本發(fā)明涉及疾病輔助診斷，特別涉及一種糖尿病分型試劑盒。

背景技術(shù)：

隨著近年來生活條件的提高，糖尿病的發(fā)病率越來越高，占總?cè)丝诘谋戎卮?。根?jù)國際糖尿病聯(lián)盟(idf)統(tǒng)計(jì)指出，2011年全球糖尿病患者已達(dá)到3.7億人，其中80％的糖尿病患者分布在發(fā)展中國家；預(yù)計(jì)到2030年，全球的糖尿病患者將會(huì)有近5.5億人。作為人口大國的國家，我國患有糖尿病的人數(shù)在過去的20年里升髙了3倍。如果按照這種趨勢(shì)發(fā)展，中國將有可能成為世界上患有糖尿病人數(shù)最多的國家。而糖尿病帶來的并發(fā)癥的致殘、致死率，會(huì)產(chǎn)生巨大的醫(yī)藥開支，不僅增加了對(duì)人們經(jīng)濟(jì)的負(fù)擔(dān)，更是給社會(huì)帶來極大的挑戰(zhàn)。1999年who把糖尿病分為ⅰ型糖尿病，ⅱ型糖尿病，妊娠糖尿病和特殊糖尿病。其中ⅱ型糖尿病是最常見的糖尿病類型，在國內(nèi)占糖尿病患者人群的90％以上。對(duì)于ⅱ型糖尿病，發(fā)病機(jī)理還不是很透徹，傳統(tǒng)上主要是認(rèn)為有胰島素阻抗和胰島素分泌相對(duì)不足的病因，所以ⅱ型糖尿病又劃分為胰島素阻抗型和胰島素相對(duì)分泌不足型。

隨著分子病理醫(yī)學(xué)的發(fā)展，現(xiàn)在新觀點(diǎn)認(rèn)為ⅱ型糖尿病根據(jù)其表現(xiàn)的病理癥狀可以分為5大類病因，分別為：胰島素原合成障礙，胰島素轉(zhuǎn)化障礙，胰島素分泌出胰島β細(xì)胞功能障礙，胰島素與靶細(xì)胞效應(yīng)阻抗以及全身性的多器官功能退化障礙。

同樣是“糖尿病”，分型不同，接受的治療及康復(fù)方案可能完全不同。比如，同時(shí)出現(xiàn)α細(xì)胞和β細(xì)胞缺陷的患者，對(duì)低血糖非常敏感，需要嚴(yán)格的血糖藥物控制；后天形成的胰島素高阻抗(胰島素正常)患者則有條件嘗試非藥物控制血糖。了解糖尿病人患病機(jī)制，就能根據(jù)病情個(gè)性化治療、量身定制康復(fù)方案，因此，對(duì)患者進(jìn)行糖尿病分型對(duì)其治療方案及藥物選擇具有舉足輕重的作用。

在過去相當(dāng)長的一段時(shí)間里，通常采用傳統(tǒng)的分型方法，然而傳統(tǒng)的ⅱ型糖尿病分型方法無法區(qū)分這些病理病因，無法很全面用一個(gè)技術(shù)檢測(cè)ⅱ型糖尿病的多個(gè)方面的分子病理病因，由于缺乏精準(zhǔn)分型的認(rèn)知和工具，很多糖尿病人治療只能通過“試錯(cuò)法”來不斷嘗試可能的有效途徑。治療過程出現(xiàn)效果差、并發(fā)癥嚴(yán)重、病程周期長的情況，甚至由于誤用藥物，透支機(jī)體整體健康，導(dǎo)致病情惡化，出現(xiàn)“越治越差”的現(xiàn)象。給糖尿病人身心帶來無盡的痛苦。另外傳統(tǒng)的分型方法主要通過口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(ogtt)、葡萄糖鉗夾技術(shù)、血清血糖相關(guān)和胰島素相關(guān)的標(biāo)志物的生化測(cè)量，通常這些檢測(cè)需要耗費(fèi)很長時(shí)間(一般需要1-2個(gè)月)，而且還要復(fù)查。除此之外，現(xiàn)有的分型技術(shù)步驟繁瑣，對(duì)操作人員技術(shù)要求高，而且耗時(shí)耗人力，成本非常高，無法在普通醫(yī)院或社區(qū)醫(yī)院進(jìn)行推廣。

因此，研發(fā)一種能對(duì)ⅱ型糖尿病精準(zhǔn)分型、快速分型的糖尿病分型產(chǎn)品是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供的一種糖尿病分型試劑盒能有效解決當(dāng)前對(duì)ⅱ型糖尿病分型費(fèi)時(shí)費(fèi)力，分型不全面的技術(shù)缺陷。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

人類全基因組中hnf1b基因、pdx1基因、pax6基因、madd基因、nkx2-2基因、insr基因、srr基因、nd1基因和srit1基因中一種或多種在制備糖尿病分型產(chǎn)品中的應(yīng)用。

其中，hnf1b基因編碼的肝細(xì)胞核因子-1β是對(duì)胰腺細(xì)胞形成有重要作用的轉(zhuǎn)錄因子；pdx1基因能夠編碼與胰腺發(fā)育相關(guān)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，參與胰島β細(xì)胞的分化成熟；pax6基因能夠編碼一種蛋白，此類蛋白與胰島素原剪切加工有關(guān)；madd基因缺陷會(huì)不同程度的影響β細(xì)胞中的胰島素正常分泌；nkx2-2基因在胰島素正常分泌時(shí)表達(dá)高；insr基因編碼胰島素受體，該基因發(fā)生缺陷會(huì)產(chǎn)生不同程度的胰島素抵抗；srr基因使胰島素受體底物表達(dá)不足或者磷酸化異?？蓪?dǎo)致胰島素抵抗；nd1基因與線粒體脫氫酶有關(guān)，該基因發(fā)生缺陷會(huì)影響機(jī)體的能量代謝，進(jìn)而影響血糖的調(diào)節(jié)導(dǎo)致ii型糖尿??；srit1基因rs2236139，與代謝調(diào)控有關(guān)，該基因缺陷會(huì)使血脂、血糖代謝紊亂增加ⅱ型糖尿病的患病危險(xiǎn)。

作為優(yōu)選，所述hnf1b基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs1800575，所述pdx1基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs137852783，所述pax6基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs121907921，所述madd基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs10501320，所述nkx2-2基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs558588132，所述insr基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs121913135，所述srr基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs4523957，所述nd1基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs28358585，所述srit1基因?yàn)槠渖蟬np位點(diǎn)rs2236139。

本發(fā)明還提供了人類全基因組中hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575或/和pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783在制備胰島素原合成障礙基因型糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。

