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      一種蛹蟲草液體菌種的培育方法和應(yīng)用及其使用的培養(yǎng)液與流程

      文檔序號:11505696閱讀:856來源:國知局

      本發(fā)明涉及應(yīng)用生物技術(shù)原理人工培育真菌的技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及蛹蟲草的培育,更具體地涉及一種蛹蟲草液體菌種的培育方法和應(yīng)用及其使用的培養(yǎng)基。



      背景技術(shù):

      蛹蟲草(cordycepsmilitaris)隸屬于真菌界(fungi)、子囊菌門(ascomycota)、子囊菌綱(ascomycetes)、糞殼菌亞綱(sordariomycetidae)、肉座菌目(hypocreales)、麥角菌科(clavicipitaceae)、蟲草屬(cordyceps)。蛹蟲草是非常著名的藥食兩用的子囊真菌,也是獲得蟲草素的主要來源,具有很高的開發(fā)利用價值。近年來,隨著野生冬蟲夏草資源的日漸枯竭,其價格不斷攀升,從而促使人們尋找野生冬蟲夏草的替代品。由于蛹蟲草具有與冬蟲夏草相近的藥用與食用價值,加之蛹蟲草更加容易馴化,因此受到人們越來越多的關(guān)注。

      但是,由于傳統(tǒng)工藝中液體配方的營養(yǎng)不全面,導(dǎo)致蛹蟲草發(fā)菌慢,菌絲較易老化,長勢弱,菌絲體色澤較暗,子實體產(chǎn)量低。因此,我們對液體菌種的培養(yǎng)液配方、液體菌種的培育方法進行了改良。



      技術(shù)實現(xiàn)要素:

      本發(fā)明提供了一種蛹蟲草液體菌種的培育方法,該方法包括:

      將蛹蟲草的純菌種接種到液體培養(yǎng)基中,搖床培養(yǎng)得到液體菌種;

      所述液體培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計,包括:馬鈴薯9-10份,鮮蠶蛹9-10份的浸出液,葡萄糖0.8-1份,蛋白胨0.8-1份,酵母浸粉0.8-1份,磷酸二氫鉀0.09-0.1份,硫酸鎂0.04-0.05份,脫脂蠶蛹粉0.09-0.1份,氫氧化鈉0.0005-0.0006份,水45-60份,維生素b10.01-0.02份;

      所述水的重量份數(shù)包含蠶蛹浸出液中的水。

      本發(fā)明通過液體菌種的特定配方并結(jié)合搖床培養(yǎng),可良好保持菌種的遺傳特性,減少菌種在菌絲分解斷裂中出現(xiàn)的退化,保持菌種活力和發(fā)菌速度,促進后續(xù)菌絲體的轉(zhuǎn)色,增加子實體產(chǎn)量。解決了蛹蟲草菌種退化、發(fā)菌弱、后期轉(zhuǎn)色慢、子實體產(chǎn)量少等問題。

      進一步,所述液體培養(yǎng)基按照重量份數(shù)計,包括:馬鈴薯9.5份,鮮蠶蛹9.5份的浸出液,葡萄糖0.95份,蛋白胨0.95份,酵母浸粉0.95份,磷酸二氫鉀0.095份,硫酸鎂0.048份,脫脂蠶蛹粉0.095份,氫氧化鈉0.00057份,水47份,維生素b10.014份;所述水的重量份數(shù)包含蠶蛹浸出液中的水。

      進一步,所述搖床培養(yǎng)的條件為:以200-250r/min搖床培養(yǎng)5-6天,培養(yǎng)溫度為20-22℃。

      進一步,所述蠶蛹浸出液為將鮮蠶蛹煮制25-35min后得到的蠶蛹過濾液。

      進一步,所述馬鈴薯的蛋白質(zhì)含量不低于3%,淀粉含量不低于13%,優(yōu)選13%-15%。

      進一步,所述蛋白胨的總氮含量不低于13.5%,氨基酸含量不低于3%。

      進一步,所述脫脂蠶蛹粉的蛋白質(zhì)含量為60%-80%,脂肪含量為5%-8%。

      本發(fā)明蛹蟲草液體菌種的培育方法可廣泛用于蛹蟲草的培育中,從而提高蛹蟲草子實體的生產(chǎn)效率和產(chǎn)量。

      本發(fā)明還提供一種培育蛹蟲草的方法,包括:將上述蛹蟲草液體菌種的培育方法制備的液體菌種轉(zhuǎn)接至子實體培養(yǎng)基,繼續(xù)進行培養(yǎng)。

      進一步,將蠶蛹浸出液使用過的蠶蛹放入子實體培養(yǎng)基中。

      本發(fā)明提供一種培育蛹蟲草液體菌種的培養(yǎng)液,按照重量份數(shù)計,包括:馬鈴薯9-10份,鮮蠶蛹9-10份的浸出液,葡萄糖0.8-1份,蛋白胨0.8-1份,酵母浸粉0.8-1份,磷酸二氫鉀0.09-0.1份,硫酸鎂0.04-0.05份,脫脂蠶蛹粉0.09-0.1份,氫氧化鈉0.0005-0.0006份,水45-60份,維生素b10.01-0.02份;所述水的重量份數(shù)包含蠶蛹浸出液中的水。

      本發(fā)明上述的培養(yǎng)液可用于蛹蟲草液體菌種的培育,使獲得的菌種不易退化,保持菌種活力和發(fā)菌速度,促進后續(xù)菌絲體的轉(zhuǎn)色,增加子實體產(chǎn)量。

