本發(fā)明涉及刑事現(xiàn)場勘查及法醫(yī)dna檢驗中接觸dna轉(zhuǎn)移提取，具體涉及一種用于載體上粘附接觸dna轉(zhuǎn)移的擦拭試劑。
背景技術(shù)：
：接觸dna是指通過皮膚接觸遺留在客體表面的dna，主要來源于人體皮膚的脫落細胞及皮膚表面的游離dna。目前接觸dna是法醫(yī)dna檢驗的熱點和難點，接觸dna檢驗的成功率顯著低于煙頭、血斑、唾液斑等常規(guī)生物檢材的成功率?，F(xiàn)場勘查人員提取案發(fā)現(xiàn)場接觸dna最為常用的方法是采用棉簽干濕兩步擦拭法，同時棉簽擦拭物在法醫(yī)dna日常檢驗中也占有很大的比例。棉簽干濕兩步擦拭法提取接觸dna時，常用蒸餾水浸濕棉簽后轉(zhuǎn)移粘附于載體上的接觸dna。雖然接觸dna檢驗成功率受載體屬性、接觸時間、遺留時間等多方面因素影響，但這些因素均為不可控因素，因此接觸dna轉(zhuǎn)移效率問題就成為影響接觸dna檢驗成功率的關(guān)鍵性問題，換言之，只有高效率的轉(zhuǎn)移粘附于載體上的接觸dna，才能為接觸dna檢驗的高成功率奠定基礎(chǔ)。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明的目的在于提供一種用于載體上粘附接觸dna轉(zhuǎn)移的擦拭試劑。除特殊說明外，本發(fā)明所述份數(shù)均為重量份，所述百分比均為質(zhì)量百分比，所述濃度為質(zhì)量百分比濃度。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的：本發(fā)明用于載體上接觸dna轉(zhuǎn)移的擦拭試劑，包含表面活性劑和水，其中表面活性劑的濃度為1％～20％；所述表面活性劑為陰離子型表面活性劑、陽離子型表面活性劑或非離子型表面活性劑中的一種或幾種組合。本發(fā)明提供一種能夠高效轉(zhuǎn)移載體上接觸dna的擦拭試劑，能通過棉簽干濕兩步擦拭法使更多量的接觸dna從載體上被轉(zhuǎn)移下來，進而可以提高接觸dna的檢驗成功率。本發(fā)明所述接觸dna為人體皮膚直接或間接接觸的物體上所遺留的dna，主要來源于人體皮膚的脫落細胞及皮膚表面的游離dna，如犯罪嫌疑人在案發(fā)現(xiàn)場使用的工具上、觸摸門把手上、翻動物品上、攀爬欄桿上、遺落佩戴的飾品上、進食使用的餐具上等都會粘附有嫌疑人的dna，即接觸dna。進一步，所述的陽離子型表面活性劑為胺鹽類(如十二烷基硫酸二乙醇胺鹽、十八烷基胺乙酸鹽、十二烷基二甲基氧化胺等)、季銨鹽類(如十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基二甲基芐基氯化銨、十六烷基三甲基氯化銨等)、雜環(huán)型表面活性劑(如十二烷基吡啶氯化銨、咪唑啉乙酸鹽、十八烷基陽離子烷基咪唑啉等)中的一種或幾種組合。進一步，所述的陰離子型表面活性劑為脂肪酸鹽類、磺酸鹽類、硫酸酯鹽類、磷酸酯鹽類表面活性劑中的一種或幾種組合。進一步，所述的非離子型表面活性劑為聚氧乙烯型、多元醇型、烷基醇酰胺型表面活性劑中的一種或幾種組合。優(yōu)選的，本發(fā)明表面活性劑為陰離子型表面活性劑、非離子型表面活性劑中的一種或兩種組合，其濃度為1％～20％。進一步優(yōu)選的，本發(fā)明表面活性劑為陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑的組合物，其濃度為1％～10％，陰離子與非離子表面活性劑重量比為0.5:0.5～9.5:0.5；所述陰離子表面活性劑為磺酸鹽類或硫酸酯鹽類表面活性劑；所述非離子表面活性劑為聚氧乙烯型或多元醇型表面活性劑。