其中，胰島素原合成障礙基因型糖尿病是指在胰島素原的合成方面存在基因突變的ⅱ型糖尿病基因分型。胰島素本身并不是胰島素基因控制合成的直接產(chǎn)物，而是由胰島素原經(jīng)過體內(nèi)細(xì)胞切割加工而成。胰島β細(xì)胞首先合成前胰島素原，然后經(jīng)過信號(hào)肽酶的切割和移去信號(hào)肽形成胰島素原。胰島素原在胰島β細(xì)胞中發(fā)生折疊，在轉(zhuǎn)換酶、內(nèi)切蛋白酶和羧肽酶等的作用下轉(zhuǎn)變成為胰島素和c肽，具有雙重免疫活性，既可與胰島素抗體結(jié)合，又可與c肽抗體結(jié)合。胰島素原主要在腎臟通過腎小球過濾和腎小管吸收代謝。此分型患者最顯著的臨床表型特征是血液中胰島素原和c肽低和空腹胰島素低。

本發(fā)明還提供了胰島素原合成障礙基因型糖尿病分型試劑盒，包括：擴(kuò)增hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575的引物對(duì)或/和擴(kuò)增pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783的引物對(duì)。

作為優(yōu)選，所述胰島素原合成障礙基因型糖尿病分型試劑盒中所述擴(kuò)增hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575的引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.1～2所示。

作為優(yōu)選，所述胰島素原合成障礙基因型糖尿病分型試劑盒中所述擴(kuò)增pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783的引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.3～4所示。

作為優(yōu)選，所述胰島素原合成障礙基因型糖尿病分型產(chǎn)品的snp位點(diǎn)還包括arap1基因snp位點(diǎn)rs1552224，以進(jìn)一步提高分型的檢出率和準(zhǔn)確率。

作為優(yōu)選，所述的胰島素原合成障礙基因型糖尿病分型試劑盒，所述擴(kuò)增arap1基因snp位點(diǎn)rs1552224的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.19～20所示。

本發(fā)明還提供了人類全基因組中pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921在制備胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。

其中，胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型代表了胰島素原在加工轉(zhuǎn)化成成熟胰島素過程中存在障礙的一種ⅱ型糖尿病分型。胰島素原是由前胰島素原經(jīng)過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)切割信號(hào)肽加工而成。然后胰島素原轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞高爾基體內(nèi)繼續(xù)加工成熟，分泌顆粒包裹胰島素原，并在胰島素原轉(zhuǎn)化酶、內(nèi)肽酶ii和羧基酶h的作用下轉(zhuǎn)化成胰島素和c肽，并最終分泌入門靜脈血。正常情況下胰島素原的轉(zhuǎn)變?cè)谄浞置谇耙汛蟛糠滞瓿?外周血中胰島素原的濃度極低。胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型患者攜帶胰島素原加工轉(zhuǎn)變通路相關(guān)基因缺陷，由胰島素原向胰島素的轉(zhuǎn)化過程中出現(xiàn)障礙，胰島素原無法完全轉(zhuǎn)變成胰島素，被直接分泌入血液，外周血中會(huì)出現(xiàn)“不成比例”的胰島素原增高，無法起到調(diào)節(jié)血糖的作用。此分型患者最顯著的臨床表型特征是血液中胰島素原高和c肽低，但是胰島素敏感度基本不變。

作為優(yōu)選，所述的胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型糖尿病分型試劑盒，包括：擴(kuò)增pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921的引物對(duì)。

作為優(yōu)選，所述的胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.5～6所示。

作為優(yōu)選，所述胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型糖尿病分型試劑盒的snp位點(diǎn)還包括擴(kuò)增thada基因snp位點(diǎn)rs11899863的引物對(duì)、擴(kuò)增dgkb/tmem195基因snp位點(diǎn)rs2191349的引物對(duì)和擴(kuò)增slc30a8基因snp位點(diǎn)rs3802177的引物對(duì)中一種或多種snp位點(diǎn)，以進(jìn)一步提高分型的檢出率和準(zhǔn)確率。

作為優(yōu)選，所述胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增thada基因snp位點(diǎn)rs11899863的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.21～22所示。

作為優(yōu)選，所述胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增dgkb/tmem195基因snp位點(diǎn)rs2191349的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.23～24所示。

作為優(yōu)選，所述胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增slc30a8基因snp位點(diǎn)rs3802177的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.25～26所示。

本發(fā)明還提供了人類全基因組中madd基因snp位點(diǎn)rs10501320或/和nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132在制備胰島素分泌障礙基因型糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。

其中，胰島素分泌障礙基因型是指患者的成熟胰島素分泌到外周血過程中相關(guān)過程輔助基因存在突變的ⅱ型糖尿病基因分型。胰島β細(xì)胞在合成胰島素后，需要在特定的生理信號(hào)的作用下，才會(huì)通過胞吐作用釋放胰島素，同時(shí)釋放的還有等量的c肽。成熟的胰島素會(huì)在高爾基體內(nèi)被包裹在小囊泡內(nèi)，與鋅離子zn⁺結(jié)合成活性蛋白晶體，然后沿微小管移動(dòng)，與細(xì)胞膜融合后經(jīng)過胞吐作用釋放。此基因分型患者攜帶分泌過程相關(guān)基因缺陷，會(huì)在以上胰島素分泌生理過程出現(xiàn)障礙，導(dǎo)致無法分泌足量成熟的胰島素。此分型患者最顯著的臨床表型特征是血液中胰島素原含量正常，c肽和胰島素含量低，但是胰島素敏感度基本不變。

作為優(yōu)選，所述的胰島素分泌障礙基因型糖尿病分型試劑盒，包括：擴(kuò)增madd基因snp位點(diǎn)rs10501320的引物對(duì)或/和擴(kuò)增nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132的引物對(duì)。

作為優(yōu)選，所述的胰島素分泌障礙基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增madd基因snp位點(diǎn)rs10501320的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.7～8所示。

作為優(yōu)選，所述的胰島素分泌障礙基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.9～10所示。

作為優(yōu)選，所述的胰島素分泌障礙基因型糖尿病分型試劑盒的snp位點(diǎn)還包括：擴(kuò)增gck基因snp位點(diǎn)rs4607517的引物對(duì)或/和擴(kuò)增mtnr1b基因snp位點(diǎn)rs10830963的引物對(duì)，以進(jìn)一步提高分型的檢出率和準(zhǔn)確率。

作為優(yōu)選，所述的胰島素分泌障礙基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增gck基因snp位點(diǎn)rs4607517的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.27～28所示。

