本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及蛋白質(zhì)TaPAP2-5A在調(diào)控植物穗型性狀和生殖器官發(fā)育時間中的應用。

背景技術(shù)：

小麥是世界上主要的糧食作物之一，全世界35-40％的人口以它為主要的食物來源。目前，在有限耕地面積的情況下，選育單產(chǎn)突出的小麥新品種是穩(wěn)定和提高小麥產(chǎn)量最經(jīng)濟有效的途徑。因此，小麥的結(jié)實性器官“小麥穗”一直是小麥育種學家研究的重要對象。

花在花序柄上有規(guī)律的排列方式稱為花序，花序發(fā)育是植物形態(tài)建成的重要組成，花序分生組織由莖尖分生組織分化、發(fā)育而來，側(cè)部器官由幼葉、側(cè)枝進一步發(fā)育成為花及花序(即小穗)。小麥為復穗狀花序，穗軸上著生若干軸節(jié)，每個軸節(jié)基部著生一個小穗。每個小穗產(chǎn)生3-10朵小花。穗型性狀包括穗粒數(shù)、小穗數(shù)和小花數(shù)。于振文等研究表明，穗粒重與籽粒產(chǎn)量之間有極顯著的正相關(guān)。因此，高產(chǎn)田可以側(cè)重于改善單株的生長發(fā)育條件，提高單穗生產(chǎn)力。每穗粒數(shù)與每穗粒重之間存在極顯著的正相關(guān)，千粒重與每穗粒重間僅表現(xiàn)一定的正向關(guān)系，說明在一定的栽培條件下，通過增加每穗粒數(shù)的途徑提高穗粒重是一種可行的途徑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何調(diào)控小麥穗型性狀和/或幼穗發(fā)育時間。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了蛋白質(zhì)TaPAP2-5A在調(diào)控植物穗型性狀和/或生殖器官發(fā)育時間中的應用；所述穗型性狀可為d1)和/或d2)和/或d3)：d1)穗粒數(shù)；d2)小穗數(shù)；d3)小花數(shù)。

上述應用中，所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A可為a1)或a2)或a3)：

a1)氨基酸序列是序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)；

a2)在序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質(zhì)；

a3)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的與植物穗型性狀和/或生殖器官發(fā)育時間相關(guān)的蛋白質(zhì)。

其中，序列表中序列2可由238個氨基酸殘基組成。

上述a3)中的蛋白質(zhì)，所述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

上述a3)中的蛋白質(zhì)可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進行生物表達得到。

上述a3)中的蛋白質(zhì)的編碼基因可通過將序列表中序列1所示的DNA序列中缺失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其5′端和/或3′端連上標簽的編碼序列得到。

編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核酸分子在調(diào)控植物穗型性狀和/或生殖器官發(fā)育時間中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍。所述穗型性狀可為d1)和/或d2)和/或d3)：d1)穗粒數(shù)；d2)小穗數(shù)；d3)小花數(shù)。

上述應用中，編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核酸分子可為如下b1)或b2)或b3)或b4)所示的DNA分子：

b1)編碼區(qū)如序列表中序列1所示的DNA分子；

b2)核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；

b3)與b1)或b2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的DNA分子；

b4)在嚴格條件下與b1)或b2)限定的核苷酸序列雜交，且編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的DNA分子。

本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以很容易地采用已知的方法，例如定向進化和點突變的方法，對本發(fā)明的編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核苷酸序列進行突變。那些經(jīng)過人工修飾的，具有與本發(fā)明分離得到的所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A，均是衍生于本發(fā)明的核苷酸序列并且等同于本發(fā)明的序列。

這里使用的術(shù)語“同一性”指與天然核酸序列的序列相似性?！巴恍浴卑ㄅc本發(fā)明的編碼序列表的序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核苷酸序列具有75％或更高，或80％或更高，或85％或更高，或90％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或計算機軟件進行評價。使用計算機軟件，兩個或多個序列之間的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用來評價相關(guān)序列之間的同一性。

