本發(fā)明屬于醫(yī)藥化學(xué)中的抗病毒研究領(lǐng)域，涉及一類新型的核苷氨基磷酸酯化合物或立體異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑合物或結(jié)晶，及其在抗病毒感染方面，特別是作為治療丙型肝炎的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

丙型肝炎病毒(hcv)每年有3-4百萬(wàn)新增的患者，世界衛(wèi)生組織估計(jì)在全世界的感染者已超過(guò)2億，在中國(guó)超過(guò)1000萬(wàn)病人，hcv屬于黃病毒科肝病毒屬病毒。長(zhǎng)期丙型肝炎病毒感染輕至炎癥，重至肝硬化、肝癌。且丙肝肝硬化失代償期時(shí)，可以出現(xiàn)各種并發(fā)癥，如腹水腹腔感染，上消化道出血，肝性腦病，肝腎綜合征，肝衰竭等表現(xiàn)。最初治療hcv感染的方法是干擾素以及干擾素和利巴韋林聯(lián)合療法，僅50％的治療者對(duì)該方法有反應(yīng)，且干擾素具有明顯的副作用，例如流行性感冒樣癥狀、體重減低以及疲乏無(wú)力，而干擾素和利巴韋林聯(lián)合療法則產(chǎn)生相當(dāng)大的副作用，包括溶血、貧血癥和疲乏等。

近幾年美國(guó)fda批準(zhǔn)了多個(gè)hcv藥物，包括蛋白酶抑制劑、核苷類和非核苷類聚合酶抑制劑以及ns5a抑制劑等。fda批準(zhǔn)的蛋白酶抑制劑類藥物有三個(gè)：vx-950(telaprevir),sch-503034(boceprevir)和tmc435(simeprevir)，蛋白酶抑制劑的缺點(diǎn)是易產(chǎn)生突變、毒性大、生物利用度差，對(duì)個(gè)別的基因類型有效。telaprevir作為第一代的蛋白酶抑制劑已經(jīng)退出市場(chǎng)。高活性和廣譜的第二代和第三代蛋白酶抑制劑主要用作和其他丙肝藥物的聯(lián)合用藥的組分之一。

丙肝的聚合酶抑制劑通常分為核苷類和非核苷類兩種。目前，臨床上僅有索菲布韋一個(gè)核苷類丙肝藥物被fda批準(zhǔn)上市，sofosbuvir與其它抗hcv在研藥物聯(lián)用的臨床試驗(yàn)也表現(xiàn)出積極效果。但是，由于sofosbuvir在體內(nèi)有近90％代謝為沒(méi)有活性的代謝產(chǎn)物,需要用較大的給藥劑量，丙肝患者需要接受長(zhǎng)期治療，隨之帶來(lái)的病毒耐藥以及長(zhǎng)期安全性問(wèn)題不容忽視，因此，開(kāi)發(fā)新的生物利用度高及更長(zhǎng)的半衰期，肝臟選擇性好，藥效高的hcv感染治療藥物仍是臨床的迫切需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種全新的核苷氨基磷酸酯化合物及其醫(yī)藥組合物和用途。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：

一種核苷氨基磷酸酯化合物，其特征是：核苷以磷氧鍵連接磷酸，結(jié)構(gòu)如通式a、b和c所描述的核苷氨基磷酸酯化合物、其立體異構(gòu)體、其藥學(xué)可接受的鹽、水合物、溶劑化物或結(jié)晶；

其中，

r1為c1-6烷基、c3-6環(huán)烷基、芐基、氘代的c1-6烷基、氘代的c3-6環(huán)烷基或氘代的芐基：例如，r1為甲基、乙基、異丙基或異丁基，或者為氘代的甲基、乙基、異丙基或異丁基。優(yōu)選地，r1為異丙基或氘代異丙基(如(cd3)2ch-、(cd3)2cd-或者(ch3)2cd-)；

r2為任意取代的苯基、聯(lián)苯基、雜芳基或萘基，或者氘代的任意取代苯基、聯(lián)苯基、雜芳基或萘基，其取代基可以是鹵素(氟、氯、溴、碘)、疊氮、氰基、炔基、c1-4烷基、c3-4環(huán)烷基或c1-4烷氧基。優(yōu)選的，r2為苯基、聯(lián)苯基、4-環(huán)丙基苯基或氘代苯基。

r3選自各種天然或非天然氨基酸?；?、羧酸?；⒍嚯孽；蛘邭洹＠?，r3為氫、乙?；?、丙?；?、丁?；惗□；?、丙氨?；⒏拾滨；⒏滨；①嚢滨；?、苯丙氨酰基、亮氨?；惲涟滨；?、纈氨酰基、色氨?；?、酪胺?；?、天冬氨酰基、天冬酰胺?；⒐劝滨；?、谷氨酰胺?；?、甲硫氨?；⑻K氨?；⒔M胺?；⒔z氨?；?、半胱氨酰基、精氨?；?等d-或l-型氨基酸)或β-丙氨酰基。

r4、r5、r6、r7、r8和r9獨(dú)立選自h或者氘。

采用實(shí)施例中描述的合成方法，以下的化合物均可以方便地得到:

述的核苷氨基磷酸酯化合物，與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合制備成藥物制劑以及納米制劑，以適合于經(jīng)口或胃腸外給藥；給藥方法包括，但不限于皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)和經(jīng)口途徑。

一種包含所述的核苷氨基磷酸酯化合物的醫(yī)藥組合物。

所述醫(yī)藥組合物，還含有獨(dú)立地選自以下藥物的其他治療劑：利巴韋林(ribavirin)、干擾素、丙肝ns3蛋白酶抑制劑、hcv逆轉(zhuǎn)錄酶ns5b非核苷抑制劑、hcv逆轉(zhuǎn)錄酶ns5b核苷抑制劑、ns5a抑制劑以及ns5a抑制劑的增效劑、進(jìn)入抑制劑、環(huán)孢素免疫抑制劑、ns4a拮抗劑、ns4b抑制劑、親環(huán)素抑制劑。

一種所述的核苷氨基磷酸酯化合物及其藥用組合物在制備抗黃病毒科病毒的藥物中的應(yīng)用，其特征是：所述黃病毒科病毒是丙型肝炎病毒。

本發(fā)明提供了上述核苷氨基磷酸酯化合物的制備方法如下式所示：

在堿性條件下，苯酚或取代苯酚(1)與三氯氧磷后，加入氨基酸酯鹽酸鹽(2)反應(yīng)，再加入五氟苯酚(3)反應(yīng)得到化合物(4)和(5)；

在低溫條件下，化合物(4)或(5)與化合物(6)反應(yīng)，分別得到化合物(7)或(8),然后，在縮合劑作用下分別與boc保護(hù)的氨基酸反應(yīng)，然后在酸性條件下脫去保護(hù)基boc，或直接與羧酸反應(yīng)得到(9)或(10)

其中，化合物中的r2、r3如式a、b和c化合物中所定義，縮合劑可以為常用的n，n'-二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)、羰基二咪唑(cdi)、n，n'-二異丙基碳二亞胺(dic)、n-(3-二甲氨基丙基)-n'-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(edchcl)、o-(7-氮苯并三氮唑)-n，n，n'，n'-四甲基脲六氟磷酸酯(hatu)、苯并三氮唑-n，n，n'，n-四甲基脲六氟磷酸酯(hbtu)，boc基團(tuán)為保護(hù)氨基的叔丁基氧羰基保護(hù)基。

本發(fā)明描述的核苷氨基磷酸酯化合物，其立體異構(gòu)體、鹽、水合物、溶劑合物或結(jié)晶與藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合制備成藥物制劑，以適合于經(jīng)口或胃腸外給藥。給藥方法包括，但不限于皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)和經(jīng)口途徑。所述制劑可以通過(guò)任何途徑施用，例如通過(guò)輸注或推注，通過(guò)經(jīng)上皮或皮膚粘膜(例如口腔粘膜或直腸等)吸收的途徑施用。給藥可以是全身的或局部的。經(jīng)口施用制劑的實(shí)例包括固體或液體劑型，具體而言，包括片劑、丸劑、粒劑、粉劑、膠囊劑、糖漿、乳劑、混懸劑等。所述制劑可通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法制備，且包含藥物制劑領(lǐng)域常規(guī)使用的載體、稀釋劑或賦形劑。

本發(fā)明提供的核苷氨基磷酸酯化合物單獨(dú)，或者與其他hcv治療劑如ns5a抑制劑或者蛋白酶抑制劑共同構(gòu)成藥物組合物，用于治療黃病毒科病毒感染的病患。包括向所述患者施用通式a、b和c的化合物、其立體異構(gòu)體、鹽、水合物、溶劑合物或結(jié)晶或者包含通式a、b和c的化合物、其立體異構(gòu)體、鹽、水合物、溶劑合物或結(jié)晶的藥物組合物，以有效治療丙型肝炎。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于治療和/或預(yù)防rna病毒例如黃病毒科病毒感染的方法，包括向需要此治療的病患給予本發(fā)明的化合物、其立體異構(gòu)體、鹽、水合物、溶劑合物或結(jié)晶或其藥物組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抑制rna病毒例如黃病毒科病毒感染的方法，包括使所述病毒與治療有效量的本發(fā)明的化合物、其立體異構(gòu)體、鹽、水合物、溶劑合物或結(jié)晶或其藥物組合物接觸。

"黃病毒科病毒"是指黃病毒科的任何病毒，包括感染人和非人動(dòng)物的那些病毒，例如黃病毒、鼠疫病毒和丙型肝炎病毒，登革熱病毒。本發(fā)明的化合物和組合物可特別用于治療或預(yù)防性治療hcv和登革熱病毒。

本發(fā)明提供的核苷氨基磷酸酯化合物、其立體異構(gòu)體、鹽、水合物、溶劑合物、結(jié)晶或組合物在預(yù)防或治療病毒性感染的應(yīng)用，尤其是在預(yù)防或治療黃病毒感染疾病的應(yīng)用，以及在制備預(yù)防和/或治療病毒性感染疾病的藥物中的應(yīng)用，特別是在制備預(yù)防和/或治療hcv病毒感染，如hcv病毒性肝炎疾病的藥物中的應(yīng)用。該類疾病的實(shí)例有急性丙型肝炎、慢性丙型肝炎以及丙型肝炎和乙型肝炎或丁型肝炎的混合感染。

