本發(fā)明涉及選擇性auroraa激酶抑制活性的喹唑啉衍生物及其制備方法以及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

有絲分裂是一個(gè)非常復(fù)雜并精密調(diào)控的進(jìn)程，其結(jié)果是產(chǎn)生兩個(gè)完全一樣的子細(xì)胞。aurora激酶(auroraa，b，c)的三個(gè)高度同源的絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶在調(diào)節(jié)有絲分裂的許多關(guān)鍵步驟發(fā)揮著重要作用。自1995年從drosophila中發(fā)現(xiàn)aurora激酶以來，隨著人們發(fā)現(xiàn)這些激酶的缺失可導(dǎo)致嚴(yán)重的有絲分裂異常，這類激酶受到普遍關(guān)注。

auroraa的表達(dá)和活性在細(xì)胞周期的g2/m期達(dá)到頂峰，在中心體的成熟和分化中起關(guān)鍵作用。aurorab同樣在有絲分裂過程中高度表達(dá)，激酶活性頂峰略晚于auroraa。aurorac的作用與aurorab相似，一般在睪丸中高水平表達(dá)，可能在雄性動(dòng)物中起到特殊作用。

近來，有報(bào)道稱抑制aurorab可能產(chǎn)生不穩(wěn)定、多倍體細(xì)胞，其中一些細(xì)胞還能繼續(xù)生存，同時(shí)抑制auroraa、b激酶可能出現(xiàn)相互抵觸的效果。此外，在一些乳腺癌患者中auroraa的高表達(dá)與生存率的降低有相關(guān)性，而aurorab的表達(dá)則與患者生存率高低無此相關(guān)性。因此，選擇性aurora激酶抑制劑對auroraa和aurorab抑制功能的區(qū)分以及腫瘤的靶向治療都有著十分重要的作用。auroraa和b高度同源，尤其在激酶區(qū)域(71％一致)，auroraa與aurorab在atp結(jié)合區(qū)域僅有三個(gè)殘基的區(qū)別，其中，在auroraa中分別為leu-215，thr-217和arg-220；而在aurorab中則相對應(yīng)地為arg，glu和lys?，F(xiàn)有的選擇性auroraa激酶抑制劑大部分利用auroraa的thr-217和aurorab的glu殘基的結(jié)構(gòu)差異來進(jìn)行合理設(shè)計(jì)，從而實(shí)現(xiàn)對auroraa激酶抑制的高選擇性。

下列幾種為代表性的處于臨床研究階段的選擇性auroraa激酶抑制劑結(jié)構(gòu)。

casi制藥公司(原名entremed)開發(fā)的化合物enmd981693顯示出較好的細(xì)胞活性，并且能選擇性地抑制auroraa激酶，其l-酒石酸鹽(enmd2076)對auroraa的抑制活性ic50值為14nm，而對aurorab激酶的抑制活性為ic50＝350nm。enmd2076是一種可口服的多靶點(diǎn)激酶抑制劑，還可作用于vegfr、flt-3和fgfr3等靶點(diǎn)，可有效抗增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡、抗血管生成。目前以enmd2076進(jìn)行的晚期或轉(zhuǎn)移性軟組織肉瘤(nct01719744)和卵巢癌(nct01104675)ii期臨床試驗(yàn)已完成，正在進(jìn)行的ii期臨床試驗(yàn)主要包括卵巢透明細(xì)胞癌(nct01914510)、晚期轉(zhuǎn)移性三陰性乳腺癌tnbc(nct01639248)。

mln8237是millennium制藥公司研發(fā)的高效auroraa激酶選擇性抑制劑，也是目前aurora激酶抑制劑中最有發(fā)展?jié)摿Φ乃幬锖蜻x物，對auroraa/b的選擇性大于200倍，ic50值分別為1.2nm和396.5nm。mln8237是在同一公司前期開發(fā)的mln8054結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上優(yōu)化而來，雖然對gaba受體仍有抑制活性，但腦血分配系數(shù)比mln8054有降低，所以并未產(chǎn)生類似mln8054的劑量限制性神經(jīng)毒性。目前mln8237以單獨(dú)用藥與聯(lián)合用藥等方式開展的多項(xiàng)臨床研究正處于臨床i、ii期(ntc00830518、ntc00853307、ntc01154816等)。

考慮到enmd2076具有良好的抗腫瘤活性和生物利用度，但對auroraa激酶的選擇性不夠好，對auroraa/b的選擇性約25倍，且對其它激酶的選擇性較差。雜萘酮類抑制劑對auroraa激酶的ic50＝38nm，而對aurorab激酶沒有明顯抑制活性，選擇性大于1000倍。化合物的高選擇性來源于雜萘酮2位n上連接的苯環(huán)，苯環(huán)與aurorab的glu殘基形成較強(qiáng)立體位阻，使得化合物對aurorab激酶無抑制活性；auroraa在相應(yīng)的位置是位阻較小的thr殘基，不會(huì)產(chǎn)生類似位阻，所以化合物具有較好的auroraa抑制活性和選擇性(j.med.chem.2011,54(1),312-319)。

本發(fā)明人前期基于enmd2076的結(jié)構(gòu)，將嘧啶母核替換為喹唑啉類結(jié)構(gòu)，并在喹唑啉的c-2位苯環(huán)和c-7位進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，得到激酶抑制活性和抗腫瘤增殖性能更優(yōu)的化合物，不過化合物對auroraa激酶的選擇性仍不夠好。對化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)一步修飾，得到一系列喹唑啉2位直接連有芳基取代基的選擇性auroraa激酶抑制劑。特別的，化合物a-1和a-7對激酶的抑制活性以及對auroraa激酶的選擇性有了較大提升，對腫瘤細(xì)胞的抗增殖活性也較參考文獻(xiàn)中的最優(yōu)化合物(hct116cells:ic50＝7.8μm)有所增強(qiáng)，化合物a-1和a-7對各種腫瘤細(xì)胞的抑制活性ic50值在0.45～4.85μm之間。

喹唑啉類選擇性auroraa激酶抑制劑的設(shè)計(jì)思路

現(xiàn)有技術(shù)中存在的先導(dǎo)化合物大部分為aurora激酶抑制劑，而對于選擇性auroraa激酶抑制劑的開發(fā)力度卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，對此，本發(fā)明提供了一系列高效選擇性auroraa激酶抑制劑，對腫瘤靶向治療具有重大意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供選擇性auroraa激酶抑制活性的喹唑啉衍生物及其制備方法以及應(yīng)用。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

通式(i)或(ii)所示的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、水合物、溶劑化物、多晶型物、互變異構(gòu)體或前藥，

其中，x是碳原子或者氮原子；y是氮原子或者氧原子；n＝0或者1；

r¹獨(dú)立地選自氫、c1-c4的脂肪烴基中的一種；或者脂肪烴基、烷氧基羰基、取代或未取代的苯基、羥基烷基、烷氧基烷基、氨基羰基、單烷基或雙烷基的氨基羰基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、苯基氨基羰基、(n-雜環(huán))羰基；或者無r¹；

r²獨(dú)立地選自氫或以下基團(tuán)：鹵素、-no2、-ome、-oet、-cn、-cf3、-cf2r、-c(r)＝cr’2、-c(r)＝c(r’)(r”)、-c≡c-r、-or、-sr、-s(o)r、-so2r、-so2nr2、-nr2、-oco2r、-oc(o)nr2、-oc(o)r、-co2r、-c(o)r、-c(o)nr2；對r²的定義中，所述的r、r’以及r”各自獨(dú)立地選自h、未取代的低級(jí)烷基、苯基或者取代苯基；

r³選自i-pr、取代或者沒有取代的芳基或者雜環(huán)芳基，其中取代基選自鹵素、-no2、-cn、-cf3、-cf2r、-c(r)＝cr’2、-c(r)＝c(r’)(r”)、-c≡c-r、-or、-sr、-s(o)r、-so2r、-so2nr2、-nr2、-oco2r、-oc(o)nr2、-oc(o)r、-co2r、-c(o)r、-c(o)nr2、-c(＝nr)-nr’2、-c(＝nr)-or’、-nrc(＝nr’)-nr”2、-nrso2r’、-nrso2nr’2、-p(o)r2、-p(o)(or)2中的一種；對r³的定義中，所述的r、r’以及r”各自獨(dú)立地選自h、未取代的低級(jí)烷基、苯基或者取代苯基；

r⁴和r^4’各自獨(dú)立地選自氫、c1-c4的脂肪烴基、烷氧基羰基、取代或未取代的苯基、羥基烷基、烷氧基烷基、氨基羰基、單烷基或雙烷基的氨基羰基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、苯基氨基羰基、(n-雜環(huán))羰基；或者，r⁴和r^4’與通式(i)或(ii)中吡唑形成雙環(huán)的結(jié)構(gòu)。