作為優(yōu)選，所述的胰島素分泌障礙基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增mtnr1b基因snp位點(diǎn)rs10830963的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.29～30所示。

本發(fā)明還提供了人類全基因組中insr基因snp位點(diǎn)rs121913135或/和srr基因snp位點(diǎn)rs4523957中在制備胰島素阻抗基因型糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。

其中，胰島素阻抗基因型是指存在胰島素阻抗相關(guān)基因的ⅱ型糖尿病。胰島素被分泌到血液中后，是通過被細(xì)胞膜上的酪氨酸酶家族受體識(shí)別來發(fā)揮其促進(jìn)葡萄糖攝取的生物學(xué)作用。胰島素受體只能與胰島素結(jié)合，才可發(fā)揮生理功能。如果這個(gè)過程出現(xiàn)障礙，機(jī)體靶細(xì)胞或組織對(duì)胰島素會(huì)缺乏正常作用反應(yīng)，血糖調(diào)節(jié)失衡，我們把這個(gè)過程稱為胰島素阻抗(ir)。胰島素抵抗最主要是由于胰島素受體底物(irs)出現(xiàn)變異或者胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)通量出現(xiàn)異常，主要包括胰島素受體的絡(luò)氨酸激酶活性下降、氧化應(yīng)激通量激活阻斷胰島素作用通路和相關(guān)細(xì)胞因子對(duì)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制效應(yīng)。此基因型患者攜帶胰島素受體和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因突變，存在靶細(xì)胞對(duì)胰島素敏感度低從而造成胰島素低效或失效的狀況。此分型患者最顯著的臨床表型特征是血液中胰島素原和c肽含量正常，胰島素含量高，胰島素敏感度顯著變低。

作為優(yōu)選，所述的胰島素阻抗基因型糖尿病分型試劑盒，包括：擴(kuò)增insr基因snp位點(diǎn)rs121913135的引物對(duì)或/和擴(kuò)增srr基因snp位點(diǎn)rs4523957的引物對(duì)。

作為優(yōu)選，所述的胰島素阻抗基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增insr基因snp位點(diǎn)rs121913135的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.11～12所示。

作為優(yōu)選，所述的胰島素阻抗基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增srr基因snp位點(diǎn)rs4523957的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.13～14所示。

作為優(yōu)選，所述胰島素阻抗基因型糖尿病分型試劑盒的snp位點(diǎn)還包括擴(kuò)增irs1基因snp位點(diǎn)rs7578326的引物對(duì)或/和擴(kuò)增pparg基因snp位點(diǎn)rs13081389的引物對(duì)。

作為優(yōu)選，所述的胰島素阻抗基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增irs1基因snp位點(diǎn)rs7578326的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.31～32所示。

作為優(yōu)選，所述的胰島素阻抗基因型糖尿病分型試劑盒的擴(kuò)增pparg基因snp位點(diǎn)rs13081389的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.33～34所示。

本發(fā)明還提供了人類全基因組中nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585或/和srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139在制備多器官功能退化基因型糖尿病產(chǎn)品中的應(yīng)用。

其中，多器官功能退化基因型是指具有機(jī)體整體代謝相關(guān)基因缺陷(細(xì)胞代謝、肝、腎、胰腺、肌肉組織，糖原異生)的ⅱ型糖尿病患者。多器官功能退化基因型主要涉及一些離子通道蛋白和細(xì)胞表面受體蛋白的基因缺陷。對(duì)于這兩類基因，它們?cè)谏{(diào)節(jié)過程中具有十分重要的功能，例如腺體激素的分泌，蛋白翻譯后的準(zhǔn)確折疊、組裝和運(yùn)輸，神經(jīng)元和心肌細(xì)胞動(dòng)作電位的形成，以及免疫細(xì)胞的免疫反應(yīng)等生理活動(dòng)都具有重要的調(diào)節(jié)作用。離子通道基因上的一些突變的累積會(huì)改變了上述生理過程，造成離子通道蛋白聚集在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上生成量不足或者離子通道蛋白合成質(zhì)量不高，降低離子通道功能，削弱了細(xì)胞離子和能量物質(zhì)運(yùn)輸能力，從而導(dǎo)致疾病的產(chǎn)生。對(duì)于細(xì)胞受體表面受體蛋白的累積突變，也可能會(huì)影響到機(jī)體靶細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收。多器官機(jī)能退化缺陷基因型個(gè)體攜帶影響整體代謝的相關(guān)基因突變，會(huì)造成個(gè)體多器官整體代謝能力的減弱，機(jī)體對(duì)胰島素敏感度降低不敏感，對(duì)血糖濃度緩沖，調(diào)節(jié)作用減弱，代謝功能紊亂。此分型患者的臨床表型特征是血液中胰島素原，c肽和胰島素含量稍微上升，胰島素敏感度稍微下降，空腹血糖上升。

作為優(yōu)選，所述的多器官功能退化基因型糖尿病分型試劑盒，包括：擴(kuò)增nd1基因snp位點(diǎn)或/和擴(kuò)增srit1基因snp位點(diǎn)。

作為優(yōu)選，所述的多器官功能退化基因型糖尿病，包括：擴(kuò)增nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.15～16所示。

作為優(yōu)選，所述的多器官功能退化基因型糖尿病，包括：擴(kuò)增srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.17～18所示。

作為優(yōu)選，所述多器官功能退化基因型糖尿病分型試劑盒的snp位點(diǎn)還包括擴(kuò)增wfs1基因snp位點(diǎn)rs1801214的引物對(duì)或/和擴(kuò)增kcnq1基因snp位點(diǎn)rs163184的引物對(duì)，以進(jìn)一步提高分型的檢出率和準(zhǔn)確率。

作為優(yōu)選，所述的多器官功能退化基因型糖尿病的擴(kuò)增wfs1基因snp位點(diǎn)rs1801214的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.35～36所示。

作為優(yōu)選，所述的多器官功能退化基因型糖尿病的擴(kuò)增kcnq1基因snp位點(diǎn)rs163184的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.37～38所示。

本發(fā)明還提供了人類全基因組中hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575，pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783，pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921，madd基因snp位點(diǎn)rs10501320，nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132，insr基因snp位點(diǎn)rs121913135，srr基因snp位點(diǎn)rs4523957，nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585和srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139中的至少兩種在制備綜合缺陷基因型產(chǎn)品糖尿病中的應(yīng)用。

