本發(fā)明涉及一種阿納其根中生物堿類化合物及制備方法。

背景技術：

阿納其根為菊科(asteraceae)植物羅馬除蟲菊(anacycluspyrethrum)的干燥根。《注醫(yī)典》中稱阿克爾開爾哈，《拜地依藥書》中又稱歐都里開日合、比合臺爾混庫依。分布于北非、歐洲南部、印度，我國的新疆地區(qū)也有分布；在印度及我國新疆維吾醫(yī)藥中用藥廣泛。阿納其根的主要形態(tài)特征是：基生葉蓮座狀，葉分裂，裂片呈長圓形，莖葉互生；頭狀花序，有長梗，頂生，總苞片長卵圓形或鈍圓，具稀疏柔毛；舌狀花白色或背面帶紫色；根粗壯，圓柱形或長倒圓錐形，支根少，質較堅硬，外部呈暗棕色或棕黑色；氣芳香而特異，微有刺激感；嘗之有麻感。阿納其根收錄于：《中華本草》、《維吾爾藥志》、《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準·維吾爾藥分冊》、《維吾爾藥材標準》?！吨腥A本草》中記載的功能與主治：生干生熱，開通阻滯，熱身壯陽，祛風止痛，滋補神經(jīng)；主治濕寒性疾病和黏液質性疾病，如面癱，癱瘓，肌肉松弛，麻痹，顫動，癔病，舌重，性欲減退，多痰咳嗽，神經(jīng)衰弱等?！蹲⑨t(yī)典》中記載用于治療汗液不出，骨節(jié)松弛，筋肌抽搐，寒性牙痛，牙齒松動?！栋莸匾浪帟分羞€記載用于治療癱瘓，癲癇(取適量除蟲菊根，經(jīng)常放在口腔中含服)。

現(xiàn)代藥理學研究表明阿納其根提取物具有廣泛的生物活性如：阿納其根的氯仿部位能夠顯著延遲模型鼠的癲癇發(fā)作，提高癲癇發(fā)作閾值。其50％甲醇提取物能夠有效減小模型鼠癲癇發(fā)作引發(fā)的氧化應激損傷及認知損傷，降低模型鼠記憶衰退水平。乙醇提取物能夠有效增加雄性wistar鼠的體重，精子數(shù)，精子活力和存活率，并增加血清中睪丸激素，促黃激素和促卵泡激素的濃度。乙醇提取物還具有阿爾法淀粉酶抑制活性；阿納其根脂肪酸對ptp1b有抑制作用。而石油醚提取物喂飼wistar大鼠能夠有效增強大鼠的免疫力。此外，阿納其根地上部分揮發(fā)油成分具抑制白色念珠菌和金黃色葡萄球菌活性。

阿納其根的化學成分研究報道較少，主要集中在n-烷基酰胺類生物堿上。目前已分離得到n-烷基酰胺類生物堿14個，通過lc-ms/ms鑒定出的n-烷基酰胺類生物堿6個。

本發(fā)明對阿納其根的生物堿成分進行的充分的分析分離研究，從中得到了14個全新的生物堿化合物。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的在于，提供一種阿納其根中生物堿類化合物及其制備方法，采用丙酮/甲醇的混合溶劑進行提取，通過酸溶堿沉法制得總生物堿，再由溶劑分配法富集得到乙酸乙酯部位，再利用反相色譜法分離得到所述的14個生物堿類新化合物。

本發(fā)明所述的一種阿納其根中生物堿類化合物，該化合物的結構式為：

其中：

化合物1為：4-(3,3-二甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-6,6-二甲基-5,6-二氫吡啶-2(1h)-酮；

化合物2為：3-丙酮基-3-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-5,5-二甲基-四氫吡咯-2(1h)-酮；

化合物3為：7-(2-羥基-2-甲基丙基)-2,2,5,5-四甲基-1,2,3,5-四氫-6h-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-酮；

