本發(fā)明屬于生物除臭技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)合微生物除臭劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
惡臭是指一切刺激嗅覺器官引起人們不愉快及損害生活環(huán)境的氣體物質(zhì)，它是大氣污染的一種形式。惡臭已成為當(dāng)今世界七種典型公害中的一種并且已引起世界各國和人們的廣泛關(guān)注。惡臭氣體的種類主要有H2S、SO2、硫醇、氨、胺類、鹵代烴等。惡臭氣體主要來源有生活源與工業(yè)源。生活源是指日常生活中產(chǎn)生的惡臭，如家用衛(wèi)生間、公廁、污水處理廠、垃圾轉(zhuǎn)運站等；工業(yè)源是指工業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)生的惡臭，如造紙廠、化工廠、制藥廠、農(nóng)藥廠、養(yǎng)殖廠、屠宰場、畜牧場污水處理廠等。不同的惡臭氣體對周邊環(huán)境造成極大的危害，嚴(yán)重影響了周邊居民的身體健康因此，迫切需要加強對惡臭氣體的治理。
目前除臭研究工作主要集中在物理除臭、化學(xué)除臭和生物除臭三方面，生物除臭以除臭效率高、無二次污染、操作簡單、成本低廉，成為目前治理惡臭環(huán)境的一個重要研究方向。
申請?zhí)枮?01310442504.4的發(fā)明專利公開了一種生產(chǎn)除臭微生物制劑的方法，該方法通過將嗜熱鏈球菌、惡臭假單胞菌、沼澤紅假單胞菌、短小芽抱桿菌和屎腸球菌進行發(fā)酵，然后冷凍干燥，按比例混合后制成除臭劑，可消除不同環(huán)境中的惡臭氣體。但是由于該生物除臭劑需要將五種不同微生物單獨分別發(fā)酵后再混合制備而成，因此生產(chǎn)過程復(fù)雜，增加了生物除臭劑的生產(chǎn)成本。申請?zhí)枮?1129774.3的發(fā)明專利公開了一種微生物除臭劑及其制備方法與應(yīng)用，該生物除臭劑僅由酵母菌屬中的產(chǎn)朊酵母和小橢圓酵母兩種酵母混合發(fā)酵制備而成，因此限制了該生物除臭劑的應(yīng)用范圍。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷和不足，利用從江西撫州市生活垃圾填埋場的土壤中分離選育而得到的一株解淀粉芽孢桿菌，提供一種除臭效果好、應(yīng)用范圍廣、生產(chǎn)成本低的復(fù)合微生物除臭劑及其制備方法。
本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，來實現(xiàn)發(fā)明目的。
一種復(fù)合微生物除臭劑，為微生物發(fā)酵液，所述的微生物由解淀粉芽孢桿菌、膠紅酵母、糞腸球菌和巴氏醋桿菌組合而成的混合菌；混合菌的活菌總數(shù)不少于3.0×1010cfu/mL。
所述的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)，從江西撫州市生活垃圾填埋場的土壤中分離選育而得，菌株號為SQ-001，菌株SQ-001已于2016年8月30日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號樓，郵編100101，菌株保藏編號為CGMCC No.12917。
所述的膠紅酵母(Rhodotorula mucilaginosa)，來源并購買于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，膠紅酵母菌的菌株保藏編號為CGMCC No.2.4008。
所述糞腸球菌(Enterococcus faecalis)，來源并購買于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，糞腸球菌的菌株保藏編號為CGMCC No.1.2024。
所述巴氏醋桿菌(Acetobacter pasteurianus)，來源并購買于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，巴氏醋桿菌的菌株保藏編號為CGMCC No.1.2830。
本發(fā)明還同時提供了一種復(fù)合微生物除臭劑的制備方法，包括以下步驟：
(1)種子的擴大培養(yǎng)：將解淀粉芽孢桿菌，膠紅酵母，糞腸球菌，巴氏醋桿菌分別接種于含碳源和氮源的種子培養(yǎng)基中，經(jīng)攪拌培養(yǎng)得到適用于發(fā)酵接種的種子液，分別為巴氏醋桿菌種子液、解淀粉芽孢桿菌種子液、膠紅酵母種子液和糞腸球菌種子液；