綜合缺陷基因型是指ⅱ型糖尿病的發(fā)病機(jī)理非常復(fù)雜，大部分糖尿病人可能攜帶不止一種基因分型突變，例如有些患者身上即出現(xiàn)明顯的胰島素抵抗上升(胰島素阻抗相關(guān)基因型)同時(shí)也有胰島素?zé)o法有效分泌到血液中(胰島素分泌相關(guān)缺陷基因型)，另外患者身上也出現(xiàn)了多器官機(jī)能退化缺陷基因型代謝相關(guān)基因的突變，對(duì)機(jī)體整體的代謝能力有微弱不良影響(輕度多器官機(jī)能退化基因型缺陷)，這樣的情況稱為綜合基因突變型。根據(jù)每一位患者基因分型結(jié)果制定康復(fù)方案時(shí)，必須綜合考慮多方面基因分型因素，并結(jié)合臨床醫(yī)護(hù)人員的診斷和治理意見。部分健康人群也可能攜帶一種或多種缺陷，這類人群較易成為糖尿病易感群體，在平時(shí)生活中需要密切注意糖尿病的預(yù)防措施。

更為優(yōu)選，綜合缺陷基因型為胰島素原合成障礙基因型、胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型、胰島素分泌障礙基因型、胰島素阻抗基因型和多器官功能退化基因型的基因snp位點(diǎn)中，至少有兩種基因型的snp位點(diǎn)發(fā)生突變，所述患者為綜合缺陷基因型。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種糖尿病分型試劑盒，包括：擴(kuò)增hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575的引物對(duì)；擴(kuò)增pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783的引物對(duì)；擴(kuò)增pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921的引物對(duì)；擴(kuò)增madd基因snp位點(diǎn)rs10501320的引物對(duì)；擴(kuò)增nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132的引物對(duì)；擴(kuò)增insr基因snp位點(diǎn)rs121913135的引物對(duì)；擴(kuò)增srr基因snp位點(diǎn)rs4523957的引物對(duì)；擴(kuò)增nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585的引物對(duì)；擴(kuò)增srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139的引物對(duì)。

在一些實(shí)施方案中，所述一種糖尿病分型試劑盒，包括：擴(kuò)增hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.1～2所示；擴(kuò)增pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.3～4所示；擴(kuò)增pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.5～6所示；擴(kuò)增madd基因snp位點(diǎn)rs10501320的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.7～8所示；擴(kuò)增nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.9～10所示；擴(kuò)增insr基因snp位點(diǎn)rs121913135的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.11～12所示；擴(kuò)增srr基因snp位點(diǎn)rs4523957的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.13～14所示；擴(kuò)增nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.15～16所示；擴(kuò)增srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.17～18所示，該糖尿病分型試劑盒的分型檢出率在80％以上，分型準(zhǔn)確率在73％以上。

本發(fā)明還提供了另一種糖尿病分型試劑盒，在上述試劑盒的基礎(chǔ)上還包括擴(kuò)增arap1基因snp位點(diǎn)rs1552224的引物對(duì)；擴(kuò)增thada基因snp位點(diǎn)rs11899863的引物對(duì)；擴(kuò)增dgkb/tmem195基因snp位點(diǎn)rs2191349的引物對(duì)；擴(kuò)增slc30a8基因snp位點(diǎn)rs3802177的引物對(duì)；擴(kuò)增gck基因snp位點(diǎn)rs4607517的引物對(duì)；擴(kuò)增mtnr1b基因snp位點(diǎn)rs10830963的引物對(duì)；擴(kuò)增irs1基因snp位點(diǎn)rs7578326的引物對(duì)；擴(kuò)增pparg基因snp位點(diǎn)rs13081389的引物對(duì)；擴(kuò)增wfs1基因snp位點(diǎn)rs1801214的引物對(duì)；擴(kuò)增kcnq1基因snp位點(diǎn)rs163184的引物對(duì)，以進(jìn)一步提高分型的檢出率和準(zhǔn)確率。

在一些實(shí)施方案中，所述的一種糖尿病分型試劑盒，包括：擴(kuò)增arap1基因snp位點(diǎn)rs1552224的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.19～20所示；擴(kuò)增thada基因snp位點(diǎn)rs11899863的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.21～22所示；擴(kuò)增dgkb/tmem195基因snp位點(diǎn)rs2191349的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.23～24所示；擴(kuò)增slc30a8基因snp位點(diǎn)rs3802177的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.25～26所示；擴(kuò)增gck基因snp位點(diǎn)rs4607517的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.27～28所示；擴(kuò)增mtnr1b基因snp位點(diǎn)rs10830963的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.29～30所示；擴(kuò)增irs1基因snp位點(diǎn)rs7578326的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.31～32所示；擴(kuò)增pparg基因snp位點(diǎn)rs13081389的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.33～34所示；擴(kuò)增wfs1基因snp位點(diǎn)rs1801214的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.35～36所示；擴(kuò)增kcnq1基因snp位點(diǎn)rs163184的引物對(duì)，所述引物對(duì)的核苷酸序列如seqidno.37～38所示。該糖尿病分型試劑盒的分型檢出率在91％以上，分型準(zhǔn)確率在80％以上。

作為優(yōu)選，所述arap1基因、hnf1b基因、pdx1基因、pax6基因、madd基因、nkx2-2基因、insr基因、srr基因、nd1基因、srit1基因、arap1基因、thada基因、dgkb/tmem195基因、gck基因、mtnr1b基因、irs1基因、pparg基因、wfs1基因和kcnq1基因中的snp位點(diǎn)信息如表1所示。

表1各基因snp位點(diǎn)信息表

作為優(yōu)選，對(duì)所述基因位點(diǎn)進(jìn)行一代測(cè)序分析檢測(cè)外，還可以采用二代測(cè)序技術(shù)、taqman探針法、kasp方法、飛行串聯(lián)質(zhì)譜方法等snp技術(shù)手段進(jìn)行檢測(cè)。

作為優(yōu)選，本發(fā)明還提供一種糖尿病分型方法，包括：

s1：檢測(cè)hnf1b基因或/和pdx1基因是否發(fā)生突變；

或，檢測(cè)pax6基因是否發(fā)生突變；

或，檢測(cè)madd基因或/和nkx2-2基因是否發(fā)生突變；

或，檢測(cè)insr基因或/和srr基因是否發(fā)生突變；

或，檢測(cè)nd1基因或/和srit1基因是否發(fā)生突變；

s2：若hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575或/和pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783發(fā)生突變，則判斷為胰島素原合成障礙基因型；

或，若pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921發(fā)生突變，則判斷為胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型；

或，若madd基因snp位點(diǎn)rs10501320或/和nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132發(fā)生突變，則判斷為胰島素分泌障礙基因型；

或，若insr基因snp位點(diǎn)rs121913135或/和srr基因snp位點(diǎn)rs4523957發(fā)生突變，則判斷為胰島素阻抗基因型；