化合物4為：2,2,5,5,7,7-六甲基-8a-羥基-3,5,7,8-四氫-2h-二吡咯并[3,2-b:3',2'-d]吡啶；

化合物5為：5-羥基-2,2,4,6,8,8-六甲基-3-氧代-3,5,8,9-四氫-2h-吡啶并[2,3-d]氮雜卓-1-氧化；

化合物6為：4,5-二羥基-2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,4,5,6-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；

化合物7為：2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,6-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；

化合物8為：9a-羥基-2,2,6,6,8,9,10-七甲基-3,4,5,6,9,9a-六氫-吡啶并[3',4':4,5]環(huán)戊二烯并[1,2-c]氮雜卓-7(2h)-酮；

化合物9為：(e)-2,2,6-三甲基-3-亞氨基-4-(-2-羥基-2-甲基-亞丙基)-5氧代-6-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-2,3,4,6,7-五氫-1h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶；

化合物10為：2,2,4,5,7,7,8a-七甲基-4-羥基-4a,4b-環(huán)氧-2,3,4,7,8,8a,9-七氫-環(huán)戊二烯并[1,2-b:3,4-c']雙吡啶；

化合物11為：(z)-8-(4-羥基-4-甲基-2,3-戊烯-2-基)-1,1,6,6-四甲基-1,4,5,6-四氫-2,7-萘啶-3(2h)-酮；

化合物12為：1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；

化合物13為：1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-5,8-二氧代-2,3,5,6,7,8-六氫-異喹啉；

化合物14為：1,3,3-三甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-7-(2-甲基-丙烯基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉。

所述阿納其根中生物堿類化合物的制備方法，按下列步驟進行：

a、將阿納其根粉碎，用體積比2:1-1:2的丙酮:甲醇的混合溶劑冷浸、回流、滲漉、超聲或微波提取2-10次，合并提取液并干燥，得到總提取物；

b、將步驟a中的總提取物用濃度為5％的鹽酸溶解過濾，收集濾液，將濾液用二氯甲烷萃取以去除非生物堿雜質，去雜質的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調ph至10-14，得到堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取，得到總生物堿；

d、將步驟c中的總生物堿用正己烷/甲醇進行分配，收集甲醇部位，干燥，得到甲醇部位，將甲醇部位用乙酸乙酯充分溶解并過濾，收集乙酸乙酯溶解液，旋干，即得乙酸乙酯部位；

e、將步驟d中得到的乙酸乙酯部位用自動純化系統(tǒng)進行在線分離分段，色譜條件為：色譜柱為xselectcshc185μm19×150mm，吸收波長230納米，流速20毫升每分鐘，流動相為：0-30分鐘濃度為10％的甲醇水溶液遞增至100％的甲醇；收集9分鐘至14分鐘的流份，將收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物1為4-(3,3-二甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-6,6-二甲基-5,6-二氫吡啶-2(1h)-酮；化合物2為3-丙酮基-3-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-5,5-二甲基-四氫吡咯-2(1h)-酮；化合物3為7-(2-羥基-2-甲基丙基)-2,2,5,5-四甲基-1,2,3,5-四氫-6h-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-酮；化合物4為2,2,5,5,7,7-六甲基-8a-羥基-3,5,7,8-四氫-2h-二吡咯并[3,2-b:3',2'-d]吡啶；收集14分鐘至18.5分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物5為5-羥基-2,2,4,6,8,8-六甲基-3-氧代-3,5,8,9-四氫-2h-吡啶并[2,3-d]氮雜卓-1-氧化；化合物6為4,5-二羥基-2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,4,5,6-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物7為2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,6-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物8為9a-羥基-2,2,6,6,8,9,10-七甲基-3,4,5,6,9,9a-六氫-吡啶并[3',4':4,5]環(huán)戊二烯并[1,2-c]氮雜卓-7(2h)-酮；化合物9為(e)-2,2,6-三甲基-3-亞氨基-4-(-2-羥基-2-甲基-亞丙基)-5氧代-6-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-2,3,4,6,7-五氫-1h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶；化合物10為2,2,4,5,7,7,8a-七甲基-4-羥基-4a,4b-環(huán)氧-2,3,4,7,8,8a,9-七氫-環(huán)戊二烯并[1,2-b:3,4-c']雙吡啶；化合物12為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；化合物13為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-5,8-二氧代-2,3,5,6,7,8-六氫-異喹啉；收集18.5分鐘至21分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物11為(z)-8-(4-羥基-4-甲基-2,3-戊烯-2-基)-1,1,6,6-四甲基-1,4,5,6-四氫-2,7-萘啶-3(2h)-酮；化合物14為1,3,3-三甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-7-(2-甲基-丙烯基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉。

