本發(fā)明屬于日用化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于洗衣液中穩(wěn)定蛋白酶的方法。
背景技術(shù)：
洗衣液富含陰離子表面活性劑、兩性表面活性劑和非離子表面活性劑，其中陰離子表面活性劑是主要去污成分。為了改善洗衣液的洗滌性能，特別是為了有效去除血漬等含蛋白污漬，需要在洗衣液配方中加入蛋白酶。但是，蛋白酶容易受到外界環(huán)境如光、熱和ph等影響，特別是在洗衣液中的陰離子表面活性劑水溶液這樣既有大量水分又有大量表面活性劑的環(huán)境下，不能像洗衣粉中那樣相對(duì)比較穩(wěn)定地存在于包埋體中，而易與配方中的表面活性劑和漂白劑發(fā)生作用；在洗衣液中加入各種穩(wěn)定劑能夠在一段時(shí)間內(nèi)減緩酶的失活。常見(jiàn)的洗衣液中穩(wěn)定蛋白酶的方法有加入甘油、山梨醇、硅藻土等穩(wěn)定劑或者其他合成穩(wěn)定劑，目前較好的穩(wěn)定劑也只能在8周內(nèi)保持酶活為初始酶活的40%-50%，需要在洗衣液配方中多加很多蛋白酶。
利用成膜材料將蛋白酶包覆起來(lái)，也可以提高蛋白酶在貨架期的穩(wěn)定性。例如用瓜爾膠或海藻酸（或其鹽）等大分子多糖來(lái)包埋蛋白酶、或者固定化蛋白酶在載體的表面。這些方法都能夠使蛋白酶在洗衣液中有一定的穩(wěn)定性，但是仍然不夠理想：比如固定化在載體表面的蛋白酶在濃縮液中仍然不敵水溶液中的表面活性劑，往往只能用于加酶洗衣粉中；此外，海藻酸鹽等包埋或表面固載的蛋白酶體系通常會(huì)降低酶活而且需要半小時(shí)才能釋放一半酶活，這遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)了通常的家用洗滌時(shí)間。
液體加酶洗滌劑中則常常需要用特殊的合成化學(xué)品來(lái)包埋蛋白酶。其關(guān)鍵問(wèn)題在于，怎樣能夠形成穩(wěn)定包埋物的體系，在洗滌環(huán)境中又不一定能夠迅速崩解。因此，液體加酶洗滌劑中，理想的蛋白酶包埋體系除了要保障穩(wěn)定的蛋白酶酶活，還要能夠在洗滌劑產(chǎn)品的液體形態(tài)中穩(wěn)定，更要在洗滌環(huán)境下迅速崩解。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供了一種用于洗衣液中穩(wěn)定蛋白酶的方法，具有包埋率高，包埋量大，蛋白酶穩(wěn)定性好，包埋體在洗滌環(huán)境中能夠迅速釋放蛋白酶，對(duì)中性和堿性蛋白酶都能適用的特點(diǎn)。
本發(fā)明以部分交聯(lián)的共軛亞油酸為囊材來(lái)制備在洗衣液中穩(wěn)定的加酶囊泡，而在洗滌環(huán)境下迅速解析出蛋白酶；其工作原理如下所述。
本發(fā)明使用的共軛亞油酸鹽屬于脂肪酸鹽，即皂，是良好的陰離子表面活性劑，和洗衣液中的兩性、陰離子表面活性劑可以配伍。脂肪酸（鹽）本身或在助表面活性劑存在下可以形成脂肪酸囊泡，因此有望是良好的囊材。而脂肪酸囊泡尤其是不飽和脂肪酸囊泡，是類(lèi)脂質(zhì)體膠體分散體系，是難得的安全且與人體相容的生物活性分子載體。
國(guó)際上對(duì)不飽和酸如油酸的囊泡化行為以及生物作用的分子機(jī)理研究較多，而對(duì)穩(wěn)定化囊泡的技術(shù)研究還在基礎(chǔ)階段。這是因?yàn)橹舅?鹽)通常僅在其pka附近自組裝成囊泡，但即便在普通環(huán)境中都只能在短時(shí)間內(nèi)并且無(wú)包埋物的前提下穩(wěn)定存在，而且囊泡在不同應(yīng)用環(huán)境的穩(wěn)定化又是很大的挑戰(zhàn)；更何況還有空腔容積大小的適應(yīng)性問(wèn)題。
共軛亞油酸具有有益生理活性，因此目前共軛亞油酸作為芯材被微膠囊包埋的研究報(bào)道較多，常見(jiàn)的多以阿拉伯膠、明膠、交聯(lián)蛋白等為壁材，用噴霧干燥制備微膠囊包埋共軛亞油酸；這些都是用于口服共軛亞油酸的保健品制備方法，不適合于洗衣液中保存蛋白酶。