上述任一所述應用中，所述調(diào)控植物穗型性狀可為植物穗型性狀劣。所述穗型性狀劣可體現(xiàn)為e1)和/或e2)和/或e3)：e1)穗粒數(shù)減少；e2)小穗數(shù)減少；e3)小花數(shù)減少。所述調(diào)控植物生殖器官發(fā)育時間具體可為縮短植物生殖器官發(fā)育時間。

上述任一所述應用中，所述縮短植物生殖器官發(fā)育時間具體可為縮短植物幼穗發(fā)育時間。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法。

本發(fā)明所提供的培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，可包括將編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核酸分子導入受體植物中，得到轉(zhuǎn)基因植物的步驟；與所述受體植物相比，所述轉(zhuǎn)基因植物的穗型性狀改變和/或生殖器官發(fā)育時間縮短。

上述方法中，所述“將編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核酸分子導入受體植物中”可通過向受體植物中導入重組載體實現(xiàn)；所述重組載體可為向表達載體插入編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核酸分子得到的重組質(zhì)粒。

上述方法中，編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的核酸分子可為如下b1)或b2)或b3)或b4)所示的DNA分子：

b1)編碼區(qū)如序列表中序列1所示的DNA分子；

b2)核苷酸序列是序列表中序列1所示的DNA分子；

b3)與b1)或b2)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的DNA分子；

b4)在嚴格條件下與b1)或b2)限定的核苷酸序列雜交，且編碼所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的DNA分子。

所述重組載體具體可為重組質(zhì)粒pUbi::TaPAP2-5A-pAHC25。所述重組質(zhì)粒pUbi::TaPAP2-5A-pAHC25具體可為將載體pUbi-pAHC25的限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和KpnⅠ識別序列間的小片段替換為序列表中序列1自5’末端起第1至714位所示的DNA分子。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明還提供了一種植物育種方法。

本發(fā)明所提供的植物育種方法，可包括如下步驟：增加植物中所述蛋白質(zhì)TaPAP2-5A的含量和/或活性，從而穗型性狀改變和/或生殖器官發(fā)育時間縮短。

上述任一所述方法中，所述穗型性狀改變可為穗粒數(shù)減少和/或小穗數(shù)減少和/或小花數(shù)減少。所述生殖器官發(fā)育時間縮短具體可表現(xiàn)為幼穗發(fā)育時間縮短。所述幼穗發(fā)育時間具體可為幼穗在二棱期的發(fā)育時間和/或幼穗在小花分化期的發(fā)育時間和/或幼穗在雌雄蕊分化期的發(fā)育時間。

上述任一所述植物可為如下c1)至c5)中的任一種：c1)雙子葉植物；c2)單子葉植物；c3)禾本科植物；c4)小麥；c5)小麥品種科農(nóng)199。

實驗證明，在科農(nóng)199中過表達蛋白質(zhì)TaPAP2-5A，可顯著縮短幼穗的發(fā)育時間(如在二棱期的發(fā)育時間、在小花分化期的發(fā)育時間、在雌雄蕊分化期的發(fā)育時間)，進而導致小穗數(shù)減少、小花數(shù)減少和穗粒數(shù)減少。因此，蛋白質(zhì)TaPAP2-5A在調(diào)控小麥穗型性狀和幼穗發(fā)育時間中具有重要的應用價值，在培育小麥品種中具有廣闊前景。

附圖說明

圖1為TaPAP2-5A基因的相對表達量與每穗小穗數(shù)的相關(guān)性分析。

圖2為TaPAP2-5A基因的相對表達量與每穗小花數(shù)的相關(guān)性分析。

圖3為TaPAP2-5A基因的相對表達量與每穗穗粒數(shù)的相關(guān)性分析。

圖4為電鏡掃描的部分實驗結(jié)果。

圖5為各個發(fā)育時期發(fā)育天數(shù)的部分統(tǒng)計結(jié)果。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。

