本發(fā)明涉及一種3-酰胺基-4-(2’-烷氧基-4-聯(lián)苯基)丁酸衍生物及其制備方法、藥物組合物和用途。該化合物具有NEP抑制活性，可以作為NEP抑制劑。

背景技術(shù)：

NEP(neutral endopeptidase，又稱Neprilysin)是M13鋅依賴的金屬蛋白酶家族的一種II型跨膜糖蛋白，也稱腦啡肽酶，其上帶有的鋅原子處于酶的活性部位。NEP分子量約為97kDa，由750個(gè)氨基酸組成，包含一個(gè)信號(hào)肽和兩個(gè)親水結(jié)構(gòu)域，胞內(nèi)片段有26個(gè)氨基酸，胞外片段有700個(gè)氨基酸。NEP可作用于多肽的氨基端，使多肽鏈水解。自從1974年首次被定義以來(lái)，NEP作為一種神經(jīng)肽的降解酶，已被發(fā)現(xiàn)廣泛分布于內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腎臟上皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞，其還存在于肺、腸、腎上腺、腦等，并具有眾多組織特異性功能。鈉利尿肽主要被NEP降解，而且NEP還能催化腎上腺髓質(zhì)和緩激肽。NEP選擇性抑制劑抑制NEP的活性，可以提高鈉利尿肽及緩激肽的濃度，使血管擴(kuò)張，心排出量增加，醛固酮水平下降并抑制RAAS(腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng))，降低心臟前、后負(fù)荷，延緩心肌重構(gòu)，改善心力衰竭患者的心功能。

近十年NEP的雙重抑制劑的研究非常多，包括NEP/ACE雙抑制劑、NEP/ARB(血管緊張肽受體)的雙抑制劑、NEP/ECE(內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶)的雙抑制劑及NEP/APN(氨肽酶N)雙抑制劑。NEP抑制劑單獨(dú)使用或聯(lián)合用藥有望成為治療高血壓/心衰的新式武器，但目前還沒(méi)有一種基于NEP抑制機(jī)理的藥物面世。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種3-酰胺基-4-(2’-烷氧基-4-聯(lián)苯基)丁酸衍生物，這些化合物具有NEP抑制活性，可以作為NEP抑制劑，可以用來(lái)治療相關(guān)疾病，例如高血壓，心衰，肺動(dòng)脈高壓以及腎臟疾病。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題而采用的技術(shù)方案是提供一種下述通式(I)所示的3-酰胺基-4-(2'-烷氧基-4-聯(lián)苯基)丁酸衍生物及其外消旋體、對(duì)應(yīng)異構(gòu)體、非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體、手性光學(xué)純異構(gòu)體：

其中R₁為氫、C₁-C₈烷基、C₃-C₆環(huán)烷基、堿金屬、堿土金屬、R₅為氫、C₁-C₃烷基或C₃-C₆環(huán)烷基；R₆為C₁-C₆烷基、C₃-C₆環(huán)烷基；R₂為氫原子、鹵素原子、C₃-C₆環(huán)烷基、C₁-C₆的烷基；R₃為氫或氟；R₄為

進(jìn)一步地，所述衍生物為4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯；(R)-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸；4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯；4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸；4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯；(R,R)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯；(R,S)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯；4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-異丙氧基碳氧基乙酯；4-(2'-二氟甲氧基-5'-氯-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯；4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-異丙氧基碳氧基乙酯；(R)-氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氯-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸-環(huán)己氧基碳氧基乙酯；(R)-3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯；(R)-3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸-異丙氧基碳氧基乙酯；(R)-3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸乙酯；3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸-環(huán)己氧基碳氧基乙酯；3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸1-異丙氧基碳氧基-乙基酯；3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸異丙氧基碳氧基甲酯；3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸異丙氧基碳氧基甲酯；(R)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)丁酸乙酯；4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)丁酸乙酯；4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)-丁酸-5-基-2-羰基-[1,3]二噁唑-4-基甲酯；(R)-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)-丁酸-5-甲基-2-羰基-[1,3]二噁唑-4-基甲酯；或(R)-4-(5'-氟-2'-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題而采用的另一技術(shù)方案是提供一種藥物組合物，含有治療有效量的上述的3-酰胺基-4-(2'-烷氧基-4-聯(lián)苯基)丁酸衍生物、藥學(xué)上可接受的載體以及藥學(xué)上可接受的鹽。

進(jìn)一步地，所述藥物組合物中含有血管緊張素受體阻滯劑或血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑。

