本發(fā)明涉及sts基因的多重拷貝數(shù)檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種x-性連鎖魚(yú)鱗病相關(guān)sts基因拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)：

魚(yú)鱗病(ichthyosis)是一種表皮細(xì)胞動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定機(jī)制紊亂或分化異常，導(dǎo)致以皮膚干燥伴有魚(yú)鱗狀鱗屑為特征的遺傳性角化障礙性皮膚病，可分為尋常型魚(yú)鱗病、x-性連鎖魚(yú)鱗病、板層狀魚(yú)鱗病、先天性非大皰性魚(yú)鱗病樣紅皮病、獲得性魚(yú)鱗病、火棉膠樣?jì)雰汉椭匦湍z樣?jì)雰?。x-性連鎖魚(yú)鱗病(x-linkedichthyosis，xli)是其中重要的一型，為x染色體隱性遺傳，常于出生時(shí)或生后不久發(fā)病，病情不隨年齡增大而改善，而且在范圍和程度上逐漸加重，表現(xiàn)為全身皮膚干燥、粗糙、覆著黑褐色鱗屑，主要累及肢體伸側(cè)和軀干側(cè)面、頸部、面及耳部。皮膚表現(xiàn)往往在夏季減輕，而冬季和干燥季節(jié)加重。

目前研究表明x-性連鎖魚(yú)鱗病主要由編碼類(lèi)固醇硫酸鹽的類(lèi)固醇硫酸酯酶(steroidsulfatase，sts)基因的缺失或點(diǎn)突變引起的遺傳病。該病主要發(fā)生在男性，大多數(shù)女性?xún)H為致病基因攜帶者。sts降解膽固醇硫酸鹽，產(chǎn)生一些膽固醇起到皮膚屏障作用，同時(shí)隨著膽固醇硫酸鹽降解累積到一定程度，使橋粒降解，導(dǎo)致皮膚正常的脫屑。sts基因缺失或點(diǎn)突變導(dǎo)致其底物膽固醇硫酸鹽水解減少，在角質(zhì)層堆積，而膽固醇硫酸鹽在保持角質(zhì)層細(xì)胞膜完整性和正常脫屑過(guò)程中起著重要作用。因此，膽固醇硫酸鹽的過(guò)量堆積改變了角質(zhì)層細(xì)胞膜間的物理特性，增加了細(xì)胞膜的穩(wěn)定性和細(xì)胞間的凝聚程度，導(dǎo)致角質(zhì)層細(xì)胞持久性黏著，從而導(dǎo)致皮膚正常脫屑過(guò)程延遲，形成鱗屑。男性發(fā)病率為1/6000-1/2000，無(wú)明顯的種族和地域差異。