術(shù)語(yǔ)定義

除非另外定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同的含義。

術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產(chǎn)生的異構(gòu)體。包括順?lè)串悩?gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體和構(gòu)象異構(gòu)體。所有立體異構(gòu)體均屬于本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的化合物的單獨(dú)立體異構(gòu)體可基本上不含其它異構(gòu)體或可以混合成例如外消旋體，或者與所有其它的立體異構(gòu)體混合。

術(shù)語(yǔ)“鹽”是指本發(fā)明所述的化合物與酸形成的藥學(xué)上可接受的鹽，所述的酸可選自：磷酸、硫酸、鹽酸、氫溴酸、檸檬酸、馬來(lái)酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富馬酸、醋酸、乳酸、硝酸、磺酸、對(duì)甲苯磺酸、蘋果酸、甲烷磺酸或其類似物。

術(shù)語(yǔ)“溶劑化物”是指通過(guò)與溶劑分子配位形成固態(tài)或液態(tài)的配合物的本發(fā)明化合物的形式。水合物是溶劑合物的特殊形式，其中與水發(fā)生配位。在本發(fā)明范圍內(nèi)，溶劑化物優(yōu)選是水合物。

術(shù)語(yǔ)“結(jié)晶”是指本發(fā)明所述的化合物形成的各種固體形態(tài)，包括晶型、無(wú)定形。

術(shù)語(yǔ)“烷基”是指直鏈、支鏈或環(huán)狀的飽和烴基，優(yōu)選6個(gè)碳原子以下的烴基。烷基的實(shí)施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、環(huán)丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、環(huán)丁基、正戊基、異戊基、新戊基、環(huán)己基、正己基、異己基、2,2,-甲基丁基和2,3-二甲基丁基。術(shù)語(yǔ)“c1-6烷基”是指含有1-6個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的飽和烴基。術(shù)語(yǔ)“c1-4烷基”是指含有1-4個(gè)碳原子的直鏈、支鏈或環(huán)狀的飽和烴基。

術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴、碘。

術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”是指至少含有一個(gè)雜原子的環(huán)狀基團(tuán)，其中雜原子為n、o或s，包括單雜環(huán)基和稠雜環(huán)基。其中單雜環(huán)基包括但不限于呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、咪唑、1,2,3-三氮唑、1,2,4-三氮唑、1,2,3-噻二唑，噁唑、1,2,4-噁二唑、1,3,4-噁二唑、吡啶、嘧啶、噠嗪、吡嗪、四氫呋喃、四氫吡咯、哌啶、哌嗪、嗎啉、異噁唑啉等。稠雜環(huán)基包括但不限于喹啉、異喹啉、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、嘌呤、吖啶、咔唑、芴、色烯酮、芴酮、喹喔啉、3,4-二氫萘酮、二苯并呋喃、氫化二苯并呋喃、苯并噁唑基等。

氘是氫的同位素，原子質(zhì)量是后者的2倍，與碳的結(jié)合更強(qiáng)。氘化“和”氘“表示氫在指定位置被替換為氘。一個(gè)“氘化的取代基”是取代基，其中至少一個(gè)氫被以指定的百分比富集取代氘。

具體實(shí)施方式

以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)闡述，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。本發(fā)明實(shí)施例中使用的試劑和原料均為商購(gòu)所得。

實(shí)施例1

((r)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸異丙酯(i-01b)

步驟1.[(r)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷?；鵠—d—丙氨酸異丙酯(5)和[(s)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基]—d—丙氨酸異丙酯(6)

在反應(yīng)瓶中加入二氯磷酸苯酯2(11.4克(95％)，51.4毫摩爾)，及d-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽1(8.64克，51.4毫摩爾)，冷卻到-70℃，在1.5小時(shí)內(nèi)滴加三乙胺(14.4毫升，103.4毫摩爾)的二氯甲烷(44毫升)溶液,加畢后，升至室溫，攪拌過(guò)夜后將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，在40分鐘內(nèi)將五氟苯酚4(9.46克，51.4毫摩爾)和三乙胺(7.2毫升，51.4毫摩爾)的二氯甲烷(60ml)溶液滴加到上述溶液中，在0℃攪拌1小時(shí)，升至室溫，攪拌過(guò)夜后，加入150毫升二氯甲烷及120毫升水，分出有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥后減壓濃縮，殘余物用硅膠柱分離(0-30％乙酸乙酯/己烷)得13.9克白色固體，固體用10％用叔丁基甲基醚/己烷重結(jié)晶，得白色固體5(6.7克)，母液用硅膠柱分離(50％乙酸乙酯/己烷)得6(4.4克)和5(0.9克)，5和6純度均大于99％。

5：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.39–7.35(m,2h),7.34–7.21(m,3h),5.18–4.97(m,1h),4.28–4.09(m,1h),3.97–3.92(m,1h),1.46(d,j＝7.0hz,3h),1.26(d,j＝5.9hz,3h),1.25(d,j＝5.9hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-1.85.

6：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.37–7.33(m,2h),7.32–7.19(m,3h),5.20–4.95(m,1h),4.18–4.01(m,1h),3.96–3.90(m,1h),1.48(d,j＝7.0hz,3h),1.25(d,j＝5.9hz,3h),1.24(d,j＝5.9hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-1.55.

步驟2.i-01b的合成

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑5(725mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物i-01b(296mg),收率56％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.74(s,1h),7.36–7.31(m,3h),7.25-7.22(m,2h),7.20-7.15(m,1h),6.18(d,j＝19.0hz,1h),5.58(d,j＝8.1hz,1h),5.05–4.95(m,1h),4.51-4.46(m,2h),4.40–4.34(m,1h),4.27(brs,1h),4.13–4.08(m,1h),3.93–3.78(m,2h),1.37-1.28(m,6h),1.23(d,j＝6.3hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.65；lcms-esi⁺(m/z):530.2(m+h)⁺.

實(shí)施例2

((s)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸異丙酯(i-01c)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑6(725mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物i-01c(308mg),收率58％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.76(s,1h),7.38–7.30(m,3h),7.26-7.22(m,2h),7.20-7.16(m,1h),6.19(d,j＝19.0hz,1h),5.57(d,j＝8.1hz,1h),5.05–4.95(m,1h),4.50-4.46(m,2h),4.40–4.33(m,1h),4.28(brs,1h),4.13–4.08(m,1h),3.92–3.78(m,2h),1.37-1.28(m,6h),1.22(d,j＝6.3hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.60；lcms-esi⁺(m/z):530.2(m+h)⁺.

實(shí)施例3

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((r)-(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-丙氨酸酯(i-02b)

步驟1.i-02’b的合成

在反應(yīng)管中將boc-ala-oh,8(43mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-01b(79.5mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24ul,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體i-02’b,65.1mg，收率62％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.66(d,j＝8.2hz,1h),7.40–7.36(m,2h),7.29-7.27(m,2h),7.22-7.18(m,1h),6.15(d,j＝19.2hz,1h),5.71(d,j＝8.1hz,1h),5.33–5.41(m,1h),4.98–4.93(m,1h),4.53-4.50(m,1h),4.35–4.27(m,2h),4.22-4.17(m,1h),3.93–3.88(m,1h),1.44(s,9h),1.40-1.31(m,9h),1.21(d,j＝6.3hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.60；lcms-esi⁺(m/z):701.3[m+1]⁺。

步驟2.i-02b的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體i-02’b(65mg,93umol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物i-02b,49.1mg，收率88％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.52(d,j＝8.1hz,1h),7.40–7.37(m,2h),7.29-7.17(m,3h),6.11(d,j＝19.2hz,1h),5.63(d,j＝8.1hz,1h),5.43–5.39(m,1h),4.98–4.94(m,1h),4.53-4.50(m,2h),4.35–4.26(m,2h),3.93–3.88(m,1h),1.61(d,j＝4.3hz,3h),1.43-1.21(m,12h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.37；lcms-esi⁺(m/z):601.4[m+1]⁺。

實(shí)施例4

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((r)-(((s)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-丙氨酸酯(i-02c)

步驟1.i-02’c的合成

在反應(yīng)管中將boc-ala-oh,8(43mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-01c(79.5mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24ul,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體i-02’c，66.9mg，收率63.7％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.65(d,j＝8.2hz,1h),7.42–7.33(m,2h),7.28-7.25(m,2h),7.21-7.18(m,1h),6.14(d,j＝19.2hz,1h),5.70(d,j＝8.1hz,1h),5.43–5.33(m,1h),4.98–4.92(m,1h),4.54-4.50(m,1h),4.36–4.26(m,2h),4.23-4.17(m,1h),3.94–3.87(m,1h),1.44(s,9h),1.40-1.30(m,9h),1.21(d,j＝6.3hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.55；lcms-esi⁺(m/z):701.3[m+1]⁺。

步驟2.i-02c的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體i-02’c(65mg,93umol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物i-02c，48mg，收率86％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.53(d,j＝8.1hz,1h),7.43–7.37(m,2h),7.29-7.16(m,3h),6.13(d,j＝19.2hz,1h),5.60(d,j＝8.1hz,1h),5.45–5.39(m,1h),4.98–4.93(m,1h),4.54-4.50(m,2h),4.33–4.26(m,2h),3.93–3.87(m,1h),1.60(d,j＝4.3hz,3h),1.43-1.20(m,12h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.31；lcms-esi⁺(m/z):601.4[m+1]⁺。

實(shí)施例5

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((r)-(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(i-05b)

步驟1.i-05’b的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-01b(79.5mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24ul,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體i-05’b，70.3mg，收率64.4％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.68(d,j＝8.1hz,1h),7.40–7.36(m,2h),7.29-7.26(m,2h),7.20-7.17(m,1h),6.16(d,j＝19.0hz,1h),5.74(d,j＝8.1hz,1h),5.41–5.33(m,1h),4.98–4.93(m,1h),4.54-4.51(m,1h),4.37–4.25(m,2h),4.07-4.04(m,1h),3.93–3.89(m,1h),2.18–2.12(m,1h),1.44(s,9h),1.38-1.31(m,6h),1.21(d,j＝6.2hz,6h),0.99(d,j＝6.3hz,3h)0.98(d,j＝6.1hz,3h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.74；lcms-esi⁺(m/z):729.4[m+1]⁺。

步驟2.i-05b的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體i-05’b(70mg,96umol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物i-05b，53.8mg，收率89％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.59(d,j＝8.1hz,1h),7.42-7.38(m,2h),7.30-7.2(m,3h),6.13(d,j＝19.0hz,1h),5.70(d,j＝8.1hz,1h),5.48–5.35(m,1h),5.03-4.94，(m,1h)，4.54-4.47(m,2h),4.38–4.34(m,1h),4.15–4.12(m,1h),3.92–3.85(m,1h),2.43–2.35(m,1h),1.43-1.34(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.12(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.22；lcms-esi⁺(m/z):629.3(m+h)⁺.