優(yōu)選的，所述r¹是h或者c1-c4的脂肪烴基。

優(yōu)選的，所述r²選自氫、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、硝基、氰基中的一種。

優(yōu)選的，所述r³選自取代苯基、苯甲酰基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、萘基中的一種；其中苯基上取代基選自3-ome、4-ome、2-ome、4-no2、3-no2、2-no2、3-cooh、3-coome、3-cooet、3-cooipr、2-f、3-f、4-f、2-cl、3-cl、4-cl、3-cl-4-coome、3-ome-4-coome、2-cl-2-ome、2-conh2-3-f、3-conh2、2-ch2oh、4-conhme、2,4-diome、2,5-diome、2-me-4-ome、2,4-dicl、3,4-dicl、2-嗎啉基、3-嗎啉基、4-嗎啉基、3,4-亞甲二氧基、4-ch2cooet、2-cn、3-cn、2-cf3或者3-cf3中的一種。

所述r³中含有氨基時(shí)，氨基的氮原子是自由堿形式或者藥學(xué)可以接受的鹽或者季銨鹽。

優(yōu)選的，r⁴和r^4’各自獨(dú)立地選自下列基團(tuán)中的一種：甲基、環(huán)丙基、乙基、異丙基、丙基、叔丁基、環(huán)戊基、苯基、cooh、co2me、ch2oh、ch2ome、ch2ch2ch2oh、ch2ch2ch2ome、ch2ch2ch2och2ph、ch2ch2ch2nh2、ch2ch2ch2nhcootbu、conhipr、conhch2ch＝ch2、conhch2ch2ome、conhch2ph、conh(環(huán)己基)、con(et)2、con(me)(ch2ph)、conh(npr)、con(et)(npr)、conhch2ch(me)2、con(npr)2、co(3-甲氧基甲基1-吡咯基)、conh(3-甲苯基)、conh(4-甲苯基)、conhme、co(1-嗎啉基)、co(4-甲基1-哌嗪基)、conhch2ch2oh、conh2、co(1-哌啶基)；或者r⁴和r^4’與通式(i)或(ii)中吡唑形成的雙環(huán)結(jié)構(gòu)為下列之一：

優(yōu)選的，所述的喹唑啉衍生物具體選自下列結(jié)構(gòu)式中的至少一種：

一種藥物組合物，其特征在于：包括下列物質(zhì)中的至少一種：a)化合物，b)該化合物在藥學(xué)上可接受的鹽，c)該化合物的水合物，d)該化合物的溶劑化物，e)該化合物的多晶型物，f)該化合物的互變異構(gòu)體，g)該化合物的前藥；其中，所述的化合物上述的通式(i)或(ii)所示的化合物。

通式(i)或(ii)所示的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、水合物、溶劑化物、多晶型物、互變異構(gòu)體或前藥在制備抑制auroraa激酶的藥物中的應(yīng)用。

通式(i)或(ii)所示的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、水合物、溶劑化物、多晶型物、互變異構(gòu)體或前藥在制備治療和/或預(yù)防和/或延緩和/或輔助治療和/或處理增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明公開的喹唑啉衍生物具有較好的auroraa抑制活性和選擇性，同時(shí)對腫瘤細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用。目前對auroraa的生理功能、分子結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)機(jī)制、與其他致癌基因、抑癌基因的關(guān)聯(lián)、在腫瘤形成過程中的作用及機(jī)制已經(jīng)有了許多闡述，也有實(shí)驗(yàn)顯示auroraa的過表達(dá)與多種傳統(tǒng)化療藥物耐藥性的產(chǎn)生有關(guān)。本發(fā)明藥物有望與傳統(tǒng)化療藥物聯(lián)用，增強(qiáng)腫瘤殺傷效果，延長復(fù)發(fā)間隔，改善患者的生活質(zhì)量。

具體實(shí)施方式

下面對上述的發(fā)明內(nèi)容進(jìn)一步說明。

一種藥物組合物，其特征在于：包括下列物質(zhì)中的至少一種：a)化合物，b)該化合物在藥學(xué)上可接受的鹽，c)該化合物的水合物，d)該化合物的溶劑化物，e)該化合物的多晶型物，f)該化合物的互變異構(gòu)體，g)該化合物的前藥；其中，所述的化合物上述的通式(i)或(ii)所示的化合物。

通式(i)或(ii)所示的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、水合物、溶劑化物、多晶型物、互變異構(gòu)體或前藥在制備抑制auroraa激酶的藥物中的應(yīng)用。

通式(i)或(ii)所示的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、水合物、溶劑化物、多晶型物、互變異構(gòu)體或前藥在制備治療和/或預(yù)防和/或延緩和/或輔助治療和/或處理增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述的增殖性疾病為胃癌、結(jié)直腸癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌、甲狀腺癌、胰腺癌、膀胱癌、腎癌、腦瘤、頸癌、cns(中樞神經(jīng)系統(tǒng))的癌癥、惡性膠質(zhì)瘤、骨髓增生病、動(dòng)脈粥樣硬化、白血病、肺纖維化、淋巴癌、風(fēng)濕性疾病、慢性炎癥、非淋巴網(wǎng)狀系統(tǒng)腫瘤、冷球蛋白血癥、丘疹性黏蛋白沉積癥、家族性脾性貧血、多發(fā)性骨髓瘤、淀粉樣變、孤立性漿細(xì)胞瘤、重鏈病、輕鏈病、惡性淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、單核細(xì)胞白血病、半分子病、原發(fā)性巨球蛋白血癥、原發(fā)性巨球蛋白血癥紫癜、繼發(fā)性良性單克隆丙種球蛋白病、溶骨性病變、急性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴母細(xì)胞瘤、部分非霍奇金淋巴瘤、sezary綜合征、傳染性單核細(xì)胞增多癥、急性組織細(xì)胞增多癥、毛細(xì)胞白血病、霍奇金淋巴瘤、結(jié)腸癌、直腸癌、腸道息肉、憩室炎、結(jié)腸炎、胰腺炎、肝炎、小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞腫瘤、胰島細(xì)胞瘤、甲狀腺髓樣癌、黑色素瘤、子宮癌、慢性肝炎、肝硬化、卵巢癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、膽囊炎、頭頸部鱗癌、消化道惡性腫瘤、非小細(xì)胞肺癌、宮頸癌、睪丸腫瘤、膀胱癌、骨髓瘤中的至少一種。

如本發(fā)明所使用的，如果未提供具體的限定，本發(fā)明的術(shù)語具有下述含義。

“鹵素”包括氟，氯，溴和碘。

“烷基”是指直鏈或支鏈的飽和烴基團(tuán)，如c1-c20烷基，優(yōu)選為c1-c12烷基，更優(yōu)選為c1-c6烷基，再優(yōu)選為c1-c4烷基，尤其是例如甲基(me)，乙基(et)，丙基(例如，正丙基和異丙基)，丁基(例如，正丁基，異丁基，叔丁基)，戊基(例如，正戊基，異戊基，新戊基)，正己基等。其中，在各取代烷基或烷基取代的基團(tuán)中，烷基定義同上。