本發(fā)明所述的一種阿納其根中生物堿類化合物及其制備方法，其中生物堿類新化合物1-14的結構鑒定：

化合物1：4-(3,3-二甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-6,6-二甲基-5,6-二氫吡啶-2(1h)-酮；白色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)219(3.98)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺196.1334；分子式：c11h17no2；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表1；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖1所示；

化合物2：3-丙酮基-3-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-5,5-二甲基-四氫吡咯-2(1h)-酮；白色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)198(3.99)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺283.2035；分子式：c15h26n2o3；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表1；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖1所示；

化合物3：7-(2-羥基-2-甲基丙基)-2,2,5,5-四甲基-1,2,3,5-四氫-6h-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-酮；黃色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)336(4.07)nm，224(4.17)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺265.1914；分子式：c15h24n2o2；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表1；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖1所示；

化合物4：2,2,5,5,7,7-六甲基-8a-羥基-3,5,7,8-四氫-2h-二吡咯并[3,2-b:3',2'-d]吡啶；微黃色無定形粉末，uv(meoh)λmax(logε)324(2.43)nm，222(3.92)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺262.1924；分子式：c15h23n3o；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表1；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖1所示；

表1.化合物1,2,3,4的氫碳核磁數(shù)據(jù)

化合物5：5-羥基-2,2,4,6,8,8-六甲基-3-氧代-3,5,8,9-四氫-2h-吡啶并[2,3-d]氮雜卓-1-氧化；亮黃色膠狀物，uv(meoh)λmax(logε)444(4.33)nm，279(3.94)nm，228(3.85)nm，196(4.34)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺279.1719；分子式：c15h22n2o3；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表2；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖1所示；

化合物6：4,5-二羥基-2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,4,5,6-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；白色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)319(3.69)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺353.2094；分子式：c18h28n2o5；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表2；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖1所示；

化合物7：2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,6-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；白色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)344(4.02)nm，228(3.82)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺319.2033；分子式：c18h26n2o3；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表2；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖2所示；

表2.化合物5,6,7的氫碳核磁數(shù)據(jù)

化合物8：9a-羥基-2,2,6,6,8,9,10-七甲基-3,4,5,6,9,9a-六氫-吡啶并[3',4':4,5]環(huán)戊二烯并[1,2-c]氮雜卓-7(2h)-酮；黃色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)290(4.04)nm，212(3.65)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺317.2238；分子式：c19h28n2o2；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表3；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖2所示；

化合物9：(e)-2,2,6-三甲基-3-亞氨基-4-(-2-羥基-2-甲基-亞丙基)-5氧代-6-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-2,3,4,6,7-五氫-1h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶；白色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)296(3.92)nm，208(3.77)nm；hr-esi(+)ms：[m+h-h2o]⁺358.2512；分子式：c21h33n3o3；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表3；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖2所示；

化合物10：2,2,4,5,7,7,8a-七甲基-4-羥基-4a,4b-環(huán)氧-2,3,4,7,8,8a,9-七氫-環(huán)戊二烯并[1,2-b:3,4-c']雙吡啶；白色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)257(2.54)nm，207(3.85)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺305.2230；分子式：c18h28n2o2；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表3；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖2所示；

表3.化合物8,9,10的氫碳核磁數(shù)據(jù)