最優(yōu)選的，本發(fā)明表面活性劑為陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑的組合物，其濃度為1％～5％，陰離子與非離子表面活性劑重量比為0.5:0.5～4.5:0.5；所述陰離子表面活性劑為烷基苯磺酸鹽(如十二烷基苯磺酸鈉)、鏈烴磺酸鹽(如十六烷基磺酸鈉)、脂肪酸酯磺酸鹽(如脂肪酸甲酯磺酸鈉)、α-烯基磺酸鹽(如α-烯基磺酸鈉)、木質(zhì)素磺酸鹽(如木質(zhì)素磺酸鈉)、琥珀酸酯磺酸鹽(如琥珀酸二異辛酯磺酸鈉)、烷基硫酸鹽(如月桂醇硫酸鈉)、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鹽(如月桂醇聚氧乙烯醚硫酸鈉)中的一種或幾種組合；所述非離子表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚(如壬基酚聚氧乙烯醚)、高碳脂肪醇聚氧乙烯醚(如烷基聚氧乙烯醚)、聚山梨酯(如聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐單棕櫚酸酯、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐單硬脂酸酯)、脂肪酸聚氧乙烯酯、蔗糖酯中的一種或幾種的組合。為了加強dna分子的穩(wěn)定性，及提升表面活性劑間的協(xié)同作用，本發(fā)明用于轉(zhuǎn)移載體上粘附的接觸dna的擦拭試劑還加入濃度為0.1％～3％的輔助添加劑，所述輔助添加劑為氯化鈉、正戊醇、異戊醇、正辛醇、異辛醇中的一種或幾種組合。根據(jù)本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明的目的在于提供上述表面活性劑在載體上粘附接觸dna轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用,所述載體包括木頭材質(zhì)、塑料材質(zhì)、石頭材質(zhì)、金屬材質(zhì)、玻璃材質(zhì)、陶瓷材質(zhì)、橡膠材質(zhì)、硬紙材質(zhì)、皮革材質(zhì)等質(zhì)地較硬的非滲透性載體，如螺絲刀、刀具、棍棒、玻璃杯、包裝盒、錢包、飲料瓶、大理石等。有益效果：本發(fā)明提供了一種提高接觸dna轉(zhuǎn)移效率的擦拭試劑，通過有效提升接觸dna的轉(zhuǎn)移效率，進而提升接觸dna的檢驗成功率，對于充分發(fā)揮接觸dna在案件偵破、打擊犯罪、固定證據(jù)中強有力的技術(shù)支撐作用具有重要意義，在現(xiàn)場勘查生物物證提取及法醫(yī)dna檢驗中具有重要的應(yīng)用價值。本發(fā)明的擦拭試劑對粘附于不同類型載體上(木頭材質(zhì)、塑料材質(zhì)、石頭材質(zhì)、金屬材質(zhì)、玻璃材質(zhì)、陶瓷材質(zhì)、橡膠材質(zhì)、硬紙材質(zhì)、皮革材質(zhì))的接觸dna的轉(zhuǎn)移效率可達60％～90％，與常規(guī)干濕兩步法相比，轉(zhuǎn)移效率可提升40％～60％。本發(fā)明的擦拭試劑浸濕棉簽后擦拭載體，棉簽對載體有較好的潤濕效果，特別是進行較大面積擦拭時，能夠保持對載體的持續(xù)潤濕。本發(fā)明的擦拭試劑除可提高載體上接觸dna轉(zhuǎn)移效率以外，還與法醫(yī)dna檢驗中的接觸dna提取純化、pcr擴增、毛細管電泳檢測的方法和試劑具有良好的兼容性，對檢測結(jié)果無不良影響。具體實施方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進行具體描述，在此指出以下實施例只用于對本發(fā)明進行進一步說明，不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)上述
發(fā)明內(nèi)容對本發(fā)明作出一些非本質(zhì)的改進和調(diào)整。本發(fā)明所有原料及試劑均為市售產(chǎn)品，其中m48磁珠試劑盒是購買自德國qiagen公司的m48dnamanualkit(200)。本發(fā)明的熒光定量分析，及pcr擴增，毛細管電泳檢測檢測方法為：熒光定量：按體積比1:199的比例配置reagent和buffer混合液，渦旋震蕩3秒，取190μl混合液加入樣品管中，再向樣品管中加入10μldna模板，渦旋震蕩3秒，室溫下靜置2分鐘，放入3.0熒光計(thermofisher，美國)中進行熒光定量分析；pcr擴增：采用identifiler-plus試劑盒(abi，美國)按表1的pcr擴增體系，表2的pcr擴增程序進行pcr擴增反應(yīng)；毛細管電泳檢測：取1μlpcr擴增產(chǎn)物加入到96孔板中，每孔中再加入9μl配制好的甲酰胺和liz600(體積比160:2.5)的混合液，混勻后將96孔板放入abi3500型遺傳分析儀(abi，美國)進行毛細管電泳檢測，用genemapperid-xv1.2基因軟件進行數(shù)據(jù)分析。