本發(fā)明涉及VBE冬凌草甲素的衍生物，及其在制藥中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

冬凌草甲素（oridonin）是從唇形科香茶菜屬植物冬凌草中分離得到的一種貝殼杉烯二萜類天然化合物。它具有清熱解毒、活血化瘀、抗菌消炎、抗腫瘤等功效。作為抗癌新藥，它可以抑制腫瘤細胞增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡，可以對腫瘤細胞信號通路進行調(diào)節(jié)，可以清除細胞內(nèi)自由基和抑制毒性物誘變細胞DNA等。但是，由于冬凌草甲素不溶于水，限制了其在臨床上的應(yīng)用。

黃荊子木質(zhì)素VBE（VBE-1和VBE-2）是從黃荊子Fructus Viticis Negundo的活性提取部位Evn-50中分離得到的芳基二氫萘類木質(zhì)素類化合物，被證實能夠通過抑制Akt-mTOR通路起到抗腫瘤作用。VBE毒性低（LD50>2000mg/kg），安全性高，對乳腺癌、前列腺癌、肝癌、卵巢癌等均有抑制作用，顯示具有廣譜抗癌活性。但是，它在體內(nèi)代謝迅速，半衰期僅為69.3min，代謝后即失活，且水溶性差。不理想的藥代動力學(xué)參數(shù)成為了VBE作為抗腫瘤藥物的重大缺陷。研究表明，VBE的代謝位點主要是2-位醛基，6-位羥基和4’-位羥基。鑒于具有抗腫瘤活性的冬凌草甲素結(jié)構(gòu)中具有1,3-二羥基片段，設(shè)計將VBE和冬凌草甲素以縮醛形式進行對接，將6-位羥基甲基化，同時在VBE的4’-位羥基上引入水溶性官能團，改善VBE的代謝，提高其水溶性。VBE冬凌草甲素衍生物經(jīng)酶作用，釋放出VBE和冬凌草甲素，雙重抗癌。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種VBE冬凌草甲素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物，包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體，其具有較好的水溶性和抗癌活性。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述VBE冬凌草甲素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物，包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述VBE冬凌草甲素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物，包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體的用途。

以下對本發(fā)明進行詳細描述。

本發(fā)明提供的VBE冬凌草甲素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物，包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)如下所示：

式中，R₁各自獨立為OH,氧代氧酰基，取代的氧?；?；R₂各自獨立為H，OMe；R₃各自獨立為H，OMe。

所述的VBE冬凌草甲素衍生物具體結(jié)構(gòu)實例如下：

本發(fā)明還提供的上述化合物的制備方法如下式所示：

式中，R₁各自獨立為OH,氧代，氧?；〈难貂；籖₂各自獨立為H，OMe；R₃各自獨立為H，OMe。

本發(fā)明的VBE冬凌草甲素衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物，包括其立體異構(gòu)體和互變異構(gòu)體，具有較好的水溶性和治療癌癥的作用。

通過以下實施例進一步舉例說明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實施例的任何限制。

具體實施方式

實施例1

化合物（IIa）的制備

N₂下,向356mg (1 mmol)的VBE-1和276mg (2 mmol)的K₂CO₃混合物中加入5mLDMF，加熱至70℃，滴加1.0mL (1 mmol)Me₂SO₄,反應(yīng)2h,加入30mL水，用10%HCl溶液調(diào)pH7.0,乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗除DMF，旋干，柱層析純化，得到Ia450.2mg，收率87.4%。¹H NMR（400MHz,CDCl₃)δ: 3.26 (dd, J=4.8, 14.6Hz, 1H), 3.33 (dd, J=4.8, 15.2Hz, 1H), 3.46 (s, 1H), 3.61 (q, J=5.2Hz, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.92 (s,3H), 4.38 ( d, J=5.2Hz, 1H), 6.56 (d, J=8.0Hz, 1H), 6.65 (d, J=8.0Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.90 (s,1H),7.35 (s,1H), 9.50 (s,1H)。

N₂下,向370mg (1 mmol)Ia中加入10mL乙腈，冷至-10℃，加770mg (5 mmol)CCl₄,于30min內(nèi)加入0.38mL (2.1 mmol)N,N-二異丙基乙胺和12.6mg (0.1 mmol)DMAP，再于30min內(nèi)滴加0.4mL (1.4 mmol)亞磷酸二芐酯，保溫反應(yīng)1h,加入0.5mol/L的KH₂PO₄溶液4mL,室溫攪拌5min，減壓蒸去乙腈，加5mL水,乙酸乙酯萃取,濃縮，殘液加15mL石油醚攪拌，析出白色固體，得到化合物IIa,收率95%。¹H NMR（400MHz,CDCl₃)δ: 3.26 (dd, J=4.8, 14.6Hz, 1H), 3.33 (dd, J=4.8, 15.2Hz, 1H), 3.46 (s, 1H), 3.61 (q, J=5.2Hz, 1H), 3.66 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.92 (s,3H), 4.38 ( d, J=5.2Hz, 1H), 5.29 (s, 4H), 6.56 (d, J=8.0Hz, 1H), 6.65 (d, J=8.0Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.90 (s,1H),7.19 (m,10H),7.35 (s,1H), 9.50 (s,1H)。