或，若nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585或/和srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139發(fā)生突變，則判斷為多器官功能退化基因型；

或，若判斷為胰島素原合成障礙基因型、胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型、胰島素分泌障礙基因型、胰島素阻抗基因型和多器官功能退化基因型的基因snp位點(diǎn)中，至少有兩種基因型的snp位點(diǎn)發(fā)生突變，則判斷為綜合缺陷基因型。

本發(fā)明還提供一種糖尿病分型方法，包括：

s1：檢測(cè)arap1基因、hnf1b基因和pdx1基因中一種或多種基因是否發(fā)生突變；

或，檢測(cè)thada基因、dgkb/tmem195基因、slc30a8基因和pax6基因中一種或多種基因是否發(fā)生突變；

或，檢測(cè)gck基因、mtnr1b基因、madd基因和nkx2-2基因中一種或多種基因是否發(fā)生突變；

或，檢測(cè)irs1基因、pparg基因、insr基因和srr基因中一種或多種基因是否發(fā)生突變；

或，檢測(cè)wfs1基因、kcnq1基因、nd1基因和srit1基因中一種或多種基因是否發(fā)生突變；

s2：若arap1基因snp位點(diǎn)rs1552224、hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575和pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783中的一個(gè)或多個(gè)發(fā)生突變，則判斷為胰島素原合成障礙基因型；

或，若thada基因snp位點(diǎn)rs11899863、dgkb/tmem195基因snp位點(diǎn)rs2191349、slc30a8基因snp位點(diǎn)rs3802177和pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921中一個(gè)或多個(gè)發(fā)生突變，則判斷為胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型；

或，若gck基因snp位點(diǎn)rs4607517、mtnr1b基因snp位點(diǎn)rs10830963、madd基因snp位點(diǎn)rs10501320和nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132中的一個(gè)或多個(gè)發(fā)生突變，則判斷為胰島素分泌障礙基因型；

或，若irs1基因snp位點(diǎn)rs7578326、pparg基因snp位點(diǎn)rs7578326、insr基因snp位點(diǎn)rs121913135和srr基因snp位點(diǎn)rs4523957中的一個(gè)或多個(gè)發(fā)生突變，則判斷為胰島素阻抗基因型；

或，若wfs1基因snp位點(diǎn)rs1801214、kcnq1基因snp位點(diǎn)rs163184、nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585和srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139中的一個(gè)或多個(gè)發(fā)生突變，則判斷為多器官功能退化基因型；

或，若判斷為胰島素原合成障礙基因型、胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型、胰島素分泌障礙基因型、胰島素阻抗基因型和多器官功能退化基因型的基因snp位點(diǎn)中，至少有兩種基因型的snp位點(diǎn)發(fā)生突變，則判斷為綜合缺陷基因型，則判斷為綜合缺陷基因型。

綜上所述，本發(fā)明的公開的制備ⅱ型糖尿病分型產(chǎn)品的基因，人類全基因組中hnf1b基因、pdx1基因、pax6基因、madd基因、nkx2-2基因、insr基因、srr基因、nd1基因和srit1基因中一種或多種在制備糖尿病分型產(chǎn)品中的應(yīng)用。因此，本發(fā)明的糖尿病分型基因能用于ⅱ型糖尿病的分型，對(duì)胰島素原合成障礙基因型、胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型、胰島素分泌障礙基因型、胰島素阻抗基因型、多器官功能退化基因基因型、綜合缺陷基因型糖尿病進(jìn)行有效區(qū)分，所述基因以及根據(jù)所述基因的snp位點(diǎn)制備的試劑盒能均能有效解決當(dāng)前對(duì)ⅱ型糖尿病分型費(fèi)時(shí)費(fèi)力，分型不全面的技術(shù)缺陷，分型檢出率和分型準(zhǔn)確率高。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。

圖1示本發(fā)明糖尿病分型試劑盒的一代測(cè)序部分圖譜，其中，a為arap1基因、b為thada基因、c為slc30a8基因、d為kcnq1基因、e為pparg基因、f為irs1基因、g為gck基因、h為mtnr1b基因的測(cè)序圖譜。

圖2示本發(fā)明的糖尿病分型試劑盒與臨床指標(biāo)值分型結(jié)果進(jìn)行比較分析圖分析，其中a為胰島素原合成障礙基因型、b為胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型、c為胰島素分泌障礙基因型、d為胰島素阻抗基因型；其中，橫坐標(biāo)的a和b分別為糖尿病分型試劑盒a和糖尿病分型試劑盒b。

圖3示本發(fā)明的糖尿病分型試劑盒與臨床指標(biāo)值分型結(jié)果比較韋恩圖分析，其中a為胰島素原合成障礙基因型、b為胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型、c為胰島素分泌障礙基因型、d為胰島素阻抗基因型、e為多器官功能退化基因型、f為綜合缺陷基因型，a和b分別為糖尿病分型試劑盒a和糖尿病分型試劑盒b、c為臨床指標(biāo)值分型方法。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明公開了一種糖尿病分型試劑盒，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

本發(fā)明提供的一種糖尿病分型試劑盒，其中所用原料及試劑均可由市場(chǎng)購得。

下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：以下實(shí)施例采用了兩種分型試劑盒：糖尿病分型試劑盒a(以下簡(jiǎn)稱a)和糖尿病分型試劑盒b(以下簡(jiǎn)稱b)；糖尿病分型試劑盒a含有擴(kuò)增hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575的引物對(duì)；擴(kuò)增pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783的引物對(duì)；擴(kuò)增pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921的引物對(duì)；擴(kuò)增madd基因snp位點(diǎn)rs10501320的引物對(duì)；擴(kuò)增nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132的引物對(duì)；擴(kuò)增insr基因snp位點(diǎn)rs121913135的引物對(duì)；擴(kuò)增srr基因snp位點(diǎn)rs4523957的引物對(duì)；擴(kuò)增nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585的引物對(duì)；擴(kuò)增srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139的引物對(duì)。