sts是廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織中的一種微粒體酶，分子量達(dá)62kda，sts基因定位于xp22.3，約164kb大小，含有10個(gè)外顯子。由于sts基因定位于xp22.3，該區(qū)域逃避了x染色體的功能失活，根據(jù)lyon假說(shuō)，正常女性一條x染色體失活可以保證男女遺傳平衡，而sts基因逃避了這種失活，使xli女性攜帶者sts僅活性降低，因此她們除了冬季皮膚較干燥，無(wú)其他可識(shí)別的臨床特征。據(jù)統(tǒng)計(jì)，90%xli患者表現(xiàn)為sts全基因及其側(cè)翼序列缺失，少數(shù)患者為sts基因部分缺失、重復(fù)或點(diǎn)突變引起。直接測(cè)序的方法不能給與明確診斷，甚至漏診。首先，當(dāng)先證者存在大片段缺失時(shí)，由于缺失而使得pcr擴(kuò)增失敗。而對(duì)于女性家系成員來(lái)說(shuō)，由于存在另外一條正常的染色體模板，pcr擴(kuò)增是能夠成功的，測(cè)序結(jié)果也是正常的，但不能排除攜帶者的可能性。其次，當(dāng)先證者為大片段重復(fù)時(shí)，pcr能夠成功擴(kuò)增所有外顯子區(qū)域，但是測(cè)序比對(duì)不能發(fā)現(xiàn)重復(fù)突變。基因大片段缺失和重復(fù)又稱(chēng)為基因拷貝數(shù)變異（copynumbersvariation，cnvs）。隨著微陣列cnv芯片技術(shù)以及二代測(cè)序技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)拷貝數(shù)變異（cnvs）廣泛地存在于人類(lèi)染色體基因組中。cnvs主要由基因組發(fā)生重組而導(dǎo)致，一般指長(zhǎng)度為幾kb-幾mb基因組大片段的拷貝數(shù)增加或者減少，主要表現(xiàn)為亞顯微水平的重復(fù)，缺失和插入等。通過(guò)拷貝數(shù)檢測(cè)方法對(duì)男性先證者sts各外顯子的拷貝數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，如果相應(yīng)外顯子缺失，則拷貝數(shù)結(jié)果為0；如果相應(yīng)外顯子重復(fù)，則拷貝數(shù)結(jié)果大于1。而對(duì)于女性攜帶者來(lái)說(shuō)，如果缺失拷貝數(shù)結(jié)果為1，而重復(fù)的話(huà)拷貝數(shù)結(jié)果將大于2。但是目前針對(duì)cnvs的檢測(cè)方法非常多，選擇合適的技術(shù)用于sts基因檢測(cè)極為重要。目前cnvs的檢測(cè)方法主要有：多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(multiplexligation-dependentprobeamplification，mlpa)、微陣列比較基因雜交(array-basedcomparativegenomichybridization，array-cgh)、單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism，snp）分型芯片、affymetrixcnv芯片技術(shù)及二代測(cè)序技術(shù)等。此外，實(shí)時(shí)熒光定量pcr技術(shù)(real-timequantitativepolymerasechainreaction，rt-qpcr)和熒光原位雜交技術(shù)(fluorescenceinsituhybridization，fish)等則主要用于cnvs的驗(yàn)證。其中array-cgh、snp分型芯片、affymetrix微陣列技術(shù)、二代測(cè)序技術(shù)等主要用于全基因組范圍內(nèi)未知cnvs的檢測(cè)，這些全基因組cnvs檢測(cè)技術(shù)先進(jìn)，準(zhǔn)確而高效，但相對(duì)比較昂貴，尤其是在檢測(cè)某些特定基因或者特定區(qū)域時(shí)并不是最佳選擇。rt-qpcr方法雖然經(jīng)典，但是效率太低，一個(gè)反應(yīng)體系中不能同時(shí)對(duì)多個(gè)片段進(jìn)行檢測(cè)。mlpa主要是針對(duì)特定基因或特定區(qū)域進(jìn)行拷貝數(shù)檢測(cè)的技術(shù)，2002年由schouten等首次報(bào)道，是目前應(yīng)用最為廣泛的單一基因拷貝數(shù)檢測(cè)技術(shù)，可在同一反應(yīng)管中對(duì)50個(gè)不同片段的拷貝數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，所需設(shè)施簡(jiǎn)單，pcr儀和毛細(xì)管電泳儀。荷蘭mrc-holland公司研發(fā)了數(shù)百種mlpa檢測(cè)試劑盒，用于人類(lèi)疾病，細(xì)胞遺傳學(xué)及腫瘤研究，其中包括各種遺傳性出血與血栓性疾病的相關(guān)基因的cnvs的檢測(cè)。盡管mlpa在診斷特定基因外顯子cnvs方面技術(shù)已經(jīng)非常成熟，但是mlpa也存在一些比較突出的問(wèn)題。首先，它對(duì)所檢測(cè)標(biāo)本的dna質(zhì)量要求相對(duì)較高，普通的dna抽提方法無(wú)法滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求，需要購(gòu)買(mǎi)質(zhì)量較好的商品化試劑盒進(jìn)行抽提，增加了實(shí)驗(yàn)成本，而且檢測(cè)標(biāo)本和參照標(biāo)本必須使用同種dna抽提方法。因此研制和開(kāi)發(fā)一種特異性強(qiáng)、敏感性高同時(shí)有快速、經(jīng)濟(jì)，同時(shí)檢驗(yàn)多個(gè)外顯子拷貝數(shù)的sts基因檢測(cè)方法顯得尤為重要，對(duì)x-性連鎖魚(yú)鱗病的診斷和治療起著重要的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的以上問(wèn)題，本發(fā)明旨在提供一種x-性連鎖魚(yú)鱗病相關(guān)sts基因拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒，主要用于檢測(cè)sts基因缺失或重復(fù)突變而導(dǎo)致x-性連鎖魚(yú)鱗病，以獲取sts基因各目標(biāo)位點(diǎn)的正確拷貝數(shù)。

為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種x-性連鎖魚(yú)鱗病相關(guān)sts基因拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒，包括：

