本發(fā)明屬于醫(yī)藥中間體的合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有生物活性的苯并四氫吡咯化合物的制備方法。

背景技術(shù)：

促性腺激素在人體中表現(xiàn)出重要的生理機(jī)能，比如新陳代謝、體溫調(diào)節(jié)和生殖過程。它是由下丘腦合成和分泌的，通過誘導(dǎo)垂體中促卵泡激素(fsh)/黃體生成激素(lh)的分泌，并進(jìn)一步誘導(dǎo)卵巢中各級卵泡的生長發(fā)育及排卵。fsh是哺乳動物生殖過程中的核心激素，在胎兒性分化、胎兒期卵子峰發(fā)生和卵泡閉鎖、性成熟期卵泡的發(fā)生發(fā)育和成熟、顆粒細(xì)胞芳香化酶活化和雄激素向雌激素的轉(zhuǎn)化、生殖周期的調(diào)節(jié)中起到不可替代的關(guān)鍵作用。fsh對靶器官的作用主要由fsh受體(fshr)所介導(dǎo)。研究表明，fshr不僅只表達(dá)于性腺，也在骨骼、前列腺、卵巢表面上皮等其它組織的表達(dá)。fsh在體內(nèi)水平過高，會導(dǎo)致骨質(zhì)流失，一些激素依賴性疾病，如卵巢癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位、卵巢過度刺激綜合征等，都受fsh影響很大；通過抑制fsh的分泌，可以進(jìn)而抑制性腺分泌性激素，導(dǎo)致血中疾病依賴性激素水平降低，抑制癌細(xì)胞的生長或預(yù)防、緩解、治療其他病癥；例如，西曲瑞克就是按照該機(jī)理對卵巢癌發(fā)揮抗增殖效應(yīng)。我們根據(jù)目前已有的fsh受體抑制劑藥物分子，通過計算機(jī)藥物輔助設(shè)計，對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了優(yōu)化，采用新的合成方法得到了一種新型的fsh受體抑制劑藥物分子，并對其進(jìn)行了相關(guān)活性測試。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種合成方法簡單、分子結(jié)構(gòu)新穎且對fsh受體作用效果較好的具有生物活性的苯并四氫吡咯化合物的制備方法。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，該具有生物活性的苯并四氫吡咯化合物的結(jié)構(gòu)為

具有生物活性的苯并四氫吡咯化合物的制備方法，其特征在于具體步驟為：

a、2,4-二羥基-苯乙酸甲酯與2-溴-4,5-二甲氧基芐溴在羥基氫活化催化劑的作用下進(jìn)行取代反應(yīng)得到2-羥基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯，其中羥基氫活化催化劑為鈀/碳酸鈣、鉑/碳酸鈣、鈀/活性炭或鉑/活性炭；

b、對甲苯磺酰氯在催化劑氯化亞錫的作用下對2-羥基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯的2位羥基進(jìn)行活化保護(hù)反應(yīng)得到2-對甲苯磺酯基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯；

c、2-對甲苯磺酯基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯在苯環(huán)氫活化催化劑的作用下進(jìn)行分子內(nèi)成環(huán)得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯，其中苯環(huán)氫活化催化劑為鈀/碳酸鈣或鉑/碳酸鈣；

d、3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯在堿性溶液中水解再經(jīng)過酸化得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸；

e、3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸與胺基化合物進(jìn)行酰化反應(yīng)得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酰胺基化合物；

f、3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酰胺基化合物進(jìn)行羰基還原得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基胺基化合物；