實(shí)施例6

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((s)-(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(i-05c)

步驟1.i-05’c的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-01c(79.5mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24ul,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體i-05’c，65.5mg，收率60％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.65(d,j＝8.1hz,1h),7.41–7.35(m,2h),7.29-7.25(m,2h),7.22-7.17(m,1h),6.14(d,j＝19.2hz,1h),5.72(d,j＝8.0hz,1h),5.43–5.35(m,1h),4.96–4.93(m,1h),4.52-4.50(m,1h),4.38–4.25(m,2h),4.08-4.05(m,1h),3.95–3.88(m,1h),2.19–2.12(m,1h),1.44(s,9h),1.39-1.31(m,6h),1.21(d,j＝6.2hz,6h),0.99(d,j＝6.2hz,3h)0.98(d,j＝6.1hz,3h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.90；lcms-esi⁺(m/z):729.5[m+1]⁺。

步驟2.i-05c的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體i-05’c(65mg,89umol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物i-05c，50.3mg，收率90％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.62(d,j＝8.0hz,1h),7.44-7.39(m,2h),7.31-7.21(m,3h),6.11(d,j＝19.0hz,1h),5.69(d,j＝8.1hz,1h),5.45–5.36(m,1h),5.01-4.94，(m,1h)，4.53-4.47(m,2h),4.38–4.35(m,1h),4.16–4.12(m,1h),3.93–3.86(m,1h),2.44–2.35(m,1h),1.41-1.34(m,6h),1.24(d,j＝6.2hz,3h),1.23(d,j＝6.1hz,3h),1.14(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ2.98；lcms-esi⁺(m/z):629.2(m+h)⁺.

實(shí)施例7

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((r)-(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基異丁酸酯(i-22b)

在反應(yīng)管中將異丁酸10(20mg,225μmol)與0.5ml1，4-二氧六環(huán)混合，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-01b(79.5mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24ul,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體產(chǎn)物i-22b，46mg，收率51％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.58(d,j＝8.1hz,1h),7.41-7.36(m,2h),7.30-7.20(m,3h),6.15(d,j＝19.0hz,1h),5.71(d,j＝8.1hz,1h),5.47–5.35(m,1h),5.02-4.93(m,1h)，4.52-4.47(m,2h),4.16–4.12(m,1h),3.93–3.85(m,1h),2.45–2.35(m,1h),1.43(d,j＝19.0hz,6h),1.24(d,j＝6.2hz,3h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.16(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.22；lcms-esi⁺(m/z):600.3(m+h)⁺.

實(shí)施例8

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((s)-(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基異丁酸酯(i-22c)

在反應(yīng)管中將異丁酸10(20mg,225μmol)與0.5ml1，4-二氧六環(huán)混合，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-01c(79.5mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24ul,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體產(chǎn)物i-22c，50mg，收率55.4％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.60(d,j＝8.1hz,1h),7.43-7.37(m,2h),7.33-7.22(m,3h),6.11(d,j＝19.2hz,1h),5.70(d,j＝8.0hz,1h),5.48–5.36(m,1h),5.03-4.92(m,1h)，4.55-4.48(m,2h),4.16–4.13(m,1h),3.95–3.85(m,1h),2.47–2.35(m,1h),1.45(d,j＝19.2hz,6h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.18(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.11；lcms-esi⁺(m/z):600.4(m+h)⁺.

實(shí)施例9

((r)-([1,1’-聯(lián)苯]-4-基氧基)(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?d-丙氨酸異丙酯(i-23b)

步驟1((r)-([1,1’聯(lián)苯]-4-基氧基)(五氟苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸異丙酯(12)和((s)-([1,1’聯(lián)苯]-4-基氧基)(五氟苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸異丙酯(13)

在反應(yīng)瓶中加入三氯氧磷(9克,58.7mmol),加二氯甲烷200ml,冷卻到-70℃，緩慢滴加對(duì)苯基苯酚(l0克,58.7mmol)和三乙胺(6克,58.7mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液，滴加完畢，緩慢升至室溫，反應(yīng)過(guò)夜。將上述混合液冷卻到0℃，加入d-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽(9克，53.1mmol)，冷卻到-70℃,滴加三乙胺(13.4克,130mmol)的二氯甲烷溶液60ml,加畢，升溫到0℃,反應(yīng)3小時(shí)，將五氟苯酚(l0克,53mmol)和三乙胺(8克，77.6mmol)的二氯甲烷溶液100ml液體滴加到上述溶液中，在0℃攪拌1小時(shí)，升至室溫，攪拌過(guò)夜后，加入150毫升二氯甲烷及120毫升水，分出有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥后減壓濃縮，殘余物用硅膠柱分離(0-30％乙酸乙酯/己烷)得13.6克白色固體，固體用10％用叔丁基甲基醚/己烷重結(jié)晶，得白色固體12(5.3克)，母液用硅膠柱分離(50％乙酸乙酯/己烷)得13(3.7克)和12(0.8克)，12和13純度均大于99％。

12：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.78–7.70(m,4h),7.50–7.33(m,5h),5.16–4.97(m,1h),4.26–4.08(m,1h),3.97–3.93(m,1h),1.45(d,j＝7.0hz,3h),1.27(d,j＝5.9hz,3h),1.26(d,j＝5.9hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-2.65.

13：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.75–7.68(m,4h),7.48–7.32(m,5h),5.20–4.98(m,1h),4.22–4.05(m,1h),3.96–3.91(m,1h),1.47(d,j＝7.0hz,3h),1.26(d,j＝6.2hz,3h),1.25(d,j＝6.2hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-2.05.

步驟2.i-23b的合成

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(130.1mg,0.5mmol)和3.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(1.5ml的1mthf溶液，1.5mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑12(846mg，1.6mmol)在3mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(150ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物i-23b(176mg),收率58％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.76–7.69(m,4h),7.51-7.39(m,6h),6.21(d,j＝19.2hz,1h),5.68(d,j＝8.1hz,1h),5.03–4.93(m,1h),4.56-4.53(m,1h),4.40–4.34(m,1h),4.13–4.09(m,1h),3.93–3.79(m,2h),1.38-1.28(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.85；lcms-esi⁺(m/z):606.3(m+h)⁺.

實(shí)施例10

((s)-([1,1’-聯(lián)苯]-4-基氧基)(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?d-丙氨酸異丙酯(i-23c)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(130.1mg,0.5mmol)和3.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(1.5ml的1mthf溶液，1.5mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑13(846mg，1.6mmol)在3mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(150ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物i-23c(158mg),收率52％)。¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.77–7.69(m,4h),7.53-7.40(m,6h),6.18(d,j＝19.2hz,1h),5.66(d,j＝8.0hz,1h),5.04–4.95(m,1h),4.55-4.52(m,1h),4.41–4.34(m,1h),4.15–4.08(m,1h),3.94–3.79(m,2h),1.39-1.27(m,6h),1.24(d,j＝6.0hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.75；lcms-esi⁺(m/z):606.2(m+h)⁺.

實(shí)施例11

(2r,3r,4r,5r)-2-((((r)-([1,1’-聯(lián)苯基]-4-基氧基)(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)磷酰基)氧)甲基)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-3-基)l-丙氨酸酯(i-25b)

步驟1.i-25’b的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-23b(90.8mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體i-25’b，63.9mg，收率53％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.77–7.63(m,4h),7.56-7.31(m,6h),6.18(d,j＝19.4hz,1h),5.72(d,j＝8.0hz,1h),5.45–5.38(m,1h),4.96–4.93(m,1h),4.56-4.52(m,1h),4.38–4.26(m,2h),4.09-4.04(m,1h),3.94–3.86(m,1h),2.19–2.11(m,1h),1.47(s,9h),1.39-1.31(m,6h),1.24(d,j＝6.2hz,6h),0.98(d,j＝6.3hz,3h)0.97(d,j＝6.1hz,3h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.94；lcms-esi⁺(m/z):805.4[m+1]⁺。

步驟2.i-25b的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體i-25’b(60mg,74μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物i-25b，44.3mg，收率85％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.80–7.65(m,4h),7.58-7.33(m,6h),6.17(d,j＝19.0hz,1h),5.73(d,j＝8.0hz,1h),5.51–5.36(m,1h),5.03-4.95，(m,1h)，4.55-4.48(m,2h),4.39–4.36(m,1h),4.16–4.10(m,1h),3.90–3.83(m,1h),2.44–2.33(m,1h),1.42-1.35(m,6h),1.25(d,j＝6.2hz,3h),1.24(d,j＝6.0hz,3h),1.13(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.38；lcms-esi⁺(m/z):705.3(m+h)⁺.