10×pcr緩沖液，

4×gcsolution，

pcr引物混合液，

taqdna聚合酶，

探針引物混合液，

dna稀釋液，

10×taq連接緩沖液，

taq連接酶，

20mmedta，

2.5mmdntp，

25mmmgcl2，

ddh2o。

進(jìn)一步的，所述探針引物混合液中的通用引物的序列如seqidno.:1至seqidno.:50所示。

利用本發(fā)明試劑盒可準(zhǔn)確檢測(cè)sts基因各目標(biāo)位點(diǎn)的正確拷貝數(shù)，該方法是基于高通量連接探針擴(kuò)增技術(shù)（hlpa）對(duì)待測(cè)樣本的sts基因進(jìn)行定量，以獲取sts基因各目標(biāo)位點(diǎn)的正確拷貝數(shù)，其具體包括以下步驟：

1）針對(duì)sts基因，設(shè)計(jì)二十五對(duì)目標(biāo)位點(diǎn)的連接探針，每對(duì)所述連接探針上具有用于pcr擴(kuò)增的通用引物；

2）每對(duì)所述連接探針?lè)謩e于目標(biāo)位點(diǎn)雜交，并在連接酶或化學(xué)連接作用下進(jìn)行連接反應(yīng)；

3）連接產(chǎn)物用通用引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)變性毛細(xì)管電泳將不同長(zhǎng)度的擴(kuò)增片段進(jìn)行分離，得到每個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物的位置信息以及熒光強(qiáng)度，并計(jì)算目標(biāo)位點(diǎn)拷貝數(shù)值。

進(jìn)一步的，步驟3）中計(jì)算目標(biāo)位點(diǎn)拷貝數(shù)的方法，包括計(jì)算每個(gè)sts基因目標(biāo)位點(diǎn)的樣本條帶/參照基因條帶的熒光峰高，然后將目標(biāo)位點(diǎn)的該比值除以對(duì)應(yīng)的參照樣本的比值再乘以參照樣本該目標(biāo)區(qū)的拷貝數(shù)，即得目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)；其具體步驟如下：

1）將每個(gè)目標(biāo)位點(diǎn)的熒光峰高分別除以group內(nèi)n個(gè)參照探針，這樣每個(gè)目標(biāo)位點(diǎn)將有n組數(shù)據(jù)b；其中，n為正整數(shù)；

2）校正參數(shù)的選取：a）計(jì)算n個(gè)正常參照樣本數(shù)據(jù)的變異系數(shù)（cv），如果變異系數(shù)小于10%，則計(jì)算該變異系數(shù)的平均數(shù)作為校正參數(shù)；b）如果變異系數(shù)大于10%，則計(jì)算任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)，如果計(jì)算出的該n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)中存在小于5%的組合，則取該變異系數(shù)最小的組合的平均數(shù)作為該組數(shù)據(jù)的校正參數(shù)，如果計(jì)算出的任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)中不存在小于5%的組合，則取n個(gè)數(shù)據(jù)的中位數(shù)作為該組數(shù)據(jù)的校正參數(shù)；將每個(gè)目標(biāo)位點(diǎn)的n組數(shù)據(jù)b，分別除以對(duì)應(yīng)的校正參數(shù)，獲得n組校正數(shù)據(jù)c；

3）對(duì)每個(gè)樣本計(jì)算該目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)（相對(duì)正常參照樣本的絕對(duì)拷貝數(shù)的比值）：a)計(jì)算n個(gè)校正數(shù)據(jù)c的變異系數(shù)，如果變異系數(shù)小于10%，則計(jì)算平均數(shù)作為該樣本的目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)；b)如果變異系數(shù)大于10%，則計(jì)算任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)，如果計(jì)算出的任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)中存在小于5%的組合，取該變異系數(shù)最小的組合的平均數(shù)作為該樣本的目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)，如果計(jì)算出的任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)中不存在小于5%的組合，則取n個(gè)數(shù)據(jù)的中位數(shù)作為該樣本的目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)，將該數(shù)據(jù)mark起來(lái)表述該數(shù)據(jù)變異較大。

本發(fā)明的有益效果是:

1、快速檢測(cè)：本發(fā)明使用的探針短，可以直接合成，無(wú)需克隆制備，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程僅需要一步連接反應(yīng)，一步pcr循環(huán)和一步毛細(xì)管電泳，耗時(shí)不到24個(gè)小時(shí)。

2、高精確性：本發(fā)明基于高特異性的連接原理，檢測(cè)區(qū)域連接產(chǎn)物采用通用引物擴(kuò)增，擴(kuò)增效率基本一致。

3、重復(fù)性高：本發(fā)明檢測(cè)穩(wěn)定性高，節(jié)約樣品復(fù)孔的檢測(cè)費(fèi)用。

4、分辨率高：本發(fā)明可對(duì)6拷貝以?xún)?nèi)的位點(diǎn)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。