化合物11：(z)-8-(4-羥基-4-甲基-2,3-戊烯-2-基)-1,1,6,6-四甲基-1,4,5,6-四氫-2,7-萘啶-3(2h)-酮；微黃色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)238(3.56)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺305.2235；分子式：c18h28n2o2；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表4；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖2所示；

化合物12：1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；黃色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)339(4.01)nm，272(3.88)nm，231(3.75)nm，199(3.90)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺305.2215；分子式：c18h28n2o2；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表4；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖2所示；

化合物13：1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-5,8-二氧代-2,3,5,6,7,8-六氫-異喹啉；黃色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)317(3.76)nm，226(3.71)nm，199(3.76)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺319.2024；分子式：c18h26n2o3；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表4；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖2所示；

化合物14：1,3,3-三甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-7-(2-甲基-丙烯基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；黃色無定型粉末，uv(meoh)λmax(logε)339(3.82)nm，274(3.79)nm；hr-esi(+)ms：[m+h]⁺345.2554；分子式：c21h32n2o2；¹h，¹³c-nmr數(shù)據(jù)見表4；通過二維核磁的hmbc相關譜確定化合物的結構如圖2所示；

表4.化合物11,12,13,14的氫碳核磁數(shù)據(jù)

附圖說明

圖1為本發(fā)明生物堿類化合物1-6的hmbc相關圖；

圖2為本發(fā)明生物堿類化合物7-14的hmbc相關圖；

圖3為本發(fā)明生物堿化合物1的¹h-nmr圖；

圖4為本發(fā)明生物堿化合物1的¹³c-nmr圖；

圖5為本發(fā)明生物堿化合物2的¹h-nmr圖；

圖6為本發(fā)明生物堿化合物2的¹³c-nmr圖；

圖7為本發(fā)明生物堿化合物3的¹h-nmr圖；

圖8為本發(fā)明生物堿化合物3的¹³c-nmr圖；

圖9為本發(fā)明生物堿化合物4的¹h-nmr圖；

圖10為本發(fā)明生物堿化合物4的¹³c-nmr圖；

圖11為本發(fā)明生物堿化合物5的¹h-nmr圖；

圖12為本發(fā)明生物堿化合物5的¹³c-nmr圖；

圖13為本發(fā)明生物堿化合物6的¹h-nmr圖；

圖14為本發(fā)明生物堿化合物6的¹³c-nmr圖；

圖15為本發(fā)明生物堿化合物7的¹h-nmr圖；

圖16為本發(fā)明生物堿化合物7的¹³c-nmr圖；

圖17為本發(fā)明生物堿化合物8的¹h-nmr圖；

圖18為本發(fā)明生物堿化合物8的¹³c-nmr圖；

圖19為本發(fā)明生物堿化合物9的¹h-nmr圖；

圖20為本發(fā)明生物堿化合物9的¹³c-nmr圖；

圖21為本發(fā)明生物堿化合物10的¹h-nmr圖；

圖22為本發(fā)明生物堿化合物10的¹³c-nmr圖；

圖23為本發(fā)明生物堿化合物11的¹h-nmr圖；

圖24為本發(fā)明生物堿化合物11的¹³c-nmr圖；

圖25為本發(fā)明生物堿化合物12的¹h-nmr圖；

圖26為本發(fā)明生物堿化合物12的¹³c-nmr圖；

圖27為本發(fā)明生物堿化合物13的¹h-nmr圖；

圖28為本發(fā)明生物堿化合物13的¹³c-nmr圖；

圖29為本發(fā)明生物堿化合物14的¹h-nmr圖；

圖30為本發(fā)明生物堿化合物14的¹³c-nmr圖。

具體實施方式

實施例1

a、將粉碎的阿納其根粉末4.5kg，加入10升1:1的丙酮:甲醇混合溶劑室溫浸泡24小時，重復提取10次，合并提取液并干燥，得到總提物1.2kg。

b、將步驟a中的總提物用1升濃度為5％鹽酸溶解，過濾，收集濾液，將濾液用二氯甲烷萃取去除非生物堿雜質，去雜質后的酸水液用飽和碳酸氫鈉水溶液調ph10，得到堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取，合并二氯甲烷萃取液并干燥，得到總生物堿660克；