(2)混菌液體的發(fā)酵培養(yǎng)：將步驟(1)中獲得的巴氏醋桿菌種子液，接種于含碳源、氮源、無機鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基中，經(jīng)攪拌培養(yǎng)后，再分別接入步驟(1)中獲得的解淀粉芽孢桿菌種子液、膠紅酵母種子液和糞腸球菌種子液，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)，得到混菌發(fā)酵液；
(3)復(fù)合微生物除臭劑的獲得：調(diào)整步驟(2)得到的混菌發(fā)酵液的pH值至2.5～3.5并抽真空，得到含有休眠活菌的液體復(fù)合微生物除臭劑。
步驟(1)所述的含碳源和氮源的種子培養(yǎng)基，其碳源選自葡萄糖、麥芽糖、甘油、可溶性淀粉的一種或幾種，碳源含量為1～5g/100mL；其氮源選自酵母膏、蛋白胨、玉米漿、大豆粉、硫酸銨的一種或幾種，氮源含量為0.5-～5g/100mL，種子培養(yǎng)基的pH優(yōu)選范圍為pH5.5～7.0。
步驟(2)所述的含碳源、氮源、無機鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基，其碳源選自葡萄糖、麥芽糖、甘油、可溶性淀粉、糖蜜的一種或幾種，碳源含量為2～5g/100mL；其氮源選自酵母膏、蛋白胨、玉米漿、大豆粉、玉米粉、蠶蛹粉的一種或幾種，氮源含量為1～6g/100mL；其無機鹽包含鎂鹽、磷酸鹽，無機鹽含量為0.001～0.2g/100mL；鎂鹽選自硫酸鎂或氯化鎂；磷酸鹽選自磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉中的一種或幾種。
優(yōu)選地，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖2.5～3.5g/100mL、酵母膏0.2～0.5g/100mL、玉米漿2.5～5.0g/100mL、磷酸二氫鉀0.02～0.08g/100mL、硫酸鎂0.01～0.05g/100mL，余量為水，pH為5.5～7.0。
步驟(1)和(2)所述的攪拌培養(yǎng)，其參數(shù)優(yōu)選為：攪拌轉(zhuǎn)速120-200rpm、培養(yǎng)溫度28-37℃，培養(yǎng)時間12-36h。
步驟(3)所述的抽真空為：在0.05～0.088MPa真空度下，將發(fā)酵液保持15～20min，以去除發(fā)酵液中的空氣和部分水份。
步驟(3)所述的液體復(fù)合微生物除臭劑，其混合菌活菌總數(shù)不少于3.0×1010cfu/mL。
本發(fā)明中解淀粉芽孢桿菌菌株SQ-001經(jīng)中國科學(xué)院微生物研究所檢測鑒定，其16S rRNA基因序列和atpA基因序列如下：
16S rRNA基因序列:
TCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTAGGAGCCAGCCGCA
atpA基因序列:
GGCGACGCTTCAGTTCACGGTATGAAGCCAGGTCAAGACGCAATGTTCCAGCTACCTTTTTCATCGCTTTGATTTGGGCTGATCCGCCGACACGGGATACGGATAATCCGGCATTGATCGCAGGACGCACGCCTGAGAAGAATAGGTCGGATTGAAGGAAAATCTGTCCGTCAGTAATGGAAATGACGTTTGTCGGGATATAAGCGGAGATATCTCCTGCTTGTGTTTCGACGAACGGCAGCGCCGTAATTGATCCTGCGCCTTTTGCGTCACTCAGCTTGGCTGCGCGCTCAAGCAGACGGGAGTGAAGATAGAATACATCCCCAGGGAATGCTTCACGGCCCGGCGGACGGCGAAGAAGCAATGACAGCTCACGGTAAGCGGCCGCTTGTTTGGATAAATCATCATATACGACGAGAACGTGCTTGCCGTTGTACATGAATTCTTCACCCATTGTCACCCCTGCATACGGTGCAAGGTAAAGAAGCGGAGCCGGCTGTGAAGCGGACGCCGTCACGACAATCGTGTAATCAAGCGCGCCATGCTTACGAAGTGTTTCCACCACGCCGCGCACTGTAGATTCTTTTTGACCGATCGCTACGTACACACAGATCATGTCTTGATCTTTTTGGTTTAAGATTGTATCAATCGCAACAGATGTTTTACCTGTCTGACGGTCACCGATAATCAGCTCACGCTGTCCGCGGCCGATCGGAATTAACGCGTCAATCGCTTTGATACCCGTTTGCAGCGGCTCATGTACCGATTTACGGTCCATTACGCCTGGAGCCTGGCTTTCGATCGGACGTGTTTTGCTTGTCAGAATCGGACCCAGTCCGTCTACCGGCTGTCCTAACGGGTTGACGATACGTCCGATTAATTCTTCACCTACAGGAACTTCCATGATGCGGCCCGTTCTTTTGACCTCATCACCTTCACGGATATCTCTGTAAGGTCCTAAGATAACGATACCTACGTTGGATTCTTCAAGGTTTTGAGCCATACC。
有益效果：
本發(fā)明所得到的液體復(fù)合微生物除臭劑，可以有效分解產(chǎn)生臭味的生物有機質(zhì)，協(xié)同吸收利用各種惡臭氣體，除臭效果好，應(yīng)用范圍廣。這是因為本發(fā)明將解淀粉芽孢桿菌CGMCC No.12917，膠紅酵母CGMCC No.2.4008，糞腸球菌CGMCC No.1.2024，巴氏醋桿菌CGMCC No.1.2830分別接種于種子培養(yǎng)基進行擴大培養(yǎng)，然后再接種于發(fā)酵培養(yǎng)基進行發(fā)酵培養(yǎng)，通過混菌發(fā)酵技術(shù)得到具有除臭功能的微生物組合物，并且該復(fù)合微生物菌種活菌總數(shù)不少于3.0×1010cfu/m數(shù)量級，使發(fā)酵液同時可以分解蛋白質(zhì)、脂肪和淀粉這些產(chǎn)生臭味的生物有機質(zhì)中的主要成分。同時，由于解淀粉芽孢桿菌、膠紅酵母、糞腸球菌和醋酸菌之間的協(xié)同作用，能夠?qū)2S、SO2、硫醇、氨、胺類等惡臭氣體作為營養(yǎng)物質(zhì)利用或者通過吸附作用將不同惡臭氣體給吸附。
本發(fā)明所得到的液體復(fù)合微生物除臭劑，貨架期長，保藏方便。在本發(fā)明中，我們通過抽真空的方法使發(fā)酵液中的微生物菌株處于休眠，大幅增加了微生物除臭劑的貨架期，便于保藏。
本發(fā)明生產(chǎn)工藝簡單，活菌總量高，生產(chǎn)成本低，有利于大規(guī)模推廣應(yīng)用。本發(fā)明由于采用了混菌發(fā)酵工藝，使得在液態(tài)發(fā)酵體系中由于不同菌株間的協(xié)同生長作用，大幅度提高了發(fā)酵液中總菌數(shù)量；另一方面，因為采用了混菌發(fā)酵工藝，一次發(fā)酵就可以得到不同微生物組合物，縮短了生產(chǎn)周期、提高生產(chǎn)設(shè)備的利用率，降低了生產(chǎn)成本，有利于大規(guī)模推廣應(yīng)用。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例1
解淀粉芽孢桿菌的菌株來源、菌株分離、基因序列測定：
菌株來源：從江西撫州市生活垃圾填埋場的土壤中分離選育而得，菌株號為SQ-001，經(jīng)中國微生物菌種保藏中心鑒定為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amgloliquefaciens)，并于2016年8月30日保藏于北京的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，該株解淀粉芽孢桿菌的菌株保藏編號為CGMCC No.12917。菌株SQ-001所述的菌株SQ-001，菌體呈桿狀，革蘭氏染色陽性，形成芽孢，不膨大；常規(guī)生理生化實驗表明，是好氧菌，接觸酶，氧化酶，VP試驗呈陽性，在7％的NaCl中生長，PH5.7生長，水解淀粉，還原硝酸鹽成亞硝酸鹽。
所述的菌株SQ-001是通過下列具體分離步驟而獲得的：
A標(biāo)本采集：從江西撫州市生活垃圾填埋場的土壤中，采集土壤標(biāo)本，保存?zhèn)溆茫?/p>
B菌株分離：稱取采集的土壤標(biāo)本約10g放在已滅菌的研缽內(nèi)，在無菌操作臺上研磨至土壤顆粒較均一為止；稱取1g研磨好的土樣置于無菌試管中，加入9mL無菌水充分震蕩30分鐘制成1：10的土壤稀釋液，從上述溶液中取出1mL加入9mL無菌水充分震蕩成10-2的土壤稀釋液，依此類推至10-3、10-4、10-5的土壤稀釋液后備用，采用涂抹法或混菌法進行平板接種；所述的涂抹法為：分別吸取上述5個濃度的土壤稀釋液0.05mL，分別加入已制好的含有NA培養(yǎng)基的無菌平板上，用滅菌和玻璃刮刀將稀釋液均勻涂布開，設(shè)三個重復(fù)；所述的混菌法為：分別吸取上述5個濃度的土壤稀釋液各1mL，分別加入無菌空白培養(yǎng)皿中，將已熔化的45-50℃的NA培養(yǎng)基倒入，輕輕搖轉(zhuǎn)使樣品和培養(yǎng)基混合均勻，待培養(yǎng)基凝固，設(shè)三個重復(fù)。