而另一方面，共軛亞油酸在一定條件下可以發(fā)生部分交聯(lián)。交聯(lián)的共軛亞油酸有可能兼具亞油酸和大分子的特征，有可能在一定條件下作為壁材形成囊泡，并且和洗衣液中的表面活性劑相容；但是要能夠作為壁材而非芯材，形成可包埋蛋白酶并且在洗衣液產(chǎn)品形態(tài)中保持相對(duì)穩(wěn)定、在洗滌環(huán)境下解體的載酶囊泡，依然是個(gè)棘手的限制性問(wèn)題。
我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，共軛亞油酸自組裝成囊泡以后，通過(guò)將囊泡壁層的共軛亞油酸部分交聯(lián)，可以獲得比共軛亞油酸囊泡更大更穩(wěn)定的囊泡，即部分交聯(lián)的共軛亞油酸囊泡。這種部分交聯(lián)的共軛亞油酸囊泡不僅比共軛亞油酸囊泡更穩(wěn)定，也比混有油酸的交聯(lián)共軛亞油酸囊泡穩(wěn)定，而且所穩(wěn)定的ph范圍得以擴(kuò)大。此外，低濃度鈣離子環(huán)境下（例如低于50ppm以碳酸鈣計(jì)算的硬度）可以制備空腔容積比無(wú)鈣離子誘導(dǎo)時(shí)大一個(gè)數(shù)量級(jí)的囊泡；但最有意義的是，在一定范圍交聯(lián)度、一定范圍酸堿環(huán)境和相對(duì)低濃度鈣離子環(huán)境下所形成的特定囊泡，可以在此低濃度鈣離子環(huán)境下穩(wěn)定，但是在一定程度的高濃度鈣離子存在下（例如高于90ppm以碳酸鈣計(jì)算的硬度，也就是常規(guī)洗滌環(huán)境下即居民用自來(lái)水中）解體。通常洗衣液配方中不含有刻意加入的鈣離子，而洗滌環(huán)境下的自來(lái)水硬度一般在100-250ppm(以碳酸鈣計(jì)算)。這就提供了一種可能性，以開(kāi)發(fā)滿足上述要求的、以交聯(lián)共軛亞油酸囊泡作為壁材包埋蛋白酶、并且在洗衣液的產(chǎn)品形態(tài)中保持相對(duì)穩(wěn)定、繼而又能在硬水洗滌環(huán)境下解體釋放蛋白酶的載酶囊泡。
本發(fā)明提供了一種用于洗衣液中穩(wěn)定蛋白酶的方法：先將共軛亞油酸和蛋白酶在一定ph值和較低鈣離子濃度下自組裝成包埋蛋白酶的囊泡，再將囊泡表層的共軛亞油酸部分交聯(lián),得到的蛋白酶囊泡包埋體經(jīng)過(guò)濃縮后可以直接用于洗衣液配方中。如此獲得的包埋體在洗衣液中能夠抵御高濃度表面活性劑的酶活抑制，而且能夠在更高鈣離子濃度下如洗滌用水的環(huán)境中會(huì)解體，釋放出蛋白酶；本發(fā)明提供的方法對(duì)中性和堿性蛋白酶都能適用。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
本發(fā)明用于洗衣液中穩(wěn)定蛋白酶的方法具體步驟為：室溫下將一定量的共軛亞油酸和鈣鹽溶解于一定ph值的緩沖液中混合均勻后，加入蛋白酶溶液，混合均勻后于一定溫度下用搖床輕微振蕩一段時(shí)間至包埋率不再上升后，即得到包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液。將100ml上述溶液于配置磁力攪拌的250ml具塞圓柱體玻璃反應(yīng)器（高徑比為2：1）中，避光加入一定量的[3-(3,4-二甲基-9-氧代-9-氫-噻噸-2-氧基)-2-羥丙基]三甲基氯化銨(qtx)溶液，通氮20-40分鐘以排出瓶中的氧氣后，將瓶口密封。攪拌下，用紫外點(diǎn)光源于一定溫度下輻照引發(fā)共軛亞油酸組裝體的部分交聯(lián)，到達(dá)一定交聯(lián)度后停止輻照；即得到包埋蛋白酶的部分交聯(lián)共軛亞油酸囊泡溶液。所得到的包埋體溶液經(jīng)過(guò)濃縮后可以直接用于洗衣液中，被包埋的蛋白酶在洗滌環(huán)境下會(huì)直接釋放出來(lái)，可以延長(zhǎng)洗衣液中蛋白酶的貨架時(shí)間。
所述的一定量的共軛亞油酸和鈣鹽，是指共軛亞油酸溶液的最終濃度為200-600mmol·l-1(55.6-139g·l-1)，鈣鹽的終濃度為0.1-0.30mmol?l-1，鈣鹽終濃度優(yōu)選0.2mmol?l-1。
所述的一定ph值的緩沖液，是指0.01mol·l-1、ph7.0-10.0的緩沖液；對(duì)緩沖液的陰離子沒(méi)有特別要求（醋酸鹽體系除外），優(yōu)選含檸檬酸或檸檬酸鹽的體系，但緩沖液中的陽(yáng)離子不宜為鈉、鉀或銨以外的離子。