“低級(jí)烷基”是指c1-c4的烷基。

“治療有效量”指的是在給予需要這樣的治療的哺乳動(dòng)物時(shí)，足以有效治療的通式化合物的量。治療有效量將依賴于所用的治療藥劑的特定活性、患者的年齡、生理狀況、其它疾病狀態(tài)的存在、和營養(yǎng)狀況而變化。此外，患者可能正接受的其它藥物治療將影響要給予的治療藥劑的治療有效量的確定。

“治療”意味著對于哺乳動(dòng)物體內(nèi)疾病的任何治療，包括：

(ⅰ)防止疾病，即造成疾病的臨床癥狀不發(fā)展；

(ⅱ)抑制疾病，即阻止臨床癥狀的發(fā)展；和/或

(ⅲ)減輕疾病，即造成臨床癥狀的消退。

在許多情況下，本發(fā)明的化合物能夠由于氨基和/或羧基基團(tuán)、酸根、或與此類似的基團(tuán)的存在而形成酸和/或堿性鹽。

本發(fā)明的化合物還包括互變異構(gòu)體形式。互變異構(gòu)體形式來源于一個(gè)單鍵與相鄰的雙鍵交換并一起伴隨一個(gè)質(zhì)子的遷移。

藥學(xué)上可接受的鹽是指把母體化合物中的堿性基團(tuán)轉(zhuǎn)換成鹽的形式。藥學(xué)上可接受的鹽包括，但不僅限于，堿性基團(tuán)例如胺(氨)基的無機(jī)或有機(jī)酸鹽類。本發(fā)明藥學(xué)上可接受的鹽可以由母體化合物合成，即母體化合物中的堿性基團(tuán)與1-4當(dāng)量的酸在一個(gè)溶劑系統(tǒng)中反應(yīng)。合適的鹽列舉在remington’spharmaceuticalsciences,17thed.,mackpublishingcompany,easton,pa.,1985,1418和journalofpharmaceuticalscience,66,2,1977中。

藥學(xué)上可接受的酸加成鹽可以由無機(jī)和有機(jī)酸制備。由衍生酸加成鹽的無機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。由衍生酸加成鹽的有機(jī)酸包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸、苯磺酸等。衍生酸加成鹽的無機(jī)酸和有機(jī)酸尤其選自鹽酸、磷酸、硫酸、硝酸、高氯酸、氫溴酸、乙酸、苯甲酸和對甲苯磺酸。

該組合物優(yōu)選被配制成單位劑型。術(shù)語“單位劑型”指的是適于用作給予人類受試者和其他哺乳動(dòng)物的單一劑量的物理離散單位，每一單位含有計(jì)算出用以產(chǎn)生所需要的治療有效的活性物質(zhì)的預(yù)定的量以及相關(guān)的合適的藥用賦形劑(如片劑、膠囊、安瓿)。通式(i)或(ii)的化合物在廣泛的劑量范圍內(nèi)是有效的并且通常給予有效藥物量。優(yōu)選地，對于口服給藥，每個(gè)劑量單位包含10mg至2g的通式(i)或(ii)化合物，更優(yōu)選為10至700mg，而對于腸胃外給藥，優(yōu)選為10至700mg的通式(i)或(ii)化合物，更優(yōu)選為50至200mg。然而，應(yīng)當(dāng)明了，實(shí)際給予的通式(i)或(ii)化合物的量將由醫(yī)師根據(jù)有關(guān)的情況來確定，包括要治療的病癥，選擇的給藥途徑，給予的實(shí)際化合物以及其相對活性，各個(gè)患者的年齡、體重、以及反應(yīng)，患者癥狀的嚴(yán)重性等。

為了制備固體組合物如片劑，將主要的活性組分與藥物賦形劑(或載體)進(jìn)行混合以形成固體預(yù)配制組合物，其包含本發(fā)明的化合物的均勻混合物。當(dāng)稱這些預(yù)配制組合物為均勻的時(shí)候，它是指活性組分被均勻分散在整個(gè)組合物中，以致組合物可以容易地被細(xì)分成相同有效的單位劑型如片劑、丸劑以及膠囊劑。

本發(fā)明的片劑或丸劑可以被涂布或用其它方式被復(fù)合以提供一種具有延長作用優(yōu)點(diǎn)的劑型，或保護(hù)片劑或丸劑免受胃中酸性條件的作用。例如，片劑或丸劑可以包括內(nèi)劑量和外劑量成分，后者具有在前者之上的外皮的形式?？梢杂媚c溶層來分隔兩種成分，其中腸溶層用來阻止在胃中的崩解以及允許內(nèi)成分完整進(jìn)入十二指腸或被延遲釋放。各種材料可以用于這樣的腸溶層或涂層，上述材料包括許多高分子酸以及高分子酸與這樣的材料如蟲膠、十六烷醇、以及醋酸纖維素的混合物。

用于吸入法或吹入法的組合物包括在藥學(xué)上可接受的含水溶劑或有機(jī)溶劑、或其混合物中的溶液和懸浮液，以及散劑。液體或固體組合物可以包含如上文所述的適宜的藥用賦形劑。優(yōu)選的，通過口服或鼻呼吸途徑給予這些組合物以獲得局部或全身效應(yīng)?？梢酝ㄟ^使用惰性氣體來霧化在優(yōu)選的藥學(xué)可接受的溶劑中的組合物。可以直接從霧化裝置吸入霧化溶液，或霧化裝置可以連接于面罩帳狀物、或間歇正壓呼吸機(jī)?？梢杂梢赃m當(dāng)方式遞送劑型的裝置，優(yōu)選口服或鼻途徑，給予溶液、混懸劑、或散劑組合物。

本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的鹽還包括溶劑化物或水合物的形式。一般來說，溶劑化物或水合物的形式與非溶劑化的或非水合的形式等同，并涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明中的某些化合物有可能存在多晶體或無定形的形式。總的來說，所有的物理形式具有同等的用途，并且涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

本發(fā)明還包括所述化合物的前藥。前藥是一個(gè)藥理物質(zhì)(藥物)，由母體藥物衍生而來。一旦進(jìn)入體內(nèi)，前藥就被代謝轉(zhuǎn)變成母體藥物。前藥可通過對母體藥物的一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)進(jìn)行取代而制備，其取代基團(tuán)在體內(nèi)將被降解而釋放出母體化合物來。前藥的制備和使用可在t.higuchiandv.stella,“pro-drugsasnoveldeliverysystems,”vol.14ofthea.c.s.symposiumseries和bioreversiblecarriersindrugdesign,ed.edwardb.roche,americanpharmaceuticalassociationandpergamonpress,1987中找到。

本發(fā)明還提供包括通式(i)或(ii)化合物或其藥學(xué)可接受的鹽或其前藥以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明的藥物組合物可口服，針劑注射，噴霧吸入，皮外用，直腸用，鼻腔用，陰道用，腹腔用，或通過植入儲(chǔ)液囊或透皮貼劑等途徑而使用。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明的具有由通式(i)或(ii)表示的化合物或其藥學(xué)上可以接受的鹽、溶劑化物、多晶型物、互變異構(gòu)體或前藥，或者包括由通式(i)或(ii)表示的化合物的藥物組合物在抑制auroraa激酶的藥物中的應(yīng)用。

在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供用通式(i)或(ii)化合物抑制auroraa激酶的方法。包括將有效量的上述的由通式(i)或(ii)表示的化合物，或其藥學(xué)上可以接受的鹽、溶劑化物、多晶型物、互變異構(gòu)體、前藥，或者包括由通式(i)或(ii)表示的化合物的藥物組合物用于抑制auroraa激酶。