g、3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基胺基化合物脫去對甲苯磺酯基后進(jìn)行分子內(nèi)成環(huán)得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯胺基化合物。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟a的具體過程為：在反應(yīng)容器中將2,4-二羥基-苯乙酸甲酯和2-溴-4,5-二甲氧基芐溴加入到干燥的丙酮中，再加入羥基氫活化催化劑鈀/活性炭，其中2,4-二羥基-苯乙酸甲酯與羥基氫活化催化劑鈀/活性炭的質(zhì)量比為5:1，加熱升溫至80℃進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷中，再用純凈水洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的2-羥基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟b的具體過程為：在反應(yīng)容器中將2-羥基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯、三乙胺和催化劑氯化亞錫加入到二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于0℃加入溶有對甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，室溫反應(yīng)3h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，加入摩爾濃度為0.5mol/l的鹽酸溶液淬滅反應(yīng)，水相ph為6-7，分出有機(jī)相，水相用二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)相，加入無水硫酸鈉除去有機(jī)相中殘留水分，蒸除溶劑后得到2-對甲苯磺酯基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟c的具體過程為：在反應(yīng)容器中將2-對甲苯磺酯基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯和苯環(huán)氫活化催化劑鈀/碳酸鈣加入到二甲基乙酰胺中，其中2-對甲苯磺酯基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯與苯環(huán)氫活化催化劑鈀/碳酸鈣的質(zhì)量比為10:1，再往反應(yīng)體系中不斷通入n2，同時排出n2，使其保持一個穩(wěn)定流通環(huán)境，室溫攪拌30min后密閉反應(yīng)容器，再將反應(yīng)容器放置于微波反應(yīng)器中，加熱至130℃反應(yīng)2h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，取出反應(yīng)容器加入純凈水淬滅反應(yīng)，再用乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，最后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟d的具體過程為：在反應(yīng)容器中將3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯加入到乙醇中，再加入溶有氫氧化鈉的水溶液，加熱升溫至80℃反應(yīng)1h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入到水中，再用乙酸乙酯洗滌水相三次，水相用稀鹽酸調(diào)節(jié)ph為4，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有機(jī)相，最后蒸除溶劑后得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟e的具體過程為：在反應(yīng)容器中將1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽加入到溶有3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸、二異丙基乙胺、1-羥基苯并三唑和苯胺的dmf中，在室溫條件下反應(yīng)24h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，將反應(yīng)液倒入水中，再用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酰胺基化合物。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟f的具體過程為：在反應(yīng)容器中將3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酰胺基化合物、氫氧化鉀和肼加入到二甘醇中，加熱升溫至180℃，反應(yīng)過程中分離出過量的水和未反應(yīng)的肼，反應(yīng)5h后繼續(xù)升溫至200℃，繼續(xù)反應(yīng)2h后把反應(yīng)液倒入冰水中，用氯仿萃取反應(yīng)液，合并有機(jī)相，最后蒸除溶劑后得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基胺基化合物；或者在反應(yīng)容器中將3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酰胺基化合物加入到thf中，再加入nabh4-alcl3復(fù)合還原劑，在惰性氣體保護(hù)下加熱至回流，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后把反應(yīng)液倒入冰水中，用氯仿萃取反應(yīng)液，合并有機(jī)相，最后蒸除溶劑后得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基胺基化合物；或者在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，用無水thf作溶劑，向其中滴加摩爾濃度為1mol/l的硼烷四氫呋喃溶液，再加熱至90℃回流反應(yīng)15h，加水破壞剩余硼烷，將thf蒸出，加濃鹽酸回流3h，用naoh調(diào)ph為12，用氯仿萃取得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基胺基化合物。

進(jìn)一步優(yōu)選，步驟g的具體過程為：在反應(yīng)容器中將3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基胺基化合物加入到乙腈中，機(jī)械攪拌，加熱至70℃反應(yīng)10h，經(jīng)tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，減壓蒸出溶劑乙腈，再加入正己烷，冷卻至-5℃，攪拌過程中有固體析出，過濾反應(yīng)液得到固體，并用冷甲苯洗滌，濾餅烘干后得到8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯胺基化合物。

本發(fā)明所述的具有生物活性的苯并四氫吡咯化合物的制備方法中的具體合成路線為：

本發(fā)明合成工藝簡單且成本低廉，經(jīng)過活性測試可知制得的fsh受體拮抗劑藥物分子對fsh受體的作用效果較好，有望進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

具體實施方式

以下通過實施例對本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不應(yīng)該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

實施例1

在反應(yīng)瓶中加入二氯化鈀5g，再加入質(zhì)量比為1:1的甲醇-水混合溶液250ml，再加入羧甲基纖維素鈉1g，用碳酸鈉調(diào)節(jié)體系的ph為4.5，加入活性炭50g，在室溫下攪拌2h后放入高壓釜中，在100kpa、100℃條件下攪拌加氫還原反應(yīng)2h，減壓抽濾，去離子水洗至中性且經(jīng)硝酸銀溶液檢測無氯離子，在常壓60℃條件下干燥3h得到鈀/活性炭43g。

實施例2

在反應(yīng)瓶中加入二氯化鉑5g，再加入質(zhì)量比為1:1的甲醇-水混合溶液250ml，再加入羧甲基纖維素鈉1g，用碳酸鈉調(diào)節(jié)體系的ph為4.5，加入活性炭50g，在室溫下攪拌2h后放入高壓釜中，在100kpa、100℃條件下攪拌加氫還原反應(yīng)2h，減壓抽濾，去離子水洗至中性且經(jīng)硝酸銀溶液檢測無氯離子，在常壓60℃條件下干燥3h得到鉑/活性炭45g。

實施例3

在反應(yīng)瓶中加入二氯化鈀5g，再加入甲醇100ml，再加入羧甲基纖維素鈉1g，用碳酸鈉調(diào)節(jié)體系的ph為4.5，加入碳酸鈣50g，在室溫下攪拌2h后放入高壓釜中，在100kpa、100℃條件下攪拌加氫還原反應(yīng)2h，減壓抽濾，去離子水洗至中性且經(jīng)硝酸銀溶液檢測無氯離子，在常壓60℃條件下干燥3h得到鈀/碳酸鈣46g。

