一種微生物發(fā)酵制備殺蟲劑的方法，涉及到用市售短小芽孢桿菌、蘇云桿菌和解淀粉芽孢桿菌h47凍干粉，以苦參為原料發(fā)酵制備殺蟲劑的方法，屬于生物工程及發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
苦參(sophoraflavescens)為豆科苦參屬植物，落葉半灌木，高1.5-3m。根圓柱狀，外皮黃白色。莖直立，多分枝，具縱溝；幼枝被疏毛，后變無毛。奇數(shù)羽狀復(fù)葉，長20-25cm，互生；小葉15-29，葉片披針形至線狀披針形，長3-4cm，寬1.2-2cm，先端漸尖，基部圓，有短柄，全緣，背面密生平貼柔毛；托葉線形?？偁罨ㄐ蝽斏?，長15-20cm，被短毛，苞片線形；萼鐘狀，扁平，長6-7mm，5淺裂；花冠蝶形，淡黃白色；旗瓣匙形，翼瓣無耳，與龍骨瓣等長；雄蕊10，花絲分離；子房柄被細(xì)毛，柱頭圓形。莢果線形，先端具長喙，成熟時(shí)不開裂，長5-8cm。種子間微縊縮，呈不明顯的串珠狀，疏生短柔毛。種子3-7顆，近球形，黑色?；ㄆ?-7月，果期7-9月。分布于全國各地，生于沙地或向陽山坡草叢中及溪溝邊?？鄥⒑性S多次生代謝產(chǎn)物，苦參醚提物及醇提物對(duì)金黃色葡萄球菌有較強(qiáng)的抑菌作用；苦參水浸劑對(duì)堇色毛癬菌、同心性毛癬菌、許蘭毛癬菌、奧杜盎小芽孢癬菌等有抑制作用?？鄥A可麻痹神經(jīng)中樞，使蟲體蛋白質(zhì)凝固，封閉蟲體氣孔，使害蟲窒息而死。對(duì)各種作物上的菜青蟲、蚜蟲、紅蜘蛛等害蟲有明顯的防治效果。但植物性殺蟲劑多用有機(jī)溶劑或煎煮提取，1)不利于節(jié)能也有較大的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)；2)影響活性物質(zhì)的穩(wěn)定性和遺失活性物質(zhì)；3)增加成本使得開發(fā)應(yīng)用困難較大，作用效果緩慢，因此給植物源殺蟲劑的研發(fā)和生產(chǎn)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)困難。利用合適的植物促生菌發(fā)酵苦參，不僅有利于生理活性物質(zhì)的提取，還不易造成活性物質(zhì)的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲防病和促生作用。有利于改善植物生長和增強(qiáng)殺蟲效果。有利于環(huán)境保護(hù)和苦參植物本身的有效利用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明利用苦參的豐富資源，通過微生物進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)生抗氧化因子及植物促生菌產(chǎn)生酶類、醇類及芳香物質(zhì)等多類有義代謝產(chǎn)物從而提高殺蟲劑的藥效及其功能，本發(fā)明擁有著發(fā)酵時(shí)間短，有害微生物滋生少甚至沒有，避免由于過長時(shí)間發(fā)酵而產(chǎn)生的病毒，以及能產(chǎn)生脂肽等生理活性物質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)，從而提高殺蟲防病的功效和植物生長的促生作用。
本發(fā)明配方及用法：
(1)挑選材料：選擇新鮮、質(zhì)量好的苦參為發(fā)酵主原料。
(2)材料的處理：先用自來水沖洗，再使用無錫百年尚水飲品有限公司提供的百年尚水清水洗兩遍，最后再用0.9％的nacl溶液侵泡120秒，瀝干備用。
(3)菌種培養(yǎng)：使用無錫百年尚水飲品有限公司提供的百年尚水配制lb培養(yǎng)基，將原保存菌株活化，培養(yǎng)約48小時(shí)得到的菌液備用；
(4)接種發(fā)酵：均按照接種比例2～4％，將市售短小芽孢桿菌、蘇云桿菌和解淀粉芽孢桿菌h47按一定的比例接入發(fā)酵原液，各菌濃度為106cfu/ml，發(fā)酵3～9d，ph值5.0～8.0，溫度25℃～35℃。
(5)后期處理制作：粗過濾，初步篩掉大顆粒殘?jiān)?，避免苦參久放容易造成酸敗，過濾條件：過濾篩數(shù)目為20～32目。細(xì)過濾：進(jìn)一步濾掉小型顆粒殘?jiān)?，使液態(tài)呈現(xiàn)較清澈的狀態(tài)，過濾條件：過濾篩數(shù)目為80～100目，既得以苦參發(fā)酵原料的殺蟲劑。
步驟(1)原料的制備方法包括如下步驟：
(11)所使用的工具、器具均要滅菌，無油膩。
(12)把苦參用純凈水洗凈，再用純凈水或0.9％的鹽水浸泡瀝干。
(13)再將苦參置于已滅菌的容器中，后加入生活垃圾及淀粉類物質(zhì)和純凈水，其中發(fā)酵原液中體積比苦參：生活垃圾：淀粉類物質(zhì):純凈水＝2～5:1～2:0.01:3～7，即得苦參發(fā)酵原液。
發(fā)明的有益效果：
