本發(fā)明涉及生物
技術領域：
，涉及基因組序列分析領域，具體涉及一種鑒定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的方法。
背景技術：
：醫(yī)學遺傳學是目前醫(yī)學中最前沿的學科，也是新興學科。是生命科學主要研究的課題。醫(yī)學遺傳學主要利用dna技術來研究疾病與基因的關系。開展新型的診斷技術和治療方法?？梢詮姆肿铀綖榧膊〉脑缙谠\斷，預防出生缺陷、以及疑難雜癥的診斷和治療提供更高效的新型醫(yī)學服務。醫(yī)學遺傳學的發(fā)展離不開各種技術的快速進步，尤其是近年來高通量測序技術的發(fā)展。高通量測序技術的誕生可以說是基因組學研究領域一個具有里程碑意義的事件。該技術使得核酸測序的單堿基成本與第一代測序技術相比急劇下降，以人類基因組測序為例，上世紀末進行的人類基因組計劃花費30億美元解碼了人類生命密碼，而第二代測序使得人類基因組測序已進入萬(美)元基因組時代。如此低廉的單堿基測序成本使得我們可以實施更多物種的基因組計劃從而解密更多生物物種的基因組遺傳密碼。同時在已完成基因組序列測序的物種中，對該物種的其他品種進行大規(guī)模地全基因組重測序也成為可能。高通量測序技術的發(fā)展也響應了精準醫(yī)療時代的到來，精準醫(yī)療是以個人基因組信息為基礎，結合蛋白質組、代謝組等相關內環(huán)境信息，為人們量身設計出健康管理和疾病治療方案，以期達到治療效果最大化和副作用最小化的定制醫(yī)療方式?？梢源_定的是，精準醫(yī)學是在醫(yī)學臨床試驗的交匯融合應用，是醫(yī)學科技發(fā)展的前沿方向。在國家“精準醫(yī)學研究”重點專項中強調：要系統(tǒng)加強精準醫(yī)學研究布局，加快重大疾病防控技術突破，占據(jù)未來醫(yī)學及相關產業(yè)發(fā)展主導權，重點打造我國生命健康產業(yè)發(fā)展的新驅動力。染色體異常又分為結構異常和數(shù)目異常，染色體數(shù)目異常一般會造成明顯的表型，經b超等篩查可以有效檢出。而染色體結構異常的患者一般不會有表型，通常在生育下一代時因反復流產或不孕篩查而確診。染色體結構性異常主要分為：平衡易位、羅氏易位與染色體倒位。染色體平衡易位是指兩條染色體發(fā)生斷裂后相互交換，僅有位置的改變，沒有可見的染色體片段的增減，在人群中的發(fā)病率為0.1％-0.2％。輔助生殖胚胎植入前遺傳學診斷(pgd)是染色體結構性異常有效的治療手段。pgd診療是染色體結構性異?；颊吲R床治療較好策略，對于平衡易位的患者，無法檢測患者胚胎是否攜帶了遺傳自親代的平衡易位，這就導致了平衡易位攜帶者的患者經pgd助孕后子代中仍有平衡易位的攜帶者，成年后仍將面臨反復流產或者原發(fā)不孕等問題。我中心pgd隨訪數(shù)據(jù)顯示：pgd助孕后染色體平衡易位患者出生后代中約10％仍為平衡易位攜帶者。如何在胚胎植入前分辨患者胚胎是否攜帶平衡易位，阻斷平衡易位垂直傳遞，是pgd技術面臨的重大科學問題。fish技術應用與胚胎植入前遺傳學診斷有效排查了胚胎的不平衡性，提高了染色體結構異?；颊叩娜焉锫?，但fish操作過程比較復雜，檢測位點少，只能檢測幾條染色體的非整倍體；每種平衡易位都需要設計專門的探針來區(qū)分平衡易位攜帶者與正常；該方法檢測周期長，無法檢測微缺失、微重復，無法進行全基因染色體非整倍性篩查，無法開展單基因遺傳病胚胎植入前遺傳學診斷等限制在臨床的應用，每個平衡易位都需要設計特殊探針、操作方法繁瑣以及檢測范圍受限，多中心隨機對照研究發(fā)現(xiàn)fish技術應用于pgs并沒有有效提高患者的妊娠率。fish技術無法對全基因組染色體進行篩查，因此對胚胎進行全基因組篩查就十分必要。目前在胚胎植入前遺傳學診斷領域內cgh可以對胚胎進行非整倍體篩查，arraycgh,snparray,ngs能夠覆蓋整個基因組范圍、操作流程較為簡單，檢測通量高在臨床廣泛采用，但這些高通量篩查方法僅能檢測染色體的非平衡易位：即染色體片段的缺失或重復；snparray的方法較cgh位點多，覆蓋度好，可以較好的進行胚胎非整倍體的篩查，亦有少量報道采用snparray進行連鎖分析進行胚胎攜帶狀態(tài)診斷，但是無法確定易位位點，在沒有易位胚胎不平衡胚胎形成的情況下，無法進行胚胎攜帶狀態(tài)的診斷。因此cgh與snparray臨床應用于胚胎易位攜帶狀態(tài)篩查具有一定局限性。目前有報道對平衡易位攜帶者進行區(qū)分采用的方式為mate-pair文庫的策略來獲得斷裂點，此方法建庫難度相對更高，在獲得具體的斷裂點位置時還要經過大量的pcr后采用一代測序驗證，費用高、耗時長。