表1pcr擴增反應(yīng)體系反應(yīng)成分反應(yīng)體積mastermix4μlprimerset2μldna模板4μl表2pcr擴增反應(yīng)程序?qū)嵤├?擦拭試劑的配置用電子天平稱取2.0g十二烷基苯磺酸鈉(陰離子表面活性劑)加入燒杯中，再向燒杯中加入1.0g聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯(非離子表面活性劑)，再加入0.5g氯化鈉(輔助添加劑)，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。實施例2擦拭試劑對玻璃上游離dna的轉(zhuǎn)移效果分別向經(jīng)過消毒、滅菌、滅dna處理的載玻片上滴加濃度為0.08ng/μl的游離dna20μl、30μl、50μl，室溫下放置2小時待游離dna干燥，處理組用棉簽蘸取擦拭試劑后干濕兩步法擦拭載玻片上粘附的游離dna，對照組以常規(guī)干濕兩步法進行擦拭。m48磁珠試劑盒對上述棉簽擦拭物進行提取純化后，進行熒光定量分析，及pcr擴增，毛細管電泳檢測。表3處理組與對照組對游離dna轉(zhuǎn)移效率的比較分組初始量(ng)回收量(ng)轉(zhuǎn)移效率提升效率處理11.601.3987％50％對照11.600.5937％/處理22.402.0083％48％對照22.400.8535％/處理34.003.3885％53％對照34.001.2832％/表3表明采用本發(fā)明中的擦拭試劑干濕兩步法轉(zhuǎn)移粘附于玻璃上的游離dna效率可達80％以上，與傳統(tǒng)干濕兩步法相比轉(zhuǎn)移效率可提升48％～53％。經(jīng)過毛細管電泳檢測，genemapperid-xv1.2基因軟件數(shù)據(jù)分析，處理組均能成功獲得與對照組相一致的16個str基因座基因分型結(jié)果，表明使用本發(fā)明中的擦拭試劑轉(zhuǎn)移載體上粘附的游離dna后，對dna的提取純化、pcr擴增、毛細管電泳檢測結(jié)果均無不良影響。實施例3擦拭試劑對玻璃上脫落細胞的轉(zhuǎn)移效果分別向消毒、滅菌、滅dna處理的載玻片上滴加可提取dna濃度為0.15ng/μl的脫落細胞懸液20μl、30μl、50μl，室溫下放置2小時待脫落細胞懸液干燥，處理組用棉簽蘸取擦拭試劑后干濕兩步法擦拭載玻片上粘附的脫落細胞，對照組以常規(guī)干濕兩步法進行擦拭。m48磁珠試劑盒對上述棉簽擦拭物進行提取純化后，進行熒光定量分析，及pcr擴增，毛細管電泳檢測。表4處理組與對照組對脫落細胞轉(zhuǎn)移效率的比較分組初始量(ng)回收量(ng)轉(zhuǎn)移效率提升效率處理13.002.5284％40％對照13.001.3244％/處理24.503.9287％42％對照24.502.0345％/處理37.56.2583％40％對照37.53.2443％/表4表明采用本發(fā)明中的擦拭試劑干濕兩步法轉(zhuǎn)移粘附于玻璃上的脫落細胞效率可達80％以上，與傳統(tǒng)干濕兩步法相比轉(zhuǎn)移效率可提升40％～42％。經(jīng)過毛細管電泳檢測，genemapperid-xv1.2基因軟件數(shù)據(jù)分析，處理組均能成功獲得與對照組相一致的16個str基因座基因分型結(jié)果，表明使用本發(fā)明中的擦拭試劑轉(zhuǎn)移載體上粘附的脫落細胞后，對dna的提取純化、pcr擴增、毛細管電泳檢測結(jié)果均無不良影響。