糖尿病分型試劑盒b含有：擴(kuò)增hnf1b基因snp位點(diǎn)rs1800575的引物對(duì)；擴(kuò)增pdx1基因snp位點(diǎn)rs137852783的引物對(duì)；擴(kuò)增pax6基因snp位點(diǎn)rs121907921的引物對(duì)；擴(kuò)增madd基因snp位點(diǎn)rs10501320的引物對(duì)；擴(kuò)增nkx2-2基因snp位點(diǎn)rs558588132的引物對(duì)；擴(kuò)增insr基因snp位點(diǎn)rs121913135的引物對(duì)；擴(kuò)增srr基因snp位點(diǎn)rs4523957的引物對(duì)；擴(kuò)增nd1基因snp位點(diǎn)rs28358585的引物對(duì)；擴(kuò)增srit1基因snp位點(diǎn)rs2236139的引物對(duì)；擴(kuò)增arap1基因snp位點(diǎn)rs1552224的引物對(duì)；擴(kuò)增thada基因snp位點(diǎn)rs11899863的引物對(duì)；擴(kuò)增dgkb/tmem195基因snp位點(diǎn)rs2191349的引物對(duì)；擴(kuò)增slc30a8基因snp位點(diǎn)rs3802177的引物對(duì)；擴(kuò)增gck基因snp位點(diǎn)rs4607517的引物對(duì)；擴(kuò)增mtnr1b基因snp位點(diǎn)rs10830963的引物對(duì)；擴(kuò)增irs1基因snp位點(diǎn)rs7578326的引物對(duì)；擴(kuò)增pparg基因snp位點(diǎn)rs13081389的引物對(duì)；擴(kuò)增wfs1基因snp位點(diǎn)rs1801214的引物對(duì)；擴(kuò)增kcnq1基因snp位點(diǎn)rs163184的引物對(duì)。

其中，糖尿病分型試劑盒b含有糖尿病分型試劑盒a的引物對(duì)，還含有10個(gè)其他基因的snp位點(diǎn)引物對(duì)。

實(shí)施例1

樣品dna提取，步驟如下：

1、從某醫(yī)院中，獲得300例已確診為ⅱ型糖尿病人的血液樣本，300名患者無ⅰ型糖尿病和其他種類的糖尿病的典型特征。使用血液樣本dna抽提試劑盒(magenhipuretissue&blooddnakitd3018-03)抽提標(biāo)本dna，具體步驟按照試劑盒說明書上操作。樣品dna使用thermo公司的nanodrop進(jìn)行定量和質(zhì)控。

2、樣品dnapcr擴(kuò)展

pcr反應(yīng)體系使用taqdnapolymerase(vazyme，p101)，其中包含10×taqbuffer(mg²⁺)，dntpmix(10mm)。對(duì)于每個(gè)snp位點(diǎn)，構(gòu)建一個(gè)pcr反應(yīng)體系。

每個(gè)反應(yīng)體系：

3、pcr反應(yīng)條件：(使用touchdownpcr方法保證擴(kuò)展的特異性，并且在后面15個(gè)循環(huán)，使用較低的退火溫度，保證擴(kuò)展效率)pcr程序步驟設(shè)置如下：

(2-4步驟重復(fù)20個(gè)循環(huán))

5.94℃15s

6.55℃30s

7.72℃30s

(5-7步驟重復(fù)15個(gè)循環(huán))

8.72℃5min

4℃保存產(chǎn)物。

4、基因位點(diǎn)擴(kuò)展產(chǎn)物一代測(cè)序檢測(cè)，樣品送測(cè)序公司進(jìn)行一代測(cè)序，測(cè)序平臺(tái)是abi一代測(cè)序平臺(tái)，如圖1所示，圖1列舉了六個(gè)snp位點(diǎn)的測(cè)序圖譜，編號(hào)a為arap1基因rs1552224位點(diǎn)、b為thada基因rs11899863位點(diǎn)、c為slc30a8基因rs3802177位點(diǎn)、d為kcnq1基因rs163184位點(diǎn)、e為pparg基因rs13081389位點(diǎn)、f為irs1基因rs7578326位點(diǎn)，g為gck基因rs4607517、h為mtnr1b基因rs10830963的序列測(cè)序圖譜，其中a、b、e、g、h為野生型純合子、c、f突變型為純合子，d為突變型雜合子。

實(shí)施例2

根據(jù)實(shí)施例1中300例ⅱ型糖尿病人各基因測(cè)序結(jié)果，對(duì)300例糖尿病人進(jìn)行分型。本實(shí)施例中采用兩種分型試劑盒，一種是糖尿病分型試劑盒a，另外一種是糖尿病分型試劑盒b。具體的分型結(jié)果總結(jié)如下表格。(受試者沒有以上基因位點(diǎn)突變，屬于暫時(shí)無法分型組，這是由于ⅱ型糖尿病發(fā)病機(jī)理非常復(fù)雜，至今現(xiàn)在還有很多與其分型相關(guān)的發(fā)病機(jī)理沒有被闡明)。

表1糖尿病分型結(jié)果分析統(tǒng)計(jì)表

可以看到，糖尿病分型試劑盒a，300例人群中能夠?qū)?0％以上的人群進(jìn)行分型，糖尿病分型試劑盒b，能夠?qū)?6％以上的人群進(jìn)行分型，通過b試劑盒能夠有效分型的比例比a高。

實(shí)施例3

對(duì)實(shí)施例2的分型結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證：

一、對(duì)實(shí)施例2中的300ii型糖尿病例患者血樣抽取前采取隔夜禁食10-12h，次日清晨在空腹?fàn)顟B(tài)下取靜脈血。當(dāng)日測(cè)定空腹血糖、糖化血紅蛋白；離取血清置于-80℃冰箱保存，用于統(tǒng)一檢測(cè)其他指標(biāo)，包括空腹胰島素原、空腹胰島素、空腹c肽。均采用常規(guī)設(shè)備和方法，具體檢測(cè)方法如下：

1、血糖及糖化血紅蛋白檢測(cè)采用advia2400全自動(dòng)生化分析儀完成；

2、血清胰島素、胰島素原采用生物素-親和素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ba-elisa)檢測(cè)，試劑盒由北京東亞免疫技術(shù)研究所提供，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

3、空腹c肽的檢測(cè)：采用放射免疫法測(cè)c肽，檢測(cè)試劑盒由深圳拉爾文生物工程技術(shù)有限公司提供，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

4、胰島β細(xì)胞功能的評(píng)價(jià)指標(biāo)(homa-b)，參照文獻(xiàn)計(jì)算。

5、穩(wěn)態(tài)模型評(píng)估胰島素抵抗水平指標(biāo)(homa-ir)，參照文獻(xiàn)計(jì)算。

表1為現(xiàn)有技術(shù)公開的利用生理指標(biāo)進(jìn)行糖尿病分型的標(biāo)準(zhǔn)表。

表2糖尿病相關(guān)生理指標(biāo)分型方法標(biāo)準(zhǔn)表

根據(jù)表2中的標(biāo)準(zhǔn)表對(duì)實(shí)施例2中的300例患者進(jìn)行生理指標(biāo)值分型，分型結(jié)果如表3所示。

