本發(fā)明涉及一類化合物及其應(yīng)用，具體是n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺及其在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

tala等[euromedchem,2014,76:155-169]以bo-1055為先導(dǎo)化合物，利用生物電子等排原理設(shè)計(jì)合成化合物a，測試了其對(duì)人前列腺癌（pc3），人肺癌（h460和h1299）和人結(jié)腸癌（hct-116，h3347，dld-1和ht-29）細(xì)胞系抗腫瘤活性；其抗腫瘤活性優(yōu)于陽性對(duì)照物順鉑。

misra等[jmedchem,2004,47(7):1719-1728.]以cdk2為靶標(biāo)，從1-溴-3,3-二甲基-2-丁酮出發(fā)，通過疊氮反應(yīng)經(jīng)加氫還原，引入氨基，再經(jīng)?；磻?yīng)、環(huán)合反應(yīng)和親核反應(yīng)得到5-(((5-(叔丁基)惡唑-2-基)甲基)硫基)噻唑-2-胺；最后與羧酸衍生物發(fā)生酰胺化反應(yīng)得到化合物b，并測試了無細(xì)胞酶活性和a2780人卵巢癌細(xì)胞體外抗腫瘤活性，在無細(xì)胞酶測定中，化合物b顯示cdk2/cyce的ic50為48nm；且分別比cdk1/cycb和cdk4/cycd高10倍和20倍的選擇性；抗增殖活性在a2780細(xì)胞細(xì)胞毒性測定，化合物b顯示ic50為95nm?；衔颾已作為抗腫瘤劑被選擇進(jìn)入ⅰ期人臨床試驗(yàn)。

biswal等[wo2014145642a2,2014-9-18]合成了一系列以轉(zhuǎn)錄因子nrf2為靶點(diǎn)的小分子抗腫瘤化合物，體外抗腫瘤活性測試結(jié)果顯示：化合物c對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞a549和人肺腺癌細(xì)胞h1437的抑制活性：5μm＜ic50＜25μm。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一類n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺及其制備方法與用途。

為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

本發(fā)明技術(shù)方案的第一方面是提供了一類如結(jié)構(gòu)式ⅰ所示的n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺及其在藥學(xué)上可接受的鹽：

i

式中r選自：氫、c1~c2烷基、c3~c4直鏈烷基；x¹~x³選自：氫、氟、氯、溴或碘；n選自：1、2、3、4或5。

進(jìn)一步的，優(yōu)選的化合物選自：n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺和n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺。

本發(fā)明技術(shù)方案的第二方面是提供了n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺的制備方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：

i

式中r選自：氫、c1~c2烷基、c3~c4直鏈烷基；x¹~x³選自：氫、氟、氯、溴或碘；n選自：1、2、3、4或5。

本發(fā)明技術(shù)方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明的n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺及其藥學(xué)上可接受的鹽，以及任選的含有藥用載體。其中所述的藥用載體指藥學(xué)領(lǐng)域常用的藥用載體；該藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑組合，制成適于人或動(dòng)物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽在其藥物組合物中的含量通常為0.1%~95%重量百分比。

本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。

給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑（包括真溶液和膠體溶液）、乳劑（包括o/w型、w/o型和復(fù)乳）、混懸劑、注射劑（包括水針劑、粉針劑和輸液）、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑（包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片）、膠囊劑（包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊）、顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣（粉）霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。

本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。

為了將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。

還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。

為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆?；蛭⑼瑁僦糜谟材z囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的膠囊劑。

為將本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領(lǐng)域常用的增溶劑、助溶劑、ph調(diào)劑劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精等；ph調(diào)劑劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。

此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。

為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。

本發(fā)明技術(shù)方案的第四方面是提供含有第一方面所述化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽以及第三方面所述藥物組合物在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑方面的應(yīng)用。

有益技術(shù)效果：本發(fā)明的n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑方面的應(yīng)用。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例旨在說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步限定。

實(shí)施例1

n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺的制備

1mmoln-[4-（1,2,4-三唑-1-基）-5-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-氯乙酰胺、2mmol哌啶、10mlthf和1.20mmoltea，常溫反應(yīng)24h；脫溶，用乙酸乙酯和飽和食鹽水洗，反萃有機(jī)層，合并有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，脫溶，乙醇重結(jié)晶得0.24g白色固體n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺，收率53.3%，熔點(diǎn)201~203℃；¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：1.26(s，2h，ch2)，1.59~1.71(m，4h，ch2×2)，2.57(s，4h，ch2nch2)，3.25(s，2h，coch2)，7.34-7.36(m，2h，c6h35,6-h)，7.47(s，1h，c6h33-h)，7.94(s，1h，c2n3h23-h)，8.03(s，1h，c2n3h25-h)。

實(shí)施例2

n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺的制備

1mmoln-[4-（1,2,4-三唑-1-基）-5-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-氯乙酰胺、2mmol哌啶、10mlthf和1.20mmoltea，常溫反應(yīng)24h。脫溶，用乙酸乙酯和飽和食鹽水洗，反萃有機(jī)層，合并有機(jī)層，無水硫酸鈉干燥，脫溶，乙醇重結(jié)晶得0.23g白色固體n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺，收率50.1%，熔點(diǎn)210~212℃；¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ：1.49(s，2h，ch2)，1.58~1.76(m，4h，ch2×2)，2.57(s，4h，ch2nch2)，3.25(s，2h，coch2)，7.29(d，j=8.8hz，1h，c6h23-h)，7.50(d，j=6.6hz，1h，c6h26-h)，8.00(s，1h，c2n3h23-h)，8.04(s，1h，c2n3h23-h)。

實(shí)施例3

n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性的測定

1.實(shí)驗(yàn)原理

化合物munana是神經(jīng)氨酸酶的特異性底物，在神經(jīng)氨酸酶作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在360nm照射激發(fā)下，可產(chǎn)生450nm熒光，熒光強(qiáng)度的變化可以靈敏地反映神經(jīng)氨酸酶活性。酶均來自a/pr/8/34（h1n1）病毒毒株。

2.實(shí)驗(yàn)方法

在酶反應(yīng)體系中，一定濃度樣品與流感病毒神經(jīng)氨酸酶na懸浮于反應(yīng)緩沖液中（ph6.5），加入熒光底物munana啟動(dòng)反應(yīng)體系，37?c孵育40分鐘后，加反應(yīng)終止液終止反應(yīng)。在激發(fā)波長360nm和發(fā)射波長為450nm的參數(shù)條件下，測定熒光強(qiáng)度值。根據(jù)熒光強(qiáng)度的減少量可以計(jì)算化合物對(duì)na活性的抑制率。

3.檢測樣品：實(shí)施例化合物

4．活性結(jié)果

在反應(yīng)系統(tǒng)中檢測濃度40.0μg/ml時(shí)，n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺和n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺對(duì)神經(jīng)氨酸酶的抑制率分別為34%和31%。

n-[5-（1,2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]哌啶基酰胺具有良好的抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性，可用于制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑。