本發(fā)明涉及順丁烯二酰亞胺化合物的制備與應用,特別涉及含氯芐胺、乙醇胺、丙醇胺、氨基苯酚、(r)-(+)-1-(4-甲氧基苯)乙胺等藥物中間體的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物的制備及在抗菌核病和抗水稻紋枯病菌中的應用。
背景技術：
水稻紋枯病又稱云紋病，是由立枯絲核菌(rhizoctoniasolanikühn)引起的重要水稻病害，苗期至穗期都可發(fā)病，造成水稻不能抽穗，抽穗的秕谷較多，千粒重下降，水稻紋枯病發(fā)生在全國各大稻區(qū)，尤其在長江流域及南方經(jīng)常發(fā)生，發(fā)病后一般減產(chǎn)15％以上，重者無收，且會嚴重影響水稻品質，該病目前已列于稻瘟病之前，居水稻病害之首，成為水稻高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的嚴重障礙。國內防治水稻紋枯病主要使用井岡霉素，但長期單一使用同一種藥劑容易產(chǎn)生抗藥性，在一些地區(qū)井岡霉素早已產(chǎn)生抗性，,而且近年來,隨著人們對化學農(nóng)藥殘留和食品安全問題的密切關注,發(fā)明安全高效的新型抗菌劑迫在眉睫。
含順丁烯二酸酐或n-取代順丁烯二酰亞胺結構的天然化合物均具有良好的生物活性,尤其是抗真菌活性。n-取代順丁烯二酰亞胺化合物是一種含氮的五元雜環(huán)類化合物，n-取代順丁烯二酰亞胺化合物的α、β不飽和二酰亞胺環(huán)狀結構能夠與巰基官能團結合,從而影響體內眾多含巰基的酶,進而影響菌體的生長。經(jīng)研究表明，該類化合物對許多細菌、酵母、真菌等微生物具有較好的抑制作用，能有效治療馬鈴薯枝葉腐爛病、水稻胡麻斑病、菜豆莖腐病、菌核病及灰霉病，柑橘的瘡癡病、番茄的晚疫病等農(nóng)作物病害，而且具有高效、低毒、無公害等優(yōu)點。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的是提供一種基于藥物中間體的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物及其制備方法與應用,該類化合物制備方法簡單,是具有防治水稻紋枯病的一類高效、安全抗菌劑。
本發(fā)明采用以下技術方案：
一種如式(i)所示的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物：
式(i)中，r1、r2各自獨立為氫、氯、溴、甲基或苯基；r0為氯芐基、乙醇基、丙醇基、4-羥基苯基或(r)-(+)-1-(4-甲氧苯基)乙基。
進一步，本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物優(yōu)選為下列之一：
進一步，本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物更優(yōu)選為下列之一：
i-1、i-3、i-6、i-11、i-12、i-13、i-14、i-15所示的化合物。
進一步，本發(fā)明還提供一種所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的制備方法：
以式(ⅱ)所示的酸酐、有機胺為原料，溶于溶劑丙酮中，磁力攪拌，室溫下反應1～3h，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，再加入甲苯作為溶劑，在穩(wěn)定劑和脫水劑的作用下，經(jīng)酰胺化反應和脫水閉環(huán)反應，反應結束后，反應液分離純化制得式(i)所示的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物；所述的有機胺為氯芐胺、乙醇胺、丙醇胺、氨基苯酚或(r)-(+)-1-(4-甲氧基苯)乙胺；所述穩(wěn)定劑為對苯二酚和無水乙酸鈉；所述脫水劑為三乙胺；
式(i)中，r1、r2各自獨立為氫、氯、溴、甲基或苯基；r0為與所述的有機胺相對應的氯芐基、乙醇基、丙醇基、4-羥基苯基或(r)-(+)-1-(4-甲氧苯基)乙基；式(ⅱ)中，所述r1與式(i)r1相同，所述r2與式(i)r2相同。
進一步，本發(fā)明所述酸酐優(yōu)選為馬來酸酐、2，3-二氯馬來酸酐、苯基順酐、溴代馬來酸酐、2，3-二甲基馬來酸酐或檸康酐。
進一步，本發(fā)明所述酸酐與有機胺的物質的量之比為0.67-1.2：1。
進一步，本發(fā)明所述的脫水劑用量以酸酐物質的量計300～400μl/mmol。
進一步，本發(fā)明所述有機溶劑丙酮以酸酐物質的量計為13.3～33.3ml/mmol，有機溶劑甲苯以酸酐物質的量計為8.3～25ml/mmol。
進一步，本發(fā)明所述穩(wěn)定劑無水乙酸鈉以酸酐物質的量計為0.01～0.033g/mmol，穩(wěn)定劑對苯二酚以酸酐物質的量計為0.02～0.083g/mmol。
進一步，本發(fā)明所述所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物的制備方法具體推薦為：用10ml的丙酮將2mmol酸酐溶于150ml的三口瓶中，把溶有有機胺的丙酮溶液通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入上述三口瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h，旋轉蒸發(fā)除去反應液中的溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2-3h，反應液分離純化制得式(i)所示的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物。
本發(fā)明所述的分離純化為：反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過200目硅膠柱層析分離洗脫劑為體積比4-12:1的石油醚和乙酸乙酯的混合液，得到純度較高的目標產(chǎn)物。進一步，本發(fā)明提供一種所述的n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物在抑制水稻紋枯病菌或菌核病菌中的應用。