進(jìn)一步地，所述血管緊張素受體阻滯劑為纈沙坦、奧美沙灘或洛沙坦；所述血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑為依那普利或賴諾普利。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題而采用的第三種技術(shù)方案是提供一種4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯的制備方法，包括如下步驟：(1)將(R)-4-(4-溴-苯基)-3-叔丁氧基羰基氨基丁酸乙酯和2-二氟甲氧基苯硼酸溶于甲苯，加入碳酸鈉、水和PdCl₂(dppf)₂，反應(yīng)體系在氮?dú)夥諊录訜峄亓?，冷卻至室溫后分液，水相經(jīng)乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、蒸出濾液，殘留物經(jīng)層析純化得到(R)-3-{[5-(叔-丁基-二甲基-硅烷氧基)-[1,3,4]噁二唑-2-羰基]-氨基}-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸；(2)將(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸乙酯溶于二氯甲烷，冰水冷卻下滴加三氟乙酸，攪拌后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸出溶劑，殘留物溶于二氯甲烷，加入三乙胺，冰水冷卻下滴加草酰氯單乙酯，滴加完畢室溫?cái)嚢韬蠹尤腼柡吞妓釟溻c水溶液，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，用無(wú)水硫酸鈉干燥、過(guò)濾、蒸出濾液，殘留物經(jīng)層析純化得到(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(乙氧基草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯；(3)將所述步驟(2)得到的(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(乙氧基草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯溶于無(wú)水乙醇，加入水合肼，攪拌后加入冷水，攪拌后析出白色固體并過(guò)濾，收集固體干燥后得到(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(肼基<聯(lián)氨基>草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯；(4)將步驟(3)得到的(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(肼基<聯(lián)氨基>草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯在室溫下溶于二氯甲烷，加入羰基二咪唑，反應(yīng)體系在室溫下攪拌，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸出溶劑，殘留物經(jīng)柱層析純化得到(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題而采用的第四種技術(shù)方案是提供一種3-酰胺基-4-(2’-烷氧基-4-聯(lián)苯基)丁酸衍生物，在制備治療或預(yù)防高血壓，肺動(dòng)脈高壓，心衰以及腎臟疾病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明對(duì)比現(xiàn)有技術(shù)有如下的有益效果：本發(fā)明提供的3-酰胺基-4-(2’-烷氧基-4-聯(lián)苯基)丁酸衍生物及其制備方法、藥物組合物和用途，3-酰胺基-4-(2’-烷氧基-4-聯(lián)苯基)丁酸衍生物具有NEP抑制活性，可以作為NEP抑制劑，可以用來(lái)制備治療相關(guān)疾病的藥物，例如高血壓，心衰，肺動(dòng)脈高壓以及腎臟疾病。

具體實(shí)施方式

下面實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，但并不以任何方式限制本發(fā)明。

實(shí)施例1：4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯

第一步：(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸乙酯的制備

(R)-4-(4-溴-苯基)-3-叔丁氧基羰基氨基丁酸乙酯(3.58g,10mmol)和2-二氟甲氧基苯硼酸(2.82g,15mmol)溶于30毫升甲苯，加入碳酸鈉(2.5g)，加入25毫升水，加入PdCl₂(dppf)₂(500mg)，反應(yīng)體系在氮?dú)夥諊录訜峄亓?0小時(shí)，冷卻至室溫，分液，水相經(jīng)乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，蒸出濾液，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化得淺黃色固體(3.08g)。

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ7.58(s,1H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.03(s,0.5H),6.81-7.18(m,3H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),4.12(q,J＝7.2Hz,2H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.41(s,9H),1.38(t,J＝6.8Hz,3H)；LCMS:t_R＝3.27min,450.34[M+H⁺].

第二步：(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(乙氧基草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯的制備

(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸乙酯(2g，4.4mmol)溶于10毫升二氯甲烷，冰水冷卻下滴加2毫升三氟乙酸，室溫?cái)嚢?小時(shí)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸出溶劑，殘留物溶于10毫升二氯甲烷，加入1毫升三乙胺，冰水冷卻下滴加草酰氯單乙酯(0.8g,5.8mmol)，滴加完畢室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入10毫升飽和碳酸氫鈉水溶液，攪拌10分鐘，分液，水相用10毫升二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，蒸出濾液，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化得到(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(乙氧基草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯(1.96g)。

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ7.53(s,1H),7.43(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.03(s,0.5H),6.81-7.18(m,3H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),4.32(q,J＝7.2Hz),4.17-4.27(m,2H),3.78(s,3H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.38(t,J＝6.8Hz,3H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H)；LCMS:t_R＝4.07min,450.34[M+H⁺].