上述說(shuō)明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段，并可依照說(shuō)明書(shū)的內(nèi)容予以實(shí)施，以下以本發(fā)明的較佳實(shí)施例并配合附圖詳細(xì)說(shuō)明如后。本發(fā)明的具體實(shí)施方式由以下實(shí)施例及其附圖詳細(xì)給出。

附圖說(shuō)明

此處所說(shuō)明的附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，構(gòu)成本申請(qǐng)的一部分，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：

圖1為本發(fā)明檢測(cè)方法的原理示意圖。

圖2為本發(fā)明實(shí)施例中樣本a的檢測(cè)結(jié)果示意圖1；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例中樣本a的檢測(cè)結(jié)果示意圖2；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例中樣本a的檢測(cè)結(jié)果示意圖3；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例中樣本a的檢測(cè)結(jié)果示意圖4。

具體實(shí)施方式

下面將參考附圖并結(jié)合實(shí)施例，來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。

一種x-性連鎖魚(yú)鱗病相關(guān)sts基因拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒，包括：

10×pcr緩沖液，

4×gcsolution，

pcr引物混合液，

taqdna聚合酶，

探針引物混合液，

dna稀釋液，

10×taq連接緩沖液，

taq連接酶，

20mmedta，

2.5mmdntp，

25mmmgcl2，

ddh2o。

進(jìn)一步的，所述探針引物混合液中的通用引物的序列如seqidno.:1至seqidno.:50所示。

參見(jiàn)圖1所示，利用本發(fā)明試劑盒可準(zhǔn)確檢測(cè)sts基因各目標(biāo)位點(diǎn)的正確拷貝數(shù)，該方法是基于高通量連接探針擴(kuò)增技術(shù)（hlpa）對(duì)待測(cè)樣本的sts基因進(jìn)行定量，以獲取sts基因各目標(biāo)位點(diǎn)的正確拷貝數(shù)，其具體包括以下步驟：

1）針對(duì)sts基因，設(shè)計(jì)二十五對(duì)目標(biāo)位點(diǎn)的連接探針，每對(duì)所述連接探針上具有用于pcr擴(kuò)增的通用引物，每對(duì)所述連接探針上的通用引物的序列如表1所示；

表1連接探針的名稱(chēng)及其具有通用引物的序列信息

2）每對(duì)所述連接探針?lè)謩e于目標(biāo)位點(diǎn)雜交，并在連接酶或化學(xué)連接作用下進(jìn)行連接反應(yīng)；

3）連接產(chǎn)物用通用引物進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)變性毛細(xì)管電泳將不同長(zhǎng)度的擴(kuò)增片段進(jìn)行分離，得到每個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物的位置信息以及熒光強(qiáng)度，并計(jì)算目標(biāo)位點(diǎn)拷貝數(shù)值。

進(jìn)一步的，步驟3）中計(jì)算目標(biāo)位點(diǎn)拷貝數(shù)的方法，包括計(jì)算每個(gè)sts基因目標(biāo)位點(diǎn)的樣本條帶/參照基因條帶的熒光峰高，然后將目標(biāo)位點(diǎn)的該比值除以對(duì)應(yīng)的參照樣本的比值再乘以參照樣本該目標(biāo)區(qū)的拷貝數(shù)，即得目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)；其具體步驟如下：

1）將每個(gè)目標(biāo)位點(diǎn)的熒光峰高分別除以group內(nèi)n個(gè)參照探針，這樣每個(gè)目標(biāo)位點(diǎn)將有n組數(shù)據(jù)b；其中，n為正整數(shù)；

2）校正參數(shù)的選?。篴）計(jì)算n個(gè)正常參照樣本數(shù)據(jù)的變異系數(shù)（cv），如果變異系數(shù)小于10%，則計(jì)算該變異系數(shù)的平均數(shù)作為校正參數(shù)；b）如果變異系數(shù)大于10%，則計(jì)算任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)，如果計(jì)算出的該n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)中存在小于5%的組合，則取該變異系數(shù)最小的組合的平均數(shù)作為該組數(shù)據(jù)的校正參數(shù)，如果計(jì)算出的任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)中不存在小于5%的組合，則取n個(gè)數(shù)據(jù)的中位數(shù)作為該組數(shù)據(jù)的校正參數(shù)；將每個(gè)目標(biāo)位點(diǎn)的n組數(shù)據(jù)b，分別除以對(duì)應(yīng)的校正參數(shù)，獲得n組校正數(shù)據(jù)c；