C純化培養(yǎng)：將上述分離平皿，放入30℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)3-7天至單菌落長出，將具有解淀粉芽孢桿菌菌落形態(tài)特征進行標(biāo)記并及時挑取單菌落至NA培養(yǎng)基平板上，采用劃線分離的方法進行純化并入30℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)，將純化培養(yǎng)后的單菌落再轉(zhuǎn)接至含有NA培養(yǎng)基的斜面管內(nèi)，繼續(xù)于30℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)3-7天，得到單菌落斜面管；
D液體培養(yǎng)：從單菌落斜面管內(nèi)逐一挑取解淀粉芽孢桿菌，接種于液體培養(yǎng)基中，在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)24h，活菌孢子數(shù)達到6×108左右，得到適于保存的種子；
E菌株保存：將上述經(jīng)液體培養(yǎng)后的解淀粉芽孢桿菌種子加入經(jīng)過高溫滅菌的甘油，使甘油在種子液中的濃度為35％(V/V)，制成解淀粉芽孢桿菌甘油凍存管，放在-80℃冰箱保存，或放在-196℃液氮罐中進行超低溫保存。
基因序列測定：將解淀粉芽孢桿菌甘油凍存管送外進行基因序列測定，經(jīng)中國科學(xué)院微生物研究所檢測鑒定，其16S rRNA基因序列和atpA基因序列，具體見SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。
實施例2
復(fù)合微生物除臭劑的制備
(1)種子制備
種子培養(yǎng)基：葡萄糖2.5g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，玉米漿2.5g/100mL，水，調(diào)pH為6.5。將解淀粉芽孢桿菌CGMCC No.12917、膠紅酵母CGMCC No.2.4008、糞腸球菌CGMCC No.1.2024和巴氏醋桿菌CGMCC No.1.2830菌接種于上述種子培養(yǎng)基中，在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)24h，即得適于接種的種子。
(2)混菌液體發(fā)酵培養(yǎng)
發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖2.5g/100mL，酵母膏0.3g/100mL，玉米漿,4g/100mL，磷酸二氫鉀0.03g/100mL，硫酸鎂0.03g/100mL。將(1)中獲得的醋酸菌種子按照發(fā)酵液體積的6％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在旋轉(zhuǎn)式搖床150rpm轉(zhuǎn)速下，32℃培養(yǎng)12h后，再分別按照發(fā)酵液體積2％接入(1)中獲得的解淀粉芽孢桿菌、膠紅酵母和糞腸球菌種子，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)30h即可獲得混合微生物組合物。
(3)發(fā)酵結(jié)束后調(diào)整發(fā)酵液的pH值至3.0，然后將發(fā)酵液在0.06MPa真空度下保持
15min以去除發(fā)酵液中的空氣，得到含有處于休眠狀態(tài)活菌的微生物除臭劑。
實施例3
復(fù)合微生物除臭劑的制備
(1)種子制備
種子培養(yǎng)基：葡萄糖5g/100mL，酵母膏1g/100mL，玉米漿3g/100mL，水，調(diào)pH為6.0。將解淀粉芽孢桿菌CGMCC No.12917、膠紅酵母CGMCC No.2.4008、糞腸球菌CGMCC No.1.2024和巴氏醋桿菌CGMCC No.1.2830菌接種于上述種子培養(yǎng)基中，在旋轉(zhuǎn)式搖床180rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)24h，即得適于接種的種子。
(2)混菌液體發(fā)酵培養(yǎng)