所述的鈣鹽為檸檬酸鈣、四水檸檬酸鈣、二檸檬酸三鈣中的一種或兩種，優(yōu)選四水檸檬酸鈣；也可以使用氯化鈣，但氯化鈣的效果不如上述檸檬酸鈣。
所述的蛋白酶溶液為市售中性或堿性蛋白酶溶液，粉劑產(chǎn)品則需根據(jù)其產(chǎn)品說(shuō)明用相應(yīng)的最佳使用ph值的緩沖液溶解。由于各種商品酶制劑的酶活不一，濃度不一，但包埋量是依據(jù)蛋白質(zhì)濃度的，加入量建議不超過(guò)600mg蛋白/g共軛亞油酸，技術(shù)人員可根據(jù)其所使用的蛋白酶在此基礎(chǔ)上適當(dāng)增減濃度。
所述洗衣液指以表面活性劑為主體的濃縮洗衣液，表面活性劑中活性物濃度在20wt%-50wt%之間。
所述的混合均勻后于一定溫度下用搖床輕微振蕩，是指20-300c。
所述的輕微振蕩，是指搖床振蕩速度不高于50rpm。
所述的一定量的[3-(3,4-二甲基-9-氧代-9-氫-噻噸-2-氧基)-2-羥丙基]三甲基氯化銨(qtx)溶液，是指溶劑為與共軛亞油酸溶液相同的緩沖液，qtx的用量為共軛亞油酸的0.05wt%-0.12wt%，優(yōu)選0.10wt%。
所述的用紫外點(diǎn)光源于一定溫度下輻照，對(duì)紫外點(diǎn)光源沒(méi)有特別要求，專業(yè)紫外點(diǎn)光源生產(chǎn)的產(chǎn)品均可使用（例如：powerarcuv100型高強(qiáng)度點(diǎn)光源，350-450nm，主波峰365nm；功率200w；光照強(qiáng)度16w/cm2；uv-led點(diǎn)光源，波長(zhǎng)365nm；功率60w；光照強(qiáng)度8w/cm2；lt-102型固化機(jī)，250-370nm；功率1-2kw，功率可調(diào)。）；紫外點(diǎn)光源反應(yīng)器距點(diǎn)光源的距離可以由技術(shù)人員根據(jù)其所選的其它技術(shù)參數(shù)如光強(qiáng)、反應(yīng)物量、光照時(shí)間自行調(diào)節(jié)，以交聯(lián)度決定反應(yīng)終點(diǎn)。
所述的到達(dá)一定交聯(lián)度后停止輻照，是指交聯(lián)度為35%-50%；高于此交聯(lián)度時(shí)，對(duì)水質(zhì)碳酸鈣硬度低于80ppm的少數(shù)地區(qū)，完全釋放時(shí)間變慢到1.5min-2.5min，對(duì)使用效果影響不大；不適合于人為的、特定軟水洗滌。
包埋率可用常規(guī)方法測(cè)定：分別測(cè)定包埋中加入游離酶的總活性以及微膠囊化后上清液酶的活性，按下列公式計(jì)算蛋白酶的包埋率：
包埋率=（初始加入酶的總活性-上清液的酶總活性）×100%/初始加入酶的總活性。酶活測(cè)定可以使用最方便和普遍的fulin酪蛋白法，或者用供應(yīng)商提供的酶活測(cè)定方法，可由技術(shù)人員自行選擇。
一定時(shí)間后的酶活釋放率指一定時(shí)間后，(自來(lái)水洗滌體系中的測(cè)得的總酶活/初始加入自來(lái)水洗滌體系中酶的計(jì)算總活性)×100%。
一定時(shí)間后的酶活保持率指一定時(shí)間后，(洗衣液中的測(cè)得的總酶活/初始加入洗衣液中的酶的計(jì)算總活性)×100%。
酶的計(jì)算總活性指按照原測(cè)定的游離酶或固定化酶比活和重量計(jì)算的酶活。
交聯(lián)度可用以下方法測(cè)定和計(jì)算：將上述囊泡溶液用ph8.6的緩沖液稀釋至0.06mmol/l，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)其在234nm處的吸光度a234。根據(jù)共軛亞油酸溶液的紫外吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線判斷測(cè)定時(shí)反應(yīng)后溶液的共軛亞油酸濃度，并根據(jù)此殘留共軛亞油酸濃度計(jì)算其交聯(lián)度：
交聯(lián)度=（反應(yīng)前溶液的共軛亞油酸濃度-反應(yīng)后溶液的共軛亞油酸濃度）×100%/反應(yīng)前溶液的共軛亞油酸濃度。
本發(fā)明的有益效果：