d、將步驟c中的總生物堿用1升甲醇溶解，并加入正己烷，充分分配后，收集甲醇部位，干燥，得到甲醇部位140克，再將140克的甲醇部位用乙酸乙酯充分溶解并過濾，收集乙酸乙酯溶解液，旋干，即得乙酸乙酯部位70克；

e、將步驟d中得到的乙酸乙酯部位用自動純化系統(tǒng)進行在線分離分段，色譜條件為：色譜柱為xselectcshc185μm19×150mm；吸收波長230納米；流速20毫升每分鐘；流動相為：0-30分鐘濃度為10％的甲醇水溶液遞增至100％的甲醇；收集9分鐘至14分鐘的流份，將收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物1為4-(3,3-二甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-6,6-二甲基-5,6-二氫吡啶-2(1h)-酮；化合物2為3-丙酮基-3-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-5,5-二甲基-四氫吡咯-2(1h)-酮；化合物3為7-(2-羥基-2-甲基丙基)-2,2,5,5-四甲基-1,2,3,5-四氫-6h-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-酮；化合物4為2,2,5,5,7,7-六甲基-8a-羥基-3,5,7,8-四氫-2h-二吡咯并[3,2-b:3',2'-d]吡啶；收集14分鐘至18.5分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物5為5-羥基-2,2,4,6,8,8-六甲基-3-氧代-3,5,8,9-四氫-2h-吡啶并[2,3-d]氮雜卓-1-氧化；化合物6為4,5-二羥基-2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,4,5,6-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物7為2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,6-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物8為9a-羥基-2,2,6,6,8,9,10-七甲基-3,4,5,6,9,9a-六氫-吡啶并[3',4':4,5]環(huán)戊二烯并[1,2-c]氮雜卓-7(2h)-酮；化合物9為(e)-2,2,6-三甲基-3-亞氨基-4-(-2-羥基-2-甲基-亞丙基)-5氧代-6-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-2,3,4,6,7-五氫-1h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶；化合物10為2,2,4,5,7,7,8a-七甲基-4-羥基-4a,4b-環(huán)氧-2,3,4,7,8,8a,9-七氫-環(huán)戊二烯并[1,2-b:3,4-c']雙吡啶；化合物12為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；化合物13為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-5,8-二氧代-2,3,5,6,7,8-六氫-異喹啉；收集18.5分鐘至21分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物11為(z)-8-(4-羥基-4-甲基-2,3-戊烯-2-基)-1,1,6,6-四甲基-1,4,5,6-四氫-2,7-萘啶-3(2h)-酮；化合物14為1,3,3-三甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-7-(2-甲基-丙烯基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉。

實施例2

a、將粉碎的阿納其根粉末4.5kg，加入10升1:1的丙酮:甲醇溶液回流提取4小時，重復提取6次，合并提取液并干燥，得到總提物1.7kg；

b、將步驟a中的總提取物用1升濃度為5％的鹽酸溶解過濾，收集濾液，將濾液用二氯甲烷萃取以去除非生物堿雜質，去雜質的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調ph至11，得堿化液；；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取，得到總生物堿725克；

d、將步驟c中的總生物堿用1升甲醇溶解，加入1升正己烷進行充分分配，收集甲醇部位，干燥，得到甲醇部位164克，再將164克甲醇部位用乙酸乙酯充分溶解并過濾，收集乙酸乙酯溶解液，旋干，即得乙酸乙酯部位87克；

