本發(fā)明涉及到解一株淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)H47和短小芽孢桿菌及蘇云金桿菌微生物發(fā)酵曼陀羅制備植物源殺蟲(chóng)劑的生產(chǎn)方法，屬于微生物和發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

曼陀羅(Datura stramonium Linn)是茄科野生直立木質(zhì)一年生草本植物，在低緯度地區(qū)可長(zhǎng)成亞灌木，高0.5-1.5m，全體近于平滑或在幼嫩部分被短柔毛。莖粗壯，圓柱狀，淡綠色或帶紫色，下部木質(zhì)化。葉互生，上部呈對(duì)生狀，葉片卵形或?qū)捖研?，頂端漸尖，基部不對(duì)稱(chēng)楔形，有不規(guī)則波狀淺裂，裂片頂端急尖，有時(shí)亦有波狀牙齒，側(cè)脈每邊3-5條，直達(dá)裂片頂端，長(zhǎng)8-17cm，寬4-12cm；葉柄長(zhǎng)3-5cm?；▎紊谥Σ骈g或葉腋，直立，有短梗；花萼筒狀，長(zhǎng)4-5cm，筒部有5棱角，兩棱間稍向內(nèi)陷，基部稍膨大，頂端緊圍花冠筒，5淺裂，裂片三角形，花后自近基部斷裂，宿存部分隨果實(shí)而增大并向外反折；花冠漏斗狀，下半部帶綠色，上部白色或淡紫色，檐部5淺裂，裂片有短尖頭，長(zhǎng)6-10cm，檐部直徑3-5cm；雄蕊不伸出花冠，花絲長(zhǎng)約3cm，花藥長(zhǎng)約4mm；子房密生柔針毛，花柱長(zhǎng)約6cm。蒴果直立生，卵狀，長(zhǎng)3-4.5cm，直徑2-4cm，表面生有堅(jiān)硬針刺或有時(shí)無(wú)刺而近平滑，成熟后淡黃色，規(guī)則4瓣裂。種子卵圓形，稍扁，長(zhǎng)約4mm，黑色。一般花期6-10月，果期7-11月。廣泛分布于世界溫帶至熱帶地區(qū)。中國(guó)各地均有分布。常生于村邊、路邊、草地。

曼陀羅的主要活性成分為具有抗膽堿特性的莨菪堿、東莨菪堿及阿托品等生物堿，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)細(xì)胞具有藥理作用，干擾了昆蟲(chóng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的“信息編碼”，從而影響其取食行為。曼陀羅干浸液對(duì)小麥葉銹病、馬鈴薯晚疫病均有較好的防治效果。

植物源殺蟲(chóng)劑是一類(lèi)利用提取具有殺蟲(chóng)活性的植物次生代謝物制成的殺蟲(chóng)劑，其所具有的多種生物活性物質(zhì)對(duì)害蟲(chóng)有忌避、拒食、觸殺和抑制生長(zhǎng)發(fā)育等作用。利用合適的植物促生菌發(fā)酵曼陀羅，不僅有利于生理活性物質(zhì)的提取，還不易造成活性物質(zhì)的失活，促生菌本身還有較好的殺蟲(chóng)防病和促生作用。有利于改善植物生長(zhǎng)和增強(qiáng)殺蟲(chóng)效果，有利于環(huán)境保護(hù)和曼陀羅植物本身的有效利用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本發(fā)明利用曼陀羅植物為原料，用2013年6月24日保存于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心的，保藏編號(hào)為：CCTCCNO：M2013283的解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)H47(該菌株以下簡(jiǎn)稱(chēng)：解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283)和市售短小芽孢桿菌及市售蘇云金桿菌發(fā)酵制備植物源殺蟲(chóng)劑，有利于改善植物生長(zhǎng)和增強(qiáng)殺蟲(chóng)效果，有利于環(huán)境保護(hù)。

發(fā)明的發(fā)酵技術(shù)方案：

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按一定比例混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量?jī)?yōu)良的曼陀羅，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得曼陀羅放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來(lái)水至終體積為10L，按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有曼陀羅的發(fā)酵罐中，25—30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過(guò)濾，過(guò)濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲(chóng)劑成品。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明提供了發(fā)酵曼陀羅制得一種生物源殺蟲(chóng)劑的方法。本發(fā)明制備方法及過(guò)程中無(wú)污染安全可靠，發(fā)酵時(shí)間周期短，工藝環(huán)節(jié)少，簡(jiǎn)單易操作，可節(jié)省投資和運(yùn)行費(fèi)用。與傳統(tǒng)化學(xué)藥劑相比，其具綠色安全，環(huán)境友好等優(yōu)勢(shì)，且促生菌本身還有較好的殺蟲(chóng)防病和促生作用，擁有廣闊的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方法：

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅為本發(fā)明的幾個(gè)具體實(shí)施例，但本發(fā)明的設(shè)計(jì)構(gòu)思并不局限于此，凡利用此構(gòu)思對(duì)本發(fā)明進(jìn)行非實(shí)質(zhì)性的改動(dòng)，均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護(hù)范圍的行為。

實(shí)施例1

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按1:2:1混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量?jī)?yōu)良的曼陀羅，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得曼陀羅放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來(lái)水至終體積為10L，按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有曼陀羅的發(fā)酵罐中，25℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過(guò)濾，過(guò)濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲(chóng)劑成品。

實(shí)施例2

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按1:2:1混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量?jī)?yōu)良的曼陀羅，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得曼陀羅放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來(lái)水至終體積為10L，按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有曼陀羅的發(fā)酵罐中，27℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過(guò)濾，過(guò)濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲(chóng)劑成品。

實(shí)施例3

1)菌種準(zhǔn)備：將解淀粉芽孢桿菌H47CCTCCM2013283和市售短小芽孢桿菌、市售蘇云金桿菌分別接種于種子培養(yǎng)基，于30℃，250r/min震蕩培養(yǎng)12h；所述種子培養(yǎng)基成分按g/L計(jì)為：蛋白胨10，酵母膏5，NaCl 10，其余成分為水，121℃高壓滅菌15min，調(diào)整pH至7.0。按1:2:1混合做種子。

2)發(fā)酵液準(zhǔn)備：選用質(zhì)量?jī)?yōu)良的曼陀羅，用水沖洗，70％—75％酒精浸泡3min，用水洗凈，經(jīng)攪碎機(jī)攪碎后待用。

3)發(fā)酵罐空消及空氣管道消毒：按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行發(fā)酵罐空消。

4)發(fā)酵液實(shí)消：將步驟2所得曼陀羅放入發(fā)酵罐中，補(bǔ)充自來(lái)水至終體積為10L，按相關(guān)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)消滅菌。

5)接種培養(yǎng)：當(dāng)發(fā)酵罐溫度降至37℃時(shí)，將步驟1所得種子按體積比1％的接種量，接種至裝有曼陀羅的發(fā)酵罐中，30℃條件下培養(yǎng)3—12天，設(shè)置工藝要求的通氣量并保持罐壓，設(shè)置各其他培養(yǎng)參數(shù)培養(yǎng)。

6)出料：培養(yǎng)完畢，放出發(fā)酵液，過(guò)濾，過(guò)濾后所得發(fā)酵液即為殺蟲(chóng)劑成品。