此處的“抑制auroraa激酶活性”術(shù)語意味著，auroraa激酶一旦與本發(fā)明的2,4,7-位取代的喹唑啉類衍生物接觸，其活性相對于沒有與該化合物接觸的情況下有所下降。因此，本發(fā)明提供了一種用2,4,7,8-位取代的喹唑啉類衍生物與auroraa激酶接觸來抑制auroraa激酶活性的方法。本發(fā)明的具有通式(i)或(ii)的化合物主要用以抑制auroraa激酶活性。本發(fā)明的具有通式(i)或(ii)的化合物可用于抑制腫瘤細(xì)胞生長。

除了上面所描述的目的、特征和優(yōu)點(diǎn)之外，本發(fā)明還有其它的目的、特征和優(yōu)點(diǎn)。下面將參照，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。

一般地，本發(fā)明的化合物可以通過本發(fā)明所描述的方法制備得到，除非有進(jìn)一步的說明，其中取代基的定義如式(i)或(ii)所示。下面的反應(yīng)方案和實(shí)施例用于進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明的內(nèi)容。

所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到：本發(fā)明所描述的化學(xué)反應(yīng)可以用來合適地制備許多本發(fā)明的其它化合物，且用于制備本發(fā)明的化合物的其它方法都被認(rèn)為是在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。例如，根據(jù)本發(fā)明那些非例證的化合物的合成可以成功地被所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員通過修飾方法完成，如適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)，通過利用其他已知的試劑除了本發(fā)明所描述的，或?qū)⒎磻?yīng)條件做一些常規(guī)的修改。另外，本發(fā)明所公開的反應(yīng)或已知的反應(yīng)條件也公認(rèn)地適用于本發(fā)明其它化合物的制備。

下面的流程說明制備本發(fā)明化合物的通用方法。

反應(yīng)方案i

化合物4通過反應(yīng)方案i制備得到，其中r¹，r³，r⁴和r^4’具有如本發(fā)明所述定義。原料1與羧酸或酰氯等合成子反應(yīng)生成酰胺鍵，之后關(guān)環(huán)生成喹唑啉酮衍生物2。化合物2與胺發(fā)生碳氮偶聯(lián)反應(yīng)生成化合物3。化合物3與吡唑衍生物發(fā)生直接氨基化反應(yīng)得到化合物4。

反應(yīng)方案ii

化合物7通過反應(yīng)方案ii制備得到，其中r²，r³，r⁴和r^4’具有如本發(fā)明所述定義。原料5與羧酸或酰氯等合成子反應(yīng)生成酰胺鍵，之后關(guān)環(huán)生成喹唑啉酮衍生物6。化合物6與吡唑衍生物發(fā)生直接氨基化反應(yīng)得到化合物7。

反應(yīng)方案iii

化合物11可以由方案iii制備得到，其中r³，r⁴和r^4’具有如本發(fā)明所述定義?；衔?由化合物8與相應(yīng)的胺等發(fā)生碳氮偶聯(lián)反應(yīng)后，在鈀碳與水合肼條件下還原水解生成?；衔?與相應(yīng)的芳基酮在碘單質(zhì)與二甲基亞砜條件下關(guān)環(huán)反應(yīng)生成喹唑啉酮衍生物10?；衔?0與吡唑衍生物發(fā)生直接氨基化反應(yīng)得到化合物11。

反應(yīng)方案iv

化合物15通過反應(yīng)方案iv制備得到，其中r¹，r³，r⁴和r^4’具有如本發(fā)明所述定義。原料12與相應(yīng)的芳基酮在碘單質(zhì)與二甲基亞砜條件下關(guān)環(huán)反應(yīng)生成喹唑啉酮衍生物13。化合物13再與胺發(fā)生碳氮偶聯(lián)反應(yīng)生成化合物14。化合物14與吡唑衍生物發(fā)生直接氨基化反應(yīng)得到化合物15。

以下通過具體的實(shí)施例對本發(fā)明的內(nèi)容作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。

實(shí)施例1：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-苯基喹唑啉(a-1)

步驟1：7-氯-2-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

室溫下往2-氨基-4-氯苯甲酸(1.716g，10mmol)，k2co3(4.146g，30mmol)和干燥乙腈(20ml)的混合物中逐滴加入苯甲酰氯(1.6ml，12mmol)，滴加完畢后加熱到95℃攪拌過夜。反應(yīng)用2nhcl水溶液淬滅，析出棕色固體。抽濾，水洗3次，干燥后得縮合物。將縮合物溶于乙酸酐(25ml)中加熱回流2h。減壓除去反應(yīng)中乙酸和乙酸酐后加入乙酸銨，170℃下反應(yīng)6h。反應(yīng)體系由170℃冷卻至80℃左右后倒入水中，大量固體析出，加入適量ch2cl2劇烈攪拌后抽濾，用少量ch2cl2和水洗滌得到目標(biāo)物(1.225g，產(chǎn)率48％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.66(s,1h),8.19-8.13(m,3h),7.78(d,j＝1.6hz,1h),7.63-7.52(m,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:161.6,153.7,149.9,139.1,132.4,131.7,128.6,127.9,126.7,126.5,119.8ppm.ms(esi+apci)m/z257.2[m+h]⁺.

步驟2：7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-2-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

氮?dú)獗Ｗo(hù)下將7-氯-2-苯基喹唑啉-4(3h)-酮(1g，4.0mmol)，pd2dba3(73mg，0.08mmol)，xphos(152mg，0.32mmol)和naotbu(769mg,8mmol)溶于10ml干燥二氧六環(huán)后加入4-哌啶甲酸叔丁酯(1.482g，8mmol)，密封反應(yīng)瓶。反應(yīng)混合物在90℃下攪拌過夜。用飽和nh4cl溶液淬滅。減壓除去二氧六環(huán)后用加水稀釋，二氯甲烷萃取3次，有機(jī)相濃縮后硅膠柱層析純化，得到黃色固體(164mg,產(chǎn)率80％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.15(s,1h),8.16(d,j＝7.2hz,2h),7.93(d,j＝8.8hz,1h),7.58-7.53(m,3h),7.17(d,j＝7.6hz,1h),7.02(s,1h),3.92(d,j＝12.8hz,2h),3.35(s,1h),3.01(t,j＝11.4hz,2h),1.88(d,j＝11.6hz,2h),1.64-1.58(m,2h),1.41(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:173.9,162.1,155.2,152.9,151.0,133.4,131.7,129.0,128.0,127.4,115.5,111.6,109.4,80.2,47.0,41.5,28.2,27.6ppm.ms(esi+apci)m/z406.2[m+h]⁺.

步驟3：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-苯基喹唑啉

將7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-2-苯基喹唑啉-4(3h)-酮(100mg，0.45mmol)和pybrop(273mg，0.59mmol)溶于6ml干燥乙腈中加入dbu(100μl，1.5mmol)在室溫下攪拌30min后，反應(yīng)體系變澄清，隨后加入3-氨基-5-甲基吡唑(88mg，0.9mmol)。反應(yīng)混合物在70℃下攪拌2天，體系中有大量黃色固體析出。冷卻至室溫后抽濾，用少量乙腈洗滌可得較純粗產(chǎn)品，進(jìn)一步通過硅膠柱層析兩次(ch2cl2/meoh，v:v＝20:1～10:1)純化得到黃色固體(58mg，產(chǎn)率42％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:13.70(s,1h),11.55(s,1h),8.60(d,j＝9.2hz,1h),8.27(d,j＝7.2hz,2h),7.78-7.69(m,3h),7.49(d,j＝7.2hz,1h),7.26(s,1h),6.62(s,1h),4.00(d,j＝13.2hz,2h),3.19(t,j＝11.8hz,2h),2.65-2.60(m,1h),2.33(s,3h),1.94(d,j＝11.2hz,2h),1.60(dd,j＝11.2,10.4hz,2h),1.42(s,9h).13cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:173.3,158.1,156.5,153.9,146.8,138.9,135.5,135.5,131.4,128.6,128.2,124.9,116.5,104.1,103.8,97.8,79.7,46.3,40.9,27.7,27.1,11.0ppm.ms(esi+apci)m/z483.2[m-h]-.