e、將步驟d中得到的乙酸乙酯部位用自動純化系統(tǒng)進行在線分離分段，色譜條件為：色譜柱為xselectcshc185μm19×150mm；吸收波長230納米；流速20毫升每分鐘；流動相為：0-30分鐘濃度為10％的甲醇水溶液遞增至100％的甲醇；收集9分鐘至14分鐘的流份，將收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物1為4-(3,3-二甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-6,6-二甲基-5,6-二氫吡啶-2(1h)-酮；化合物2為3-丙酮基-3-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-5,5-二甲基-四氫吡咯-2(1h)-酮；化合物3為7-(2-羥基-2-甲基丙基)-2,2,5,5-四甲基-1,2,3,5-四氫-6h-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-酮；化合物4為2,2,5,5,7,7-六甲基-8a-羥基-3,5,7,8-四氫-2h-二吡咯并[3,2-b:3',2'-d]吡啶；收集14分鐘至18.5分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物5為5-羥基-2,2,4,6,8,8-六甲基-3-氧代-3,5,8,9-四氫-2h-吡啶并[2,3-d]氮雜卓-1-氧化；化合物6為4,5-二羥基-2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,4,5,6-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物7為2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,6-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物8為9a-羥基-2,2,6,6,8,9,10-七甲基-3,4,5,6,9,9a-六氫-吡啶并[3',4':4,5]環(huán)戊二烯并[1,2-c]氮雜卓-7(2h)-酮；化合物9為(e)-2,2,6-三甲基-3-亞氨基-4-(-2-羥基-2-甲基-亞丙基)-5氧代-6-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-2,3,4,6,7-五氫-1h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶；化合物10為2,2,4,5,7,7,8a-七甲基-4-羥基-4a,4b-環(huán)氧-2,3,4,7,8,8a,9-七氫-環(huán)戊二烯并[1,2-b:3,4-c']雙吡啶；化合物12為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；化合物13為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-5,8-二氧代-2,3,5,6,7,8-六氫-異喹啉；收集18.5分鐘至21分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物11為(z)-8-(4-羥基-4-甲基-2,3-戊烯-2-基)-1,1,6,6-四甲基-1,4,5,6-四氫-2,7-萘啶-3(2h)-酮；化合物14為1,3,3-三甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-7-(2-甲基-丙烯基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉。

實施例3

a、將粉碎的阿納其根粉末4.5kg，加入10升1:1的丙酮:甲醇溶液滲漉提取24小時，重復提取8次，合并提取液并干燥，得到總提物1.4kg；

b、將步驟a中的總提取物用1升濃度為5％的鹽酸溶解過濾，收集濾液，將濾液用二氯甲烷萃取以去除非生物堿雜質，去雜質的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調ph至12，得堿化液；；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取，得到總生物堿689克；

d、將步驟c中的總生物堿用1升甲醇溶解，并加入1升正己烷進行充分分配，收集甲醇部位，干燥，得到甲醇部位147克，再將147克甲醇部位用乙酸乙酯充分溶解并過濾，收集乙酸乙酯溶解液，旋干，即得乙酸乙酯部位78克；

e、將步驟d中得到的乙酸乙酯部位用自動純化系統(tǒng)進行在線分離分段，色譜條件為：色譜柱為xselectcshc185μm19×150mm；吸收波長230納米；流速20毫升每分鐘；流動相為：0-30分鐘濃度為10％的甲醇水溶液遞增至100％的甲醇；收集9分鐘至14分鐘的流份，將收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物1為4-(3,3-二甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-6,6-二甲基-5,6-二氫吡啶-2(1h)-酮；化合物2為3-丙酮基-3-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-5,5-二甲基-四氫吡咯-2(1h)-酮；化合物3為7-(2-羥基-2-甲基丙基)-2,2,5,5-四甲基-1,2,3,5-四氫-6h-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-酮；化合物4為2,2,5,5,7,7-六甲基-8a-羥基-3,5,7,8-四氫-2h-二吡咯并[3,2-b:3',2'-d]吡啶；收集14分鐘至18.5分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物5為5-羥基-2,2,4,6,8,8-六甲基-3-氧代-3,5,8,9-四氫-2h-吡啶并[2,3-d]氮雜卓-1-氧化；化合物6為4,5-二羥基-2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,4,5,6-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物7為2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,6-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物8為9a-羥基-2,2,6,6,8,9,10-七甲基-3,4,5,6,9,9a-六氫-吡啶并[3',4':4,5]環(huán)戊二烯并[1,2-c]氮雜卓-7(2h)-酮；化合物9為(e)-2,2,6-三甲基-3-亞氨基-4-(-2-羥基-2-甲基-亞丙基)-5氧代-6-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-2,3,4,6,7-五氫-1h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶；化合物10為2,2,4,5,7,7,8a-七甲基-4-羥基-4a,4b-環(huán)氧-2,3,4,7,8,8a,9-七氫-環(huán)戊二烯并[1,2-b:3,4-c']雙吡啶；化合物12為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；化合物13為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-5,8-二氧代-2,3,5,6,7,8-六氫-異喹啉；收集18.5分鐘至21分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物11為(z)-8-(4-羥基-4-甲基-2,3-戊烯-2-基)-1,1,6,6-四甲基-1,4,5,6-四氫-2,7-萘啶-3(2h)-酮；化合物14為1,3,3-三甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-7-(2-甲基-丙烯基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉。

