(每種脫氧核糖核苷酸的濃度均為1.5mmol/L)、16％甘油和0.35％吐溫20。PCR擴(kuò)增程序分為三個(gè)步驟：第一步：95℃，5min；第二步：95℃，20s；60℃，30s；68℃，45s；27個(gè)循環(huán)；第三步：68℃，25min，4℃保存。3、毛細(xì)管電泳將步驟2所得擴(kuò)增產(chǎn)物按照第一組引物擴(kuò)增產(chǎn)物、第二組引物擴(kuò)增產(chǎn)物、第三組引物擴(kuò)增產(chǎn)物和第四組引物擴(kuò)增產(chǎn)物等比混合得擴(kuò)增產(chǎn)物混合物。將所得擴(kuò)增產(chǎn)物混合物與甲酰胺、SIZ標(biāo)記的分子量?jī)?nèi)標(biāo)按照1μL:8.8μL:0.2μL進(jìn)行混合加樣于96孔板中，于95℃變性3min，冰浴3min之后，進(jìn)行毛細(xì)管電泳，所使用的儀器為ABI3730XLDNA測(cè)序儀，收集數(shù)據(jù)。4、分型分析用片段分析軟件GeneMapper分析步驟3中所收集到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，得到檢測(cè)樣本的分型數(shù)據(jù)。結(jié)果如說(shuō)明書(shū)附圖1-4所示，其中附圖1為第一組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果，峰1和峰2為T(mén)HO1基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰3和峰4為D21S11基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰5為D2S1338基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰6和峰7為PentaE基因座的等位基因擴(kuò)增峰。附圖2為第二組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果，其中峰8和峰9為D5S818基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰10和峰11為D13S317基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰12和峰13為D7S820基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰14和峰15為D16S539基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰16為CSF1PO基因座的等位基因擴(kuò)增峰。附圖3為第三組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果，其中峰17為Amelogenin基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰18和峰19為vWA基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰20和峰21為D8S1179基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰22和峰23為T(mén)POX基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰24和峰25為FGA基因座的等位基因擴(kuò)增峰。附圖4為第四組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果，其中峰26和峰27為D6S1043基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰28和峰29為D12S391基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰30和峰31為D10S1248基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰32和峰33為PentaD基因座的等位基因擴(kuò)增峰。從附圖1-4中可知，本實(shí)施例提供的檢測(cè)方法可特異性擴(kuò)增出18個(gè)STR基因座所對(duì)應(yīng)的等位基因，在目的片段區(qū)域沒(méi)有非特異性條帶，說(shuō)明本發(fā)明提供的檢測(cè)方法特異性好。根據(jù)該檢測(cè)結(jié)果，獲得該DNA樣本的各個(gè)STR基因座的等位基因的擴(kuò)增片段大小，進(jìn)而可獲得各個(gè)STR基因座的等位基因型別，將所得等位基因型別與實(shí)際等位基因型別對(duì)比，兩者一致，說(shuō)明本發(fā)明提供的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性良好。實(shí)施例2：人基因組DNA樣本18個(gè)STR基因座檢測(cè)2本實(shí)施例采用磁珠法提取DNA，獲得人基因組DNA樣本；對(duì)獲得的DNA樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中采用的引物熒光標(biāo)記分別為6-FAM、HEX、TAMRA和ROX；將所得PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)；分型分析。同時(shí)，聯(lián)合Life公司的STR檢測(cè)試劑盒和Sanger測(cè)序方法確定所得人基因組DNA樣本中18個(gè)STR基因座的型別。具體如下。1、引物組合物存儲(chǔ)液的配置按照表5所示的配方配置5×引物儲(chǔ)存液。表5、5×引物儲(chǔ)存液的配方表2、PCR擴(kuò)增PCR擴(kuò)增時(shí)，一個(gè)DNA樣本的18個(gè)STR位點(diǎn)在一個(gè)擴(kuò)增體系進(jìn)行擴(kuò)增，其擴(kuò)增體系如表6所示。表6、PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系具體成分表組分含量人基因組DNA4ng5×引物儲(chǔ)存液4μL5×緩沖液4μLTaqDNA聚合酶2U水補(bǔ)足至20μL其中5×緩沖液中包含如下含量的各個(gè)組分：250mmol/LKCl，100mmol/LTris-HCl，12.5mmol/LMgCl2、1.5mmol/LdNTP(每種脫氧核糖核苷酸的濃度均為1.5mmol/L)、16％甘油和0.35％吐溫20。PCR擴(kuò)增程序分為三個(gè)步驟：第一步：95℃，5min；第二步：95℃，20s；60℃，2min；68℃，1min；27個(gè)循環(huán)；第三步：68℃，25min，4℃保存。3、毛細(xì)管電泳將步驟2所得擴(kuò)增產(chǎn)物與甲酰胺、SIZ標(biāo)記的分子量?jī)?nèi)標(biāo)按照1μL:8.8μL:0.2μL進(jìn)行混合加樣于96孔板中，于95℃變性3min，冰浴3min之后，進(jìn)行毛細(xì)管電泳，所使用的儀器為ABI3730XLDNA測(cè)序儀，收集數(shù)據(jù)。4、分型分析用片段分析軟件GeneMapper分析步驟3中所收集到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，得到檢測(cè)樣本的分型數(shù)據(jù)。結(jié)果如說(shuō)明書(shū)附圖5-8所示，其中附圖5為第一組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果，其中峰1為T(mén)HO1基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰2和峰3為D21S11基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰4和峰5為D2S1338基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰6和峰7為PentaE基因座的等位基因擴(kuò)增峰；附圖6為第二組引物引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果，其中峰8和峰9為D5S818基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰10為D13S317基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰11為D7S820基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰12和峰13為D16S539基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰14和峰15為CSF1PO