步驟4：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-苯基喹唑啉

將n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-苯基喹唑啉(185mg，0.38mmol)溶于20ml干燥乙醇中，體系冷卻到0℃后緩慢滴加二氯亞砜(0.08ml，1.15mmol)，在室溫下攪拌2h后體系升溫至80℃回流過夜。減壓除去溶劑后用飽和na2co3溶液調(diào)節(jié)體系ph值至11左右，直接硅膠柱層析純化得目標(biāo)產(chǎn)物(120mg，產(chǎn)率69％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.15(s,1h),10.06(s,1h),8.46(d,j＝6.8hz,3h),7.54-7.48(m,3h),7.29(d,j＝8.8hz,1h),7.06(s,1h),6.76(s,1h),4.09(q,j＝7.0hz,2h),3.96(d,j＝12.8hz,2h),3.01(t,j＝11.2hz,2h),2.61(t,j＝11.2hz,1h),2.33(s,3h),1.94(d,j＝11.2hz,2h),1.67(dd,j＝11.2,11.2hz,2h),1.19(t,j＝7.2hz,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:174.6,160.0,157.1,154.0,152.8,148.6,139.5,138.6,130.4,128.75,128.3,124.6,116.8,108.8,106.2,97.9,60.4,47.2,27.6,14.6,11.4ppm.ms(esi+apci)m/z457.2[m+h]⁺.

實(shí)施例2：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸-1-基)-4-氨基-2-苯基喹唑啉(a-2)

步驟1、2和3分別與實(shí)施例1的步驟1、2和3相同。

步驟4：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸-1-基)-4-氨基-2-苯基喹唑啉

將n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸-1-基)-4-氨基-2-苯基喹唑啉(125mg，0.26mmol)溶于tfa/ch2cl2(v:v＝1:1)的混合溶劑中攪拌4小時(shí)，減壓除去溶劑后用飽和nahco3溶液調(diào)節(jié)ph值為中性，用硅膠柱層析(ch2cl2/meoh，v:v＝20:1～10:1)純化得到黃色固體(122mg，產(chǎn)率99％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.36(s,1h),10.83(s,1h),8.52(d,j＝9.6hz,1h),8.38-8.35(m,2h),7.62-7.60(m,4h),7.39(d,j＝7.2hz,1h),7.19(s,1h),6.66(s,1h),3.98(d,j＝13.2hz,2h),3.11(t,j＝11.2hz,2h),2.62-2.56(m,1h),2.33(s,3h),1.97-1.91(m,2h),1.70-1.60(m,2h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:176.1,158.6,158.5,158.3,157.0,154.4,147.2,139.4,132.0,129.2,128.8,125.5,119.2,117.0,116.2,98.3,46.9,27.6,11.5ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc24h25n6o2[m+h]⁺:429.2034；found:429.2019.

實(shí)施例3：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-(2,6-甲氧基苯甲?；?喹唑啉(a-3)

步驟1：2-(2,6-甲氧基苯甲?；?喹唑啉-4(3h)-酮

化合物2-(2,6-甲氧基苯甲?；?喹唑啉-4(3h)-酮的合成方法與實(shí)施例5的步驟1相同，收率為49.4％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.83(s,1h),8.18(d,j＝8.8hz,1h),7.72(d,j＝2.0hz,1h),7.65(dd,j＝2.0,2.0hz,1h),7.48(t,j＝8.4hz,1h),6.79(d,j＝8.8hz,2h),3.68(s,6h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:189.1,161.0,158.9,150.8,149.0,139.9,133.5,129.4,128.6,127.9,122.2,115.4,105.2,56.6,55.3ppm.ms(esi+apci)m/z345.1[m+h]⁺.

步驟2：7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-2-(2,6-甲氧基苯甲?；?喹唑啉-4(3h)-酮

7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-2-(2,6-甲氧基苯甲?；?喹唑啉-4(3h)-酮的合成方法與實(shí)施例1的步驟2相同，收率為14.5％。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:9.70(s,1h),8.15(d,j＝8.8hz,1h),7.42(t,j＝8.4hz,1h),7.12(dd,j＝2.4,2.4hz,1h),7.01(d,j＝2.4hz,1h),6.66(s,1h),6.64(s,1h),3.88-3.83(m,2h),3.75(s,6h),3.02-2.95(m,2h),2.47-2.40(m,1h),1.96(dd,j＝3.6,4.0hz,2h),1.75-1.71(m,2h),1.45(s,9h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ:190.1,173.8,160.5,158.7,155.2,150.3,146.9,132.2,127.9,116.9,114.9,113.7,111.5,104.3,80.6,56.2,47.2,41.7,29.7,29.3,28.1,27.6ppm.ms(esi+apci)m/z494.1[m+h]⁺.

步驟3：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-(2,6-甲氧基苯甲酰基)喹唑啉

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-(2,6-甲氧基苯甲?；?喹唑啉的合成方法與實(shí)施例1的步驟3相同，收率為6.2％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:11.95(s,1h),10.22(s,1h),8.47(d,j＝8.0hz,1h),7.42(t,j＝7.6hz,2h),7.07(s,1h),6.78(d,j＝8.4hz,2h),6.01(s,1h),3.95(d,j＝12.4hz,2h),3.62(s,6h),3.31(s,1h),3.01(t,j＝11.4hz,2h),2.12(s,3h),1.89(d,j＝11.6hz,2h),1.65-1.57(m,2h),1.41(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:194.0,173.4,157.4,157.0,156.4,153.5,151.8,133.1,130.4,124.1,119.6,118.0,108.8,106.5,104.5,99.5,96.8,79.6,55.8,46.5,41.0,27.7,27.2,10.7ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc31h37n6o5[m+h]⁺:573.2820；found:573.2803.

實(shí)施例4：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2-硝基苯基)喹唑啉-4-胺(a-4)

步驟1：2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺

將4-氯-2硝基苯甲腈(5.5g，30mmol)，甲基哌嗪(7.4ml，66mmol)溶于50ml二氧六環(huán)中，在110℃反應(yīng)回流16小時(shí)，減壓除去二氧六環(huán)后加入二氯甲烷萃取，有機(jī)相用無水硫酸鈉干燥，濃縮得到的中間體溶于100ml乙醇中，加入濕pd/c(300mg)和水合肼(5.8ml，120mmol)，反應(yīng)體系在80℃反應(yīng)過夜，減壓除去有機(jī)溶劑后，加入meoh：ch2cl2(1：10)溶劑約150ml溶解產(chǎn)物，過硅藻土柱，meoh：ch2cl2(1：10)溶劑洗滌，有機(jī)相濃縮后得到的固體用少量二氯甲烷洗滌，得目標(biāo)產(chǎn)物(6.4g，產(chǎn)率91％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:7.41(d,j＝8.8hz,1h),6.57(s,2h),6.13(dd,j＝8.9,2.2hz,1h),6.09(d,j＝2.1hz,1h),3.24-2.96(m,4h),2.45-2.27(m,4h),2.20(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:171.6,153.9,152.3,130.4,105.2,103.4,100.6,54.9,47.4,46.2ppm.ms(esi+apci)m/z235.2[m+h]⁺.