實施例4

a、將粉碎的阿納其根粉末4.5kg，加入10升2:1的丙酮:甲醇溶液超聲提取3小時，重復提取4次，合并提取液并干燥，得到總提物1.5kg；

b、將步驟a中的總提取物用1升濃度為5％的鹽酸溶解過濾，收集濾液，將濾液用二氯甲烷萃取以去除非生物堿雜質，去雜質的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調ph至13，得堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取，得到總生物堿；

d、將步驟c中的總生物堿用1升甲醇溶解，并加入1升正己烷進行充分分配，收集甲醇部位，干燥，得到甲醇部位155克，再將155克甲醇部位用乙酸乙酯充分溶解并過濾，收集乙酸乙酯溶解液，旋干，即得乙酸乙酯部位81克；

e、將步驟d中得到的乙酸乙酯部位用自動純化系統(tǒng)進行在線分離分段，色譜條件為：色譜柱為xselectcshc185μm19×150mm；吸收波長230納米；流速20毫升每分鐘；流動相為：0-30分鐘濃度為10％的甲醇水溶液遞增至100％的甲醇；收集9分鐘至14分鐘的流份，將收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物1為4-(3,3-二甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-6,6-二甲基-5,6-二氫吡啶-2(1h)-酮；化合物2為3-丙酮基-3-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-5,5-二甲基-四氫吡咯-2(1h)-酮；化合物3為7-(2-羥基-2-甲基丙基)-2,2,5,5-四甲基-1,2,3,5-四氫-6h-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-酮；化合物4為2,2,5,5,7,7-六甲基-8a-羥基-3,5,7,8-四氫-2h-二吡咯并[3,2-b:3',2'-d]吡啶；收集14分鐘至18.5分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物5為5-羥基-2,2,4,6,8,8-六甲基-3-氧代-3,5,8,9-四氫-2h-吡啶并[2,3-d]氮雜卓-1-氧化；化合物6為4,5-二羥基-2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,4,5,6-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物7為2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,6-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物8為9a-羥基-2,2,6,6,8,9,10-七甲基-3,4,5,6,9,9a-六氫-吡啶并[3',4':4,5]環(huán)戊二烯并[1,2-c]氮雜卓-7(2h)-酮；化合物9為(e)-2,2,6-三甲基-3-亞氨基-4-(-2-羥基-2-甲基-亞丙基)-5氧代-6-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-2,3,4,6,7-五氫-1h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶；化合物10為2,2,4,5,7,7,8a-七甲基-4-羥基-4a,4b-環(huán)氧-2,3,4,7,8,8a,9-七氫-環(huán)戊二烯并[1,2-b:3,4-c']雙吡啶；化合物12為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；化合物13為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-5,8-二氧代-2,3,5,6,7,8-六氫-異喹啉；收集18.5分鐘至21分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物11為(z)-8-(4-羥基-4-甲基-2,3-戊烯-2-基)-1,1,6,6-四甲基-1,4,5,6-四氫-2,7-萘啶-3(2h)-酮；化合物14為1,3,3-三甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-7-(2-甲基-丙烯基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉。