實(shí)施例12

(2r,3r,4r,5r)-2-((((s)-([1,1’-聯(lián)苯基]-4-基氧基)(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)磷?；?氧)甲基)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-3-基)l-丙氨酸酯(i-25c)

步驟1.i-25’c的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-23c(90.8mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體i-25’c，68.7mg，收率57％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.74–7.62(m,4h),7.55-7.30(m,6h),6.15(d,j＝19.2hz,1h),5.71(d,j＝8.0hz,1h),5.43–5.36(m,1h),4.97–4.92(m,1h),4.54-4.50(m,1h),4.39–4.25(m,2h),4.08-4.02(m,1h),3.93–3.84(m,1h),2.20–2.10(m,1h),1.45(s,9h),1.38-1.30(m,6h),1.24(d,j＝6.0hz,6h),0.99(d,j＝6.0hz,3h)0.98(d,j＝6.1hz,3h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.65；lcms-esi⁺(m/z):805.3[m+1]⁺。

步驟2.i-25c的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體i-25’c(60mg,74μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物i-25c，41.8mg，收率80％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.78–7.62(m,4h),7.52-7.32(m,6h),6.14(d,j＝19.0hz,1h),5.77(d,j＝8.0hz,1h),5.52–5.35(m,1h),5.05-4.94，(m,1h)，4.53-4.46(m,2h),4.37–4.32(m,1h),4.14–4.10(m,1h),3.92–3.82(m,1h),2.43–2.33(m,1h),1.41-1.34(m,6h),1.24(d,j＝6.2hz,3h),1.23(d,j＝6.0hz,3h),1.10(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.18；lcms-esi⁺(m/z):705.2(m+h)⁺。

實(shí)施例13

((r)-(4-環(huán)丙基苯氧基)(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷酰基)-d-丙氨酸異丙酯(i-27b)

步驟1.((r)-(4-環(huán)丙基苯氧基)(五氟苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸異丙酯(15)和((s)-(4-環(huán)丙基苯氧基)(五氟苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸異丙酯(16)

在反應(yīng)瓶中加入三氯氧磷(9g,58.7mmol),加二氯甲烷200ml,冷卻到-70℃，緩慢滴加對(duì)環(huán)丙基苯酚(7.88g,58.7mmol)和三乙胺(6g,58.7mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液，滴加完畢，緩慢升至室溫，反應(yīng)過(guò)夜。將上述混合液冷卻到0℃，加入d-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽(9g，53.1mmol)，冷卻到-70℃,滴加三乙胺(13.4g,130mmol)的二氯甲烷溶液60ml,加畢，升溫到0℃,反應(yīng)3小時(shí)，將五氟苯酚(l0g,53mmol)和三乙胺(8g，77.6mmol)的二氯甲烷溶液100ml液體滴加到上述溶液中，在0℃攪拌1小時(shí)，升至室溫，攪拌過(guò)夜后，加入150毫升二氯甲烷及120毫升水，分出有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥后減壓濃縮，殘余物用硅膠柱分離(0-30％乙酸乙酯/己烷)得11.2克白色固體，固體用10％用叔丁基甲基醚/己烷重結(jié)晶，得白色固體15(3.8g)，母液用硅膠柱分離(50％乙酸乙酯/己烷)得16(3.1g)和15(0.6g)，15和16純度均大于99％。

15：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.45(d,2h),7.33(d,2h),5.16–4.97(m,1h),4.16–4.08(m,1h),3.97(brs,1h),1.88–1.78(m,1h),1.61–1.43(m,2h),1.33–1.22(m,11h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-2.85.

16：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.44(d,2h),7.35(d,2h),5.13–4.96(m,1h),4.01–3.90(m,1h),3.87(brs,1h),1.86–1.75(m,1h),1.63–1.46(m,2h),1.35–1.23(m,11h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-2.15.

步驟2.i-27b的合成

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(130.1mg,0.5mmol)和3.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(1.5ml的1mthf溶液，1.5mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑15(790mg，1.6mmol)在3mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(150ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物i-27b(151mg),收率53％)。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.48–7.39(m,3h),7.35(d,2h),6.28(d,j＝19.0hz,1h),5.62(d,j＝8.2hz,1h),5.01–4.92(m,1h),4.55-4.52(m,1h),4.43–4.36(m,1h),4.15–4.09(m,1h),3.95–3.78(m,2h),1.86–1.75(m,1h),1.63–1.46(m,2h),1.40(d,j＝19.0hz,3h),1.35–1.23(m,11h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.65；lcms-esi⁺(m/z):570.2(m+h)⁺.

實(shí)施例14

((s)-(4-環(huán)丙基苯氧基)(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷?；?-d-丙氨酸異丙酯(i-27c)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(130.1mg,0.5mmol)和3.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(1.5ml的1mthf溶液，1.5mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑16(790mg，1.6mmol)在3mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(150ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物i-27c(151mg),收率53％)。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.45–7.35(m,3h),7.33(d,2h),6.25(d,j＝19.2hz,1h),5.60(d,j＝8.0hz,1h),5.03–4.93(m,1h),4.53-4.50(m,1h),4.41–4.35(m,1h),4.13–4.07(m,1h),3.93–3.75(m,2h),1.86–1.76(m,1h),1.62–1.43(m,2h),1.41(d,j＝19.0hz,3h),1.36–1.21(m,11h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.25；lcms-esi⁺(m/z):570.3(m+h)⁺.

實(shí)施例15

(2r,3r,4r,5r)-2-((((r)-(4-環(huán)丙基苯氧基))(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)磷?；?氧)甲基)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-3-基-l-丙氨酸酯(i-29b)

步驟1.i-29’b的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-27b(85.4mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體i-29’b，63.4mg，收率55％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.46–7.36(m,3h),7.34(d,2h),6.19(d,j＝19.2hz,1h),5.74(d,j＝8.0hz,1h),5.44–5.37(m,1h),4.97–4.93(m,1h),4.55-4.51(m,1h),4.39–4.26(m,2h),4.08-4.05(m,1h),3.95–3.87(m,1h),2.18–2.11(m,1h),1.87–1.75(m,1h),1.63–1.52(m,2h),1.48(s,9h),1.43–1.37(m,6h),1.35–0.96(m,14h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.98；lcms-esi⁺(m/z):769.3[m+1]⁺。

步驟2.i-29b的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體i-29’b(60mg,78μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物i-29b，43.8mg，收率84％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.43–7.37(m,3h),7.33(d,2h),6.12(d,j＝19.2hz,1h),5.72(d,j＝8.0hz,1h),5.41–5.35(m,1h),4.95–4.93(m,1h),4.54-4.49(m,1h),4.38–4.25(m,2h),4.09-4.03(m,1h),3.93–3.85(m,1h),2.20–2.10(m,1h),1.86–1.75(m,1h),1.61–1.52(m,2h),1.45–1.36(m,6h),1.35–0.93(m,14h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.18；lcms-esi⁺(m/z):669.3(m+h)⁺.

實(shí)施例16

(2r,3r,4r,5r)-2-((((s)-(4-環(huán)丙基苯氧基))(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)磷?；?氧)甲基)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-3-基-l-丙氨酸酯(i-29c)

步驟1.i-29’c的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh，9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入i-27c(85.4mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體i-29’c，61.6mg，收率53％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.47–7.36(m,3h),7.35(d,2h),6.16(d,j＝19.0hz,1h),5.72(d,j＝8.0hz,1h),5.45–5.38(m,1h),4.99–4.93(m,1h),4.55-4.50(m,1h),4.38–4.26(m,2h),4.10-4.05(m,1h),3.96–3.87(m,1h),2.20–2.11(m,1h),1.89–1.75(m,1h),1.62–1.51(m,2h),1.46(s,9h),1.45–1.37(m,6h),1.35–0.98(m,14h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.65；lcms-esi⁺(m/z):769.3[m+1]⁺。

步驟2.i-29c的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體i-29’c(60mg,78μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物i-29c，45.1mg，收率86％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.42–7.37(m,3h),7.34(d,2h),6.13(d,j＝19.2hz,1h),5.70(d,j＝8.0hz,1h),5.43–5.33(m,1h),4.95–4.91(m,1h),4.52-4.49(m,1h),4.37–4.25(m,2h),4.09-4.01(m,1h),3.96–3.84(m,1h),2.21–2.11(m,1h),1.85–1.73(m,1h),1.62–1.51(m,2h),1.48–1.37(m,6h),1.35–0.90(m,14h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.11；lcms-esi⁺(m/z):669.4(m+h)⁺.

實(shí)施例17

d-丙氨酸氘代異丙酯鹽酸鹽19、20、21的制備

在0℃下，將參照文獻(xiàn)方法(journaloflabelledcompounds&radiopharmaceuticals,41(12),1145‐1163；1998)合成的六氘代異丙醇(17，1.05g)與n‐boc保護(hù)的d‐丙氨酸(1.8g)、edc(2.74g)及4‐n,n‐二甲胺基吡啶(100mg)混溶于無(wú)水二氯甲烷(20ml)中，撤去冰浴后室溫下攪拌過(guò)夜，tlc檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束后加入二氯甲烷(100ml)稀釋，有機(jī)相分別用5％碳酸氫鈉溶液和飽和鹽水洗滌，干燥，濃縮后殘余物用柱層析(己烷：乙酸乙酯＝4：1)純化，得到無(wú)色油狀液體產(chǎn)物(18，2.3g)。

0℃下將化合物(18，2.3g)溶于4mhcl的二氧六環(huán)溶液中，室溫下攪拌過(guò)夜，tlc檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸除溶劑，殘余物加入甲醇(2x3ml)并蒸除，殘余物中加無(wú)水乙醇(5ml)析出白色沉淀即為d-丙氨酸六氘代異丙酯鹽酸鹽(19)。

用同樣的方法制備d-丙氨酸單氘代異丙酯鹽酸鹽(20)和d-丙氨酸七氘代異丙酯鹽酸鹽(21)。

實(shí)施例18

氘代異丙基[(五氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基]—d—丙氨酸酯22、23、24、25、26、27的制備

參考[(r)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷?；鵠—d—丙氨酸異丙酯(5)和[(s)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基]—d—丙氨酸異丙酯(6)的制備方法，用同樣的方法制備[(r)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷?；鵠—d—丙氨酸六氘代異丙酯(22)和[(s)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷?；鵠—d—丙氨酸六氘代異丙酯(23)

22：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.38–7.35(m,2h),7.33–7.21(m,3h),4.87(s,1h),3.92(brs,1h),3.68–3.60(m,1h),1.41(d,j＝7.0hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-2.05.

23：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.40–7.36(m,2h),7.32–7.20(m,3h),4.91(m,1h),3.86(brs,1h),3.66–3.61(m,1h),1.43(d,j＝7.2hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-1.65.