      具體實施方式

      在蛹蟲草的液體菌種培育方法中,按照不同的配方進行培養(yǎng)制作得到的菌種的退化程度和抵抗力不同。其將固體試管種轉(zhuǎn)接到液體搖床培養(yǎng)液中,通過有一段時間的培養(yǎng)得到搖床液體菌種,再將液體菌種再轉(zhuǎn)接到子實體培養(yǎng)基中,繼續(xù)培養(yǎng)一段時間見光,進行子實體培養(yǎng)即可得到污染率低、高產(chǎn)的蟲草子實體。通過不同的培養(yǎng)液培養(yǎng)的蛹蟲草菌種的生長特性和子實體產(chǎn)量有很大差別,通過本發(fā)明培養(yǎng)液配方制作的液體菌種使得菌種菌絲體多,菌種特性穩(wěn)定,能夠高效的繁殖和生長。

      本發(fā)明的實施例提供了一種采用特定配方的培養(yǎng)液進行蛹蟲草液體菌種培育的方法,包括配制液體培養(yǎng)基,然后在無菌環(huán)境下將固體試管菌種轉(zhuǎn)接到液體菌種中,再將液體菌種放置搖床上以250r/min搖制5-6天,避光培養(yǎng)溫度為20-22℃,再將搖制好的液體菌種轉(zhuǎn)接到子實體培養(yǎng)基上。

      以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明,但這些內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。其中未具體載明的操作方法依照本領(lǐng)域的常規(guī)操作進行,使用的試劑、原料和菌種等均市售獲得。其中培養(yǎng)基的組分如無特別說明,則購自北京奧博星。

      實施例

      首先配制液體培養(yǎng)基,具體包括:稱取馬鈴薯200g,煮30min后濾掉殘渣,得到馬鈴薯浸出液。將活蠶蛹200g放入鍋中加入1200ml左右水進行煮制,大約30分鐘后過濾得到蠶蛹浸出液??刂岂R鈴薯浸出液和蠶蛹浸出液的液體總量為1000ml并混合到一起,然后分別加入葡萄糖20g、蛋白胨20g、酵母浸20g、磷酸二氫鉀2g、硫酸鎂1g、脫脂蠶蛹粉2g、氫氧化鈉0.012g、b10.3g,溶解攪拌均勻分裝在500l三角瓶中,每瓶大約裝取營養(yǎng)液200l,封口時在瓶口位置放一塊2cm*2cm的無菌棉,以便為后期液體菌種增加氧氣。

      將裝有液體的三角瓶放置于滅菌鍋中,0.12-0.18mpa下進行蒸汽滅菌,溫度為118-121℃滅菌30分鐘,待壓力降到常壓時打開鍋取出滅菌好的三角瓶營養(yǎng)液,然后取出放涼備用。

      將滅菌好的三角瓶放入超凈工作臺中,在紫外線燈下滅菌30-40min,然后在超凈工作臺中將固體試管種轉(zhuǎn)接到滅好的三角瓶中,再將三角瓶放到滅菌好的暗培室中,在搖床上以250r/min搖制6天,避光培養(yǎng)溫度為21℃,即可得到搖制好的液體菌種。

      將液體菌種接到子實體培養(yǎng)基中,進行發(fā)菌轉(zhuǎn)色及子實體培養(yǎng),40-55天得到子實體。

      在本實施例中,液體培養(yǎng)基中添加了蠶蛹粉和蠶蛹浸出液可使菌種的遺傳性得以良好的保持,減少菌種在菌絲分解斷裂中出現(xiàn)的退化,使菌種保持最原始的狀態(tài)。蠶蛹浸出液中使用過的蠶蛹可以放入子實體培養(yǎng)基中,再接種液體菌種進行子實體培養(yǎng),這樣可避免浪費。選擇色澤、品相比較單純的小麥或大米的子實體好,產(chǎn)量也相對高。

      各培養(yǎng)基的原料經(jīng)過嚴格的篩選,如蠶蛹粉、蛋白胨、活體蠶蛹和馬鈴薯都要求質(zhì)量過關(guān),為正規(guī)的生產(chǎn)廠家。其中,馬鈴薯的采購相對要嚴格一些:要求無腐爛、無霉變、無發(fā)芽、無損傷、無綠變、完整無損傷的新鮮馬鈴薯,其蛋白質(zhì)含量為5%,淀粉含量為25%。蠶蛹選取當(dāng)季活體蠶蛹:新鮮、大小均勻、無傷、無異味,使用前已進行清洗消毒。蛋白胨的總氮含量為18.5%,氨基酸含量為4.5%。脫脂蠶蛹粉的蛋白質(zhì)含量為75%,脂肪含量為7%。

      對比例

      按照實施例的步驟培育蛹蟲草,所不同的是采用以下組成的液體培養(yǎng)基:20%馬鈴薯,2%葡萄糖,0.2%蛋白胨,0.09%磷酸二氫鉀,0.04%硫酸鎂,余量為水,其中馬鈴薯的處理與實施例相同。并且,將對比例的菌種搖床培養(yǎng)8天,以使其更充分發(fā)菌。

      比較實施例與對比例的發(fā)菌和采收情況,結(jié)果如下:實施例搖床培養(yǎng)6天,對比例搖床培養(yǎng)8天,但實施例的菌球仍明顯比對比例的菌球更濃密、更均勻。比較轉(zhuǎn)色時間,實施例接種的后期需要4天轉(zhuǎn)色,而對比例接種的后期需要6天轉(zhuǎn)色。最后比較采收的產(chǎn)量,實施例的平均產(chǎn)量為300g/盒,對比例的平均產(chǎn)量為270g/盒。

      以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施方案,并不用于限制本發(fā)明,對于本領(lǐng)域的科技人員,本發(fā)明可以有更多的改變和變化,凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所做的任何修改、等同替換、改進均包含在本發(fā)明之內(nèi)。

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