本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物在抑制水稻紋枯病菌或菌核病菌中的應用為：在瓊脂培養(yǎng)基或pda培養(yǎng)基中加入本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物，采用菌絲生長速率法測定n-取代順丁烯二酰亞胺化合物對水稻紋枯病菌或菌核病菌絲生長的抑制率：在丕氏培養(yǎng)基培養(yǎng)的水稻紋枯病菌菌或菌核病病菌落邊緣用直徑為6mm的打孔器取菌碟，分別接種至含n-取代順丁烯二酰亞胺化合物的培養(yǎng)基平板正中央，以含助溶劑的平板為對照，于23℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待對照菌落生長至少50mm，但未長滿全皿時，采用十字交叉法測量含藥培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落生長直徑；所述化合物以n-取代順丁烯二酰亞胺化合物與助溶劑和水的混合液的形式加入瓊脂培養(yǎng)基，配制成n-取代順丁烯二酰亞胺化合物濃度為100ppm的含藥培養(yǎng)基平板，所述助溶劑為吐溫-80，所述助溶劑為質量濃度0.2％的吐溫-80水溶液。
本發(fā)明采用十字交叉法測量菌落生長直徑。菌絲生長抑制率計算公式(長度單位：mm)如下：
與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有優(yōu)勢主要體現(xiàn)在：(1)基于藥物中間體的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物制備方法簡單、操作方便；(2)合成的此類n-取代順丁烯二酰亞胺化合物，不但對水稻紋枯病與菌核病都有效果，而且為后續(xù)的研究打下了堅實的基礎。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此。
實施例1：n-4-氯芐基順丁烯二酰亞胺(i-1)的合成
稱取0.6mmol馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用4ml丙酮溶解，將0.66mmol的4-氯芐胺用4ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用5ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.006g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.012g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：
v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield32.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.34-7.32(m,2h),7.29(s,2h),7.27-7.25(m,2h),4.58(s,2h).esi-msm/z:[m]+221。
實施例2：n-4-氯芐基-3-甲基順丁烯二酰亞胺(i-2)的合成
稱取0.6mmol檸康酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的4-氯芐胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield29.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.34–7.30(m,2h),7.27(s,1h),7.23–7.20(m,2h),4.67(s,2h),2.09(s,3h).esi-msm/z:[m]+235.5。
實施例3：n-4-氯芐基-3-溴順丁烯二酰亞胺(i-3)的合成
稱取0.6mmol溴代馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的4-氯芐胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield53.3％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.28(d,j＝7.7hz,4h),6.90(s,1h),4.69(s,2h).esi-msm/z:[m]+300.5。
實施例4：n-4-氯芐基-3-苯基順丁烯二酰亞胺(i-4)的合成
稱取0.6mmol苯基順酐到三口圓底燒瓶中，用5ml丙酮溶解，將0.9mmol的4-氯芐胺用5ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用6ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.012g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.018g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝10:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield35.9％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.93(d,j＝7.7hz,2h),7.50-7.45(m,3h),7.37-7.33(m,2h),7.32-7.29(m,2h),6.76(s,1h),4.72(s,2h).esi-msm/z:[m]+297.5。
實施例5：n-4-氯芐基-3,4-二甲基順丁烯二酰亞胺(i-5)的合成
稱取0.6mmol2，3-二甲基馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的4-氯芐胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield70.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.29-7.27(m,4h),4.61(s,2h),1.97(s,6h).esi-msm/z:[m]+249.5。
實施例6：n-4-氯芐基-3,4-二氯順丁烯二酰亞胺(i-6)的合成
稱取0.6mmol3，4-二氯馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用4ml丙酮溶解，將0.66mmol的4-氯芐胺用4ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用5ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.012g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.012g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield69.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.36-7.32(m,2h),7.27-7.23(m,2h),4.52(s,2h).esi-msm/z:[m]+290.5。
實施例7：n-4-羥基苯基順丁烯二酰亞胺(i-1)的合成
稱取0.6mmol馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用5ml丙酮溶解，將0.9mmol的氨基苯酚用5ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用5ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.006g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.012g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield88.5％1hnmr(500mhz,dmso)δ9.32(s,1h),7.25(s,2h),7.06(m,2h),6.44(m,2h).esi-msm/z:[m]+189。
實施例8：n-4-羥基苯基-3-甲基順丁烯二酰亞胺(i-8)的制備
稱取0.6mmol檸康酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的氨基苯酚用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield58.5％1hnmr(500mhz,dmso)δ9.72(s,1h),7.25(s,1h),6.79–6.6(m,2h),6.75–6.72(m,2h),2.07(s,3h).esi-msm/z:[m]+203。
實施例9：n-4-羥基苯基-3-溴順丁烯二酰亞胺(i-9)的合成
稱取0.6mmol溴代馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的氨基苯酚用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield35.5％1hnmr(500mhz,dmso)δ9.43(s,1h),7.89(s,1h),6.79–6.77(m,2h),6.74–6.71(m,2h).esi-msm/z:[m]+268。
實施例10：n-4-羥基苯基-3-苯基順丁烯二酰亞胺(i-10)的合成
稱取0.6mmol苯基順酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的氨基苯酚用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield20.3％1hnmr(500mhz,dmso)δ9.71(s,1h),7.49(s,1h),7.37-7.35(m,4h),7.28(s,1h),7.02-6.90(m,2h),6.81-6.78(m,2h).esi-msm/z:[m]+265。
實施例11：n-(4-甲氧苯基)乙基順丁烯二酰亞胺(i-11)的合成
稱取0.6mmol馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用5ml丙酮溶解，將0.66mmol的(r)-(+)-1-(4-甲氧基苯)乙胺用5ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用5ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.012g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.018g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield21.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.39–7.37(m,2h),7.29(s,2h),6.86-6.82(m,2h),5.25(m,1h),3.76(s,3h),1.78(d,j＝7.3hz,3h).esi-msm/z:[m]+231。
實施例12：n-(4-甲氧苯基)乙基-3-溴順丁烯二酰亞胺(i-12)的合成
稱取0.6mmol溴代馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用5ml丙酮溶解，將0.9mmol的(r)-(+)-1-(4-甲氧基苯)乙胺用5ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用6ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.012g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.018g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield43.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.40-7.37(m,2h),7.39-7.37(m,2h),6.85(s,1h),5.36(m,1h),3.80(s,3h),1.83(d,j＝7.4hz,3h).esi-msm/z:[m]+310。
實施例13：n-(4-甲氧苯基)乙基-3-苯基順丁烯二酰亞胺(i-13)的合成
稱取0.6mmol苯基順酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的(r)-(+)-1-(4-甲氧基苯)乙胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield33.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.91-7.87(m,2h),7.46-7.41(m,4h),7.28(s,1h),6.89-6.85(m,2h),6.68(s,1h),5.41(m,1h),3.80(s,3h),1.87(d,j＝7.4hz,3h).esi-msm/z:[m]+307.
