本發(fā)明涉及生化提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及柚皮苷的生化提取工藝及其提取物在治療皮膚炎中的用途。
背景技術(shù)：
：柚皮苷是一種雙氫黃酮類化合物。由于a環(huán)和b環(huán)之間完全沒(méi)有共軛，所以在282nm有強(qiáng)烈的紫外吸收峰，使柚皮苷顯示多種生物學(xué)活性和藥理作用。具有抗炎、抗病毒、抗癌、抗突變、抗過(guò)敏、抗?jié)儭㈡?zhèn)痛、降血壓活性，能降血膽固醇、減少血栓的形成，改善局部微循環(huán)和營(yíng)養(yǎng)供給，可用于生產(chǎn)防治心腦血管疾病。柚皮苷作為天然色素、風(fēng)味改良劑和苦味劑用于食品、飲料的生產(chǎn)，又可作為合成高甜度、無(wú)毒、低能量的新型甜味劑二氫柚苷查耳酮和新柚皮苷二氫查耳酮的原料。柚皮苷還可在其它領(lǐng)域應(yīng)用。柚皮苷主要存在于柚子、酸橙及其變種的果皮中，如柚子中一半以上的柚皮苷分布于果皮內(nèi)。柚皮苷的提取方法主要有熱水浸提法和堿提酸沉法。熱水浸提法存在雜質(zhì)較多，提取效率低下，嚴(yán)重浪費(fèi)水資源等缺陷；堿提酸沉法擁有節(jié)約經(jīng)濟(jì)，工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，但其反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)且容易污染環(huán)境，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。周石磊，農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)2006年，柚皮中柚皮苷乙醇提取工藝研究，采用醇提法，提取率可達(dá)到91%，但是存在純度較低，耗費(fèi)大量乙醇等缺陷。開(kāi)發(fā)一種有效提取柚皮苷的方法尤為重要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提出了柚皮苷的生化提取工藝，采用多因子正交試驗(yàn)，優(yōu)化了工藝參數(shù)，提高了產(chǎn)率和純度。本發(fā)明還公開(kāi)了柚皮苷提取物在治療皮膚炎中的用途。本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：柚皮苷的生化提取工藝，其包括如下步驟：步驟1）烘干、粉碎，步驟2）蔗糖處理，步驟3）高溫高壓處理，步驟4）堿液和酶處理，步驟5）醇溶、溫控以及水提。具體地，所述工藝包括如下步驟：步驟1）烘干、粉碎：取新鮮無(wú)霉變的柚皮，置于50℃烘干至水分含量低于3wt%，粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)100目篩，收集柚皮粉；步驟2）蔗糖處理：往柚皮粉中添加到同等重量的30-40g/l的蔗糖水溶液中,300-500rpm攪拌8-10小時(shí)，再靜置6h，50℃烘干；步驟3）高溫高壓處理：將步驟2）所得物料置于反應(yīng)釜中，控制反應(yīng)釜中壓強(qiáng)為1.0-1.2mpa，溫度為120-130℃，保溫保壓5min，待冷卻至室溫；步驟4）堿液和酶處理：往步驟3）所得物料中添加占步驟1）所得柚皮粉5倍重量的氫氧化鈣水溶液以及占步驟1）所得柚皮粉0.05-0.07wt%的纖維素酶，300rpm攪拌6h，再靜置30min；步驟5）醇溶、溫控以及水提：離心收集沉淀，往沉淀中添加兩倍質(zhì)量的70%（v/v）的乙醇，60℃水浴加熱，邊加熱邊攪拌30min，靜置10min，離心去除沉淀，將液體減壓蒸發(fā)去除乙醇；再添加純化水，300rpm攪拌10min，然后冷卻至5-8℃，靜置6h，收集沉淀物，將沉淀物置于50℃干燥，即得。優(yōu)選地，所述氫氧化鈣水溶液的濃度為0.4-0.6g/l。優(yōu)選地，所述纖維素酶的酶活為20000u/g。本發(fā)明還公開(kāi)了按照上述任其一所述的工藝提取的提取物。本發(fā)明還公開(kāi)了上述提取物在治療皮膚炎中的用途。本發(fā)明取得的有益效果主要包括但是并不限于以下幾個(gè)方面：1.蔗糖溶液滲透壓的作用可以引起柚皮細(xì)胞快速膨脹，有助于細(xì)胞壁破裂，提高了產(chǎn)率；2.本發(fā)明采用較小的粒徑能夠提高細(xì)胞壁的破碎效率并且提高有效物質(zhì)的浸出率；3.本發(fā)明通過(guò)提高溫度和壓強(qiáng)，可增加分子擴(kuò)散的速度，使得細(xì)胞壁的受壓膨脹變薄，加快細(xì)胞壁的破裂，加速有效成分的溶出速度，提高活性組分的提取效率；4.本發(fā)明配合氫氧化鈣溶液以及纖維素酶，有效破碎了細(xì)胞壁，柚皮苷浸出率大大提高；5.本發(fā)明采用乙醇溶解，配合溫度變化，有效去除了雜質(zhì)，提高了柚皮苷的純度；6.本發(fā)明采用多因子正交試驗(yàn)，優(yōu)化了提取工藝，提高了產(chǎn)率和純度，其制備的產(chǎn)品能夠有效地治療皮膚炎。具體實(shí)施方式為了使本
技術(shù)領(lǐng)域：