[(r)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷?；鵠—d—丙氨酸單氘代異丙酯(24)和

[(s)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基]—d—丙氨酸單氘代異丙酯(25)

24：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.40–7.35(m,2h),7.33–7.20(m,3h),3.95(brs,1h),3.65–3.60(m,1h),1.43(s,6h),1.41(d,j＝7.0hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-1.99.

25：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.42–7.34(m,2h),7.32–7.19(m,3h),3.89(brs,1h),3.66–3.61(m,1h),1.45(s,6h),1.42(d,j＝7.0hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-1.63.

[(r)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷?；鵠—d—丙氨酸七氘代異丙酯(26)和

[(s)-(五氟苯氧基)(苯氧基)磷?；鵠—d—丙氨酸七氘代異丙酯(27)

26：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.40–7.36(m,2h),7.33–7.21(m,3h),3.98(brs,1h),3.65–3.59(m,1h),1.37(d,j＝7.0hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-1.97.

27：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):7.42–7.34(m,2h),7.32–7.19(m,3h),3.89(brs,1h),3.66–3.60(m,1h),1.35(d,j＝7.0hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-1.60.

實(shí)施例19

異丙基[(五氟苯氧基)(五氘代苯氧基)磷?；鵠—d—丙氨酸酯30、31的制備

在反應(yīng)瓶中加入二氯磷酸五氘代苯酯28(11.1克，51.4毫摩爾)，及d-丙氨酸異丙酯鹽酸鹽1(8.64克，51.425.7毫摩爾)，冷卻到-70℃，在1.5小時(shí)內(nèi)滴加三乙胺(14.4毫升，103.4毫摩爾)的二氯甲烷(44毫升)溶液,加畢后，升至室溫，攪拌過(guò)夜后將反應(yīng)混合物冷卻至0℃，在40分鐘內(nèi)將五氟苯酚4(9.46克，51.4毫摩爾)和三乙胺(7.2毫升，51.4毫摩爾)的二氯甲烷(60ml)溶液滴加到上述溶液中，在0℃攪拌1小時(shí)，升至室溫，攪拌過(guò)夜后，加入150毫升二氯甲烷及120毫升水，分出有機(jī)相，用無(wú)水硫酸鈉干燥后減壓濃縮，殘余物用硅膠柱分離(0-30％乙酸乙酯/己烷)得13.9克白色固體，固體用10％用叔丁基甲基醚/己烷重結(jié)晶，得白色固體30(6.5克)，母液用硅膠柱分離(50％乙酸乙酯/己烷)得31(4.5克)和30(1.0克)，30和31純度均大于99％。

30：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):5.22–4.96(m,1h),4.25–4.09(m,1h),3.97–3.91(m,1h),1.47(d,j＝7.0hz,3h),1.25(d,j＝6.0hz,3h),1.24(d,j＝6.0hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-2.05.

31：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ(ppm):5.24–4.97(m,1h),4.16–4.03(m,1h),3.95–3.90(m,1h),1.48(d,j＝7.0hz,3h),1.23(d,j＝6.0hz,3h),1.22(d,j＝6.0hz,3h).³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ-1.75.

實(shí)施例20

((r)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸七氘代異丙酯(ii-01b)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑26(736mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物ii-01b(322mg),收率60％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.78(s,1h),7.40–7.33(m,3h),7.25-7.20(m,2h),7.19-7.15(m,1h),6.17(d,j＝19.0hz,1h),5.56(d,j＝8.1hz,1h),5.06–4.95(m,1h),4.50-4.46(m,2h),4.42–4.33(m,1h),4.29(brs,1h),3.93–3.78(m,2h),1.38-1.29(m,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.68；lcms-esi⁺(m/z):537.2(m+h)⁺.

實(shí)施例21

((s)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸七氘代異丙酯(ii-01c)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑27(736mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物ii-01c(305mg),收率57％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.70(s,1h),7.41–7.34(m,3h),7.25-7.21(m,2h),7.20-7.15(m,1h),6.14(d,j＝19.0hz,1h),5.53(d,j＝8.1hz,1h),5.05–4.93(m,1h),4.50-4.45(m,2h),4.42–4.31(m,1h),4.26(brs,1h),3.94–3.77(m,2h),1.38-1.30(m,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.59；lcms-esi⁺(m/z):537.2(m+h)⁺.

實(shí)施例22

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((r)-(((r)-1-七氘代異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(ii-03b)

步驟1.ii-03’b的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入ii-01b(80.4mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體ii-03’b，72.2mg，收率65.4％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.67(d,j＝8.1hz,1h),7.41–7.36(m,2h),7.28-7.23(m,2h),7.20-7.16(m,1h),6.17(d,j＝19.0hz,1h),5.77(d,j＝8.1hz,1h),5.40–5.32(m,1h),4.99–4.93(m,1h),4.55-4.51(m,1h),4.38–4.24(m,2h),3.97–3.88(m,1h),2.16–2.11(m,1h),1.48(s,9h),1.39-1.30(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.78；lcms-esi⁺(m/z):736.4[m+1]⁺。

步驟2.ii-03b的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體ii-03’b(70.6mg,96μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物ii-03b，54.7mg，收率89.6％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.56(d,j＝8.1hz,1h),7.45-7.38(m,2h),7.32-7.22(m,3h),6.18(d,j＝19.0hz,1h),5.73(d,j＝8.1hz,1h),5.49–5.35(m,1h),5.02-4.93，(m,1h)，4.53-4.48(m,2h),4.39–4.35(m,1h),3.96–3.88(m,1h),2.45–2.35(m,1h),1.44-1.36(m,6h),1.16(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.33；lcms-esi⁺(m/z):636.3(m+h)⁺.

實(shí)施例23

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((s)-(((r)-1-七氘代異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(ii-03c)

步驟1.ii-03’c的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入ii-01c(80.4mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體ii-03’c，68.5mg，收率62％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.63(d,j＝8.1hz,1h),7.42–7.33(m,2h),7.27-7.26(m,2h),7.23-7.18(m,1h),6.13(d,j＝19.2hz,1h),5.75(d,j＝8.0hz,1h),5.45–5.36(m,1h),4.95–4.92(m,1h),4.53-4.50(m,1h),4.39–4.26(m,2h),3.98–3.88(m,1h),2.19–2.13(m,1h),1.46(s,9h),1.39-1.31(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.91；lcms-esi⁺(m/z):736.4[m+1]⁺。

步驟2.ii-03c的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體ii-03’c(65.5mg,89μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物ii-03c，48.2mg，收率85％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.60(d,j＝8.0hz,1h),7.43-7.38(m,2h),7.30-7.20(m,3h),6.13(d,j＝19.0hz,1h),5.68(d,j＝8.1hz,1h),5.43–5.38(m,1h),5.00-4.94，(m,1h)，4.53-4.46(m,2h),4.39–4.35(m,1h),3.95–3.88(m,1h),2.46–2.37(m,1h),1.40-1.33(m,6h),1.24(d,j＝6.2hz,3h),1.23(d,j＝6.1hz,3h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ2.95；lcms-esi⁺(m/z):636.2(m+h)⁺.

實(shí)施例24

((r)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸l六氘代異丙酯(iii-01b)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑22(735mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物iii-01b(311mg),收率58％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.73(s,1h),7.42–7.32(m,3h),7.26-7.20(m,2h),7.17-7.13(m,1h),6.19(d,j＝19.0hz,1h),5.58(d,j＝8.1hz,1h),5.06–4.96(m,1h),4.52-4.46(m,2h),4.41–4.32(m,1h),4.25(brs,1h),4.18–4.09(m,1h),3.93–3.79(m,2h),1.38-1.27(m,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.69；lcms-esi⁺(m/z):536.2(m+h)⁺.

實(shí)施例25

((s)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸六氘代異丙酯(iii-01c)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑23(735mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物iii-01c(303mg),收率56.6％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.68(s,1h),7.41–7.33(m,3h),7.25-7.20(m,2h),7.18-7.13(m,1h),6.12(d,j＝19.0hz,1h),5.55(d,j＝8.1hz,1h),5.05–4.95(m,1h),4.52-4.45(m,2h),4.41–4.31(m,1h),4.29(brs,1h),4.16–4.06(m,1h),3.96–3.79(m,2h),1.39-1.31(m,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.52；lcms-esi⁺(m/z):536.3(m+h)⁺.

實(shí)施例26

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((r)-(((r)-1-六氘代異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(iii-03b)

步驟1.iii-03’b的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入iii-01b(80.3mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體iii-03’b，73.6mg，收率66.8％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.61(d,j＝8.1hz,1h),7.43–7.37(m,2h),7.25-7.22(m,2h),7.19-7.15(m,1h),6.19(d,j＝19.0hz,1h),5.75(d,j＝8.1hz,1h),5.42–5.32(m,1h),4.99–4.92(m,1h),4.58-4.51(m,1h),4.39–4.23(m,2h),4.19–4.09(m,1h),3.98–3.89(m,1h),2.17–2.10(m,1h),1.46(s,9h),1.38-1.30(m,6h),1.25(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.75；lcms-esi⁺(m/z):735.4[m+1]⁺。

步驟2.iii-03b的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體iii-03’b(70.5mg,96μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物iii-03b，51.6mg，收率84.6％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.53(d,j＝8.1hz,1h),7.46-7.38(m,2h),7.34-7.20(m,3h),6.16(d,j＝19.0hz,1h),5.75(d,j＝8.1hz,1h),5.47–5.34(m,1h),5.01-4.92，(m,1h)，4.54-4.49(m,2h),4.37–4.33(m,1h),4.11–4.06(m,1h),3.97–3.86(m,1h),2.42–2.31(m,1h),1.45-1.38(m,6h),1.20(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.28；lcms-esi⁺(m/z):635.3(m+h)⁺.