表3300全體ii型糖尿病例患者進(jìn)行血清中糖尿病相關(guān)生理指標(biāo)分型方法的結(jié)果表

表3結(jié)果可知，采用相關(guān)生理指標(biāo)值對(duì)糖尿病分型中綜合缺陷型比例最高，其次是胰島素阻抗型和多器官功能退化型，該結(jié)果與表1結(jié)果類似。

二、對(duì)300例已確診為ii型糖尿病的患者進(jìn)行臨床指標(biāo)值分型后，得出表3的結(jié)果，以該表位標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)施例2采用基因測(cè)序分型的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果如圖2的比較分析圖和圖3的韋恩圖所示。

圖2的比較分析圖說明了，橫坐標(biāo)為a組、b組和300全體ii型糖尿病例患者組，縱坐標(biāo)為臨床指標(biāo)值，a組、b組和300全體ii型糖尿病例患者組散點(diǎn)中的短橫線為每一組的平均值，圖中的虛線表示臨床指標(biāo)值的患病閾值。

請(qǐng)參照?qǐng)D2，具體的，a為胰島素原合成障礙基因型，該基因型最主要臨床特征指標(biāo)是患者血清中空腹胰島素原含量值與c肽的含量值分別顯著低于0.05μg/l和0.77μg/l的閾值，表1中a組和b組分別檢測(cè)出12名和14名患者為胰島素原合成障礙基因型，從圖2中的a的左右兩幅圖可知，這a組和b組檢測(cè)出的患者的空腹胰島素原含量與c肽含量均低于空腹胰島素原含量值和c肽含量值的閾值，a組的12名患者的空腹胰島素原含量值和c肽含量值與300全體ii型糖尿病例患者組相比均有顯著性差異，p<0.01，說明12名患者的空腹胰島素原含量值和c肽含量值顯著比300全體ii型糖尿病例患者的空腹胰島素原含量值和c肽含量值低；b組的該14名患者的空腹胰島素原含量值和c肽含量值與300全體ii型糖尿病例患者組相比均有顯著性差異，p<0.01，說明該14名患者的空腹胰島素原含量值和c肽含量值顯著比300全體ii型糖尿病例患者的空腹胰島素原含量值和c肽含量值低。表明實(shí)施例2中a組和b組分別檢測(cè)出12名和14名患者符合該基因分型的臨床特征，表3結(jié)果顯示300全體ii型糖尿病例患者的胰島素原合成障礙基因型為15人，由此可知，a組的檢出率為80％，b組的檢出率為93％。

請(qǐng)參照?qǐng)D2，具體的，b為胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型，該基因型最主要的臨床特征是患者血清中空腹胰島素原含量值顯著高于0.1μg/l的閾值，空腹c肽的含量值顯著低于0.77μg/l的閾值，a組的25名患者的空腹胰島素原含量值和空腹c肽含量與300全體ii型糖尿病例患者組相比均有顯著性差異，p<0.01，說明該25名患者的空腹胰島素原含量值顯著高于300全體ii型糖尿病例患者組，該25名患者的空腹c肽的含量值顯著低于300全體ii型糖尿病例患者組；b組的27名患者的空腹胰島素原和c肽含量與300全體ii型糖尿病例患者組相比均有顯著性差異，p<0.01，說明該27名患者的空腹胰島素原含量值顯著高于300全體ii型糖尿病例患者組的空腹胰島素原含量值，該27名患者的空腹c肽的含量值顯著低于300全體ii型糖尿病例患者組的空腹c肽的含量值。表1中a組和b組分別檢測(cè)出25名和27名患者為胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型，從圖2中的b的左右兩幅圖可知，這a組和b組檢測(cè)出的患者的空腹胰島素原含量高于閾值，c肽含量均低于閾值，表明實(shí)施例2中a組和b組分別檢測(cè)出25名和27名患者符合胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型最主要的臨床特征，表3結(jié)果顯示300全體ii型糖尿病例患者中的胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型為29人，由此可知，a組的檢出率為86％，b組的檢出率為93％。

請(qǐng)參照?qǐng)D2，具體的，c為胰島素分泌障礙基因型，該基因型最主要的臨床特征是患者h(yuǎn)oma-b評(píng)價(jià)指標(biāo)值顯著低于30％的閾值，表1中a組和b組分別檢測(cè)出42名和43名患者為胰島素分泌障礙基因型，a組的42名患者的homa-b評(píng)價(jià)指標(biāo)值與300全體ii型糖尿病例患者組相比均有顯著性差異，p<0.01，說明該42名患者的homa-b評(píng)價(jià)指標(biāo)值低于300全體ii型糖尿病例患者組的homa-b評(píng)價(jià)指標(biāo)值；b組的43名患者的homa-b評(píng)價(jià)指標(biāo)值與300全體ii型糖尿病例患者組相比均有顯著性差異，p<0.01，說明該43名患者的homa-b評(píng)價(jià)指標(biāo)值低于300全體ii型糖尿病例患者組的homa-b評(píng)價(jià)指標(biāo)值。從圖2中的c圖可知，這a組和b組檢測(cè)出的患者的homa-b評(píng)價(jià)指標(biāo)值低于閾值，表明實(shí)施例2中a組和b組分別檢測(cè)出42名和43名患者符合胰島素分泌障礙基因型最主要的臨床特征，表3結(jié)果顯示300全體ii型糖尿病例患者中胰島素分泌障礙基因型為46人，因此，a組的檢出率為91％，b組的檢出率為93％。

請(qǐng)參照?qǐng)D2，具體的，d為胰島素阻抗基因型，該基因型最主要的臨床特征是患者h(yuǎn)oma-ir評(píng)價(jià)指標(biāo)值顯著高于4.67的閾值，表1中a組和b組分別檢測(cè)出58名和60名患者為胰島素阻抗基因型，a組的58名患者的homa-ir評(píng)價(jià)指標(biāo)值與300全體ii型糖尿病例患者組相比均有顯著性差異，p<0.01，說明該58名患者的homa-ir評(píng)價(jià)指標(biāo)值低于300全體ii型糖尿病例患者組的homa-ir評(píng)價(jià)指標(biāo)值；b組的60名患者的homa-ir評(píng)價(jià)指標(biāo)值與300全體ii型糖尿病例患者組相比均有顯著性差異，p<0.01，說明該60名患者的homa-ir評(píng)價(jià)指標(biāo)值低于300全體ii型糖尿病例患者組的homa-ir評(píng)價(jià)指標(biāo)值。從圖2中的d圖可知，這a組和b組檢測(cè)出的患者的homa-ir評(píng)價(jià)指標(biāo)值高于閾值，c肽含量均低于閾值，表明實(shí)施例2中a組和b組分別檢測(cè)出58名和60名患者符合胰島素阻抗基因型最主要的臨床特征，表3結(jié)果顯示300全體ii型糖尿病例患者中的胰島素原合成障礙基因型為66人，因此，a組的檢出率為88％，b組的檢出率為91％。