下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

RNA Miniprep Kit為Axygen公司的產(chǎn)品。TransScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix Kit為TransGen的產(chǎn)品。Premix Ex Taq^TM為TaKaRa公司的產(chǎn)品。逆轉(zhuǎn)錄酶為TransGen的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為AT301-02。KOD-plus-DNA聚合酶和10×PCR buffer for KOD-plus均為TOYOBO公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為KOD-201。載體pGEM-Teasy為Promega公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為A3600。掃描電子顯微鏡臨界點干燥儀為HITACHI公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品型號為HCP-2。冷凍掃描電子顯微鏡為HITACHI公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品型號為S-3000N。

載體pUbi-pAHC25記載于如下文獻中：Jing Wang，Jinghan Sun，et al.A phosphate starvation response regulator Ta-PHR1is involved in phosphate signalling and increases grain yield in wheat.Ann Bot.2013Jun；111(6)：1139-53.

實施例1、TaPAP2-5A基因的克隆

1、提取小麥品種科農(nóng)199(以下簡稱科農(nóng)199)處于二棱期的幼穗組織的總RNA，然后將該總RNA用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄出第一鏈cDNA，即得到科農(nóng)199幼穗組織的cDNA。科農(nóng)199幼穗組織的cDNA中DNA含量均為65ng/μL。

2、以步驟1得到的科農(nóng)199幼穗組織的cDNA為模板，采用引物F：5’-GAGGTCGGAGGTCGGAGATGGG-3’和引物R：5’-ATGCGGGTGCGTAGCTATGCCATCC-3’進行PCR擴增，得到約744bp的PCR擴增產(chǎn)物。

反應體系為50μL，由1μL KOD-plus-DNA聚合酶、1μL模板、5μL 10×PCR buffer for KOD-plus、5μL濃度為2mM的dNTPs水溶液(即dATP、dTTP、dCTP和dGTP的濃度均為2mM)、2μL濃度為25mM的MgSO₄水溶液、1.5μL濃度為10μM的引物F水溶液、1.5μL濃度為10μM的引物R水溶液和33μL水組成。

反應條件：98℃預變性2min；98℃變性30s，54℃退火30s，68℃延伸40s，35個循環(huán)。

3、將步驟2得到的PCR擴增產(chǎn)物和載體pGEM-Teasy連接，得到重組質(zhì)粒pGEM-Teasy-TaPAP2-5A。

對重組質(zhì)粒pGEM-Teasy-TaPAP2-5A進行測序。測序結(jié)果表明，重組質(zhì)粒pGEM-Teasy-TaPAP2-5A中含有序列表中序列1所示的DNA分子(以下命名為TaPAP2-5A基因)。

實施例2、轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥的獲得及其鑒定

一、構(gòu)建重組質(zhì)粒pUbi::TaPAP2-5A-pAHC25

1、以實施例1構(gòu)建的重組質(zhì)粒pGEM-Teasy-TaPAP2-5A為模板，以5’-GGATCCATGGGTCGCGGCAAGGTGGTGC-3’(下劃線為限制性內(nèi)切酶BamHⅠ的酶切識別序列)和5’-GGTACCTGCCATCCATGCAGGCG-3’(下劃線為限制性內(nèi)切酶KpnⅠ的酶切識別序列)為引物，進行PCR擴增，得到約726bp的PCR擴增產(chǎn)物。

2、用限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和KpnⅠ雙酶切步驟1獲得的PCR擴增產(chǎn)物，回收酶切產(chǎn)物。

3、用限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和KpnⅠ雙酶切載體pUbi-pAHC25，回收約6.9kb的載體骨架。

4、將酶切產(chǎn)物和載體骨架連接，得到重組質(zhì)粒pUbi::TaPAP2-5A-pAHC25。

根據(jù)測序結(jié)果，對重組質(zhì)粒pUbi::TaPAP2-5A-pAHC25進行結(jié)構(gòu)描述如下：將載體pUbi-pAHC25的限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和KpnⅠ識別序列間的小片段替換為序列表中序列1自5’末端起第1至714位所示的DNA分子。重組質(zhì)粒pUbi::TaPAP2-5A-pAHC25表達序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)(以下命名為TaPAP2-5A蛋白或蛋白質(zhì)TaPAP2-5A)。