第三步：(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(肼基<聯(lián)氨基>草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯的制備

(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(乙氧基草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯(6.12g,13.6mmol)溶于10毫升無(wú)水乙醇，加入水合肼(1ml,85％)，反應(yīng)體系在室溫下攪拌1小時(shí)，加入5毫升冷水，攪拌10分鐘，析出的白色固體過(guò)濾，收集固體干燥后得到(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(肼基<聯(lián)氨基>草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯(5.26g)。

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ7.42(s,1H),7.23(d,J＝8.4Hz,2H),7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.81-7.18(m,3H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),4.17-4.27(m,2H),3.78(s,3H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H)；LCMS:t_R＝2.03min,436.04[M+H⁺].

第四步：(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯的制備

(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(肼基<聯(lián)氨基>草酰<乙二酰>-氨基)丁酸乙酯(4.35g,10mmol)在室溫下溶于50毫升二氯甲烷，加入羰基二咪唑(2.4g,14mmol)，反應(yīng)體系在室溫下攪拌過(guò)夜，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸出溶劑，殘留物經(jīng)柱層析純化得到(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯(4.05g)。

¹HNMR(MeOH-d₄,400MHz)δ7.44(s,1H),7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.97(s,1H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),4.17-4.27(m,2H),3.78(s,3H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H)；LCMS:t_R＝2.23min,462.14[M+H⁺].

實(shí)施例2:(R)-4-(5’-氯-2’-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸

(R)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯(4.05g,8.8mmol)溶于25毫升95％乙醇，加入氫氧化鈉固體(1.5g)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，蒸出乙醇，加入5毫升水，加入3N硫酸調(diào)節(jié)pH值在1-2，直接用反相柱層析純化(乙腈/水體系)得到淺黃色固體(3.483g)。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.85(s,1H),7.54(s,1H),7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.97(s,1H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),3.78(m,3H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H)；LCMS:t_R＝2.03min,422.18[M-H]^-.

實(shí)施例3:4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯

制備方法同實(shí)施例1。

¹HNMR(MeOH-d₄,400MHz)δ7.34(s,1H),7.27(s,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),4.17-4.27(m,2H),3.78(s,3H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H)；LCMS:t_R＝2.30min,480.04[M+H⁺].

實(shí)施例4:4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸

制備方法同實(shí)施例2。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ12.03(s,1H),7.44(s,1H),7.27(s,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),3.78(m,3H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H)；LCMS:t_R＝2.13min,450.18[M-H]^-.

實(shí)施例5:4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯

第一步：(R)-3-{[5-(叔-丁基-二甲基-硅烷氧基)-[1,3,4]噁二唑-2-羰基]-氨基}-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸的制備

(R)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸(2.856g，6.3mmol)與DMAP(85mg)溶于10毫升二氯甲烷，加入0.5毫升三乙胺，加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.5g)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，加入10毫升水，攪拌10分鐘，分液，水相用10毫升二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干濾液的淺黃色油狀粘稠液體，此液體未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下步反應(yīng)。

第二步：4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯的制備

(R)-3-{[5-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-[1,3,4]噁二唑-2-羰基]-氨基}-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸(0.865g,1.53mmol)溶于15毫升乙腈，加入碳酸鉀(800mg)和碘化鉀(1.2g)，加入1-氯-乙基酯碳酸環(huán)己酯(1ml)，室溫下攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干濾液，殘留物經(jīng)柱層析純化得到淺黃色粘稠油狀液體(0.803g)。將此油狀液體溶于10毫升四氫呋喃，室溫下加入TBAF(3ml,1M in THF)，攪拌30分鐘，蒸出溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化得到淺黃色固體(563mg)。

實(shí)施例6:(R,R)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯

由實(shí)施例5(500mg)經(jīng)手性柱層析拆分得到實(shí)施例6(338mg)。手性柱型號(hào)：CHIRALPAK AD-H；手性柱規(guī)格：0.46cm X 15cm；流動(dòng)相：石油醚/異丙醇(80/20,體積比)，異丙醇中添加5％的乙酸；流速：2ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.44(s,1H),7.27(s,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.95(s,0.5H),6.60(q,J＝5.4Hz,1H),4.50-4.53(m,1H),3.78-3.92(m,4H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.61(d,J＝7.6Hz,3H),1.14-1.27(m,10H),；LCMS:t_R＝2.13min,622.18[M+H]⁺.