實(shí)施例27

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((s)-(((r)-1-六氘代異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(iii-03c)

步驟1.iii-03’c的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入iii-01c(80.3mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體iii-03’c，66.3mg，收率60％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.65(d,j＝8.1hz,1h),7.41–7.32(m,2h),7.26-7.24(m,2h),7.23-7.17(m,1h),6.15(d,j＝19.2hz,1h),5.74(d,j＝8.0hz,1h),5.44–5.36(m,1h),4.95–4.91(m,1h),4.54-4.48(m,1h),4.39–4.28(m,2h),4.15–4.08(m,1h),3.98–3.86(m,1h),2.18–2.12(m,1h),1.45(s,9h),1.38-1.31(m,6h),1.22(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.88；lcms-esi⁺(m/z):735.4[m+1]⁺。

步驟2.iii-03c的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體iii-03’c(65.4mg,89μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物iii-03c，46.2mg，收率82％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.58(d,j＝8.0hz,1h),7.42-7.38(m,2h),7.32-7.20(m,3h),6.12(d,j＝19.0hz,1h),5.65(d,j＝8.1hz,1h),5.44–5.37(m,1h),5.02-4.95，(m,1h)，4.52-4.45(m,2h),4.38–4.35(m,1h),4.17–4.09(m,1h),3.95–3.86(m,1h),2.47–2.35(m,1h),1.41-1.33(m,6h),1.24(d,j＝6.2hz,3h),1.23(d,j＝6.1hz,3h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ2.92；lcms-esi⁺(m/z):635.2(m+h)⁺.

實(shí)施例28

((r)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸單氘代異丙酯(iv-01b)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑24(727mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物iv-01b(350mg),收率66％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.98(s,1h),7.43–7.35(m,3h),7.28-7.22(m,2h),7.19-7.15(m,1h),6.21(d,j＝19.0hz,1h),5.55(d,j＝8.1hz,1h),5.06–4.96(m,1h),4.52-4.47(m,2h),4.43–4.36(m,1h),4.30(brs,1h),3.98–3.78(m,2h),1.42-1.28(m,12h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.69；lcms-esi⁺(m/z):531.2(m+h)⁺.

實(shí)施例29

((s)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸單氘代異丙酯(iv-01c)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑25(727mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物iv-01c(308mg),收率58％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.71(s,1h),7.40–7.34(m,3h),7.25-7.22(m,2h),7.20-7.14(m,1h),6.13(d,j＝19.0hz,1h),5.52(d,j＝8.1hz,1h),5.03–4.93(m,1h),4.50-4.42(m,2h),4.40–4.31(m,1h),4.29(brs,1h),3.94–3.78(m,2h),1.41-1.27(m,12h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.55；lcms-esi⁺(m/z):531.2(m+h)⁺.

實(shí)施例30

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((r)-(((r)-1-單氘代異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(iv-03b)

步驟1.iv-03’b的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入iv-01b(79.6mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體iv-03’b，74mg，收率67.6％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.89(d,j＝8.1hz,1h),7.41–7.34(m,2h),7.28-7.22(m,2h),7.20-7.15(m,1h),6.19(d,j＝19.0hz,1h),5.78(d,j＝8.1hz,1h),5.40–5.31(m,1h),4.97–4.91(m,1h),4.58-4.51(m,1h),4.37–4.24(m,2h),3.95–3.87(m,1h),2.15–2.10(m,1h),1.49(s,9h),1.40-1.23(m,18h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.77；lcms-esi⁺(m/z):730.4[m+1]⁺。

步驟2.iv-03b的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體iv-03’b(70mg,96μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物iv-03b，51.7mg，收率85％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.59(d,j＝8.1hz,1h),7.44-7.37(m,2h),7.31-7.22(m,3h),6.19(d,j＝19.2hz,1h),5.75(d,j＝8.0hz,1h),5.47–5.34(m,1h),5.02-4.92，(m,1h)，4.55-4.48(m,2h),4.37–4.35(m,1h),3.96–3.89(m,1h),2.46–2.34(m,1h),1.44-1.20(m,18h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.38；lcms-esi⁺(m/z):630.3(m+h)⁺.

實(shí)施例31

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((s)-(((r)-1-單氘代異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(iv-03c)

步驟1.iv-03’c的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入iv-01c(79.6mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體iv-03’c，71.8mg，收率65.7％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.62(d,j＝8.1hz,1h),7.40–7.32(m,2h),7.26-7.23(m,2h),7.21-7.16(m,1h),6.10(d,j＝19.2hz,1h),5.74(d,j＝8.0hz,1h),5.44–5.36(m,1h),4.94–4.90(m,1h),4.55-4.51(m,1h),4.39–4.24(m,2h),3.98–3.86(m,1h),2.19–2.12(m,1h),1.47(s,9h),1.39-1.19(m,18h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.97；lcms-esi⁺(m/z):730.4[m+1]⁺。

步驟2.iv-03c的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體iv-03’c(70mg,96μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物iv-03c，49.5mg，收率82％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.61(d,j＝8.0hz,1h),7.42-7.35(m,2h),7.30-7.22(m,3h),6.14(d,j＝19.2hz,1h),5.66(d,j＝8.0hz,1h),5.41–5.35(m,1h),5.00-4.95，(m,1h)，4.52-4.45(m,2h),4.39–4.34(m,1h),3.96–3.88(m,1h),2.48–2.37(m,1h),1.40-1.20(m,18h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ2.93；lcms-esi⁺(m/z):630.2(m+h)⁺.

實(shí)施例32

((r)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(五氘代苯氧基)磷酰基)-d-丙氨酸異丙酯(x-01b)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑30(733mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物x-01b(302mg),收率56％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.79(s,1h),7.42(d,j＝8.0hz,1h),6.19(d,j＝19.2hz,1h),5.57(d,j＝8.0hz,1h),5.03–4.95(m,1h),4.52-4.46(m,2h),4.40–4.33(m,1h),4.29(brs,1h),4.15–4.07(m,1h),3.95–3.78(m,2h),1.39-1.21(m,12h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.69；lcms-esi⁺(m/z):535.2(m+h)⁺.

實(shí)施例33

((s)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(五氘代苯氧基)磷?；?-d-丙氨酸異丙酯(x-01c)

向10ml反應(yīng)管中加入核苷7(260.2mg,1mmol)和5.0ml無(wú)水thf，混合物在冰水浴中冷卻至0℃。滴加叔丁基氯化鎂格氏試劑(3.0ml的1mthf溶液，3.0mmol)，反應(yīng)混合物在o℃下攪拌30min，隨后在0℃下滴加磷試劑31(733mg，1.6mmol)在5mlthf中的溶液。將所得到的澄清反應(yīng)溶液升溫,攪拌1天。加入飽和nh4cl(15ml)，攪拌5分鐘，將混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋。分出有機(jī)相，水層用乙酸乙酯(30ml)萃取。合并的有機(jī)層用水(30ml)、飽和nahco3(2x3oml)、鹽水(3oml)洗滌，并經(jīng)na2so4干燥。減壓蒸去溶劑，殘留物經(jīng)由硅膠柱層析(0-10％甲醇的二氯甲烷)純化，得白色固體產(chǎn)物x-01c(301mg),收率55％)。¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.76(s,1h),7.38(d,j＝8.1hz,1h),6.13(d,j＝19.0hz,1h),5.56(d,j＝8.1hz,1h),5.02–4.93(m,1h),4.50-4.45(m,2h),4.40–4.31(m,1h),4.25(brs,1h),4.19–4.09(m,1h),3.90–3.78(m,2h),1.37-1.19(m,12h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.58；lcms-esi⁺(m/z):535.2(m+h)⁺.

實(shí)施例34

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((r)-(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(五氘代苯氧基)磷?；?氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(x-03b)

步驟1.x-03’b的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入x-01b(80.2mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體x-03’b，72mg，收率65.4％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.69(d,j＝8.2hz,1h),6.19(d,j＝19.0hz,1h),5.76(d,j＝8.2hz,1h),5.40–5.33(m,1h),4.99–4.93(m,1h),4.55-4.50(m,1h),4.38–4.25(m,2h),4.13-4.06(m,1h),3.93–3.87(m,1h),2.17–2.11(m,1h),1.47(s,9h),1.40–0.99(m,18h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.76；lcms-esi⁺(m/z):734.4[m+1]⁺。

步驟2.x-03b的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體x-03’b(70.4mg,96μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物x-03b，55.3mg，收率91％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.56(d,j＝8.1hz,1h),6.18(d,j＝19.0hz,1h),5.54(d,j＝8.1hz,1h),5.48–5.35(m,1h),5.03-4.94，(m,1h)，4.54-4.47(m,2h),4.38–4.32(m,1h),4.15–4.10(m,1h),3.93–3.85(m,1h),2.44–2.35(m,1h),1.43-1.11(m,18h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.32；lcms-esi⁺(m/z):634.3(m+h)⁺.

實(shí)施例35

(2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-二氧-3,4-二氫嘧啶-1(2h)-基)-4-氟-2-((((s)-(((r)-1-異丙基-1-氧丙-2-基)氨基)(五氘代苯氧基)磷酰基)氧)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基l-纈氨酸酯(x-03c)

步驟1.x-03’c的合成

在反應(yīng)管中將boc-val-oh,9(49mg,225μmol)用0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶解，降溫至-5℃，攪拌下加入dcc(46.5mg,225μmol)，室溫下反應(yīng)30min，繼續(xù)降溫至-5℃，然后依次加入x-01c(80.2mg,0.15mmol)的0.5ml1，4-二氧六環(huán)溶液，三乙胺(24μl,0.18mmol)，催化量4-二甲氨基吡啶(dmap)，室溫反應(yīng)過(guò)夜，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取3次，合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到固體中間體x-03’c，72.7mg，收率66％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.66(d,j＝8.1hz,1h),6.13(d,j＝19.2hz,1h),5.71(d,j＝8.0hz,1h),5.45–5.36(m,1h),4.99–4.93(m,1h),4.52-4.49(m,1h),4.39–4.25(m,2h),4.09-4.03(m,1h),3.95–3.86(m,1h),2.19–2.11(m,1h),1.43(s,9h),1.39-0.98(m,18h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ2.91；lcms-esi⁺(m/z):734.5[m+1]⁺。

步驟2.x-03c的合成

在反應(yīng)管中加入4mhcl的1，4-二氧六環(huán)(2ml)，降溫至0℃，攪拌下加入中間體x-03’c(70.4mg,96μmol)，室溫下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束倒入10ml水中，用15ml乙酸乙酯萃取三次，合并的有機(jī)層用水、飽和nahco3、鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，旋干溶劑后，用硅膠柱層析分離得到產(chǎn)物x-03c，51.7mg，收率85％。

¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.62(d,j＝8.0hz,1h),6.10(d,j＝19.0hz,1h),5.68(d,j＝8.1hz,1h),5.44–5.36(m,1h),5.00-4.92，(m,1h)，4.52-4.45(m,2h),4.39–4.33(m,1h),4.18–4.12(m,1h),3.95–3.86(m,1h),2.45–2.35(m,1h),1.41-1.14(m,18h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ2.95；lcms-esi⁺(m/z):634.2(m+h)⁺.