二、T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥的獲得

采用基因槍介導的遺傳轉(zhuǎn)化方法，將重組質(zhì)粒pUbi::TaPAP2-5A-pAHC25轉(zhuǎn)化科農(nóng)199，獲得T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥。

采用基因槍介導的遺傳轉(zhuǎn)化方法，將載體pUbi-pAHC25轉(zhuǎn)化科農(nóng)199，獲得T₀代轉(zhuǎn)空載體小麥。

三、T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥的實時定量PCR檢測

隨機選取96株T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥進行實時定量PCR檢測，具體步驟如下：

1、采用RNA Miniprep Kit分別提取96株T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥處于二棱期的幼穗組織的總RNA，然后采用TransScript First-Strand cDNA Synthesis SuperMix Kit將該總RNA反轉(zhuǎn)錄出第一鏈cDNA，得到各個T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥的cDNA。各個T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥的cDNA中DNA含量約為55ng/μL。

2、使用RT-qPCR技術(shù)檢測各個T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥中TaPAP2-5A基因的相對表達量(以β-TaTubulin基因作為內(nèi)參基因)。

檢測TaPAP2-5A基因的引物為正向引物1：5’-TCCTCCAACATGCTTAAGACCCTCG-3’和反向引物1：5’-CTTCAGCTCCATATACTCCAGATAG-3’。檢測β-TaTubulin基因的引物為正向引物2：5’-ACCGCCAGCTCTTCCACCCT-3’和反向引物2：5’-TCACTGGGGCATAGGAGGAA-3’。

反應體系為20μL，由10μLPremix Ex Taq^TM、0.5μL濃度為10μM的正向引物、0.5μL濃度為10μM的反向引物、1μL T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥的cDNA和8.0μL無核酸酶水組成。

反應程序：94℃預變性2min；95℃變性3sec，60℃退火30sec，40個循環(huán)。

按照上述方法，將T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥替換為科農(nóng)199，其它步驟均不變，得到科農(nóng)199中TaPAP2-5A基因的相對表達量。

按照上述方法，將T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥替換為T₀代轉(zhuǎn)空載體小麥，其它步驟均不變，得到T₀代轉(zhuǎn)空載體小麥中TaPAP2-5A基因的相對表達量。

以科農(nóng)199中的TaPAP2-5A基因的相對表達量作為1，統(tǒng)計其它各個小麥中TaPAP2-5A基因的相對表達量。結(jié)果表明，與科農(nóng)199相比，45株T₀代擬轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥(分別命名為OE-1-T₀至OE-45-T₀)中TaPAP2-5A基因的相對表達量均顯著增加，而T₀代轉(zhuǎn)空載體小麥中TaPAP2-5A基因的相對表達量則無顯著差異。

四、T₂代轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥和T₄代轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥的獲得及實時定量PCR檢測

將OE-1-T₀至OE-45-T₀經(jīng)連續(xù)兩代自交，獲得T₂代轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥，分別命名為OE-1-T₂至OE-45-T₂。

將OE-1-T₀至OE-45-T₀經(jīng)連續(xù)四代自交，獲得T₄代轉(zhuǎn)TaPAP2-5A基因小麥，分別命名為OE-1-T₄至OE-45-T₄。

將T₀代轉(zhuǎn)空載體小麥經(jīng)連續(xù)兩代自交，獲得T₂代純合轉(zhuǎn)空載體小麥。

將T₀代轉(zhuǎn)空載體小麥經(jīng)連續(xù)四代自交，獲得T₄代純合轉(zhuǎn)空載體小麥。

按照步驟三的方法，對OE-1-T₂至OE-45-T₂、OE-1-T₄至OE-45-T₄、T₂代純合轉(zhuǎn)空載體小麥、T₄代純合轉(zhuǎn)空載體小麥和科農(nóng)199分別進行實時定量PCR檢測。結(jié)果表明，與科農(nóng)199相比，OE-1-T₂至OE-45-T₂和OE-1-T₄至OE-45-T₄中TaPAP2-5A基因的相對表達量均顯著增加，而T₂代純合轉(zhuǎn)空載體小麥和T₄代純合轉(zhuǎn)空載體小麥中TaPAP2-5A基因的相對表達量則無顯著差異。