步驟2：7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2-硝基)苯基喹唑啉-4(3h)-酮

將鄰硝基苯甲酸(610.6mg，5.0mmol)和hatu(2.3g,6mmol)溶于ch2cl2(50ml)后加入dipea(1.6ml，10.0mmol)，室溫下攪拌1h。加入2-氨基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺室溫下攪拌12h。加入1nhcl(50ml),用ch2cl2(50ml×3)萃取，合并有機(jī)相后用na2so4干燥，減壓除去溶劑后殘留物溶于50mletoh冷卻至0℃，加入10nnaoh(2ml)，室溫下攪拌30min后用濃hcl中和反應(yīng)體系，減壓除去乙醇，殘留物用硅膠柱層析(ch2cl2/meoh，v:v＝30:1)得目標(biāo)產(chǎn)物(674mg，產(chǎn)率61％)。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.41(s,1h),8.19(d,j＝8.0hz,1h),7.96(d,j＝9.2hz,1h),7.91-7.87(m,1h),7.83-7.78(m,2h),7.22(d,j＝8.4hz,1h),6.92(s,1h),3.39(s,8h),2.51(s,3h),2.27(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:161.5,155.4,152.2,150.8,148.0,134.3,131.8,129.9,127.4,124.9,115.6,112.1,109.4,54.5,47.0,45.9ppm.ms(esi+apci)m/z366.2[m+h]⁺.

步驟3：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2-硝基苯基)喹唑啉-4-胺

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2-硝基苯基)喹唑啉-4-胺的合成方法與實(shí)施例1的步驟3相同，收率為45.2％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.09(s,1h),10.16(s,1h),8.48(d,j＝9.2hz,1h),8.01(d,j＝8.0hz,1h),7.92(d,j＝8.0hz,1h),7.80(t,j＝8.0hz,1h),7.68(t,j＝8.0hz,1h),7.37(d,j＝9.2hz,1h),6.98(s,1h),6.42(s,1h),3.46(s,4h),3.04(q,j＝7.2hz,2h),2.64(s,2h),2.35(s,3h),2.24(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:159.4,157.1,154.1,152.4,150.1,138.9,134.9,132.8,131.7,130.3,124.7,124.3,117.1,108.6,106.1,100.0,97.8,54.3,46.8,45.9,45.5,11.5,9.0ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc23h25n8o2[m+h]⁺:445.2095；found:445.2082.

實(shí)施例5：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-苯甲?；蜻?4-胺(a-5)

步驟1：2-苯甲?；蜻?4(3h)-酮

將苯乙酮(272mg,2.0mmol)和碘(615.6mg,2.2mmol)溶于3ml的n,n-二甲基亞砜在110℃下攪拌10min后逐滴加入鄰氨基苯甲酰胺的n,n-二甲基亞砜(2ml)溶液，在110℃下攪拌12h。反應(yīng)完全后加水稀釋，然后用二氯甲烷萃取3次。有機(jī)層用飽和氯化鈉洗滌后，無水硫酸鈉干燥。旋干溶劑，柱色譜分離(二氯甲烷:甲醇＝30:1～20:1)得淡黃色固體(275mg,產(chǎn)率55％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.38(s,1h),8.52(d,j＝7.6hz,2h),8.41(d,j＝8.0hz,1h),7.93(d,j＝8.0hz,1h),7.85(t,j＝7.4hz,1h),7.71-7.63(m,2h),7.55(t,j＝7.6hz,2h).¹³cnmr(101mhz,cdcl3)δ:185.7,161.0,147.6,146.0,134.9,134.3,134.0,131.8,129.5,129.4,128.4,126.9,123.28ppm.ms(esi+apci)m/z251.1[m+h]⁺.

步驟2：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-苯甲酰基喹唑啉-4-胺

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-苯甲?；蜻?4-胺的合成方法與實(shí)施例1的步驟3相同，收率為38％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.23(s,1h),10.71(s,1h),8.75(d,j＝8.0hz,1h),7.99(d,j＝6.8hz,2h),7.93-7.85(m,2h),7.73-7.66(m,2h),7.57(t,j＝7.0hz,2h),6.52(s,1h),2.18(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:192.7,159.2,157.8,149.5,147.8,138.7,135.8,134.1,134.0,130.8,129.1,128.7,127.9,123.9,115.1,98.3,11.2ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc19h16n5o[m+h]⁺:330.1343；found:330.1349.

實(shí)施例6:

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-(2-硝基苯基)喹唑啉

步驟1：7-氯-2-(2-硝基苯基)喹唑啉-4(3h)-酮

化合物7-氯-2-(2-硝基)苯基喹唑啉-4(3h)-酮的合成方法與實(shí)施例1的步驟1相同，收率為47％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.43(s,1h),8.54(s,1h),8.26(d,j＝7.2hz,2h),7.21(d,j＝8.8hz,1h),7.16(d,j＝1.6hz,1h),7.11-7.02(m,4h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:161.4,155.9,151.1,139.9,135.2,131.6,126.2,126.1,125.8,125.2,119.6ppm.ms(esi+apci)m/z302.1[m+h]⁺.

步驟2：7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-2-(2-硝基)苯基喹唑啉-4(3h)-酮

化合物7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-2-(2-硝基)苯基喹唑啉-4(3h)-酮的合成方法與實(shí)施例1的步驟2相同，收率為23％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.27(s,1h),8.30(d,j＝7.2hz,2h),7.91(d,j＝8.8hz,1h),7.50-7.42(m,2h),7.07(d,j＝7.6hz,1h),7.02(s,1h),6.21(s,3h),3.97(d,j＝12.8hz,2h),3.28(s,1h),3.05(t,j＝11.4hz,2h),1.79(d,j＝11.6hz,2h),1.60-1.56(m,2h),1.38(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:176.9,164.1,156.5,151.7,149.8,132.6,130.7,128.6,127.9,127.1,116.5,113.7,108.0,79.1,45.6,45.1,29.3,26.8ppm.ms(esi+apci)m/z451.1[m+h]⁺.

步驟3：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-(2-硝基)苯基喹唑啉

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-(2硝基)苯基喹唑啉的合成方法與實(shí)施例1的步驟3相同，收率為39％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:13.72(s,1h),10.87(s,1h),8.62(d,j＝9.2hz,1h),8.24(d,j＝7.2hz,2h),7.81-7.72(m,2h),7.15(d,j＝7.2hz,1h),6.74(s,1h),6.36(s,1h),3.76(d,j＝13.2hz,2h),3.24(s,3h),3.05(t,j＝11.8hz,2h),2.54-2.45(m,1h),2.39(s,3h),1.71(d,j＝11.2hz,2h),1.64(dd,j＝11.2,10.4hz,2h),1.24(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:173.2,158.9,157.3,155.2,148.7,140.5,135.3,134.0,132.4,128.6,126.8,125.4,118.9,106.4,105.0,99.5,81.9,41.9,29.0,26.2,11.1ppm.ms(esi+apci)m/z530.1[m+h]⁺.

步驟4：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-(2-硝基)苯基喹唑啉

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-(2-硝基)苯基喹唑啉的合成方法與實(shí)施例1的步驟4相同，收率為37％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.08(s,1h),10.24(s,1h),8.37(d,j＝6.4hz,3h),7.62(s,1h),7.36(d,j＝8.0hz,2h),7.10(s,1h),6.25(s,1h),4.07(q,j＝7.2hz,2h),3.88-3.84(m,2h),3.50(t,j＝10.6hz,2h),2.84(t,j＝11.2hz,1h),2.21(s,3h),1.88(d,j＝11.4hz,2h),1.70-1.66(m,2h),1.19(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:174.2,161.5,155.5,155.0,150.4,145.3,140.3,138.2,128.1,128.1,127.6,122.5,113.1,109.4,108.0,94.2,50.4,43.8,29.2,12.2,11.4ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc26h28n7o4[m+h]⁺:502.2134；found:502.2126.

