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      一種蛭弧菌微生態(tài)制劑的發(fā)酵制備方法與流程

      文檔序號:12056286閱讀:來源:國知局

      技術特征:

      1.一種蛭弧菌微生態(tài)制劑的發(fā)酵制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

      1)使用大腸桿菌作為宿主,接入發(fā)酵培養(yǎng)基中;

      2)接種蛭弧菌菌液至發(fā)酵罐中進行培養(yǎng);

      3)在發(fā)酵周期中流加大腸桿菌;

      4)固液分離去除底部大腸桿菌,取上層澄清液即得蛭弧菌生態(tài)制劑。

      2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟1)的發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖1~20g/L;胰蛋白胨1~20g/L;氯化鈉1~20g/L;氯化鈣0.1~2g/L,pH為6.5~8.0之間。

      3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟1)的發(fā)酵培養(yǎng)基的大腸桿菌CFU為1010~1018/ml之間。

      4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟2)的蛭弧菌菌液PFU為106~108/ml,其來源為:雙層平板,下層為1.5%瓊脂平板,上層平板為葡萄糖1~20g/L;胰蛋白胨1~20g/L;氯化鈉1~20g/L;氯化鈣0.1~2g/L,瓊脂15~20g/L,pH為6.5~8.0之間,取100μl宿主菌液(CFU為105~1010/ml)與100μl蛭弧菌(PFU為103~105/ml)混合加入上層平板進行篩選,挑取噬菌斑,使用大腸桿菌進行擴培,最后制備得蛭弧菌菌液(PFU為106~108/ml),接種體積為發(fā)酵液體積的1~10%之間。

      5.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟2)中,發(fā)酵罐培養(yǎng)條件為:溫度為25~32℃,轉速為50~200rpm。

      6.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中在發(fā)酵周期6~16小時內,流加大腸桿菌,所述大腸桿菌CFU為1010~1018/ml之間,流加時間為2~6小時之間,流加總發(fā)酵體積1~10%的量。

      7.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟3)中發(fā)酵周期為18~24小時。

      8.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,所述步驟4)中固液分離的方法為將所得的發(fā)酵液,在2~15℃溫度下靜置12~24h,使得大腸桿菌沉降于底部,取上層澄清部分,將澄清液使用超濾膜進行過濾,膜孔徑為0.5~1.5μm,即得蛭弧菌生態(tài)制劑。

      9.一種根據權利要求1~8任意一項所述的方法制備的蛭弧菌微生態(tài)制劑。

      10.根據權利要求9所述的蛭弧菌微生態(tài)制劑,其特征在于,所述蛭弧菌微生態(tài)制劑的效價為1010~1014pfu/ml。

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