亦有報道采用顯微切割的方式來進行平衡易位斷裂點的獲得，該方法操作需要顯微切割儀器，顯微切割的片段還要進行純化后才可進行后續(xù)擴增實驗，該法技術難度較大，過程較為繁瑣，成功率相對較低。除上述技術上的缺陷，以上檢測技術都不能精準的確定胚胎平衡易位攜帶/不攜帶的狀態(tài)。因此，本領域迫切需要開發(fā)一種能夠更有效綜合鑒定胚胎平衡易位攜帶/不攜帶的方法，提高判斷平衡易位的精準性。技術實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術的不足及實際的需求，本發(fā)明提供一種鑒定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的系統(tǒng)和方法，所述系統(tǒng)和方法采用的單精子擴增方式與靶向pcr的方式來尋找斷裂位點，操作相對簡單易行，可以有效降低pcr擴增偏倚，靈敏度高，還可以同時提供胚胎非整倍體篩查與平衡易位攜帶狀態(tài)的信息。為達此目的，本發(fā)明采用以下技術方案：第一方面，本發(fā)明提供一種鑒定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的系統(tǒng)，包括如下單元：(1)取樣單元：獲取胚胎待測樣本、父方精液和母方dna；(2)測序單元：從父方獲得的精液中挑選單精子，進行擴增，構建文庫后測序；(3)拷貝數(shù)分析單元：對測序結果進行染色體拷貝數(shù)(cnv)分析，初步確定染色體易位位置；(4)snp分析單元：對染色體易位位置及周圍位置進行snp分析，通過多個單精子的比較，獲得正常單精子的單倍型；(5)對母方的染色體相應的易位位置及周圍位置進行snp分析；(6)比對單元：對待測樣本的胚胎的染色體相應的易位位置及周圍位置進行snp分析，將分析的結果與正常的單精子單倍型以及母方的snp信息進行比對，確定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)。根據(jù)本發(fā)明，步驟(1)所述的待測樣本為胚胎的活檢細胞，所述活檢細胞為胚胎發(fā)育到卵裂球時期或囊胚時期取下的外胚層細胞，所述外胚層細胞可以是1個也可以是多個滋養(yǎng)外胚層細胞。根據(jù)本發(fā)明，所述母方dna為能夠提取dna的任何人源樣本都是可行的，在此不做特殊限定，本領域技術人員可以根據(jù)實驗需要進行提取，本發(fā)明的母方dna選取來自外周血、淋巴液或口腔黏膜細胞中的任意一種或至少兩種的組合。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)所述挑選單精子的數(shù)量為15-30個，例如可以是15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個或30個，優(yōu)選為18-25個，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)所述的擴增為單細胞擴增，通過單細胞擴增對活檢細胞中的微量核酸進行擴增，以獲得更多的核酸用于后續(xù)分析。根據(jù)本發(fā)明，所述單細胞擴增為能夠進行單細胞擴增的方法都是可行的，在此不做特性限定，本領域技術人員可以根據(jù)實驗需要進行選擇，本發(fā)明采用擴增前引物延伸pcr(primerextensionpreamplificationpcr,pep-pcr)、退變寡核苷酸引物pcr(degenerateoligonucleotideprimer-pcr,dop-pcr)、多重置換擴增技術(multipledisplacementamplification,mda)或多次退火環(huán)狀循環(huán)擴增技術(multipleannealingandloopingbasedamplificationcycles,malbac)中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為多次退火環(huán)狀循環(huán)擴增技術。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)所述的測序將擴增后的樣本進行文庫構建后，采用高通量測序平臺進行測序，所述高通量測序平臺為第二代測序平臺，本領域的第二代測序平臺都是可行的，在此不做特殊限定，本領域技術人員可以根據(jù)需要進行選擇，本發(fā)明可采用illumina公司的ga、gaii、gaiix、hiseq1000/2000/2500/3000/4000、xten、xfive、nextseq500/550、miseq、miseqdx、miseqfgx、miniseq、novaseq5000/6000；appliedbiosystems的solid，roche的454flx，thermofisherscientific(lifetechnologies)的iontorrent、ionpgm、ionprotoni/ii，華大基因的bgiseq1000、bgiseq500、bgiseq100、bgiseq50，博奧生物集團的bioelectronseq4000，中山大學達安基因股份有限公司的da8600，貝瑞和康的nextseqcn500，紫鑫藥業(yè)旗下子公司中科紫鑫的bigis，華因康基因hyk-pstar-iia中的任意一種，本發(fā)明優(yōu)選采用illumina公司的hiseq2500高通量測序平臺。優(yōu)選地，所述測序類型為單端測序和/或雙端測序，優(yōu)選為單端測序。根據(jù)本發(fā)明，所述測序的長度為不小于30bp，例如可以是是30bp、40bp、50bp、80bp、100bp、150bp、300bp、500bp，優(yōu)選為50bp，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。根據(jù)本發(fā)明，所述測序的深度為不小于基因組的0.1倍，例如可以是是0.1倍、0.5倍、1倍、2倍、5倍、10倍、30倍、50倍、100倍，優(yōu)選為基因組的0.1倍，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。優(yōu)選地，本發(fā)明中測序采用malbac單細胞擴增方法，illumina公司的hiseq2500高通量測序平臺，測序類型為單端測序，測序長度50bp，測序深度為基因組的0.1倍。根據(jù)本發(fā)明，步驟(4)所述的周圍位置為染色體易位位置1-5m內的位點，例如可以是1m、2m、3m、4m或5m，優(yōu)選為染色體易位位置1-3m內的位點，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。優(yōu)選地，所述周圍位置的snp數(shù)量一般檢測30個以上，每個胚胎上的可用位點約占1/3，10個以上可用位點就可以確定單倍型連鎖關系，本發(fā)明中所述snp的數(shù)量為10-500，例如可以是10、20、30、40、50、60、80、100、120、130、150、200、250、300、350、400、450、500，優(yōu)選為30-100，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。根據(jù)本發(fā)明，所述snp分析的方法為本領域公知的方法，在此不做特殊限定，本領域技術人員可以根據(jù)需要進行選擇，本發(fā)明采用設計探針芯片捕獲測序、設計引物對擴增子進行一代測序或設計引物對擴增子進行二代測序中的任意一種或至少兩種的組合。根據(jù)本發(fā)明，步驟(4)所述獲得正常染色體的單倍型的具體步驟為：將具有染色體重復或缺失的單精子進行比較，發(fā)生易位的單精子的snp減去易位缺失的單精子的snp，確定正常單精子的單倍型。根據(jù)本發(fā)明，步驟(5)母方的染色體相應的易位位置及周圍位置的snp為純合子。根據(jù)本發(fā)明，步驟(6)所述確定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的具體步驟如下：將待測樣本的胚胎的snp減去母方的snp后獲得的單倍型snp與正常單精子單倍型進行比較，若一致，為正常胚胎，若不一致，為攜帶者胚胎。第二方面，本發(fā)明提供一種用于非診斷目的的胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的檢測方法，采用如第一方面所述的系統(tǒng)，包括如下步驟：(1)獲取胚胎待測樣本、父方精液和母方dna；(2)從父方獲得的精液中挑選單精子，進行擴增，構建文庫后測序；(3)對測序結果進行染色體拷貝數(shù)(cnv)分析，初步確定染色體易位位置；(4)對染色體易位位置及周圍位置進行snp分析，通過多個單精子的比較，獲得正常單精子的單倍型；(5)對母方的染色體相應的易位位置及周圍位置進行snp分析；(6)對待測樣本的胚胎的染色體相應的易位位置及周圍位置進行snp分析，將分析的結果與正常的單精子單倍型以及母方的snp信息進行比對，確定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)。根據(jù)本發(fā)明，步驟(1)所述的待測樣本為胚胎的活檢細胞，所述活檢細胞為胚胎發(fā)育到卵裂球時期或囊胚時期取下的外胚層細胞，所述外胚層細胞可以是1個也可以是多個滋養(yǎng)外胚層細胞。