實施例4

在反應(yīng)瓶中加入二氯化鉑5g，再加入甲醇100ml，再加入羧甲基纖維素鈉1g，用碳酸鈉調(diào)節(jié)體系的ph為4.5，加入碳酸鈣50g，在室溫下攪拌2h后放入高壓釜中，在100kpa、100℃條件下攪拌加氫還原反應(yīng)2h，減壓抽濾，去離子水洗至中性且經(jīng)硝酸銀溶液檢測無氯離子，在常壓60℃條件下干燥3h得到鉑/碳酸鈣43g。

實施例5

在反應(yīng)瓶中，把2,4-二羥基-苯乙酸甲酯1g和2-溴-4,5-二甲氧基芐溴2g加入到干燥的丙酮160ml中，再加入鈀/碳酸鈣0.2g，緩慢升高溫度至80℃進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷100ml中，再用純凈水40ml洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的2-羥基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯1.20g，收率91％；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.97(s,1h),7.76(d,j＝8.8hz,1h),7.06(s,1h),7.00(s,1h),6.56-6.50(m,2h),5.08(s,2h),3.92(s,3h),3.89(s,3h),3.86(s,3h)。

實施例6

在反應(yīng)瓶中，把2,4-二羥基-苯乙酸甲酯1g和2-溴-4,5-二甲氧基芐溴2g加入到干燥的丙酮160ml中，再加入鈀/活性炭0.2g，緩慢升高溫度至80℃進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷100ml中，再用純凈水40ml洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的2-羥基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯1.26g，收率95％；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.97(s,1h),7.76(d,j＝8.8hz,1h),7.06(s,1h),7.00(s,1h),6.56-6.50(m,2h),5.08(s,2h),3.92(s,3h),3.89(s,3h),3.86(s,3h)。

實施例7

在反應(yīng)瓶中，把2,4-二羥基-苯乙酸甲酯1g和2-溴-4,5-二甲氧基芐溴2g加入到干燥的丙酮160ml中，再加入鉑/活性炭0.2g，緩慢升高溫度至80℃進(jìn)行回流反應(yīng)，反應(yīng)4h后tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷100ml中，再用純凈水40ml洗滌三次，有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，蒸除溶劑，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的2-羥基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯1.15g，收率87％；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.97(s,1h),7.76(d,j＝8.8hz,1h),7.06(s,1h),7.00(s,1h),6.56-6.50(m,2h),5.08(s,2h),3.92(s,3h),3.89(s,3h),3.86(s,3h)。

實施例8

在反應(yīng)瓶中，將2-羥基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯2g、三乙胺1.5g和氯化亞錫0.75g加入到二氯甲烷20ml中，在0℃條件下，氮?dú)獗Ｗo(hù)中，緩慢滴加溶有對甲苯磺酰氯2.0g的二氯甲烷30ml溶液，滴加完后升至室溫反應(yīng)3h，tlc監(jiān)控[展開劑:pe:ea＝10:1]原料反應(yīng)完全，用摩爾濃度為0.5mol/l的稀鹽酸10ml淬滅反應(yīng)液，水相ph為6-7，分出有機(jī)相，水相再用二氯甲烷10ml萃取三次，合并有機(jī)相，加入無水硫酸鈉10g除去有機(jī)相殘留水分，蒸除溶劑后得到2-對甲苯磺酯基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯(2.3g)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:10.62(s,1h),7.59(d,j＝8.8hz,1h),7.42(s,2h),7.16(s,1h),7.08(s,2h),7.03(s,1h),6.59-6.55(m,2h),5.18(s,2h),3.97(s,3h),3.81(s,3h),3.36(s,3h),2.31(s,3h)。

實施例9

在反應(yīng)瓶中，把2-對甲苯磺酯基-4-(2-溴-4,5-二甲氧基芐氧基)-苯乙酸甲酯2g和鈀/碳酸鈣0.2g加入到二甲基乙酰胺30ml中，往反應(yīng)體系中不停通入n2，同時排出n2，使其保持一個穩(wěn)定流通環(huán)境，室溫攪拌30min后密閉反應(yīng)瓶，把其放置在微波反應(yīng)器中，加熱到130℃反應(yīng)2h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，從微波反應(yīng)器中拿出反應(yīng)瓶，加入一定量的純凈水淬滅反應(yīng)，再用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，最后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯1.66g，收率為97％；¹hnmr(400mhz,cdcl3):8.16(s,1h),7.74-7.59(m,4h),7.09-7.06(m,2h),7.19(s,1h),6.63(s,1h),5.21(s,2h),4.61-4.50(m,5h),3.81(s,3h),3.64(s,3h),2.48(d,j＝6.0hz,3h)。