（1）利用包埋體在洗衣液產(chǎn)品中和洗衣液使用環(huán)境下的鈣離子濃度的差異，分別達(dá)到穩(wěn)定包埋體和迅速解體包埋體以釋放蛋白酶的目的，產(chǎn)品使用簡(jiǎn)單易行；
（2）囊泡通過(guò)部分交聯(lián)穩(wěn)定，不需要加入其它非離子表面活性劑或助表面活性劑以穩(wěn)定囊泡；
（3）適用對(duì)象寬，對(duì)中性和堿性蛋白酶都能適用；
（4）包埋率高，蛋白酶在高濃度洗衣液中的穩(wěn)定性顯著提高；
（5）包埋體在高濃度洗衣液產(chǎn)品形態(tài)中的穩(wěn)定性也高，所使用的共軛亞油酸鹽自身也是有去污作用的表面活性劑，在洗衣液中相容性好，比果膠和海藻酸鈉等大分子多糖的包埋和釋放效果好；
（6）制備方法也簡(jiǎn)單易行，所采用的設(shè)備和合成方法都是常用的手段。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1-3中使用的洗衣液配方如下(所述配比為原料折干后重量百分比)：aes(脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸鈉)，21.5%；aeo-7(脂肪醇聚氧乙烯醚-7)，2.5%；aeo-9(脂肪醇聚氧乙烯醚-9)，2.5%；檸檬酸三鈉，3.5%；聚醚消泡劑，0.05%；檸檬酸，0.1%；nacl，0.5%；熒光增白劑，0.14%；開(kāi)松，0.05%；香精（檸檬香)，0.1%，余量為水，ph7.5。
實(shí)施例4-6中使用的洗衣液配方如下(所述配比為原料折干后重量百分比)：aes，29%；椰子油聚氧乙烯醚-9，8%；aeo-9，5.5%；aeo-7，2.5%；檸檬酸三鈉3.5%；聚醚消泡劑0.05%；檸檬酸0.1%；nacl0.5%；熒光增白劑0.14%；開(kāi)松0.05%；香精（檸檬香）0.1%，余量為水，ph7.4。
上述洗衣液配方與大多數(shù)商品洗衣液類(lèi)似，技術(shù)人員也可以自行開(kāi)發(fā)，洗衣液配方對(duì)本發(fā)明提供的蛋白酶穩(wěn)定方法的效果的影響不大。以下實(shí)施例所使用的蛋白酶均來(lái)自市售蛋白酶，有些經(jīng)實(shí)驗(yàn)室濃縮處理。本發(fā)明方法不限于以下蛋白酶。
實(shí)施例1
制備包埋堿性蛋白酶2709(909.1mg蛋白/g，邢臺(tái)思倍特生物科技有限公司)的囊泡，具體步驟如下：
1）室溫下將5.76g共軛亞油酸溶解于100ml含0.25mmol/l檸檬酸鈣的磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液（ph8.6，0.01mol/l）中，共軛亞油酸的濃度為200mmol·l-1；混合均勻后，加入堿性蛋白酶2709溶液，蛋白酶的加入量為500mg蛋白/g共軛亞油酸(550mg蛋白酶制劑/g共軛亞油酸)，混合均勻后于250c下用搖床避光振蕩4h(搖床轉(zhuǎn)速50rpm)，即得到包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液，包埋率為91.2%；
2）將100ml上述溶液于配置磁力攪拌的250ml具塞圓柱體玻璃反應(yīng)器（高徑比為2：1）中，避光加入共軛亞油酸的質(zhì)量0.05%的qtx溶液，通氮約半小時(shí)以排出瓶中的氧氣后，將瓶口密封。攪拌下，用紫外點(diǎn)光源于250c下輻照20min，停止輻照，交聯(lián)度為36.2%，得到包埋蛋白酶的部分交聯(lián)共軛亞油酸囊泡溶液。
將此溶液凍干濃縮到10%水含量后，所得到的蛋白酶囊泡包埋體以2wt%直接加入上述洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為85%；6個(gè)月后酶活保持率為55%。取1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中(總硬度以碳酸鈣計(jì)為98ppm)，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.01%。
對(duì)照例1：直接將堿性蛋白酶2709加入洗衣液中