五、TaPAP2-5A基因的相對表達量與小麥穗型性狀的相關(guān)性分析

待測小麥為OE-1-T₂、OE-2-T₂、OE-3-T₂、OE-4-T₂、OE-5-T₂、OE-6-T₂、OE-7-T₂、OE-8-T₂、OE-9-T₂、OE-10-T₂、OE-11-T₂、OE-12-T₂、OE-13-T₂、OE-14-T₂、OE-15-T₂、OE-16-T₂、OE-17-T₂、OE-18-T₂、OE-19-T₂、OE-20-T₂、OE-21-T₂、OE-22-T₂、OE-23-T₂、OE-24-T₂、OE-25-T₂、OE-26-T₂、OE-27-T₂、OE-28-T₂、OE-29-T₂、OE-30-T₂、OE-31-T₂、OE-32-T₂、OE-33-T₂、OE-34-T₂、OE-35-T₂、OE-36-T₂、OE-37-T₂、OE-38-T₂、OE-39-T₂、OE-40-T₂、OE-41-T₂、OE-42-T₂、OE-43-T₂、OE-44-T₂或OE-45-T₂。

將待測小麥種植于溫室，待開花后20d，調(diào)查每穗小穗數(shù)、每穗小花數(shù)和每穗穗粒數(shù)，然后與TaPAP2-5A基因的相對表達量進行相關(guān)性分析。培養(yǎng)條件具體如下：溫度25℃，光照350μmol photons m^-2s^-1，濕度60-70％。

實驗結(jié)果見圖1、圖2和圖3。結(jié)果表明，TaPAP2-5A基因的相對表達量與每穗小穗數(shù)、每穗小花數(shù)和每穗穗粒數(shù)均負相關(guān)，即TaPAP2-5A基因的相對表達量越高，則每穗小穗數(shù)、小花數(shù)和穗粒數(shù)的數(shù)量越少。

六、TaPAP2-5A基因的相對表達量與小麥幼穗發(fā)育時間的研究

待測小麥為OE-1-T₄、OE-2-T₄、T₄代純合轉(zhuǎn)空載體小麥或科農(nóng)199。

取30株待測小麥幼穗進入單棱期后的第2d、第9d、第15d或第22d的幼穗，先置于甲醇中浸泡15min，再置于無水乙醇中浸泡30min，然后采用掃描電子顯微鏡臨界點干燥儀冷凍干燥2h，最后采用冷凍掃描電子顯微鏡進行電鏡掃描。根據(jù)電鏡掃描結(jié)果，統(tǒng)計待測小麥幼穗在二棱期、小花分化期和雌雄蕊分化期的發(fā)育天數(shù)。

電鏡掃描的部分實驗結(jié)果見圖4(A為科農(nóng)199，B為OE-1-T₄；LP為外稃原基，GP為護穎原基，An為芒，數(shù)字6、8、10、13為小穗數(shù)，白色五角星為小穗)。各個時期發(fā)育天數(shù)的部分統(tǒng)計結(jié)果見圖5(WT為科農(nóng)199)。結(jié)果表明，與科農(nóng)199相比，OE-1-T₄和OE-2-T₄的幼穗在二棱期、小花分化期和雌雄蕊分化期的發(fā)育時間均顯著縮短(在單棱期的發(fā)育時間無顯著差異)，而T₄代純合轉(zhuǎn)空載體小麥的幼穗在單棱期、二棱期、小花分化期和雌雄蕊分化期的發(fā)育時間均無顯著差異。因此，在科農(nóng)199中過表達TaPAP2-5A基因，可顯著縮短幼穗的發(fā)育時間(如在二棱期的發(fā)育時間、在小花分化期的發(fā)育時間和在雌雄蕊分化期的發(fā)育時間)，進而導致小穗數(shù)減少、小花數(shù)減少和穗粒數(shù)減少。