實(shí)施例7：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-(2-甲氧基苯基)喹唑啉-4-胺(a-7)

操作步驟與實(shí)施例4的合成類似，產(chǎn)率為82.8％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.20(s,1h),10.33(s,1h),8.46(d,j＝9.2hz,1h),7.94(s,1h),7.51-7.47(m,1h),7.38(d,j＝8.4hz,2h),7.22(d,j＝8.4hz,2h),7.11(d,j＝7.2hz,2h),6.41(s,1h),3.95(s,3h),3.59(s,4h),2.97(s,4h),2.58(s,3h),2.23(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:158.0,153.6,152.9,151.2,131.8,131.7,131.6,124.8,120.8,117.0,116.5,112.8,108.4,108.3,108.1,108.0,100.0,56.3,53.5,46.0,44.2,12.2ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc24h28n7o[m+h]⁺:430.2350；found:430.2342.

實(shí)施例8：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基喹唑啉-4-胺(a-8)

操作步驟與實(shí)施例4的合成類似，產(chǎn)率為22.5％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.61(s,1h),8.23-8.17(m,4h),7.61-7.49(m,5h),7.39-7.35(m,1h),3.34(s,8h),2.51(s,3h),1.22(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:160.1,157.1,153.8,152.7,147.8,147.7,139.4,130.4,128.8,128.3,124.7,116.6,109.0,106.7,97.6,53.9,46.5,44.9,29.5,11.7ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc23h26n7[m+h]⁺:400.2244；found:400.2239.

實(shí)施例9：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-(2-甲氧基苯基)喹唑啉(a-9)

步驟1：7-氯-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉-4(3h)-酮

化合物7-氯-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉-4(3h)-酮的合成方法與實(shí)施例1的步驟1相同，收率為45％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.50(s,1h),8.24(s,1h),8.03(d,j＝7.2hz,2h),7.37(d,j＝8.8hz,1h),7.24(d,j＝1.6hz,1h),7.10-7.02(m,4h),6.46(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:161.5,154.9,150.3,138.8,135.5,130.2,127.4,126.2,126.1,127.9,118.7,57.8ppm.ms(esi+apci)m/z287.1[m+h]⁺.

步驟2：7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉-4(3h)-酮

化合物7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉-4(3h)-酮的合成方法與實(shí)施例1的步驟2相同，收率為39％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.27(s,1h),8.30(d,j＝7.2hz,2h),7.91(d,j＝8.8hz,1h),7.50-7.42(m,2h),7.07(d,j＝7.6hz,1h),7.02(s,1h),6.21(s,3h),3.97(d,j＝12.8hz,2h),3.28(s,1h),3.05(t,j＝11.4hz,2h),1.79(d,j＝11.6hz,2h),1.60-1.56(m,2h),1.38(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:174.1,163.6,156.6,152.0,150.0,132.6,130.9,128.7,128.0,127.6,116.7,113.5,108.8,79.0,61.8,47.7,45.0,29.1,26.9ppm.ms(esi+apci)m/z436.1[m+h]⁺.

步驟3：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸叔丁酯-1-基)-4-氨基-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉的合成方法與實(shí)施例1的步驟3相同，收率為42％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:13.62(s,1h),11.64(s,1h),8.51(d,j＝9.2hz,1h),8.18(d,j＝7.2hz,2h),7.61-7.53(m,2h),7.09(d,j＝7.2hz,1h),6.87(s,1h),6.49(s,1h),3.89(d,j＝13.2hz,2h),3.77(s,3h),3.20(t,j＝11.8hz,2h),2.74-2.61(m,1h),2.29(s,3h),1.88(d,j＝11.2hz,2h),1.71(dd,j＝11.2,10.4hz,2h),1.37(s,9h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:172.9,159.0,157.1,154.9,147.0,139.1,134.8,133.7,131.9,127.8,127.0,125.5,117.6,105.4,102.8,98.5,80.6,47.8,42.5,28.5,26.5,11.2ppm.ms(esi+apci)m/z515.1[m+h]⁺.

步驟4：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-哌啶甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉的合成方法與實(shí)施例1的步驟4相同，收率為64％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.24(s,1h),11.66(s,1h),8.24(s,1h),7.70(d,j＝6.2hz,3h),7.18(d,j＝8.0hz,2h),7.04(s,1h),6.33(s,1h),4.52-4.40(m,2h),3.92(q,j＝8.0hz,2h),3.68(s,3h),3.55(t,j＝10.2hz,2h),2.76(t,j＝10.6hz,1h),2.08(s,3h),1.69(d,j＝10.6hz,2h),1.24-1.15(m,2h),1.21(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:168.8,162.3,160.0,159.1,156.8,151.0,145.8,140.9,138.7,131.5,128.6,127.3,118.2,117.5,108.7,105.6,95.8,63.0,56.0,51.7,43.8,30.2,17.2,13.7ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc27h31n6o3[m+h]⁺:487.2386；found:487.2381.

實(shí)施例10：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-硝基-2-苯基喹唑啉-4-胺(a-10)

步驟1：7-硝基-2-苯基喹唑啉-4(3h)-酮

化合物7-硝基-2-苯基喹唑啉-4(3h)-酮的合成方法與實(shí)施例1的化合物步驟1相同，收率為62％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.89(s,1h),8.39(s,1h),8.33(d,j＝8.8hz,1h),8.20(d,j＝8.0hz,3h),7.65-7.55(m,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:161.8,155.0,151.8,149.6,132.5,132.4,129.2,128.6,128.5,125.8,122.8,120.5ppm.ms(esi+apci)m/z268.1[m+h]⁺.

步驟2：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-硝基-2-苯基喹唑啉-4-胺

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-硝基-2-苯基喹唑啉-4-胺的合成方法與實(shí)施例1的步驟3相同，收率為44.0％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:10.80(d,j＝13.2hz,1h),8.89(d,j＝8.0hz,1h),8.48(d,j＝12.0hz,3h),8.21-8.17(m,1h),7.56(d,j＝12.8hz,3h),6.78(d,j＝16.4hz,1h),2.39-2.14(m,1h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:161.8,157.4,150.9,150.6,147.5,139.2,138.2,131.3,129.0,128.7,126.3,123.3,119.2,117.9,98.1,11.5ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc18h15n6o2[m+h]⁺:347.1251；found:347.1241.

實(shí)施例11：

8-甲氧基-n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-(2-硝基)苯基喹唑啉-4-胺(a-11)

步驟1：2-(2-硝基苯基)-8-甲氧基-喹唑啉-4(3h)-酮

化合物2-(2-硝基苯基)-8-甲氧基-喹唑啉-4(3h)-酮的合成方法與實(shí)施例1的步驟1相同，收率為57.0％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.81(s,1h),8.26-8.21(m,1h),7.93-7.71(m,4h),7.53-7.47(m,1h),7.41-7.37(m,1h),3.89-3.84(m,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:162.2,154.9,151.0,147.5,139.3,134.7,132.0,131.8,129.7,128.2,125.0,122.3,117.2,115.8,56.3ppm.ms(esi+apci)m/z298.1[m+h]⁺.

步驟2：n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-(2-硝基)苯基-8-甲氧基-喹唑啉-4-胺

化合物n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-(2-硝基)苯基-8-甲氧基-喹唑啉-4-胺的合成方法與實(shí)施例1的步驟3相同，收率為47.0％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.17(s,1h),10.31(s,1h),8.19(d,j＝8.0hz,1h),7.98(t,j＝8.8hz,2h),7.82(t,j＝7.6hz,1h),7.70(t,j＝8.0hz,1h),7.52(t,j＝8.0hz,1h),7.35(d,j＝7.6hz,1h),6.41(s,1h),3.94(s,3h),2.25(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:158.4,157.4,154.8,149.6,141.8,134.7,133.3,131.8,130.6,127.7,124.4,114.2,114.0,113.2,100.0,98.0,56.3,11.1ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc19h17n6o3[m+h]⁺:377.1357；found:377.1339.