將0.5克堿性蛋白酶2709加入100克洗衣液中，混合均勻；250c下8周后，酶活保持率為45%，6個(gè)月后酶活保持率為38%。將1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中，250c下，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.2%。
對(duì)照例2：用海藻酸鈉和氯化鈣固定化堿性蛋白酶2709
取1.5克堿性蛋白酶2709溶液加入到100ml3%的海藻酸鈉溶液中，充分?jǐn)嚢杈鶆?，用滅菌后的注射器吸入上述混合液緩慢滴?%的氯化鈣溶液中，得到凝膠微球；將此凝膠微球溶液于40c下靜置過(guò)夜，使其進(jìn)一步硬化，然后抽濾得到硬化的凝膠微球。用無(wú)菌生理鹽水洗滌3次以洗去表面的氯化鈣，晾干。將10g上述微球加入100g上述洗衣液中，混合均勻后備用；250c下8周后，酶活保持率為46.8%，6個(gè)月后酶活保持率為35%。將1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中，250c下，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為10.2%。
實(shí)施例2
制備包埋粘質(zhì)賽氏堿性蛋白酶(930.2mg蛋白/g，來(lái)自粘質(zhì)賽氏菌)的囊泡，具體步驟如下：
1）室溫下將共軛亞油酸和檸檬酸鈣溶解于0.01mol/l的硼砂緩沖液（ph9.18）中混合均勻，共軛亞油酸的濃度為240mmol/l，鈣鹽的濃度為0.15mmol/l；加入粘質(zhì)賽氏堿性蛋白酶，蛋白酶的加入量為560mg蛋白/g共軛亞油酸，混合均勻后于20℃下用搖床振蕩7h，搖床的振蕩速度為40rpm，自組裝得到包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液，包埋率為92.3%；
（2）將步驟（1）得到的自組裝包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液置于反應(yīng)器中，避光加入qtx的用量為共軛亞油酸質(zhì)量的0.06%，向反應(yīng)器中通入氮?dú)?0分鐘，將反應(yīng)器瓶口密封；對(duì)反應(yīng)器中混合溶液進(jìn)行攪拌，攪拌的同時(shí)用紫外點(diǎn)光源輻照引發(fā)共軛亞油酸組裝體的部分交聯(lián)，交聯(lián)度為45%時(shí)停止輻照，得到包埋蛋白酶的部分交聯(lián)共軛亞油酸囊泡溶液，將此溶液凍干濃縮到10%水含量后，所得到的蛋白酶囊泡包埋體以2wt%直接加入上述洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為90.6%。將1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中(總硬度以碳酸鈣計(jì)為115ppm)，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為99.8%。
對(duì)照例：直接將粘質(zhì)賽氏堿性蛋白酶加入洗衣液中
將0.65g粘質(zhì)賽氏堿性蛋白酶加入100克洗衣液中，混合均勻；250c下8周后，酶活保持率為43.4%。將1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中，250c下，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.6%。
實(shí)施例3
制備包埋中性蛋白酶1398(905.7mg蛋白/g，邢臺(tái)思倍特生物科技有限公司)的囊泡，具體步驟如下：
（1）室溫下將共軛亞油酸和四水檸檬酸鈣溶解于0.01mol/l的ph8的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液中，共軛亞油酸的濃度為300mmol/l，鈣鹽的濃度為0.25mmol/l；加入中性蛋白酶1398溶液，蛋白酶的加入量為580mg蛋白/g共軛亞油酸，混合均勻后于25℃下用搖床振蕩5h，搖床的振蕩速度為50rpm，自組裝得到包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液,包埋率為94.5%；