3）對(duì)每個(gè)樣本計(jì)算該目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)（相對(duì)正常參照樣本的絕對(duì)拷貝數(shù)的比值）：a)計(jì)算n個(gè)校正數(shù)據(jù)c的變異系數(shù)，如果變異系數(shù)小于10%，則計(jì)算平均數(shù)作為該樣本的目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)；b)如果變異系數(shù)大于10%，則計(jì)算任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)，如果計(jì)算出的任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)中存在小于5%的組合，取該變異系數(shù)最小的組合的平均數(shù)作為該樣本的目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)，如果計(jì)算出的任意n-1個(gè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)中不存在小于5%的組合，則取n個(gè)數(shù)據(jù)的中位數(shù)作為該樣本的目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)，將該數(shù)據(jù)mark起來(lái)表述該數(shù)據(jù)變異較大。

下面利用本發(fā)明所述的sts基因拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒對(duì)一個(gè)女性樣本進(jìn)行sts基因的拷貝數(shù)檢測(cè)。

一、檢測(cè)樣本

一個(gè)待測(cè)女性樣本a，一個(gè)已知目標(biāo)位點(diǎn)拷貝數(shù)的男性參照樣本。

二、檢測(cè)方法

主要包括以下步驟：

1、將待測(cè)女性樣本a及男性參照樣本的dna用biophotomerterplus(eppendor)（核酸蛋白測(cè)定儀）進(jìn)行精確定量，然后稀釋至20ng/μl作為待測(cè)dna樣本待用。

2、利用本發(fā)明的所述sts基因拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒構(gòu)建連接反應(yīng)體系。

連接反應(yīng)體系（20μl）的配置如下：

dna稀釋液5.25μl；

探針引物混合液1μl；

4×gcsolution1.25μl；

10×taq連接緩沖液1μl；

樣本dna2.5μl；

taq連接酶0.4μl；

ddh2o7.6μl。

連接反應(yīng)條件設(shè)置如下：

98℃6分鐘；5個(gè)循環(huán)連接（96℃20秒，60℃3h），在94℃2分鐘，結(jié)束后半小時(shí)內(nèi)加入20μl20mmedta。

3、利用本發(fā)明的所述sts基因拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒構(gòu)建pcr反應(yīng)體系。

pcr反應(yīng)體系（20μl）的配置如下：

dntp（2.5mm）2.4μl；

mgcl2（25mm）0.8μl；

10×taq連接緩沖液2μl；

pcr引物混合液2.4μl；

連接產(chǎn)物2.5μl；

taqdna聚合酶0.16μl；

ddh2o11.24μl。

pcr反應(yīng)條件設(shè)置如下：

95℃2分鐘；5個(gè)循環(huán)的touchdown程序（94℃20秒，62℃-1℃/循環(huán)40秒和72℃1分鐘）；27個(gè)循環(huán)擴(kuò)增（94℃20秒，57℃40秒，72℃1分鐘）；68℃30分鐘，4℃保存。

4、取1μlpcr產(chǎn)物用ddh2o稀釋10倍，然后取1μl與0.1μlliz500+8.9μlhi-di混勻后，95℃5分鐘變性后，置于abi3130xl測(cè)序儀上進(jìn)行毛細(xì)管電泳。

5、測(cè)試結(jié)果使用genemapper4.1軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，讀取峰高等數(shù)據(jù)，參見(jiàn)圖2-5所示。

6、建立擴(kuò)增體系數(shù)據(jù)分析表，見(jiàn)表2所示。

表2檢測(cè)樣本及參照樣本的25個(gè)目標(biāo)位點(diǎn)和32個(gè)參照位點(diǎn)擴(kuò)增體系數(shù)據(jù)

7、計(jì)算樣本拷貝數(shù)。

計(jì)算每個(gè)sts基因目標(biāo)位點(diǎn)的樣本條帶/參照基因條帶的熒光峰高，然后將目標(biāo)位點(diǎn)的該比值除以對(duì)應(yīng)的參照樣本的比值再乘以參照樣本該目標(biāo)區(qū)的拷貝數(shù)，即得目標(biāo)位點(diǎn)的相對(duì)拷貝數(shù)。使用參照樣本對(duì)應(yīng)目標(biāo)位點(diǎn)的拷貝數(shù)為1對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步的校正，獲取目標(biāo)位點(diǎn)的精確拷貝數(shù)，得到結(jié)果如表3所示。

表3檢測(cè)樣本及參照樣本的25個(gè)目標(biāo)位點(diǎn)的精確拷貝數(shù)

三、結(jié)論

檢測(cè)的女性樣本a為sts基因雜合重復(fù)。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

<110>上海杰傲奉生醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司

天昊生物醫(yī)藥科技（蘇州）有限公司

<120>x-性連鎖魚(yú)鱗病相關(guān)sts基因拷貝數(shù)變異檢測(cè)試劑盒

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