本利用合適的植物促生菌發(fā)酵苦參，不僅有利于生理活性物質(zhì)的提取，保持活性物質(zhì)的穩(wěn)定性，促生菌本身可通過優(yōu)勢(shì)菌株抑制了其他雜菌滋生從而有較好的殺蟲防病和促生作用。有利于改善植物生長和增強(qiáng)殺蟲效果。有利于環(huán)境保護(hù)和苦參植物本身的有效利用。提高殺蟲劑的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完善地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1
一種以苦參為原料發(fā)酵制備殺蟲劑的方法，包括以下步驟：
(1)選擇新鮮、質(zhì)量好的苦參做為發(fā)酵主要原料。
(2)純凈水清水洗兩遍，最后再用0.9％的nacl溶液浸泡，低溫殺菌，然后瀝干，裝入純凈水清洗好的容器中，大概占體積的20％，加入占總液體體積5％的生活垃圾及1％的淀粉類物質(zhì)為發(fā)酵原液備用。
(3)配制lb培養(yǎng)基，將原保存菌株活化，80r/min振蕩培養(yǎng)約48小時(shí)得到的發(fā)酵菌液備用；
(4)均按照接種比例3％，將市售短小芽孢桿菌、蘇云桿菌和解淀粉芽孢桿菌h47按等比分別取接入發(fā)酵原液，100r/min振蕩培養(yǎng)發(fā)酵6d，ph值7.0，溫度25℃。
(5)先進(jìn)行粗過濾，過濾篩數(shù)目為20～32目。然后細(xì)過濾，過濾篩數(shù)目為為80～100目，即得苦參為發(fā)酵原料的殺蟲劑。
實(shí)施例2
一種以苦參為原料發(fā)酵制備殺蟲劑的方法，包括以下步驟：
(1)選擇新鮮、質(zhì)量好的苦參做為發(fā)酵主要原料。
(2)純凈水清水洗兩遍，最后再用0.9％的nacl溶液浸泡，低溫殺菌，然后瀝干，裝入純凈水清洗好的容器中，大概占體積的30％，加入占總液體體積10％的生活垃圾及1％的淀粉類物質(zhì)為發(fā)酵原液備用。
(3)配制lb培養(yǎng)基，將原保存菌株活化，100r/min振蕩培養(yǎng)約48小時(shí)得到的發(fā)酵菌液備用；
(4)按照不同接種比例(市售短小芽孢桿菌：蘇云桿菌：解淀粉芽孢桿菌＝2：1：1)，將接種量為4％市售短小芽孢桿菌：2％蘇云桿菌：2％解淀粉芽孢桿菌h47分別取接入發(fā)酵原液，120r/min振蕩發(fā)酵6d，ph值7.0，溫度25℃。
(5)先進(jìn)行粗過濾，過濾篩數(shù)目為20～32目。然后細(xì)過濾，過濾篩數(shù)目為為80～100目，即得苦參為發(fā)酵原料的殺蟲劑。
實(shí)施例3
一種以苦參為原料發(fā)酵制備殺蟲劑的方法，包括以下步驟：
(1)選擇新鮮、質(zhì)量好的苦參做為發(fā)酵主要原料。
(2)純凈水清水洗兩遍，最后再用0.9％的nacl溶液浸泡，低溫殺菌，然后瀝干，裝入純凈水清洗好的容器中，大概占體積的40％，加入占總液體體積15％的生活垃圾及1％的淀粉類物質(zhì)為發(fā)酵原液備用。
(3)配制lb培養(yǎng)基，將原保存菌株活化，120r/min振蕩培養(yǎng)約48小時(shí)得到的發(fā)酵菌液備用；
(4)按照不同的接種比例(市售短小芽孢桿菌：蘇云桿菌：解淀粉芽孢桿菌＝1：2：1)，將接種量2％市售短小芽孢桿菌、4％蘇云桿菌和2％解淀粉芽孢桿菌h47分別取接入發(fā)酵原液，150r/min振蕩發(fā)酵6d，ph值7.0，溫度25℃。
(5)先進(jìn)行粗過濾，過濾篩數(shù)目為20～32目。然后細(xì)過濾，過濾篩數(shù)目為為80～100目，即得苦參為發(fā)酵原料的殺蟲劑。
實(shí)施例4
一種以苦參為原料發(fā)酵制備殺蟲劑的方法，包括以下步驟：
(1)選擇新鮮、質(zhì)量好的苦參做為發(fā)酵主要原料。
(2)純凈水清水洗兩遍，最后再用0.9％的nacl溶液浸泡，低溫殺菌，然后瀝干，裝入純凈水清洗好的容器中，大概占體積的50％，加入占總液體體積20％的生活垃圾及1％的淀粉類物質(zhì)為發(fā)酵原液備用。
(3)配制lb培養(yǎng)基，將原保存菌株活化，150r/min振蕩培養(yǎng)約48小時(shí)得到的發(fā)酵菌液備用；
(4)按照不同的接種比例(市售短小芽孢桿菌：蘇云桿菌：解淀粉芽孢桿菌＝1：1：2)，將接種量為2％市售短小芽孢桿菌、2％蘇云桿菌和4％解淀粉芽孢桿菌h47分別取接入發(fā)酵原液，200r/min振蕩發(fā)酵6d，ph值7.0，溫度25℃。
先進(jìn)行粗過濾，過濾篩數(shù)目為20～32目。然后細(xì)過濾，過濾篩數(shù)目為為80～100目，即得苦參為發(fā)酵原料的殺蟲劑。
本發(fā)明中的苦參含有豐富的次級(jí)代謝物質(zhì)以及苦參醚提物及醇提物等對(duì)植物具有促生作用且藥效明顯，但是不僅僅限于此，可以根據(jù)實(shí)際情況，確定苦參的鮮重或是干重的添加量或者選擇淀粉類物質(zhì)及生活垃圾混合在一起，只要能達(dá)到殺蟲劑配比合理、殺蟲劑的藥效就可以發(fā)揮明顯作用。
另外發(fā)酵原液的選擇和配比、接菌量也不限于實(shí)施例所舉的組合，可根據(jù)實(shí)際情況選擇不同的組合。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的思路和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。