（2）將步驟（1）得到的自組裝包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液置于反應(yīng)器中，避光加入qtx的用量為共軛亞油酸質(zhì)量的0.08%，向反應(yīng)器中通入氮?dú)?5分鐘，將反應(yīng)器瓶口密封；對(duì)反應(yīng)器中混合溶液進(jìn)行攪拌，攪拌的同時(shí)用紫外點(diǎn)光源輻照引發(fā)共軛亞油酸組裝體的部分交聯(lián)，交聯(lián)度為50%時(shí)停止輻照，得到包埋蛋白酶的部分交聯(lián)共軛亞油酸囊泡溶液，將此溶液凍干濃縮到10%水含量后，所得到的蛋白酶囊泡包埋體以5.5wt%直接加入上述洗衣液中。250c下8周后，酶活保持率為82%。
將1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中(總硬度以碳酸鈣計(jì)為98ppm)，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.3%。
對(duì)照例：直接將中性蛋白酶1398加入洗衣液中
將1.2g蛋白酶1398加入洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為45%。將1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.8%。
實(shí)施例4
堿性蛋白酶2709的包埋，具體步驟如下：
（1）室溫下將共軛亞油酸、等量的四水檸檬酸鈣和二檸檬酸三鈣溶解于0.01mol/l的ph9.0的硼砂緩沖液中混合均勻，共軛亞油酸的濃度為250mmol/l，鈣鹽的濃度為0.28mmol/l；加入堿性蛋白酶2709，蛋白酶的加入量為600mg蛋白/g共軛亞油酸，混合均勻后于30℃下用搖床振蕩8h，搖床的振蕩速度50rpm，自組裝得到包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液，包埋率為92.4%；
（2）將步驟（1）得到的自組裝包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液置于反應(yīng)器中，避光加入qtx的用量為共軛亞油酸質(zhì)量的0.1%，向反應(yīng)器中通入氮?dú)?0分鐘后，將反應(yīng)器瓶口密封；對(duì)反應(yīng)器中混合溶液進(jìn)行攪拌，攪拌的同時(shí)用紫外點(diǎn)光源輻照引發(fā)共軛亞油酸組裝體的部分交聯(lián)，交聯(lián)度為45%時(shí)停止輻照，得到包埋蛋白酶的部分交聯(lián)共軛亞油酸囊泡溶液。將此溶液凍干濃縮到15%水含量后，所得到的蛋白酶囊泡包埋體以3wt%直接加入加入上述洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為89.8%。將1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中(總硬度以碳酸鈣計(jì)為115ppm)，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.1%。
對(duì)照例：直接將堿性蛋白酶2709加入洗衣液中
將0.8克蛋白酶2709加入洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為48%。將1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.8%。
實(shí)施例5
制備包埋中性蛋白酶1398的囊泡，具體步驟如下：
（1）室溫下將共軛亞油酸和氯化鈣溶解于0.01mol/l的ph7.0的磷酸氫二鈉–檸檬酸緩沖液中混合均勻，共軛亞油酸的濃度為300mmol/l，鈣鹽的濃度為0.30mmol/l；加入中性蛋白酶1398，蛋白酶的加入量為560mg蛋白/g共軛亞油酸，混合均勻后于20℃下用搖床振蕩8h，搖床的振蕩速度為50rpm，自組裝得到包埋蛋白酶的共軛亞油酸囊泡溶液,包埋率為91.6%；