實(shí)施例12：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-2-(2-硝基)苯基喹唑啉-4-胺(a-12)

操作步驟與實(shí)施例11的合成類似，產(chǎn)率為38.0％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.18(s,1h),10.46(s,1h),8.68(d,j＝8.4hz,1h),8.06(dd,j＝1.2hz,1h),7.96(dd,j＝1.2hz,1h),7.89-7.77(m,3h),7.73-7.69(m,1h),7.61(t,j＝8.0hz,1h),6.48(s,1h),2.27(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:159.1,157.8,150.3,150.1,147.7,138.7,134.5,133.7,132.9,131.8,130.6,128.3,127.1,124.4,123.7,113.9,98.2,11.3ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc18h15n6o2[m+h]⁺:347.1251；found:347.1243.

實(shí)施例13：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-8-甲氧基-2-苯基喹唑啉-4-胺(a-13)

操作步驟與實(shí)施例11的合成類似，產(chǎn)率為76.3％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.23(s,1h),10.24(s,1h),8.48(d,j＝7.2hz,2h),8.18(d,j＝8.0hz,1h),7.56-7.50(m,3h),7.45(t,j＝8.4hz,1h),7.31(d,j＝7.6hz,1h),6.77(s,1h),3.99(s,3h),2.35(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:164.1,158.0,157.5,146.3,140.4,139.8,131.6,128.3,127.0,115.2,111.7,99.0,56.3,11.4ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc19h18n5o[m+h]⁺:332.1506；found:332.1487.

實(shí)施例14：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-8-甲氧基-2-(2-甲氧基)苯基喹唑啉-4-胺(a-14)

操作步驟與實(shí)施例11的合成類似，產(chǎn)率為80.5％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.75(s,1h),11.94(s,1h),8.34(d,j＝8.0hz,1h),8.26(d,j＝8.0hz,1h),7.72(dd,j＝7.2,8.0hz,2h),7.63(d,j＝8.0hz,1h),7.40(d,j＝8.4hz,1h),7.26(t,j＝7.6hz,1h),6.56(s,1h),4.12(s,3h),4.11(s,3h),2.35(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:161.5,159.4,154.87,146.2,140.5,135.5,132.7,131.9,129.0,122.1,118.5,117.9,116.1,115.9,115.0,113.8,98.8,57.7,57.5,11.3ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc20h20n5o2[m+h]⁺:362.1612；found:362.1574.

實(shí)施例15：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-8-甲氧基-2-(4-甲氧基)苯基喹唑啉-4-胺(a-15)

操作步驟與實(shí)施例11的合成類似，產(chǎn)率為21.5％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.19(s,1h),10.13(s,1h),8.43(d,j＝7.6hz,2h),8.14(d,j＝8.0hz,1h),7.41(t,j＝7.6hz,1h),7.28(d,j＝7.6hz,1h),7.09(d,j＝7.2hz,2h),6.75(s,1h),3.98(s,3h),3.85(s,3h),2.35(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:161.5,158.5,157.6,155.0,148.3,142.7,139.8,131.8,130.0,125.8,114.8,114.6,114.2,112.7,98.0,56.3,55.8ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc20h20n5o2[m+h]⁺:362.1612；found:362.1594.

實(shí)施例16：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-8-甲氧基-2-芐基喹唑啉-4-胺(a-16)

操作步驟與實(shí)施例11的合成類似，產(chǎn)率為79.4％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.36(s,1h),10.87(s,1h),8.18(d,j＝8.0hz,1h),7.50(t,j＝8.0hz,1h),7.40-7.38(m,3h),7.34(t,j＝7.6hz,2h),7.28-7.24(m,1h),6.27-6.17(m,1h),4.25(s,2h),3.99(s,3h),2.20(s,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:163.4,156.7,152.4,152.1,138.7,138.6,137.8,137.3,129.5,128.3,126.5,126.4,114.5,113.3,97.8,56.1,43.7,10.9ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc20h20n5o[m+h]⁺:346.1662；found:346.1652.

實(shí)施例17：

n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)-7-(4-吡咯甲酸乙酯-1-基)-4-氨基-2-苯基喹唑啉(a-17)

操作步驟與實(shí)施例1的合成類似，產(chǎn)率為29.4％。¹hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.21(s,1h),10.38(s,1h),8.48-8.34(m,3h),8.21-8.17(m,2h),7.40(d,j＝8.0hz,1h),7.16(s,1h),6.94(s,1h),6.12(s,1h),4.07(q,j＝8.0hz,2h),3.98(t,j＝12.0hz,1h),3.75(d,j＝10.0hz,2h),3.01(t,j＝12.0hz,2h),2.31(s,3h),1.86(dd,j＝10.0,14.0hz,2h),1.20(t,j＝6.0hz,3h).¹³cnmr(101mhz,dmso-d6)δ:175.6,161.2,158.4,158.4,154.7,152.3,144.7,139.5,138.2,131.3,129.6,123.3,117.1,107.6,94.1,74.0,61.3,52.4,29.8,22.6,11.5ppm.hrms(esi-tof):m/zcalcd.forc25h27n6o2[m+h]⁺:443.2126；found:443.2121.

在本發(fā)明中同時(shí)還制備了如下表1中其它化合物，這些化合物的合成方法參照上述方法。這些化合物的表征數(shù)據(jù)，包括核磁數(shù)據(jù)和高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)如表1所示。

表1化合物a-18～a-29核磁數(shù)據(jù)和高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)

應(yīng)用：

1、本發(fā)明所合成的化合物對aurora激酶抑制實(shí)驗(yàn)

aurora激酶活性測試通過calipermobilityshiftassay方法測定。將化合物從100μm開始依次三倍稀釋，總共得到10個(gè)濃度，并加入aurora激酶、fam標(biāo)記多肽和atp，25℃下反應(yīng)60分鐘后加入終止液終止反應(yīng)；最后采用caliper讀取轉(zhuǎn)化率數(shù)據(jù)，換算成抑制率數(shù)據(jù)后通過xlfit統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算獲得ic50數(shù)據(jù)。以不加藥物的溶劑空白作為陰性對照，以enmd-2076為陽性對照。上述實(shí)施例與表1中各化合物都具有aurora激酶抑制作用，且對auroraa激酶的活性顯著優(yōu)于aurorab，即對auroraa激酶的抑制具有一定的選擇性。測試結(jié)果如表2所示。

表2實(shí)施例化合物的aurora激酶抑制活性(ic50,μm)

2、本發(fā)明所合成的化合物對腫瘤細(xì)胞株的活性實(shí)驗(yàn)

腫瘤細(xì)胞株包括：人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株k562，人宮頸癌細(xì)胞株hela，人前列腺細(xì)胞癌du145，急性淋巴母細(xì)胞白血病系molt-4，人乳腺癌細(xì)胞株mcf-7，mda-mb-231和sk-br-3。

實(shí)驗(yàn)方法：細(xì)胞株在10％fbs和1％盤尼西林/鏈霉素的dmem/rpmi培養(yǎng)基中生長存活。所有細(xì)胞株都存放于thermo/formascientificco2細(xì)胞培養(yǎng)箱中生長，條件：含5％co2的空氣，溫度為37℃。細(xì)胞活性分析是通過cck8(dojindo)方法測定的。以400-800/孔的細(xì)胞密度接種于384孔培養(yǎng)板中，加入不同濃度的化合物，經(jīng)過72小時(shí)孵育后，加入cck8試劑，用envision2104多功能微孔分析儀(perkinelmer)測定450nm波長下吸光值，最后使用prism(version5，graphpadsoftware)通過量效曲線計(jì)算出抗腫瘤細(xì)胞增殖ic50值。

實(shí)驗(yàn)以enmd2076為陽性對照，實(shí)施例化合物及對照物的ic50值如下表所示。

表3本發(fā)明化合物的抗腫瘤細(xì)胞增殖活性(ic50,μm)

以上僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。