實施例14：n-(4-甲氧苯基)乙基-2，3-二甲基順丁烯二酰亞胺(i-14)的合成
稱取0.6mmol2，3-二甲基馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用4ml丙酮溶解，將0.66mmol的(r)-(+)-1-(4-甲氧基苯)乙胺用4ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用5ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.006g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.012g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield62.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.40-7.37(m,2h),6.87-6.83(m,2h),5.29(m,1h),3.79(s,3h),1.92(s,6h),1.79(d,j＝7.4hz,3h).esi-msm/z:[m]+259。
實施例15：n-(4-甲氧苯基)乙基-3,4-二氯順丁烯二酰亞胺(i-15)的合成
稱取0.6mmol2，3-二甲基馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的(r)-(+)-1-(4-甲氧基苯)乙胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield60.5％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.37-7.27(m,2h),6.92-6.89(m,2h),5.12(m,1h),3.82(s,3h),1.56(d,j＝6.9hz,3h).esi-msm/z:[m]+300。
實施例16：n-乙醇基順丁烯二酰亞胺(i-16)的合成
稱取0.6mmol馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用5ml丙酮溶解，將0.66mmol的乙醇胺用5ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用5ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.012g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.018g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield30％1hnmr(500mhz,dmso)δ6.75(s,2h),4.7(s,1h),3.40(t,j＝5.2hz,2h)；3.47(t,j＝4.9hz,2h).esi-msm/z:[m]+141。
實施例17：n-乙醇基-3-溴順丁烯二酰亞胺(i-17)的合成
稱取0.6mmol溴代馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的乙醇胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield26％1hnmr(500mhz,dmso)δ6.72(s,1h),4.77(s,1h),3.42(t,j＝5.2hz,2h),3.46(t,j＝5.0hz,2h).esi-msm/z:[m]+220。
實施例18：n-乙醇基-3,4-二甲基順丁烯二酰亞胺(i-18)的合成
稱取0.6mmol3，4-二甲基馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的乙醇胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield45％1hnmr(500mhz,dmso)δ4.79(s,1h),3.47(t,j＝4.9hz,2h),3.44(t,j＝5.0hz,2h),1.89(s,6h).esi-msm/z:[m]+169。
實施例19：n-乙醇基-3,4-二氯順丁烯二酰亞胺(i-19)的合成
稱取0.6mmol3，4-二氯馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用5ml丙酮溶解，將0.66mmol的乙醇胺用5ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用6ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.012g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.018g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield30％1hnmr(500mhz,dmso)δ4.64(s,1h),3.41(t,j＝5.0hz,2h),3.37(t,j＝5.0hz,2h).esi-msm/z:[m]+210。
實施例20：n-丙醇基順丁烯二酰亞胺(i-20)的合成
稱取0.6mmol馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的丙醇胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield20％1hnmr(500mhz,dmso)yield25％δ6.15(s,2h),4.96(s,1h),3.90(t,j＝5.5hz,2h),3.72(t,j＝4.9hz,2h),1.76(m,2h).esi-msm/z:[m]+155。
實施例21：n-丙醇基-3-溴順丁烯二酰亞胺(i-21)的合成
稱取0.6mmol溴代馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的丙醇胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝4～12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield25％1hnmr(500mhz,dmso)δ6.18(s,1h),4.93(s,1h),3.90(t,j＝4.8hz,2h)3.72(t,j＝3.6hz,2h),1.76(m,2h).esi-msm/z:[m]+234。
實施例22：n-丙醇基-3,4-二甲基順丁烯二酰亞胺(i-22)的合成