發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖3g/100mL，酵母膏0.5g/100mL，黃豆粉4g/100mL，磷酸二氫鉀0.05g/100mL，硫酸鎂0.04g/100mL。將(1)中獲得的巴氏醋桿菌種子按照發(fā)酵液體積的5％接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在旋轉(zhuǎn)式搖床170rpm轉(zhuǎn)速下，30℃培養(yǎng)24h后，再分別按照發(fā)酵液體積6％接入(1)中獲得的解淀粉芽孢桿菌、膠紅酵母和糞腸球菌種子，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)30h即可獲得混合微生物組合物。
(3)發(fā)酵結(jié)束后調(diào)整發(fā)酵液的pH值至3.5，然后將發(fā)酵液在0.07MPa真空度下保持20min以去除發(fā)酵液中的空氣，得到含有處于休眠狀態(tài)活菌的微生物除臭劑。
實施例4
復(fù)合微生物除臭劑的應(yīng)用
在1L燒杯中加入200g新鮮牛糞，加入10mL本發(fā)明的復(fù)合微生物除臭劑，和糞便混勻后，用保鮮膜密封燒杯，同時以不加菌劑做對照，每組實驗設(shè)置三個重復(fù)，5天后測定氨氣、硫化氫和、吲哚等惡臭強度濃度。測定結(jié)果表明，加入復(fù)合微生物除臭劑組的惡臭去除率達到95％以上，而對照組對惡臭的去除率僅為10％左右。說明本發(fā)明的微生物制劑對牛糞具有很好的除臭效果，能有效的改善空氣質(zhì)量。
實施例5
復(fù)合微生物除臭劑的應(yīng)用
取100g新鮮垃圾平攤于5個培養(yǎng)皿中后，加入20mL本發(fā)明的復(fù)合微生物除臭劑，放于塑料袋中，充氣50L后扎緊密封。分別設(shè)置投復(fù)合微生物除臭劑和自來水作為對照。每個處理設(shè)3個重復(fù)。7天后測定氨氣、硫化氫和、吲哚等惡臭強度濃度。測定結(jié)果表明，加入復(fù)合微生物除臭劑組的惡臭去除率達到90％以上，而對照組對惡臭的去除率僅為15％左右。說明本發(fā)明的微生物制劑對垃圾具有很好的除臭效果，能有效地改善空氣質(zhì)量。
以上對本發(fā)明的具體實施例進行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述具體實施例。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對本發(fā)明進行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都涵蓋在本發(fā)明范圍內(nèi)。
SEQUENCE LISTING
<110> 江西順泉生物科技有限公司
<120> 一種復(fù)合微生物除臭劑及其制備方法
<130> 12
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1416
<212> DNA
<213> 16S rRNA基因序列
<400> 1
tcagtcgagc ggacagatgg gagcttgctc cctgatgtta gcggcggacg ggtgagtaac 60
acgtgggtaa cctgcctgta agactgggat aactccggga aaccggggct aataccggat 120
ggttgtttga accgcatggt tcaaacataa aaggtggctt cggctaccac ttacagatgg 180
acccgcggcg cattagctag ttggtgaggt aacggctcac caaggcgacg atgcgtagcc 240
gacctgagag ggtgatcggc cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg 300
cagcagtagg gaatcttccg caatggacga aagtctgacg gagcaacgcc gcgtgagtga 360
tgaaggtttt cggatcgtaa agctctgttg ttagggaaga acaagtgccg ttcaaatagg 420
gcggcacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg 480
taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggaa ttattgggcg taaagggctc gcaggcggtt 540