實施例2

化合物（IIb）的制備

用356mg (1 mmol)的VBE-2代替356mg (1 mmol)的VBE-1，其它操作同實施例1，制得化合物IIb。

實施例3

1-氧代冬凌草甲素的制備

向1.97g (5 mmol)冬凌草甲素中加入40mL丙酮，0℃下，緩慢滴入6mLJone’s試劑，升至室溫，反應(yīng)2h，加入0.4mL異丙醇，反應(yīng)0.5h，再加入0.5gNaHCO₃，反應(yīng)0.5h，加入50mL乙酸乙酯，過濾，減壓濃縮，石油醚-丙酮重結(jié)晶，得到1.69g固體，收率85%。Mp220-222℃。ESI-MS（m/z)：385.4([M+Na]⁺)。

實施例4

1-乙酰氧基冬凌草甲素的制備

向1.97g (5 mmol)冬凌草甲素中加入35mL丙酮、7mL二甲氧基丙烷和0.2g對甲苯磺酸，加熱回流1h，加5%Na₂CO₃溶液10mL終止反應(yīng)，乙酸乙酯萃取，濃縮，柱層析純化，得到7,14-位縮醛保護的冬凌草甲素中間體，收率77.1%。

向上述2.17g (5 mmol)7,14-位縮醛保護的冬凌草甲素中間體中加入20mL醋酐和40mL吡啶，加熱回流4h，冷卻，加入100mL80%的HOAc溶液，室溫反應(yīng)2days，，減壓蒸出醋酸，并不斷加入甲醇帶出醋酸和水，抽干，柱層析純化，得1-乙酰氧基冬凌草甲素，收率45%。¹H NMR（400MHz,CDCl₃)δ: 1.13 (s,6H), 2.06 (s,3H), 3.20 (d, J=9.9Hz, 1H), 3.08 (dd, J=3.8, 10.4Hz, 1H), 4.28, 4.20 (d, J=11.2Hz, 2H), 4.24 (s, 1H), 4.62-4.65 (m,1H), 5.50 (s,1H), 5.80 (s,1H), 6.10 (d, J=10.4Hz, 1H), 6.17 (s, 1H)。

實施例5

化合物（1）的制備

向1.97g (5 mmol)冬凌草甲素中加入35mL丙酮、3.15g (5 mmol)化合物IIa和0.2g對甲苯磺酸，加熱回流1h，加5%Na₂CO₃溶液10mL終止反應(yīng)，濃縮，柱層析純化，得到IIIa，收率72.5%，將1.0g (1 mmol)IIIa加入20mLDMF中，加入0.18g 10%Pd/C，50bar壓力下，室溫氫化8h，濾除Pd/C，減壓濃縮，柱層析純化，得到IVa，收率90%。ESI-MS（m/z)：826.3([M]⁺)，向上述1g中間體IVa中加入10mLDMF，攪拌，滴入1mol/LNaOH的乙醇溶液，保持反應(yīng)液pH9.3，反應(yīng)1h，減壓蒸至近干，加20mL丙酮攪拌1h，冰箱靜置8h，過濾，丙酮洗滌，干燥，得化合物（1），收率97.2%。

實施例6

化合物（2）的制備

用1.96g (5 mmol)1-氧代冬凌草甲素代替實施例5中的1.97g (5 mmol)冬凌草甲素，其它操作同實施例5，得到化合物（2）。

實施例7

化合物（3）的制備

用2.18g (5 mmol)1-乙酰氧基冬凌草甲素代替實施例5中的1.97g (5 mmol)冬凌草甲素，其它操作同實施例5，得到化合物（3）。

實施例8

化合物（4）的制備

用3.15g (5 mmol)化合物IIb代替實施例5中的3.15g (5 mmol)化合物IIa，其它操作同實施例5，化合物（4）。

實施例9

化合物（5）的制備

用3.15g (5 mmol)化合物IIb代替實施例6中的3.15g (5 mmol)化合物IIa，其它操作同實施例6，化合物（5）。

實施例10

化合物（6）的制備

用3.15g (5 mmol)化合物IIb代替實施例7中的3.15g (5 mmol)化合物IIa，其它操作同實施例7，得到化合物（6）。

實施例11

VBE冬凌草甲素衍生物抗腫瘤活性

ICR種小鼠，雌雄各半，體重18-22g。按體重隨機分組，將小鼠分成腫瘤陰性對照組，VBE-1和冬凌草甲素陽性對照組（20mg/Kg.d），VBE冬凌草甲素衍生物（20mg/Kg.d）劑量組，每組各10只，除VBE-1和冬凌草甲素組外，其余每組在接種前一個星期開始經(jīng)口灌胃給藥，陰性對照組給予一定量的生理鹽水。無菌抽取接種H₂₂瘤種8天的小鼠的腹水，以生理鹽水稀釋10倍，0.02%伊紅（臺盼藍）染色，滴加到細胞計數(shù)板上計數(shù)后，調(diào)細胞濃度至2.0*10⁶個/mL，于小鼠后肢腋窩下接種，每只0.2mL。接種后次日各組均給藥，連續(xù)9天，第10天處死小鼠，摘瘤稱重，以抑制率判斷抑瘤效果。

抑瘤率（%）= （對照組瘤重-實驗組瘤重）/ 對照組瘤重 * 100%

結(jié)果顯示，與VBE-1和冬凌草甲素相比，VBE冬凌草甲素衍生物對小鼠肝癌22（H₂₂）均有明顯抑制作用（表1）。