實施例10

在反應(yīng)瓶中，把3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸甲酯2g加入到乙醇20ml中，再加入溶有氫氧化鈉2g的水溶液15ml，加熱升溫至80℃反應(yīng)1h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入到水中，再用乙酸乙酯洗滌水相三次，水相再用稀鹽酸調(diào)節(jié)ph為4，再用二氯甲烷萃取水相三次，合并有機(jī)相，最后蒸除溶劑后得到產(chǎn)品3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸1.6g；¹hnmr(400mhz,cdcl3):8.15(s,1h),7.74-7.62(m,4h),7.11-7.08(m,2h),7.11(s,1h),6.75(s,1h),5.22(s,2h),4.64-4.56(m,5h),3.87(s,3h),2.41(s,3h)。

實施例11

在反應(yīng)瓶中，把1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽0.092g加入到溶有3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酸2.0g、二異丙基乙胺0.167ml、1-羥基苯并三唑0.065g和苯胺1g的dmf20ml中，在室溫條件下反應(yīng)24h，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后，加入一定量的純凈水，再用乙酸乙酯萃取反應(yīng)液三次，合并有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酰胺基苯2.2g；¹hnmr(400mhz,cdcl3):8.07-8.01(m,3h),7.87-7.82(m,3h),7.15-7.07(m,5h),6.75-6.71(m,2h),5.25(s,1h),5.07(s,2h),4.71-4.66(m,4h),4.23(s,1h),3.96-3.92(m,6h),2.45(s,3h)。

實施例12

在反應(yīng)瓶中，把3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酰胺基苯2g、氫氧化鉀1g和肼10ml加入到二甘醇20ml中，緩慢升溫至180℃，反應(yīng)過程中注意分離出過量的水和未反應(yīng)的肼，反應(yīng)5h后繼續(xù)升溫至200℃，繼續(xù)反應(yīng)2h后把反應(yīng)液倒入冰水中，用氯仿萃取反應(yīng)液，合并有機(jī)相，最后蒸除溶劑后得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基胺基苯1.7g。

實施例13

在反應(yīng)瓶中，把3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙酰胺基苯2g加入到thf20ml中，再加入nabh4-alcl3復(fù)合還原劑0.5g，在惰性氣體保護(hù)下，加熱至回流，tlc監(jiān)控原料反應(yīng)完全后把反應(yīng)液倒入冰水中，用氯仿萃取反應(yīng)液，合并有機(jī)相，最后蒸除溶劑后得到3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-二苯并吡喃-2-乙基胺基苯1.6g。

實施例14

在反應(yīng)瓶中，把3-對甲苯磺酯基-8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃-2-乙基胺基苯2g加入到乙腈20ml中，機(jī)械攪拌，加熱至70℃反應(yīng)10h，經(jīng)tlc監(jiān)控[展開劑:pe:ea＝7:1]原料反應(yīng)完全，減壓蒸出溶劑乙腈，再加入正己烷50ml，冷卻至-5℃，攪拌過程中逐漸有大量固體析出，過濾反應(yīng)液得到固體，并用一定量的冷甲苯(200ml)洗滌，濾餅烘干后得到目標(biāo)產(chǎn)物8,9-甲氧基-6h-苯并吡喃并苯基并四氫吡咯胺基苯1.1g。¹hnmr(400mhz,cdcl3):7.87-7.86(m,2h),7.71-7.65(m,3h),7.24-7.23(m,3h),7.11(s,1h),5.39(s,2h),4.14(s,2h),4.23(s,1h),3.81-3.79(m,6h),3.09-3.08(m,1h)。

實施例15

抗腫瘤活性測試

收集生長期卵巢癌細(xì)胞ovcar-3，以mts法測定一下化合物的抗癌活性，將細(xì)胞以適當(dāng)濃度(每毫升4×10⁴個細(xì)胞)加到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中(含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細(xì)胞懸液)，培養(yǎng)24小時后，在37℃、體積濃度為5％的co2條件下與不同濃度的化合物作用72小時，然后將mts(最終質(zhì)量濃度2mg/ml)和dms(最終摩爾濃度30μm)的混合物直接加入含細(xì)胞的培養(yǎng)基中，繼續(xù)置培養(yǎng)箱孵育4h。作用4h后，棄去上清液，每孔加入150μldmso，振蕩，細(xì)胞存活率通過其對mts作用的代謝物在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀490nm波長下的吸收率測定，fsh受體拮抗劑藥物分子對該細(xì)胞的抑制率ic50為197μmol·l^-1。

以上實施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點(diǎn)，本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)均落入本發(fā)明保護(hù)的范圍內(nèi)。