的人員更好地理解本申請(qǐng)中的技術(shù)方案，下面將結(jié)合本申請(qǐng)具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更加清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本申請(qǐng)一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒旧暾?qǐng)中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。實(shí)施例1柚皮苷的生化提取工藝，其包括如下步驟：取新鮮無(wú)霉變的柚皮，置于50℃烘干至水分含量低于3wt%，粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)100目篩，收集柚皮粉，然后添加到同等重量的30g/l的蔗糖水溶液中,300rpm攪拌10小時(shí)，再靜置6h，50℃烘干，置于反應(yīng)釜中，控制反應(yīng)釜中壓強(qiáng)為1.2mpa，溫度為120℃，保溫保壓5min，待冷卻至室溫后，再添加占柚皮粉5倍重量的濃度為0.4g/l的氫氧化鈣水溶液以及占柚皮粉0.07wt%的纖維素酶（20000u/g），300rpm攪拌6h，再靜置30min；離心收集沉淀，往沉淀中添加兩倍質(zhì)量的70%（v/v）的乙醇，60℃水浴加熱，邊加熱邊攪拌30min，靜置10min，離心去除沉淀，將液體減壓蒸發(fā)去除乙醇，再添加兩倍體積的純化水，300rpm攪拌10min，然后冷卻至5℃，靜置6h，收集沉淀物，將沉淀物置于50℃干燥，即得。實(shí)施例2柚皮苷的生化提取工藝，其包括如下步驟：取新鮮無(wú)霉變的柚皮，置于50℃烘干至水分含量低于3wt%，粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)100目篩，收集柚皮粉，然后添加到同等重量的40g/l的蔗糖水溶液中,500rpm攪拌8小時(shí)，再靜置6h，50℃烘干，置于反應(yīng)釜中，控制反應(yīng)釜中壓強(qiáng)為1.0mpa，溫度為130℃，保溫保壓5min，待冷卻至室溫后，再添加占柚皮粉5倍重量的濃度為0.6g/l的氫氧化鈣水溶液以及占柚皮粉0.05wt%的纖維素酶（20000u/g），300rpm攪拌6h，再靜置30min；離心收集沉淀，往沉淀中添加兩倍質(zhì)量的70%（v/v）的乙醇，60℃水浴加熱，邊加熱邊攪拌30min，靜置10min，離心去除沉淀，將液體減壓蒸發(fā)去除乙醇，再添加兩倍體積的純化水，攪拌溶解，然后冷卻至8℃，靜置6h，收集沉淀物，將沉淀物置于50℃干燥，即得。實(shí)施例3本發(fā)明實(shí)施例1-2提取方法獲得產(chǎn)品純度和得率檢測(cè)：以安江柚為例，hplc法測(cè)定產(chǎn)品中柚皮苷的純度以及柚皮苷的收率；柚皮苷的得率的計(jì)算：柚皮苷的得率＝（(柚皮苷產(chǎn)品的質(zhì)量×純度)/柚皮粉質(zhì)量）×100％；具體結(jié)果見(jiàn)表1：表1指標(biāo)實(shí)施例1實(shí)施例2收率%7.196.82純度%96.697.1實(shí)施例4正交試驗(yàn)檢測(cè)多因子因素對(duì)收率的影響：以實(shí)施例1為例。一）粒徑因素：對(duì)照組1采用30目，對(duì)照組2采用10目，其余同實(shí)施例1；具體結(jié)果見(jiàn)表2：表2指標(biāo)對(duì)照組1對(duì)照組2收率%5.675.39二）壓強(qiáng)溫度因素：對(duì)照組1采用常壓，對(duì)照組2采用室溫，其余同實(shí)施例1；具體結(jié)果見(jiàn)表3：表3指標(biāo)對(duì)照組1對(duì)照組2收率%6.036.35三）纖維素酶和堿液因素：對(duì)照組1不采用纖維素酶處理，對(duì)照組2采用氫氧化鈉溶液，對(duì)照組3采用碳酸鈉溶液，使用的堿液中溶質(zhì)的質(zhì)量相同其余同實(shí)施例1，其余步驟同實(shí)施例1，具體結(jié)果見(jiàn)表4：表4指標(biāo)對(duì)照組1對(duì)照組2對(duì)照組3收率%5.446.716.46實(shí)施例4動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)流程：icr雌性小鼠腹腔注射含有氫氧化鋁凝膠1mg與dnp-ova10mg的生理鹽水溶液0.2ml，誘導(dǎo)過(guò)敏，1周后，在小鼠耳朵內(nèi)外兩面涂布0.1%dnfb乙醇溶液10ul，24h后選擇耳充分腫脹的小鼠（浮腫率在10%以上）。選定的小鼠再次重復(fù)誘導(dǎo)過(guò)敏實(shí)驗(yàn)，1周后，引起過(guò)敏反應(yīng)。動(dòng)物分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組給予實(shí)施例1制備的柚皮苷，劑量為100mg/kg,對(duì)照組給予同等質(zhì)量的生理鹽水，給藥時(shí)間從過(guò)敏實(shí)驗(yàn)結(jié)束后1h開(kāi)始，每天兩次，連續(xù)一周。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組能明顯抑制小鼠耳緣浮腫，抑制率可達(dá)到50%，其可作為皮膚炎的潛力藥物。上述數(shù)據(jù)對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行了詳盡描述，但并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍以內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12