實(shí)施例36

類似的方法合成了化合物i-31b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.57(d,j＝8.1hz,1h),7.43-7.38(m,2h),7.30-7.21(m,3h),6.13(d,j＝19.0hz,1h),5.71(d,j＝8.1hz,1h),5.48–5.35(m,1h),5.03-4.95，(m,1h)，4.54-4.45(m,2h),4.38–4.34(m,1h),4.15–4.11(m,1h),3.92–3.85(m,1h),2.43–2.35(m,1h),1.43-1.34(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.13(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.22；lcms-esi⁺(m/z):629.3(m+h)⁺.

實(shí)施例37

類似的方法合成了化合物ii-13b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.58(d,j＝8.1hz,1h),7.42-7.36(m,2h),7.30-7.20(m,3h),6.14(d,j＝19.0hz,1h),5.73(d,j＝8.1hz,1h),5.46–5.34(m,1h),4.53-4.45(m,2h),4.38–4.33(m,1h),4.15–4.12(m,1h),3.92–3.84(m,1h),2.43–2.35(m,1h),1.43-1.35(m,6h),1.10(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.29；lcms-esi⁺(m/z):636.3(m+h)⁺.

實(shí)施例38

類似的方法合成了化合物iii-13b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.58(d,j＝8.1hz,1h),7.40-7.35(m,2h),7.31-7.22(m,3h),6.15(d,j＝19.0hz,1h),5.74(d,j＝8.1hz,1h),5.44–5.35(m,1h),4.93(s,1h),4.53-4.44(m,2h),4.37–4.33(m,1h),4.15–4.12(m,1h),3.95–3.84(m,1h),2.44–2.36(m,1h),1.42-1.35(m,6h),1.11(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.25；lcms-esi⁺(m/z):635.2(m+h)⁺.

實(shí)施例39

類似的方法合成了化合物iv-13b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.56(d,j＝8.0hz,1h),7.42-7.38(m,2h),7.32-7.21(m,3h),6.12(d,j＝19.0hz,1h),5.70(d,j＝8.1hz,1h),5.48–5.38(m,1h),4.54-4.43(m,2h),4.39–4.34(m,1h),4.15–4.10(m,1h),3.90–3.84(m,1h),2.44–2.35(m,1h),1.43-1.34(m,6h),1.26(s,6h),1.09(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.18；lcms-esi⁺(m/z):630.2(m+h)⁺.

實(shí)施例40

類似的方法合成了化合物v-13b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.60(s,1h),7.44-7.38(m,2h),7.32-7.21(m,3h),6.15(d,j＝19.0hz,1h),5.45–5.34(m,1h),5.05-4.96，(m,1h)，4.56-4.43(m,2h),4.38–4.33(m,1h),4.13–4.10(m,1h),3.92–3.85(m,1h),2.43–2.35(m,1h),1.43-1.34(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.11(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.29；lcms-esi⁺(m/z):630.3(m+h)⁺.

實(shí)施例41

類似的方法合成了化合物vi-13b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.45-7.39(m,2h),7.32-7.22(m,3h),6.13(d,j＝19.0hz,1h),5.47–5.36(m,1h),5.03-4.97，(m,1h)，4.57-4.46(m,2h),4.39–4.34(m,1h),4.16–4.12(m,1h),3.92–3.85(m,1h),2.43–2.35(m,1h),1.44-1.35(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.21(d,j＝6.2hz,3h),1.12(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.22；lcms-esi⁺(m/z):631.4(m+h)⁺.

實(shí)施例42

類似的方法合成了化合物x-05b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.54(d,j＝8.1hz,1h),6.11(d,j＝19.0hz,1h),5.73(d,j＝8.1hz,1h),5.50–5.39(m,1h),5.04-4.95，(m,1h)，4.55-4.47(m,2h),4.38–4.35(m,1h),4.16–4.12(m,1h),3.93–3.82(m,1h),2.44–2.35(m,1h),1.45-1.34(m,6h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.21(d,j＝6.2hz,3h),1.10(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.31；lcms-esi⁺(m/z):634.2(m+h)⁺.

實(shí)施例43

類似的方法合成了化合物xi-01b：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.79(s,1h),7.38–7.30(m,3h),7.25-7.18(m,2h),6.18(d,j＝19.0hz,1h),5.56(d,j＝8.0hz,1h),5.06–4.95(m,1h),4.51-4.45(m,2h),4.42–4.36(m,1h),4.25(brs,1h),4.13–4.09(m,1h),3.94–3.78(m,2h),1.36-1.28(m,6h),1.24(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.63；lcms-esi⁺(m/z):531.2(m+h)⁺.

實(shí)施例44

類似的方法合成了化合物xi-03b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.57(d,j＝8.1hz,1h),7.43-7.37(m,2h),7.29-7.22(m,2h),6.12(d,j＝19.0hz,1h),5.70(d,j＝8.1hz,1h),5.48–5.36(m,1h),5.05-4.95，(m,1h)，4.54-4.47(m,2h),4.38–4.33(m,1h),4.15–4.10(m,1h),3.93–3.84(m,1h),2.46–2.37(m,1h),1.43-1.33(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.11(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.20；lcms-esi⁺(m/z):630.4(m+h)⁺.

實(shí)施例45

類似的方法合成了化合物xi-05b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.58(d,j＝8.1hz,1h),7.44-7.38(m,2h),7.31-7.20(m,2h),6.14(d,j＝19.0hz,1h),5.73(d,j＝8.0hz,1h),5.48–5.37(m,1h),5.02-4.95，(m,1h)，4.53-4.45(m,2h),4.38–4.33(m,1h),4.15–4.10(m,1h),3.92–3.85(m,1h),2.43–2.36(m,1h),1.43-1.36(m,6h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.21(d,j＝6.2hz,3h),1.08(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.27；lcms-esi⁺(m/z):630.3(m+h)⁺.

實(shí)施例46

類似的方法合成了化合物xii-01b：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.73(s,1h),7.34–7.30(m,2h),7.25-7.18(m,2h),6.13(d,j＝19.0hz,1h),5.59(d,j＝8.0hz,1h),5.03–4.94(m,1h),4.52-4.47(m,2h),4.41–4.35(m,1h),4.25(brs,1h),4.15–4.09(m,1h),3.93–3.83(m,2h),1.37-1.26(m,6h),1.20(d,j＝6.0hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.59；lcms-esi⁺(m/z):531.3(m+h)⁺.

實(shí)施例47

類似的方法合成了化合物xii-03b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.55(d,j＝8.0hz,1h),7.45-7.22(m,4h),6.13(d,j＝19.0hz,1h),5.71(d,j＝8.2hz,1h),5.48–5.35(m,1h),5.03-4.95，(m,1h)，4.58-4.49(m,2h),4.39–4.35(m,1h),4.15–4.10(m,1h),3.92–3.86(m,1h),2.42–2.35(m,1h),1.43-1.36(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.12(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.33；lcms-esi⁺(m/z):630.4(m+h)⁺.

實(shí)施例48

類似的方法合成了化合物xii-04b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.55(d,j＝8.0hz,1h),7.43-7.22(m,4h),6.17(d,j＝19.2hz,1h),5.72(d,j＝8.0hz,1h),5.47–5.39(m,1h),5.02-4.95(m,1h)，4.52-4.45(m,2h),4.15–4.11(m,1h),3.92–3.86(m,1h),2.43–2.35(m,1h),1.42(d,j＝19.0hz,6h),1.24(d,j＝6.2hz,3h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.10(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.32；lcms-esi⁺(m/z):601.3(m+h)⁺.

實(shí)施例49

類似的方法合成了化合物xii-05b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.59(d,j＝8.1hz,1h),7.45-7.23(m,4h),6.11(d,j＝19.0hz,1h),5.73(d,j＝8.2hz,1h),5.51–5.42(m,1h),5.09-4.98，(m,1h)，4.55-4.45(m,2h),4.38–4.32(m,1h),4.17–4.12(m,1h),3.92–3.83(m,1h),2.44–2.37(m,1h),1.43-1.35(m,6h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.21(d,j＝6.0hz,3h),1.11(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.19；lcms-esi⁺(m/z):630.3(m+h)⁺.

實(shí)施例50

類似的方法合成了化合物xii-06c：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.75(s,1h),7.34–7.30(m,2h),7.24-7.17(m,2h),6.12(d,j＝19.0hz,1h),5.59(d,j＝8.0hz,1h),5.03–4.94(m,1h),4.52-4.47(m,2h),4.40–4.35(m,1h),4.27(brs,1h),4.15–4.09(m,1h),3.93–3.83(m,2h),1.34-1.26(m,6h),1.20(d,j＝6.0hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.53；lcms-esi⁺(m/z):531.2(m+h)⁺.

實(shí)施例51

類似的方法合成了化合物xii-07c：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.58(d,j＝8.0hz,1h),7.48-7.21(m,4h),6.14(d,j＝19.0hz,1h),5.74(d,j＝8.2hz,1h),5.48–5.35(m,1h),5.03-4.95，(m,1h)，4.58-4.49(m,2h),4.39–4.35(m,1h),4.15–4.10(m,1h),3.92–3.86(m,1h),2.42–2.35(m,1h),1.43-1.36(m,6h),1.23(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.2hz,3h),1.12(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.38；lcms-esi⁺(m/z):630.1(m+h)⁺.

實(shí)施例52

類似的方法合成了化合物xii-08c：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.51(d,j＝8.0hz,1h),7.45-7.20(m,4h),6.13(d,j＝19.2hz,1h),5.71(d,j＝8.2hz,1h),5.51–5.41(m,1h),5.09-4.98，(m,1h)，4.55-4.43(m,2h),4.38–4.32(m,1h),4.17–4.13(m,1h),3.92–3.82(m,1h),2.41–2.36(m,1h),1.43-1.35(m,6h),1.24(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.0hz,3h),1.13(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.22；lcms-esi⁺(m/z):630.2(m+h)⁺.