根據(jù)本發(fā)明，所述母方dna為能夠提取dna的任何人源樣本都是可行的，在此不做特殊限定，本領域技術人員可以根據(jù)實驗需要進行提取，本發(fā)明的母方dna選取來自外周血、淋巴液或口腔黏膜細胞中的任意一種或至少兩種的組合。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)所述挑選單精子的數(shù)量為15-30個，例如可以是15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個或30個，優(yōu)選為18-25個，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)所述的擴增為單細胞擴增，通過單細胞擴增對活檢細胞中的微量核酸進行擴增，以獲得更多的核酸用于后續(xù)分析。根據(jù)本發(fā)明，所述單細胞擴增為能夠進行單細胞擴增的方法都是可行的，在此不做特性限定，本領域技術人員可以根據(jù)實驗需要進行選擇，本發(fā)明采用擴增前引物延伸pcr(primerextensionpreamplificationpcr,pep-pcr)、退變寡核苷酸引物pcr(degenerateoligonucleotideprimer-pcr,dop-pcr)、多重置換擴增技術(multipledisplacementamplification,mda)或多次退火環(huán)狀循環(huán)擴增技術(multipleannealingandloopingbasedamplificationcycles,malbac)中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為多次退火環(huán)狀循環(huán)擴增技術。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)所述的測序將擴增后的樣本進行文庫構建后，采用高通量測序平臺進行測序，所述高通量測序平臺為第二代測序平臺，本領域的第二代測序平臺都是可行的，在此不做特殊限定，本領域技術人員可以根據(jù)需要進行選擇，本發(fā)明可采用illumina公司的ga、gaii、gaiix、hiseq1000/2000/2500/3000/4000、xten、xfive、nextseq500/550、miseq、miseqdx、miseqfgx、miniseq、novaseq5000/6000；appliedbiosystems的solid，roche的454flx，thermofisherscientific(lifetechnologies)的iontorrent、ionpgm、ionprotoni/ii，華大基因的bgiseq1000、bgiseq500、bgiseq100、bgiseq50，博奧生物集團的bioelectronseq4000，中山大學達安基因股份有限公司的da8600，貝瑞和康的nextseqcn500，紫鑫藥業(yè)旗下子公司中科紫鑫的bigis，華因康基因hyk-pstar-iia中的任意一種，本發(fā)明優(yōu)選采用illumina公司的hiseq2500高通量測序平臺。優(yōu)選地，所述測序類型為單端測序和/或雙端測序，優(yōu)選為單端測序。根據(jù)本發(fā)明，所述測序的長度為不小于30bp，例如可以是是30bp、40bp、50bp、80bp、100bp、150bp、300bp、500bp，優(yōu)選為50bp，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。根據(jù)本發(fā)明，所述測序的深度為不小于基因組的0.1倍，例如可以是是0.1倍、0.5倍、1倍、2倍、5倍、10倍、30倍、50倍、100倍，優(yōu)選為基因組的0.1倍，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。優(yōu)選地，本發(fā)明中測序采用malbac單細胞擴增方法，illumina公司的hiseq2500高通量測序平臺，測序類型為單端測序，測序長度50bp，測序深度為基因組的0.1倍。根據(jù)本發(fā)明，步驟(4)所述的周圍位置為染色體易位位置1-5m內的位點，例如可以是1m、2m、3m、4m或5m，優(yōu)選為染色體易位位置1-3m內的位點，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。