實施例4擦拭試劑對螺絲刀上粘附的接觸dna的轉(zhuǎn)移效果10把同樣規(guī)格型號經(jīng)過消毒、滅菌、滅dna處理的螺絲刀，由5名已檢測str基因分型、身體健康的志愿者任意選取2把，同時抓握在右手中摩擦1分鐘，每名志愿抓握后的螺絲刀其中1把用擦拭試劑干濕兩步法擦拭作為處理組，另一把用常規(guī)干濕兩步法擦拭作為對照組，兩組均用m48磁珠試劑盒提取純化后，進行熒光定量分析，另取處理組模板dna進行pcr擴增，毛細管電泳檢測。表5處理組與對照組對螺絲刀上粘附的接觸dna轉(zhuǎn)移效果的比較從表5得出，處理組轉(zhuǎn)移螺絲刀上接觸dna的平均量是對照組的2.4倍；以上數(shù)據(jù)經(jīng)spssv18.0軟件進行樣本配對t檢驗，結(jié)果顯示，擦拭試劑處理與常規(guī)擦拭對照存在顯著性差異(p＜0.01)，表明使用本發(fā)明擦拭試劑干濕兩步法轉(zhuǎn)移載體上的接觸dna要顯著優(yōu)于常規(guī)干濕兩步法。經(jīng)過毛細管電泳檢測，genemapperid-xv1.2基因軟件數(shù)據(jù)分析，處理組成功獲得5名名志愿者的16個str基因座基因分型結(jié)果，表明使用本發(fā)明中的擦拭試劑轉(zhuǎn)移載體上粘附的接觸dna后，對dna的提取純化、pcr擴增、毛細管電泳檢測結(jié)果均無不良影響。參照實施例1的制備方法，按照下表6運行實施例5-11，制備本發(fā)明用于載體上接觸dna轉(zhuǎn)移的擦拭試劑。其中實施例5表面活性劑的濃度為1.0％，輔助添加劑的濃度為0.1％；實施例6表面活性劑的濃度為2.0％，輔助添加劑的濃度為0.5％；實施例7表面活性劑的濃度為3.5％，輔助添加劑的濃度為0.9％；實施例8表面活性劑的濃度為4.5％，輔助添加劑的濃度為1.5％；實施例9表面活性劑的濃度為5.0％，輔助添加劑的濃度為2.0％；實施例10表面活性劑的濃度為7.0％，輔助添加劑的濃度為2.5％；實施例11表面活性劑的濃度為10.0％，輔助添加劑的濃度為3.0％。表6接觸dna擦拭試劑不同配置方法參照實施例2-4的實驗方法，檢測本發(fā)明實施例5-11制備的擦拭試劑的對不同屬性載體上接觸dna的轉(zhuǎn)移效果。具體見下表7。表7擦拭試劑對不同屬性載體上接觸dna的轉(zhuǎn)移效果表7表明采用施例5-11中的擦拭試劑干濕兩步法對粘附于不同屬性載體上的游離dna的轉(zhuǎn)移效率達到65％～90％，對粘附于不同屬性載體上的脫落細胞的轉(zhuǎn)移效率達到70％～88％；在其他影響因素固定的條件下，對不同屬性載體上志愿者所遺留的接觸dna的轉(zhuǎn)移效果，擦拭試劑處理與常規(guī)干濕擦拭對照均存在顯著性差異(p＜0.01)，其表明使用施例5-11的擦拭試劑干濕兩步法對粘附于不同屬性載體上的接觸dna的轉(zhuǎn)移效果要顯著優(yōu)于常規(guī)干濕兩步擦拭法。同時經(jīng)熒光定量分析，及pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測實驗顯示本發(fā)明擦拭試劑與法醫(yī)dna檢驗中的接觸dna提取純化、pcr擴增、毛細管電泳檢測的方法和試劑具有良好的兼容性，對檢測結(jié)果無不良影響。參照實施例1的制備方法，制備實施例12-19的本發(fā)明擦拭試劑。實施例12擦拭試劑的配置用電子天平稱取3.0g十二烷基二甲基氧化胺(陽離子表面活性劑)加入燒杯中，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。采用實施例2-4的檢測方法，檢測結(jié)果為對載玻片上游離dna轉(zhuǎn)移效率為55％；對脫落細胞轉(zhuǎn)移效率為58％。實施例13擦拭試劑的配置用電子天平稱取3.0g十二烷基二甲基芐基氯化銨(陽離子表面活性劑)加入燒杯中，再加入0.5g氯化鈉(輔助添加劑)，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。采用實施例2-4的檢測方法，檢測結(jié)果為對載玻片上游離dna轉(zhuǎn)移效率為56％；對脫落細胞轉(zhuǎn)移效率為59％。實施例14擦拭試劑的配置用電子天平稱取3.0g如十六烷基三甲基溴化銨(陽離子表面活性劑)加入燒杯中，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。