實施例5

a、將粉碎的阿納其根粉末4.5kg，加入10升1:2的丙酮:甲醇溶液微波提取1小時，重復提取2次，合并提取液并干燥，得到總提物1.1kg；

b、將步驟a中的總提取物用1升濃度為5％的鹽酸溶解過濾，收集濾液，將濾液用二氯甲烷萃取以去除非生物堿雜質，去雜質的濾液用飽和碳酸氫鈉水溶液調ph至14，得堿化液；

c、將步驟b中的堿化液用二氯甲烷充分萃取，得到總生物堿579克；

d、將步驟c中的總生物堿用1升甲醇溶解，加入正己烷進行充分分配，收集甲醇部位，干燥，得到甲醇部位125克，將125克甲醇部位用乙酸乙酯充分溶解并過濾，收集乙酸乙酯溶解液，旋干，即得乙酸乙酯部位58克；

e、將步驟d中得到的乙酸乙酯部位用自動純化系統(tǒng)進行在線分離分段，色譜條件為：色譜柱為xselectcshc185μm19×150mm；吸收波長230納米；流速20毫升每分鐘；流動相為：0-30分鐘濃度為10％的甲醇水溶液遞增至100％的甲醇；收集9分鐘至14分鐘的流份，將收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物1為4-(3,3-二甲基環(huán)氧乙烷-2-基)-6,6-二甲基-5,6-二氫吡啶-2(1h)-酮；化合物2為3-丙酮基-3-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-5,5-二甲基-四氫吡咯-2(1h)-酮；化合物3為7-(2-羥基-2-甲基丙基)-2,2,5,5-四甲基-1,2,3,5-四氫-6h-吡咯并[3,2-b]吡啶-6-酮；化合物4為2,2,5,5,7,7-六甲基-8a-羥基-3,5,7,8-四氫-2h-二吡咯并[3,2-b:3',2'-d]吡啶；收集14分鐘至18.5分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物5為5-羥基-2,2,4,6,8,8-六甲基-3-氧代-3,5,8,9-四氫-2h-吡啶并[2,3-d]氮雜卓-1-氧化；化合物6為4,5-二羥基-2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,4,5,6-六氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物7為2,2,3a,7-四甲基-5-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-4,6-二氧代-2,3,3a,6-四氫-1h-環(huán)戊二烯并[c]吡啶；化合物8為9a-羥基-2,2,6,6,8,9,10-七甲基-3,4,5,6,9,9a-六氫-吡啶并[3',4':4,5]環(huán)戊二烯并[1,2-c]氮雜卓-7(2h)-酮；化合物9為(e)-2,2,6-三甲基-3-亞氨基-4-(-2-羥基-2-甲基-亞丙基)-5氧代-6-(2-甲基-2-乙酰氨基-丙基)-2,3,4,6,7-五氫-1h-環(huán)戊二烯并[b]吡啶；化合物10為2,2,4,5,7,7,8a-七甲基-4-羥基-4a,4b-環(huán)氧-2,3,4,7,8,8a,9-七氫-環(huán)戊二烯并[1,2-b:3,4-c']雙吡啶；化合物12為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉；化合物13為1,3,3,7-四甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-5,8-二氧代-2,3,5,6,7,8-六氫-異喹啉；收集18.5分鐘至21分鐘的流份，收集得到的流份干燥后再經(jīng)過反相色譜進一步分離得到化合物11為(z)-8-(4-羥基-4-甲基-2,3-戊烯-2-基)-1,1,6,6-四甲基-1,4,5,6-四氫-2,7-萘啶-3(2h)-酮；化合物14為1,3,3-三甲基-6-(2-乙酰氨基-異丙基)-7-(2-甲基-丙烯基)-8-氧代-2,3,4,6,7,8-六氫-異喹啉。