實(shí)施例53

類似的方法合成了化合物xiii-01b：¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.77(s,1h),7.39(d,j＝8.0hz,1h),7.30(s,2h),6.16(d,j＝19.0hz,1h),5.59(d,j＝8.1hz,1h),5.05–4.97(m,1h),4.50-4.44(m,2h),4.41–4.36(m,1h),4.23(brs,1h),4.12–4.08(m,1h),3.95–3.78(m,2h),1.37-1.29(m,6h),1.22(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cdcl3)δ3.61；lcms-esi⁺(m/z):533.3(m+h)⁺.

實(shí)施例54

類似的方法合成了化合物xiii-05b：¹hnmr(400mhz,cd3od)δ7.59(d,j＝8.1hz,1h),7.29(s,2h),6.11(d,j＝19.0hz,1h),5.74(d,j＝8.2hz,1h),5.48–5.35(m,1h),5.03-4.97，(m,1h)，4.52-4.43(m,2h),4.36–4.32(m,1h),4.15–4.10(m,1h),3.91–3.85(m,1h),2.45–2.37(m,1h),1.43-1.36(m,6h),1.24(d,j＝6.2hz,3h),1.22(d,j＝6.0hz,3h),1.08(d,j＝6.2hz,6h)；³¹pnmr(162mhz,cd3od)δ3.35；lcms-esi⁺(m/z):632.4(m+h)⁺.

實(shí)施例55化合物鹽酸鹽的制備

索菲布韋在堿性或酸性條件下都無(wú)法成鹽，在中性的水中溶解度很差。而本發(fā)明中，3’-位用氨基酸酯保護(hù)的化合物可以與酸成鹽，能增加其在水中的溶解度，在制劑上提供便利。

化合物鹽酸鹽的制備：將3’-位用氨基酸酯保護(hù)的化合物(i-02b、i-02c、i-05b、i-05c、i25b、i-25c、i-29b、i-29c、i-31b、ii-03b、ii-03c、ii-13b、iii-03b、iii-03c、iii-13b、iv-03b、iv-03c、iv-13b、v-13b、vi-13b、x-03b、x-03c、xi-03b、xi-05b、xii-03b、xii-05b、xii-07c、xii-08c、xiii-05b)用乙酸乙酯溶解，在0℃下滴加1mhcl的乙酸乙酯溶液，攪拌10min，加入環(huán)己烷，析出沉淀，沉淀用環(huán)己烷洗滌三遍，減壓除去溶劑，干燥得鹽酸鹽產(chǎn)品。

生物學(xué)評(píng)價(jià)

1.本發(fā)明的化合物在hcv復(fù)制子(hcvpp)系統(tǒng)中的抗病毒活性檢測(cè)

hcv復(fù)制子測(cè)定程序

一般程序:使帶有hcv基因型1b復(fù)制子和螢光素酶報(bào)道基因的huh-7來(lái)源的細(xì)胞系(zluc)在補(bǔ)充10％胎牛血清、2mmglutamax、1％mem非必需氨基酸、100iu/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素和0.5mg/ml(g418)的dulbecco改進(jìn)eagle培養(yǎng)基(dmem)中生長(zhǎng)。通過(guò)采用基于脂質(zhì)/組蛋白的轉(zhuǎn)染過(guò)程，用人類羰酸酯酶1(ces1)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染zluc細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24和48小時(shí)后，使用抗ces1和抗標(biāo)簽抗體，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡(westernblot)確認(rèn)ces1的表達(dá)。對(duì)于劑量反應(yīng)測(cè)試，以7.5xl0³個(gè)細(xì)胞/孔，在50μl體積中，將細(xì)胞接種在96孔板，并在37℃/5％co2下孵育。在huh-7培養(yǎng)基中新鮮配制藥物溶液作為2x儲(chǔ)液。在不含g418的dmem中從這些儲(chǔ)液制備10個(gè)另外的5倍稀釋液。在接種huc細(xì)胞后至少3小時(shí)，通過(guò)向板中一式兩份加入50μl的藥物稀釋液以開(kāi)始藥物處理。藥物終濃度的范圍為1oonm-0.0000512nμ。然后將細(xì)胞在37℃/5％co2下孵育?；蛘咭詢煞N濃度(1onm和1oonm)測(cè)試化合物。在所有情況下，huh-7(其未帶有hcv復(fù)制子)用作陰性對(duì)照。在孵育72小時(shí)后,通過(guò)量化通過(guò)螢火蟲(chóng)螢光素酶將5’-氟螢光素單氧合成為氧基氟螢光素(oxyfiuoroluciferin)所發(fā)射的光子,來(lái)測(cè)量hcv復(fù)制的抑制。為此，通過(guò)輕叩，從板中除去培養(yǎng)基，將50微升one-glo螢光素酶測(cè)定試劑加入各孔。在室溫下將板輕輕振蕩3分鐘，使用700nm截止濾波器，在具有1秒鐘讀出時(shí)間的victor³v1420多標(biāo)記記數(shù)器(perkinelmer)上測(cè)量發(fā)光。通過(guò)microsoftexcel和xlfit4.1軟件求出的所得最佳擬合方程式的劑量反應(yīng)曲線計(jì)算ec50值。

對(duì)于細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)，將zluc細(xì)胞用上述化合物處理，采用celltiter-blue細(xì)胞存活力測(cè)定法(promega)，將20μl測(cè)定溶液加入各孔中，來(lái)監(jiān)測(cè)細(xì)胞存活力。然后將板在37℃/5％co2下孵育至少3小時(shí)。分別用560和590nm的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)，在victor³v1420多標(biāo)記記數(shù)器(perkinelmer)中檢測(cè)板的熒光,應(yīng)用microsoftexcel和xlfit4.1軟件求出cc50值。

根據(jù)上述復(fù)制子測(cè)定法測(cè)定下表提供的化合物。

^*索菲布韋是依照參考文獻(xiàn)j.org.chem.2011,76,8311制備

2.實(shí)施例化合物體內(nèi)pk試驗(yàn)數(shù)據(jù)

hcvns5b是一種rna聚合酶，負(fù)責(zé)hcv病毒復(fù)制，復(fù)制所用底物為三磷酸核苷。本發(fā)明的實(shí)施例化合物為磷酰胺酯核苷酸類似物前藥，在肝細(xì)胞內(nèi)代謝生成活性成分三磷酸核苷類似物，從而抑制ns5b的活性和hcv病毒的復(fù)制。作為一個(gè)前藥，體內(nèi)生成三磷酸尿苷類似物的能力與對(duì)ns5b的抑制活性直接相關(guān)聯(lián)，因此發(fā)明人做了體內(nèi)pk試驗(yàn)以檢測(cè)本發(fā)明化合物生成活性藥三磷酸尿苷類似物的能力,體內(nèi)pk試驗(yàn)?zāi)Ｐ蜑閏d-1小鼠體內(nèi)肝臟pk分析。

實(shí)施例化合物在小鼠肝臟內(nèi)代謝生成活性成分2’-甲基-2’-氟代尿苷三磷酸的藥物代謝動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)是用cd-1小鼠進(jìn)行的。給藥為單次灌胃給藥，給藥劑量為10毫克/5毫升/千克。索菲布韋的制劑處方為20％peg200和0.5％羧甲基纖維素鈉；實(shí)施例化合物的制劑處方為30％peg200和0.5％羧甲基纖維素鈉。肝臟樣品的取樣點(diǎn)為給藥后1、2、4、6、12、24小時(shí)。取樣時(shí)，小鼠先用co2處死，通過(guò)肝門靜脈用冰冷的生理鹽水沖洗肝臟，切成大約0.2克的小塊肝臟樣品，在液氮中速凍，并在-80℃中保存。

通過(guò)lc-ms/ms分析肝臟樣品中的活性物種核苷三磷酸。內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)(is)采用美國(guó)trilinkbiotechnologies公司(2’r)-2’-脫氧-2’-甲基-2’-氟尿苷三磷酸，以正離子模式的串聯(lián)質(zhì)譜法在美國(guó)ab公司的api5500型液質(zhì)聯(lián)用儀上對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)及定量,測(cè)得小鼠肝臟活性藥(2’r)-2’-脫氧-2’-甲基-2’-氟尿苷三磷酸的暴露量(2’-deoxy-2’-me-2’-f-utpauc)。

由實(shí)施例中制備的差向異構(gòu)體的測(cè)試結(jié)果表可得知，實(shí)施例化合物中rp構(gòu)型的化合物在肝細(xì)胞中的生成2’-deoxy-2’-me-2’-f-utp的濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于sp構(gòu)型的異構(gòu)體，也遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)同樣劑量的索菲布韋在肝臟中的濃度。所有實(shí)施例中制備的化合物(d-丙氨酸磷酸酯前藥)其體外活性高于索菲布韋(l-丙氨酸磷酸酯前藥)，其體內(nèi)活性更顯著的優(yōu)越于索菲布韋，顯示出極高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

對(duì)照兩對(duì)化合物xii-06c和xii-04b以及x-06c和x-04b，可以看到d-氨基酸酯構(gòu)成的核苷氨基磷酸酯相較于對(duì)應(yīng)的l-氨基酸酯構(gòu)成的核苷氨基磷酸酯具有5倍以上的三核苷酸輸送能力，說(shuō)明本發(fā)明的d-氨基酸酯構(gòu)成的核苷氨基磷酸酯比天然氨基酸酯的前藥更佳的肝靶向成藥性。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的化合物具有高效的抑制hcv病毒的能力，與陽(yáng)性對(duì)照藥索菲布韋相比，體外和體內(nèi)的活性評(píng)價(jià)都下顯示出顯著的優(yōu)越性，本發(fā)明的化合物在測(cè)試的濃度范圍內(nèi)沒(méi)有表現(xiàn)出細(xì)胞毒性，安全性好，對(duì)于治療hcv感染具有極好的前景。

盡管以上已經(jīng)對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的前提下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種修改和改變均在本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的權(quán)利范圍并不限于上文所作的詳細(xì)描述，而應(yīng)歸屬于權(quán)利要求書(shū)。