上述結(jié)果表明，蛋白質(zhì)TaPAP2-5A在調(diào)控小麥穗型性狀(如小穗數(shù)、小花數(shù)、穗粒數(shù))和幼穗發(fā)育時間(如幼穗在二棱期的發(fā)育時間和/或幼穗在小花分化期的發(fā)育時間和/或幼穗在雌雄蕊分化期的發(fā)育時間)中具有重要的應用價值。

<110> 中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所

<120> 蛋白質(zhì)TaPAP2-5A在調(diào)控植物穗型性狀和生殖器官發(fā)育時間中的應用

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 717

<212> DNA

<213> 小麥（Triticum aestivum L.）

<400> 1

atgggtcgcg gcaaggtggt gctgcagcgg atcgagaaca agatcagccg ccaggtgacg 60

ttcgccaagc gccgcaacgg cctgctcaag aaggcctacg agctctccct cctctgcgac 120

gccgaggtcg cgctcgtcct cttctcccac gctggccgcc tctaccagtt ctcctcctcc 180

tccaacatgc ttaagaccct cgagaagtac cagaggtaca ttttcgcttc ccaagatgct 240

gccgtgccga ctaccgatga gatgcagaac aactatctgg agtatatgga gctgaaggca 300

agagttgagg ttttacaacg ctcacaaagg aatctcctag gcgaggattt ggctccactg 360

agtacaatcg agcttgaaca gcttgagggt caagtaggca agaccttgag gcaaataagg 420

tcaagaaaga ctcaagtact gctggatgaa atgtgcgacc tgaagagaaa ggagcaaata 480

ttgcaggatg caaatatgac cctgaaaaga aagctgggcg agatcgagct ggaggcgaca 540

cctgatcccc cgcagcagcc gcagcagcag cagatgtggc agggcgaccg gggcgtgccg 600

ccccacacgc ctccgcagcc agagcacttc ttccaggccc tagaacgcta tccttccctg 660

cagccagtat ttcgtggcat ggatgtgaac cagccgccgc ctgcatggat ggcatag 717

<210> 2

<211> 238

<212> PRT

<213> 小麥（Triticum aestivum L.）

<400> 2

Met Gly Arg Gly Lys Val Val Leu Gln Arg Ile Glu Asn Lys Ile Ser

1 5 10 15

Arg Gln Val Thr Phe Ala Lys Arg Arg Asn Gly Leu Leu Lys Lys Ala

20 25 30

Tyr Glu Leu Ser Leu Leu Cys Asp Ala Glu Val Ala Leu Val Leu Phe

35 40 45

Ser His Ala Gly Arg Leu Tyr Gln Phe Ser Ser Ser Ser Asn Met Leu

50 55 60

Lys Thr Leu Glu Lys Tyr Gln Arg Tyr Ile Phe Ala Ser Gln Asp Ala

65 70 75 80

Ala Val Pro Thr Thr Asp Glu Met Gln Asn Asn Tyr Leu Glu Tyr Met

85 90 95

Glu Leu Lys Ala Arg Val Glu Val Leu Gln Arg Ser Gln Arg Asn Leu

100 105 110

Leu Gly Glu Asp Leu Ala Pro Leu Ser Thr Ile Glu Leu Glu Gln Leu

115 120 125

Glu Gly Gln Val Gly Lys Thr Leu Arg Gln Ile Arg Ser Arg Lys Thr

130 135 140

Gln Val Leu Leu Asp Glu Met Cys Asp Leu Lys Arg Lys Glu Gln Ile

145 150 155 160

Leu Gln Asp Ala Asn Met Thr Leu Lys Arg Lys Leu Gly Glu Ile Glu

165 170 175

Leu Glu Ala Thr Pro Asp Pro Pro Gln Gln Pro Gln Gln Gln Gln Met

180 185 190

Trp Gln Gly Asp Arg Gly Val Pro Pro His Thr Pro Pro Gln Pro Glu

195 200 205

His Phe Phe Gln Ala Leu Glu Arg Tyr Pro Ser Leu Gln Pro Val Phe

210 215 220

Arg Gly Met Asp Val Asn Gln Pro Pro Pro Ala Trp Met Ala

225 230 235