稱取0.6mmol2，3-二甲基馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的丙醇胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield20％1hnmr(500mhz,cdcl3)δ3.67-3.62(t,j＝6.2hz,2h),3.56(t,j＝5.8hz,2h),2.36(s,1h),1.97(s,6h),1.79-1.73(m,2h).esi-msm/z:[m]+183。
實施例23：n-丙醇基-3,4-二氯順丁烯二酰亞胺(i-23)的合成
稱取0.6mmol2，3-二氯馬來酸酐到三口圓底燒瓶中，用10ml丙酮溶解，將0.5mmol的丙醇胺用10ml的丙酮溶解通過恒壓滴液漏斗緩慢滴入三口燒瓶中，磁力攪拌，室溫下反應1h后，旋轉蒸發(fā)除去溶劑丙酮，改用15ml甲苯作溶劑，向反應體系中依次加入0.02g無水乙酸鈉，0.2ml三乙胺，0.05g對苯二酚，緩慢升溫至115℃回流反應2.5h，反應過程通過薄層層析硅膠板跟蹤。反應結束后冷卻至室溫，旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到濃縮液，將濃縮液經(jīng)過硅膠柱層析分離(洗脫劑：v石油醚：v乙酸乙酯＝12:1)，并收集目標液，真空旋轉去溶劑，得到目標產(chǎn)物。
yield20％1hnmr(500mhz,dmso)δ4.82(s,1.82(s,1h),3.43(t＝4.8hz,2h),3.21(t,1(t,j＝4.3hz,2h),1.61(m,2h).esi-msm/z:[m]+224。
實施例24：n-取代順丁烯二酰亞胺化合物抑菌活性的測定
以水稻紋枯病菌為模型，測試了本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物的抑菌活性。分別將實施例1-23所制備的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物(i-1)-(i-23)與吐溫-80和水混合，獲得混合液，混合液為2.5mgn-取代順丁烯二酰亞胺化合物(i-1)-(i-23)和25ml的0.1％吐溫-80的水溶液配制成100ppm的含藥溶液，然后取100ppm含藥溶液1ml，用0.1％的吐溫-80水溶液稀釋成10ppm的含藥溶液；根據(jù)上述方法，再取10ppm的含藥溶液1ml稀釋成1ppm含藥溶液，然后分別取含藥溶液lml，加入9ml的瓊脂培養(yǎng)基中，分別配制成0.1ppm的含藥培養(yǎng)基平板，每個梯度設2個平行。采用菌絲生長速率法測定n-取代順丁烯二酰亞胺化合物對水稻紋枯病菌菌絲生長的抑制率，在丕氏培養(yǎng)基預培養(yǎng)的水稻紋枯病菌菌落邊緣用直徑為5mm的打孔器取菌碟，分別接種至含藥瓊脂培養(yǎng)基平板正中央，以含0.1％吐溫-80的平板為對照，于23℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待對照菌落生長至少50mm但未長滿全皿時，采用十字交叉法測量含藥培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落生長直徑，根據(jù)公式(1)計算菌絲生長抑制率，結果如表1所示，所述丕氏培養(yǎng)基終濃度組成為:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，酵母膏5g，加去離子水至1000ml，分裝至500ml錐形瓶中，總共4瓶。每瓶加入瓊脂條5g，ph自然，121℃滅菌20min。菌絲生長抑制率計算公式(長度單位：mm)如下：
表1n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物離體水稻紋枯病菌的抑制情況(單位：μg/ml)
注：*：無抑制效果；+：抑制效果不明顯，0～30％；++：抑制效果明顯，30～60％；+++：抑制效果明顯，但未完全抑制，60～90％；++++：完全抑制，100％
結果表明，在制備的23個化合物中，i-1、i-3、i-6、i-11、i-12、i-13、i-14、i-15對水稻紋枯病菌的菌絲生長都具有良好的抑制作用，且抑制作用均隨濃度的增高而增強，表現(xiàn)出較強的濃度依賴性，且當藥物濃度達到最小抑制濃度(mic)時，對真菌的抑制作用不隨時間的延長而降低，表現(xiàn)出持久的抑制效果。
同時與酸酐反應生成n-取代順丁烯二酰亞胺的胺的不同，也較大的影響了物質的抑菌活性，雖具有相同的酸酐，但抑制率會相差極大。
實施例25：n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物對菌核病病菌抑菌活性的測定
以菌核病菌為模型，測試了本發(fā)明所述的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物的抑菌活性。分別將實施例1-23所制備的n-取代順丁烯二酰亞胺化合物(i-1)-(i-23)與吐溫-80和水混合，獲得混合液，混合液為2.5mgn-取代順丁烯二酰亞胺化合物(i-1)-(i-23)和25ml的0.1％吐溫-80的水溶液配制成100ppm的含藥溶液，然后取100ppm含藥溶液1ml，用0.1％的吐溫-80水溶液稀釋成10ppm的含藥溶液；根據(jù)上述方法，再取10ppm的含藥溶液1ml稀釋成1ppm含藥溶液，然后分別取含藥溶液lml，加入9ml的pda培養(yǎng)基中，分別配制成0.1ppm的含藥培養(yǎng)基平板，每個梯度設2個平行。采用菌絲生長速率法測定n-取代順丁烯二酰亞胺化合物對菌核病菌菌絲生長的抑制率，在丕氏培養(yǎng)基預培養(yǎng)的菌核病菌菌落邊緣用直徑為5mm的打孔器取菌碟，分別接種至含藥pda培養(yǎng)基平板正中央，以含0.1％吐溫-80的平板為對照，于23℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，待對照菌落生長至少50mm但未長滿全皿時，采用十字交叉法測量含藥培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌落生長直徑，根據(jù)公式(1)計算菌絲生長抑制率，結果如表1所示，所述丕氏培養(yǎng)基終濃度組成為:馬鈴薯200g，葡萄糖20g，酵母膏5g，加去離子水至1000ml，分裝至500ml錐形瓶中，總共4瓶。每瓶加入瓊脂條5g，ph自然，121℃滅菌20min。菌絲生長抑制率計算公式(長度單位：mm)如下：
表2n-取代順丁烯二酰亞胺類化合物離體菌核病菌的抑制情況(單位：μg/ml)
注：*：無抑制效果；+：抑制效果不明顯，0～30％；++：抑制效果明顯，30～60％；+++：抑制效果明顯，但未完全抑制，60～90％；++++：完全抑制，100％
從表2中看出i-1到i-5和i-11到i-15化合物對菌核病菌的抑制效果沒有對水稻紋枯病的抑制效果好，這有可能與兩種真菌的致病機理有關。而i-6到i-10、i-16到i-23中的化合物的ec50除了i-9(ec50＝83.13μg/ml)外均大于1000μg/ml。