實(shí)施例7:(R,S)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯

由實(shí)施例5(500mg)經(jīng)手性柱層析拆分得到實(shí)施例7(135mg)。手性柱型號(hào)：CHIRALPAK AD-H；手性柱規(guī)格：0.46cm X 15cm；流動(dòng)相：石油醚/異丙醇(80/20,體積比)，異丙醇中添加5％的乙酸；流速：2ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ7.44(s,1H),7.27(s,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.95(s,0.5H),5.87(q,J＝5.4Hz,1H),4.50-4.53(m,1H),3.78-3.92(m,4H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.61(d,J＝7.6Hz,3H),1.14-1.27(m,10H),；LCMS:t_R＝2.13min,622.18[M+H]⁺.

實(shí)施例8:4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-異丙氧基碳氧基乙酯

(R)-3-{[5-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-[1,3,4]噁二唑-2-羰基]-氨基}-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸(0.500g,0.884mmol)溶于10毫升乙腈，加入碳酸鉀(500mg)和碘化鉀(0.8g)，加入1-氯-乙基酯碳酸異丙酯(0.6ml)，室溫下攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干濾液，殘留物經(jīng)柱層析純化得到淺黃色粘稠油狀液體(0.487g)。將此油狀液體溶于10毫升四氫呋喃，加入TBAF(2ml,1M in THF)，攪拌30分鐘，蒸出溶劑，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化得到淺黃色固體(457mg)。

實(shí)施例9:4-(2'-二氟甲氧基-5'-氯-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯

制備方法同實(shí)施例5。

實(shí)施例10:4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]-丁酸-1-異丙氧基碳氧基乙酯

制備方法同實(shí)施例8。

實(shí)施例11:(R)-氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氯-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸-環(huán)己氧基碳氧基乙酯

第一步：(R)-3-叔-丁氧基羰基氨基-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸-環(huán)己氧基碳氧基乙酯的制備

(R)-3-叔-丁氧基羰基氨基-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸(0.650g,1.43mmol)溶于15毫升乙腈，加入碳酸鉀(780mg)和碘化鉀(1.1g)，加入1-氯-乙基酯碳酸環(huán)己酯(0.85ml)，室溫下攪拌過(guò)夜，過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干濾液，殘留物經(jīng)柱層析純化得到淺黃色粘稠油狀液體(0.603g)。

第二步：(R)-氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氯-聯(lián)苯基-4-基)丁酸-環(huán)己氧基碳氧基乙酯的制備

(R)-3-叔-丁氧基羰基氨基-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸-環(huán)己氧基碳氧基乙酯(0.603g,1.32mmol)溶于10毫升二氯甲烷，加入1毫升三氟乙酸，室溫下攪拌1小時(shí)，蒸干溶劑，殘留物溶于10毫升乙腈，加入1毫升三乙胺，加入琥珀酸叔丁基酯-5-二羰基-吡咯烷-1-基酯(1g)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，蒸干溶劑，殘留物經(jīng)柱層析純化得到一黃色粘稠液體，此液體溶于10毫升二氯甲烷，加入1毫升三氟乙酸，室溫下攪拌1小時(shí)，蒸干溶劑，殘留物經(jīng)反相柱層析純化得到白色固體(0.439g)。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ11.78(br s,1H),8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(dd,J＝6.8,2.8Hz,1H),7.50(dd,J＝8.4,1.6Hz,2H),

7.44(s,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.03(s,0.5H),6.95(s,0.5H),6.61(0.6H),5.87(0.4H),4.50-4.53(m,1H),3.78-3.92(m,4H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),2.5-2.45(m,4H),1.61(d,J＝7.6Hz,3H),1.14-1.27(m,10H),；LCMS:t_R＝3.13min,625.18[M-H]^-.