tcttaagtct gatgtgaaag cccccggctc aaccggggag ggtcattgga aactggggaa 600
cttgagtgca gaagaggaga gtggaattcc acgtgtagcg gtgaaatgcg tagagatgtg 660
gaggaacacc agtggcgaag gcgactctct ggtctgtaac tgacgctgag gagcgaaagc 720
gtggggagcg aacaggatta gataccctgg tagtccacgc cgtaaacgat gagtgctaag 780
tgttaggggg tttccgcccc ttagtgctgc agctaacgca ttaagcactc cgcctgggga 840
gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca 900
tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt cttgacatcc tctgacaatc 960
ctagagatag gacgtcccct tcgggggcag agtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc 1020
tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttgat cttagttgcc 1080
agcattcagt tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg 1140
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<210> 2
<211> 1006
<212> DNA
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<400> 2
ggcgacgctt cagttcacgg tatgaagcca ggtcaagacg caatgttcca gctacctttt 60
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aaatgacgtt tgtcgggata taagcggaga tatctcctgc ttgtgtttcg acgaacggca 240
gcgccgtaat tgatcctgcg ccttttgcgt cactcagctt ggctgcgcgc tcaagcagac 300
gggagtgaag atagaataca tccccaggga atgcttcacg gcccggcgga cggcgaagaa 360
gcaatgacag ctcacggtaa gcggccgctt gtttggataa atcatcatat acgacgagaa 420
cgtgcttgcc gttgtacatg aattcttcac ccattgtcac ccctgcatac ggtgcaaggt 480
aaagaagcgg agccggctgt gaagcggacg ccgtcacgac aatcgtgtaa tcaagcgcgc 540
catgcttacg aagtgtttcc accacgccgc gcactgtaga ttctttttga ccgatcgcta 600
cgtacacaca gatcatgtct tgatcttttt ggtttaagat tgtatcaatc gcaacagatg 660
ttttacctgt ctgacggtca ccgataatca gctcacgctg tccgcggccg atcggaatta 720
acgcgtcaat cgctttgata cccgtttgca gcggctcatg taccgattta cggtccatta 780
cgcctggagc ctggctttcg atcggacgtg ttttgcttgt cagaatcgga cccagtccgt 840
ctaccggctg tcctaacggg ttgacgatac gtccgattaa ttcttcacct acaggaactt 900
ccatgatgcg gcccgttctt ttgacctcat caccttcacg gatatctctg taaggtccta 960
agataacgat acctacgttg gattcttcaa ggttttgagc catacc 1006