優(yōu)選地，所述周圍位置的snp數(shù)量一般檢測30個以上，每個胚胎上的可用位點約占1/3,10個以上可用位點就可以確定單倍型連鎖關系，本發(fā)明中所述snp的數(shù)量為10-500，例如可以是10、20、30、40、50、60、80、100、120、130、150、200、250、300、350、400、450、500，優(yōu)選為30-100，以及上述數(shù)值之間的具體點值，限于篇幅及出于簡明的考慮，本發(fā)明不再窮盡列舉所述范圍包括的具體點值。根據(jù)本發(fā)明，所述snp分析的方法為本領域公知的方法，在此不做特殊限定，本領域技術人員可以根據(jù)需要進行選擇，本發(fā)明采用設計探針芯片捕獲測序、設計引物對擴增子進行一代測序或設計引物對擴增子進行二代測序中的任意一種或至少兩種的組合。根據(jù)本發(fā)明，步驟(4)所述獲得正常染色體的單倍型的具體步驟為：將具有染色體重復或缺失的單精子進行比較，發(fā)生易位的單精子的snp減去易位缺失的單精子的snp，確定正常單精子的單倍型。根據(jù)本發(fā)明，步驟(5)母方的染色體相應的易位位置及周圍位置的snp為純合子。根據(jù)本發(fā)明，步驟(6)所述確定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的具體步驟如下：將待測樣本的胚胎的snp減去母方的snp后獲得的單倍型snp與正常單精子單倍型進行比較，若一致，為正常胚胎，若不一致，為攜帶者胚胎。作為優(yōu)選技術方案，所述胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的檢測方法包括如下步驟：(1)獲取胚胎的活檢細胞、父方精液和母方dna；(2)從父方獲得的精液中挑選15-30個單精子，進行多次退火環(huán)狀循環(huán)擴增，構建文庫后采用高通量測序平臺進行測序；(3)對測序結果進行染色體拷貝數(shù)分析，初步確定染色體易位位置：通過染色體拷貝數(shù)分析，染色體重復或缺失的位置，初步判斷為染色體易位位置；(4)對染色體易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析，通過多個單精子的比較，獲得正常單精子的單倍型：將具有染色體重復或缺失的單精子進行比較，接受易位的2倍體單精子的snp減去易位缺失的單精子的snp，確定正常單精子的單倍型；(5)對母方的染色體相應的易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析；(6)對待測樣本的胚胎的染色體相應的易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析，將分析的結果與正常的單精子單倍型以及母方的snp信息進行比對，確定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)：將待測樣本的胚胎的snp減去母方的snp后獲得的單倍型snp與正常單精子單倍型進行比較，若一致，為正常胚胎，若不一致，為攜帶者胚胎。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果：(1)本發(fā)明系統(tǒng)和方法采用的單精子擴增方式與靶向pcr的方式來尋找斷裂位點，能夠將斷裂點位置精確到200kb-500kb，可以有效降低pcr擴增偏倚，靈敏度高；(2)本發(fā)明系統(tǒng)和方法可同時做胚胎染色體非整倍體的篩選以及平衡易位斷裂位點附近2m區(qū)域內snp位點的挖掘，可以同時提供胚胎非整倍體篩查與平衡易位攜帶狀態(tài)的信息，同時確定易位位置和胚胎非整倍性；(3)本發(fā)明系統(tǒng)和方法操作相對簡單易行，成本低，易于推廣應用。附圖說明圖1是本發(fā)明實施例1中的樣本6_2_mal_cnv的cnv分析；圖2是本發(fā)明實施例1中的樣本12_2_mal_cnv的cnv分析；圖3是本發(fā)明實施例1中的樣本13_2_mal_cnv的cnv分析；圖4是本發(fā)明實施例1中的樣本17_2_mal_cnv的cnv分析；圖5是本發(fā)明實施例1中的胚胎的cnv分析。具體實施方式為更進一步闡述本發(fā)明所采取的技術手段及其效果，以下結合附圖并通過具體實施方式來進一步說明本發(fā)明的技術方案，但本發(fā)明并非局限在實施例范圍內。