（2）將步驟（1）得到的自組裝包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液置于反應(yīng)器中，避光加入qtx的用量為共軛亞油酸質(zhì)量的0.12%，向反應(yīng)器中通入氮?dú)?0分鐘，將反應(yīng)器瓶口密封；對(duì)反應(yīng)器中混合溶液進(jìn)行攪拌，攪拌的同時(shí)用紫外點(diǎn)光源輻照引發(fā)共軛亞油酸組裝體的部分交聯(lián)，交聯(lián)度為50%時(shí)停止輻照，得到包埋蛋白酶的部分交聯(lián)共軛亞油酸囊泡溶液。將此溶液凍干濃縮到10%水含量后，所得到的蛋白酶囊泡包埋體以6wt%直接加入洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為86.2%。取1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中(總硬度以碳酸鈣計(jì)為98ppm)，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為94%。
對(duì)照例：直接將中性蛋白酶1398加入洗衣液中
將1.3g中性蛋白酶1398加入100克洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為47%。取1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中(總硬度以碳酸鈣計(jì)為98ppm)，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.3%。
實(shí)施例6
制備包埋堿性蛋白酶2709的囊泡，具體步驟如下：
（1）室溫下將共軛亞油酸和氯化鈣溶解于0.01mol/l的ph10.0的硼砂-氫氧化鈉緩沖液緩沖液中混合均勻，共軛亞油酸的濃度為600mmol/l，鈣鹽的濃度為0.10mmol/l；加入堿性蛋白酶2709，蛋白酶的加入量為550mg蛋白/g共軛亞油酸，混合均勻后于20℃下用搖床振蕩8h，搖床的振蕩速度為50rpm，自組裝得到包埋蛋白酶的共軛亞油酸囊泡溶液,包埋率為91.6%；
（2）將步驟（1）得到的自組裝包埋蛋白酶共軛亞油酸囊泡溶液置于反應(yīng)器中，避光加入qtx的用量為共軛亞油酸質(zhì)量的0.10%，向反應(yīng)器中通入氮?dú)?0分鐘，將反應(yīng)器瓶口密封；對(duì)反應(yīng)器中混合溶液進(jìn)行攪拌，攪拌的同時(shí)用紫外點(diǎn)光源輻照引發(fā)共軛亞油酸組裝體的部分交聯(lián)，交聯(lián)度為35%時(shí)停止輻照，得到包埋蛋白酶的部分交聯(lián)共軛亞油酸囊泡溶液。將此溶液凍干濃縮到13%水含量后，所得到的蛋白酶囊泡包埋體以6wt%直接加入洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為85.4%。取1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中(總硬度以碳酸鈣計(jì)為100ppm)，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為98%。
對(duì)照例：直接將堿性蛋白酶2709加入洗衣液中
將1.2g堿性蛋白酶2709加入100克洗衣液中；250c下8周后，酶活保持率為45%。取1克此加酶洗衣液分散在1升自來(lái)水中(總硬度以碳酸鈣計(jì)為100ppm)，1min后測(cè)得溶液中蛋白酶酶活釋放率為100.1%。
雖然本發(fā)明已以較佳實(shí)施例公開(kāi)如上，但其并非用以限定本發(fā)明，任何熟悉此技術(shù)的人，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，都可做各種的改動(dòng)與修飾，因此本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書(shū)所界定的為準(zhǔn)。