采用實施例2-4的檢測方法，檢測結(jié)果為對載玻片上游離dna轉(zhuǎn)移效率為59％；脫落細胞轉(zhuǎn)移效率為64％。實施例15擦拭試劑的配置用電子天平稱取2.0g十六烷基三甲基溴化銨(陽離子表面活性劑)加入燒杯中，再向燒杯中加入1.0g聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯(非離子表面活性劑)，再加入0.5g氯化鈉(輔助添加劑)，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。采用實施例2-4的檢測方法，檢測結(jié)果為對載玻片上游離dna轉(zhuǎn)移效率為75％；對脫落細胞轉(zhuǎn)移效率為72％。實施例16擦拭試劑的配置用電子天平稱取3.0g十六烷基磺酸鈉(陰離子表面活性劑)加入燒杯中，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。采用實施例2-4的檢測方法，檢測結(jié)果為對載玻片上游離dna轉(zhuǎn)移效率為77％；對脫落細胞轉(zhuǎn)移效率為76％。實施例17擦拭試劑的配置用電子天平稱取3.0g聚氧乙烯山梨醇酐單硬脂酸酯(非離子表面活性劑)加入燒杯中，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。采用實施例2-4的檢測方法，檢測結(jié)果為對載玻片上游離dna轉(zhuǎn)移效率為72％；對脫落細胞轉(zhuǎn)移效率為69％。實施例18擦拭試劑的配置用電子天平稱取5.0g木質(zhì)素磺酸鈉(陰離子表面活性劑)加入燒杯中，再向燒杯中加入5.0g月桂醇聚氧乙烯醚硫酸鈉(陰離子表面活性劑)、再向燒杯中加入5.0g蔗糖酯(非離子表面活性劑)，再加入3.0g氯化鈉(輔助添加劑)，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。采用實施例2-4的檢測方法，檢測結(jié)果為對載玻片上游離dna轉(zhuǎn)移效率為80％；對脫落細胞轉(zhuǎn)移效率為82％。實施例19擦拭試劑的配置用電子天平稱取10.0g脂肪酸甲酯磺酸鈉(陰離子表面活性劑)加入燒杯中，再向燒杯中加入5.0g烷基聚氧乙烯醚(非離子表面活性劑)、再向燒杯中加入5.0g脂肪酸聚氧乙烯酯(非離子表面活性劑)，再加入2.0g氯化鈉(輔助添加劑)和1.0g異戊醇(輔助添加劑)，再加入超純水補足至100.0g，用玻璃棒攪拌均勻，吸取20μl試劑溶液用m48磁珠試劑盒提取純化后，pcr擴增，毛細管電泳檢測，檢測無外源dna后，將試劑分裝至1.5mlep管中備用。采用實施例2-4的檢測方法，檢測結(jié)果為對載玻片上游離dna轉(zhuǎn)移效率為79％；對脫落細胞轉(zhuǎn)移效率為80％。本發(fā)明用于載體上粘附接觸dna轉(zhuǎn)移的擦拭試劑，能通過棉簽干濕兩步擦拭法使更多量的接觸dna從載體上被轉(zhuǎn)移下來，進而可以提高接觸dna的檢驗成功率，對于充分發(fā)揮接觸dna在案件偵破、打擊犯罪、固定證據(jù)中強有力的技術(shù)支撐作用具有重要意義，在現(xiàn)場勘查生物物證提取及法醫(yī)dna檢驗中具有重要的應(yīng)用價值。本發(fā)明的擦拭試劑對粘附于不同類型載體上(木頭材質(zhì)、塑料材質(zhì)、石頭材質(zhì)、金屬材質(zhì)、玻璃材質(zhì)、陶瓷材質(zhì)、橡膠材質(zhì)、硬紙材質(zhì)、皮革材質(zhì))的接觸dna的轉(zhuǎn)移效率可達60％～90％，與常規(guī)干濕兩步法相比，轉(zhuǎn)移效率可提升40％～60％。本發(fā)明的擦拭試劑浸濕棉簽后擦拭載體，棉簽對載體有較好的潤濕效果，特別是進行較大面積擦拭時，能夠保持對載體的持續(xù)潤濕。本發(fā)明的擦拭試劑除可提高載體上接觸dna轉(zhuǎn)移效率以外，還與法醫(yī)dna檢驗中的接觸dna提取純化、pcr擴增、毛細管電泳檢測的方法和試劑具有良好的兼容性，對檢測結(jié)果無不良影響。當前第1頁12