實(shí)施例12、(R)-3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸1-環(huán)己氧基碳氧基乙酯

制備方法同實(shí)施例11。

實(shí)施例13、(R)-3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸-異丙氧基碳氧基乙酯

制備方法同實(shí)施例11。

實(shí)施例14、(R)-3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸乙酯

(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(5-氟-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸乙酯(1.2g，2.57mmol)溶于10毫升二氯甲烷，冰水冷卻下滴加2毫升三氟乙酸，室溫?cái)嚢?小時(shí)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸出溶劑，殘留物溶于10毫升二氯甲烷，加入1毫升三乙胺，冰水冷卻下加入琥珀酸叔丁基酯-5-二羰基-吡咯烷-1-基酯(1.27g)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，加入10毫升飽和碳酸氫鈉水溶液，攪拌10分鐘，分液，水相用10毫升二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，蒸干溶劑，殘留物溶于10毫升二氯甲烷，加入2毫升三氟乙酸，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入10毫升水，分液，水相用10毫升二氯甲烷萃取，合并有機(jī)相，蒸干，殘留物經(jīng)反相柱層析純化(乙腈/水體系)得白色固體(0.764g)。

¹HNMR(CDCl₃,400MHz)δ11.38(br s,1H),7.65(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(dd,J＝6.8,2.8Hz,1H),7.50(dd,J＝8.4,1.6Hz,2H),7.44(s,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.03(s,0.5H),6.95(s,0.5H),6.61(0.6H),5.87(0.4H),4.50-4.53(m,1H),3.78-3.92(m,4H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),2.5-2.45(m,4H),1.61(d,J＝7.6Hz,3H)；LCMS:t_R＝2.73min,466.18[M-H]^-.

實(shí)施例15:3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸-環(huán)己氧基碳氧基乙酯

制備方法同實(shí)施例11。LCMS:t_R＝3.53min,590.18[M-H]^-.

實(shí)施例16:3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸1-異丙氧基碳氧基-乙基酯

制備方法同實(shí)施例9。LCMS:t_R＝3.12min,550.21[M-H]^-.

實(shí)施例17:3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸異丙氧基碳氧基甲酯

第一步：(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸異丙氧基碳氧基甲酯的制備

(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(5-氟-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸(500mg,1.138mmol)溶于10毫升乙腈，加入碳酸鉀(300mg)與碘化鉀(250mg)，加入氯甲基碳酸異丙酯(695mg)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾，蒸干濾液，殘留物直接用于下一步反應(yīng)。

第二步：3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)丁酸異丙氧基碳氧基甲酯的制備

上一步到的粗產(chǎn)品溶于10毫升二氯甲烷，加入1.5毫升三氟乙酸，室溫?cái)嚢?小時(shí)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑，殘留物溶于10毫升乙腈，加入1毫升三乙胺，加入琥珀酸叔丁基酯-5-二羰基-吡咯烷-1-基酯(300mg)，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，過(guò)濾，蒸干濾液，殘留物溶于10毫升二氯甲烷，加入1.5毫升三氟乙酸，蒸干溶劑，殘留物經(jīng)柱層析純化得到淺黃色粘稠液體(218mg)。

LCMS:t_R＝3.09min,554.21[M-H]^-.

實(shí)施例18:3-(3-羧基-丙酰氨基)-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸異丙氧基碳氧基甲酯

制備方法同實(shí)施例17。

實(shí)施例19:(R)-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)丁酸乙酯

(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(5-氟-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸乙酯(250mg,0.5mmol)溶于5毫升二氯甲烷，加入2.5毫升氯化氫的1,4-環(huán)氧二烷溶液，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸干溶劑，殘留物溶于5毫升二氯甲烷，加入HATU(450mg)，加入3-磷羧基丙酸(175mg)，加入1毫升三乙胺，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸出溶劑，殘留物經(jīng)反相柱層析純化(乙腈/水體系)得到白色固體(196mg)。

¹HNMR(MeOH-d₄,400MHz)δ7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.97(s,1H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),3.08-2.87(m,3H),2.91-3.10(m,4H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.47-1.39(m,3H)；LCMS:t_R＝1.93min,502.18[M-H]^-.

實(shí)施例20:4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)丁酸乙酯

制備方法同實(shí)施例19。

¹HNMR(MeOH-d₄,400MHz)δ7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.97(s,1H),6.95(s,0.5H),4.50-4.53(m,1H),3.08-2.87(m,3H),2.91-3.10(m,4H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.47-1.39(m,3H)；LCMS:t_R＝2.03min,518.48[M-H]^-.