實施例1鑒定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的系統(tǒng)所述鑒定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的系統(tǒng)，包括如下單元：(1)取樣單元：獲取胚胎的活檢細胞、父方精液和母方dna；(2)測序單元：從父方獲得的精液中挑選15-30個單精子，進行多次退火環(huán)狀循環(huán)擴增，構建文庫后采用高通量測序平臺進行測序；(3)拷貝數(shù)分析單元：對測序結果進行染色體拷貝數(shù)分析，初步確定染色體易位位置：通過染色體拷貝數(shù)分析，染色體重復或缺失的位置，初步判斷為染色體易位位置；(4)snp分析單元：對染色體易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析，通過多個單精子的比較，獲得正常單精子的單倍型：將具有染色體重復或缺失的單精子進行比較，接受易位的2倍體單精子的snp減去易位缺失的單精子的snp，確定正常單精子的單倍型；(5)對母方的染色體相應的易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析；(6)比對單元：對待測樣本的胚胎的染色體相應的易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析，將分析的結果與正常的單精子單倍型以及母方的snp信息進行比對，確定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)：將待測樣本的胚胎的snp減去母方的snp后獲得的單倍型snp與正常單精子單倍型進行比較，若一致，為正常胚胎，若不一致，為攜帶者胚胎。實施例2胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的檢測所述鑒定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)的方法包括如下步驟：(1)獲取胚胎的活檢細胞、父方精液和母方dna，父方的染色體為：46,xy,t(9,21)(q24,q22.1)；(2)從父方獲得的精液中挑選15-30個單精子，進行多次退火環(huán)狀循環(huán)擴增，構建文庫后采用高通量測序平臺進行測序，其中樣本6、、12、13和17為四個單精子樣本，其結果如圖1-4和表1所示：表1樣本名稱樣本條形碼檢測結果66_2_mal_cnv22,y,+9(p24.1→qter,～119m,×0),-21(p11.2→q21.1,～14m,×2)1212_2_mal_cnv22,y,+9p(pter→p24.1,～9m,×2),-21q(q21.1→p24.1,～28m,×0)1313_2_mal_cnv22,y,+9p(pter→p24.1,～9m,×2),-21q(q21.1→p24.1,～28m,×0)1717_2_mal_cnv22,y,+9(p24.1→qter,～119m,×0),-21(p11.2→q21.1,～14m,×2)(3)對測序結果進行染色體拷貝數(shù)分析，初步確定染色體易位位置：通過染色體拷貝數(shù)分析，染色體重復或缺失的位置，初步判斷為染色體易位位置為chr21，精確度在500kb左右；(4)對染色體易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析，結果如表2所示，通過多個單精子的比較，獲得正常單精子的單倍型：將具有染色體重復或缺失的單精子進行比較，接受易位的2倍體單精子的snp減去易位缺失的單精子的snp，確定正常單精子的單倍型；表2(5)對母方的染色體相應的易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析；(6)對待測樣本的胚胎的染色體相應的易位位置及周圍位置1-5m內進行snp分析，結果如表3所示，將分析的結果與正常的單精子單倍型以及母方的snp信息進行比對，確定胚胎平衡易位攜帶狀態(tài)：將待測樣本的胚胎的snp減去母方的snp后獲得的單倍型snp與正常單精子單倍型進行比較，其cnv的結果如圖5所示，其減去母本的snp后與正常chr21一致，為正常胚胎。表3綜上所述，本發(fā)明方法可同時做胚胎染色體非整倍體的篩選以及平衡易位斷裂位點附近2m區(qū)域內snp位點的挖掘，可以同時提供胚胎非整倍體篩查與平衡易位攜帶狀態(tài)診斷的信息，同時確定易位位置和胚胎非整倍性。申請人聲明，本發(fā)明通過上述實施例來說明本發(fā)明的詳細方法，但本發(fā)明并不局限于上述詳細方法，即不意味著本發(fā)明必須依賴上述詳細方法才能實施。所屬
技術領域：
的技術人員應該明了，對本發(fā)明的任何改進，對本發(fā)明產品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護范圍和公開范圍之內。當前第1頁12