基因座的等位基因擴(kuò)增峰；附圖7為第三組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果，其中峰16為Amelogenin基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰17和峰18為vWA基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰19和峰20為D8S1179基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰21和峰22為T(mén)POX基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰23和峰24為FGA基因座的等位基因擴(kuò)增峰；附圖8為第四組引物擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果，其中峰25和峰26為D6S1043基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰27為D12S391基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰28為D10S1248基因座的等位基因擴(kuò)增峰，峰29為PentaD基因座的等位基因擴(kuò)增峰。從附圖5-8中可知，本實(shí)施例提供的檢測(cè)方法可特異性擴(kuò)增出18個(gè)STR基因座所對(duì)應(yīng)的等位基因，在目的片段區(qū)域沒(méi)有非特異性條帶，說(shuō)明本發(fā)明提供的檢測(cè)方法特異性好。根據(jù)該檢測(cè)結(jié)果，獲得該DNA樣本的各個(gè)STR基因座的等位基因的擴(kuò)增片段大小，進(jìn)而可獲得各個(gè)STR基因座的等位基因型別，將所得等位基因型別與實(shí)際等位基因型別對(duì)比，兩者一致，說(shuō)明本發(fā)明提供的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性良好。并且本實(shí)施例提供的檢測(cè)方法實(shí)現(xiàn)了18個(gè)基因座的復(fù)合擴(kuò)增，操作簡(jiǎn)便，成本低，效率高，適用于應(yīng)用與推廣。序列表<110>上海荻碩貝肯生物科技有限公司<120>用于檢測(cè)短串聯(lián)重復(fù)序列的引物、試劑盒及方法<160>36<170>PatentInversion3.3<210>1<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>1gtgattcccattggcctgttc21<210>2<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>2attcctgtgggctgaaaagctc22<210>3<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>3atatgtgagtcaattccccaag22<210>4<211>26<212>DNA<213>人工序列<400>4tgtattagtcaatgttctccagagac26<210>5<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>5tcctactggcccataatcca20<210>6<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>6tccctgtctcaccccttttc20<210>7<211>26<212>DNA<213>人工序列<400>7attaccaacatgaaagggtaccaata26<210>8<211>33<212>DNA<213>人工序列<400>8tgggttattaattgagaaaactccttacaattt33<210>9<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>9ggtgattttcctctttggtatcc23<210>10<211>26<212>DNA<213>人工序列<400>10agccacagtttacaacatttgtatct26<210>11<211>26<212>DNA<213>人工序列<400>11attacagaagtctgggatgtggagga26<210>12<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>1ggcagcccaaaaagacaga19<210>13<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>13atgttggtcaggctgactatg21<210>14<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>14gattccacatttatcctcattgac24<210>15<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>15gggggtctaagagcttgtaaaaag24<210>16<211>29<212>DNA<213>人工序列<400>16gtttgtgtgtgcatctgtaagcatgtatc29<210>17<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>17ccggaggtaaaggtgtcttaaagt24<210>18<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>18atttcctgtgtcagaccctgtt22<210>19<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>19gccctgggctctgtaaagaatagt24<210>20<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>20atcagagcttaaactgggaagctg24<210>21<211>33<212>DNA<213>人工序列<400>21gccctagtggatgataagaataatcagtatgtg33<210>22<211>30<212>DNA<213>人工序列<400>22ggacagatgataaatacataggatggatgg30<210>23<211>32<212>DNA<213>人工序列<400>23attgcaacttatatgtatttttgtatttcatg32<210>24<211>28<212>DNA<213>人工序列<400>24accaaattgtgttcatgagtatagtttc28<210>25<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>25gcacagaacaggcacttagg20<210>26<211>18<212>DNA<213>人工序列<400>26cgctcaaacgtgaggttg18<210>27<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>27ggctgcagggcataacatta20<210>28<211>24<212>DNA<213>人工序列<400>28attctatgactttgcgcttcagga24<210>29<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>29caaggatgggtggatcaata20<210>30<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>30ttgtatgagccacttcccat20<210>31<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>31aacaggatcaatggatgcat20<210>32<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>32tggcttttagacctggactg20<210>33<211>20<212>DNA<213>人工序列<400>33actcactgccttgaacataa20<210>34<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>34tgctaaaacctctgtatcccac22<210>35<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>35gaaggtcgaagctgaagtg19<210>36<211>26<212>DNA<213>人工序列<400>36attagaattctttaatctggacacag26當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3