實(shí)施例21:4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)-丁酸-5-基-2-羰基-[1,3]二噁唑-4-基甲酯

第一步：(R)-3-叔-丁氧基羰基氨基-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸-5-甲基-2-羰基-[1,3]二噁唑-4-基甲酯的制備

(R)-3-叔丁氧基羰基氨基-4-(5-氟-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)丁酸乙酯(150mg,0.34mmol)與4-羥甲基-5-甲基-[1,3]二噁唑-2-酮(75mg)溶于5毫升二氯甲烷，加入HATU(250mg)，加入0.5毫升三乙胺，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸干溶劑，殘留物經(jīng)柱層析純化得到淺黃色油狀液體(147mg)。

第二步：4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)-丁酸-5-基-2-羰基-[1,3]二噁唑-4-基甲酯的制備

(R)-3-叔-丁氧基羰基氨基-4-(2'-二氟甲氧基-5'-氟-聯(lián)苯基-4-基)-丁酸-5-甲基-2-羰基-[1,3]二噁唑-4-基甲酯(147mg)溶于5毫升二氯甲烷，加入0.3毫升三氟乙酸，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸干溶劑，殘留物溶于5毫升二氯甲烷，加入3-磷羧基丙酸(85mg)加入HATU(250mg)，加入0.5毫升三乙胺，室溫?cái)嚢?小時(shí)，蒸干溶劑，殘留物經(jīng)反相柱層析純化得到淺黃色油狀液體(87mg)。

¹HNMR(MeOH-d₄,400MHz)δ7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.97(s,1H),6.95(s,0.5H),4.76(s,2H),4.50-4.53(m,1H),3.08-2.87(m,2H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),2.47(d,J＝6.4Hz,2H),1.87(s,3H)；LCMS:t_R＝2.03min,586.48[M-H]^-.

實(shí)施例22:(R)-4-(5'-氯-2'-二氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-(3-磷羧基-丙酰氨基)-丁酸-5-甲基-2-羰基-[1,3]二噁唑-4-基甲酯

制備方法同實(shí)施例21。¹HNMR(MeOH-d₄,400MHz)δ7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),7.03(s,0.5H),6.97(s,1H),6.95(s,0.5H),4.76(s,2H),4.50-4.53(m,1H),3.08-2.87(m,2H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),2.47(d,J＝6.4Hz,2H),1.87(s,3H)；LCMS:t_R＝2.14min,602.48[M-H]^-.

實(shí)施例23:(R)-4-(5'-氟-2'-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-4-基)-3-[(5-羰基-4,5-二氫-[1,3,4]噁二唑-2-羰基)-氨基]丁酸乙酯

制備方法同實(shí)施例1。

¹HNMR(MeOH-d₄,400MHz)δ7.34(s,1H),7.37(m,1H),7.20(d,J＝8.2Hz,2H),7.00-7.05(m,3H),6.97(s,1H),4.50-4.53(m,1H),4.17-4.27(m,2H),3.78(s,3H),2.91-3.10(m,2H),2.58(d,J＝6.2Hz,2H),1.30(t,J＝7.2Hz,3H)；LCMS:t_R＝2.38min,498.14[M+H⁺].

生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：NEP酶抑制測(cè)試

下面的體外試驗(yàn)可用來(lái)測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)于大鼠血漿中NEP酶的抑制活性，其活性可用IC₅₀值來(lái)表示?；衔锏陌霐?shù)抑制濃度IC₅₀(將一定濃度的酶活性抑制至50％時(shí)所需的化合物濃度)是通過(guò)將一定量的酶與特定的底物及不同濃度的待測(cè)化合物混合反應(yīng)后測(cè)定計(jì)算出的。本實(shí)驗(yàn)所用的NEP酶體系是取自正常SD大鼠的新鮮血液，置于含肝素鈉抗凝劑的管中，5000rpm，4℃離心10min后，收集血漿；配制不同濃度的NEP抑制劑，其中，NEP抑制劑的最高終濃度為100uM,并以3倍梯度依次稀釋10次；每孔加60ul新鮮的大鼠血漿于384孔板；隨后，每孔再加入10ul梯度稀釋的NEP抑制劑；37℃，孵育30min后，每孔加入10ul 10uM的底物(SenoLyte 520Neprilysin Activity Assay Kit，AnaSpec,72223)；在37℃孵育18h(±1h)；在激發(fā)光490nm和發(fā)射光520nm的波長(zhǎng)下，測(cè)定熒光信號(hào)；并采用Prism 5.0軟件求得IC₅₀。

本發(fā)明化合物的NEP酶抑制活性通過(guò)以上的試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得的IC₅₀值見(jiàn)下表。

結(jié)論：本發(fā)明實(shí)施例化合物在SD大鼠血漿中對(duì)NEP酶均有明顯地抑制作用。

雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例揭示如上，然其并非用以限定本發(fā)明，任何本領(lǐng)域技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可作些許的修改和完善，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍當(dāng)以權(quán)利要求書所界定的為準(zhǔn)。