多器官功能退化基因型的臨床特征如表2所示，表1中a組和b組分別檢測(cè)出50名和53名患者為多器官功能退化基因型，表3結(jié)果顯示300全體ii型糖尿病例患者中的多器官功能退化基因型為54人，因此，a組的檢出率為92％，b組的檢出率為98％。

綜合缺陷基因型為同時(shí)符合胰島素原合成障礙基因型、胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型、胰島素分泌障礙基因型和多器官功能退化基因型兩種以上的糖尿病分型，其臨床特征較其他基因型復(fù)雜，表1中a組和b組分別檢測(cè)出83名和90名患者為綜合缺陷基因型，表3結(jié)果顯示300全體ii型糖尿病例患者中的多器官功能退化基因型為90人，因此，a組的檢出率為92％，b組的檢出率為100％。

圖3的韋恩圖顯示，左上角圓圈為a組，右上角圓圈為b組，中間圓圈c為臨床指標(biāo)值分型組，三個(gè)圓圈重疊部分為用三種方法共同的分型患者人數(shù)，左上角圓圈與中間圓圈重疊部分為a組與臨床指標(biāo)值分型組c的重疊分型患者人數(shù)，以現(xiàn)有技術(shù)的臨床指標(biāo)值分型組c為標(biāo)準(zhǔn)，a組與c組重疊人數(shù)越多，說明其分型準(zhǔn)確性越高；右上角圓圈與中間圓圈重疊部分為b方法與臨床指標(biāo)值分型方法同樣分型患者人數(shù)，以現(xiàn)有技術(shù)的臨床指標(biāo)值分型組c為標(biāo)準(zhǔn)，b組與c組重疊人數(shù)越多，說明其分型準(zhǔn)確性越高。

請(qǐng)參照?qǐng)D3，具體的，a表示胰島素原合成障礙基因型，對(duì)表1和表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行韋恩圖分析，以臨床指標(biāo)值分型方法為標(biāo)準(zhǔn)，a方法的分型準(zhǔn)確率為73％，b方法的分型準(zhǔn)確率為80％。

請(qǐng)參照?qǐng)D3，具體的，b表示胰島素原與胰島素轉(zhuǎn)化障礙基因型，對(duì)表1和表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行韋恩圖分析，以臨床指標(biāo)值分型方法為標(biāo)準(zhǔn)，a方法的分型準(zhǔn)確率為76％，b方法的分型準(zhǔn)確率為86％。

請(qǐng)參照?qǐng)D3，具體的，c表示胰島素分泌障礙基因型，對(duì)表1和表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行韋恩圖分析，以臨床指標(biāo)值分型方法為標(biāo)準(zhǔn)，a方法的分型準(zhǔn)確率為85％，b方法的分型準(zhǔn)確率為89％。

請(qǐng)參照?qǐng)D3，具體的，d表示胰島素阻抗基因型，對(duì)表1和表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行韋恩圖分析，以臨床指標(biāo)值分型方法為標(biāo)準(zhǔn)，a方法的分型準(zhǔn)確率為86％，b方法的分型準(zhǔn)確率為88％。

請(qǐng)參照?qǐng)D3，具體的，e表示多器官功能退化基因型，對(duì)表1和表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行韋恩圖分析，以臨床指標(biāo)值分型方法為標(biāo)準(zhǔn)，a方法的分型準(zhǔn)確率為89％，b方法的分型準(zhǔn)確率為93％。

請(qǐng)參照?qǐng)D3，具體的，f表示綜合缺陷基因型，對(duì)表1和表3的數(shù)據(jù)進(jìn)行韋恩圖分析，以臨床指標(biāo)值分型方法為標(biāo)準(zhǔn)，a方法的分型準(zhǔn)確率為89％，b方法的分型準(zhǔn)確率為98％。

因此，糖尿病分型試劑盒b含有糖尿病分型試劑盒a的引物對(duì)，還含有10個(gè)其他基因的snp位點(diǎn)引物對(duì)；從以上實(shí)施例可知糖尿病分型試劑盒b的分型檢出率和分型準(zhǔn)確率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于糖尿病分型試劑盒a。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。

sequencelisting

<110>廣州普麥健康咨詢有限公司

<120>一種糖尿病分型試劑盒

<130>mp1707008

<160>38

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>1

ctgaggcagccaatggggtg20

<210>2

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>2

ctctcccagcatctcaacaag21

<210>3

<211>14

<212>dna

<213>人工序列

<400>3

tggagcagggcagc14

<210>4

<211>17

<212>dna

<213>人工序列

<400>4

ctcggctccctccggga17

<210>5

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>5

gtatgcattaaacaatgacaag22

<210>6

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>6

ctacagtaagttctcatacc20

<210>7

<211>17

<212>dna

<213>人工序列

<400>7

ggctgactctggagtag17

<210>8

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>8

gcaatacctctcaaatcctc20

<210>9

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>9

agaggagtgtcaggaaggagctt23

<210>10

<211>16

<212>dna

<213>人工序列

<400>10

ctgcagctgcgcgcga16

<210>11

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>11

gggtctctgcctcacccttg20

<210>12

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>12

catgctctgtgtacgtgcc19

<210>13

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>13

gggataatacagctgactgc20

<210>14

<211>26

<212>dna

<213>人工序列

<400>14

aatctcagcagctttcattgtgatac26

<210>15

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>15

aaaggccccaacgttgtag19

<210>16

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>16

cgatggtgagagctaagg18

<210>17

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>17

ggatgaatagatctcaagg19

<210>18

<211>26

<212>dna

<213>人工序列

<400>18

ctattaataaaggattggggaacatg26

<210>19

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>19

ggctgcgttctcttggaggt20

<210>20

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>20

tggacagatccacagttatac21

<210>21

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>21

agagcccaatgcttcccaatc21

<210>22

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>22

agcctctaggcagtcacct19

<210>23

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>23

ggcaaccagtctcctacccag21

<210>24

<211>18

<212>dna

<213>人工序列

<400>24

ctgactcagctgggaagc18

<210>25

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>25

tcaaacatgctgctatgcag20

<210>26

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>26

tggatctcagtgcctcttc19

<210>27

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>27

aggagactcagggaggtaatg21

<210>28

<211>19

<212>dna

<213>人工序列

<400>28

agcctcattcatagtcatg19

<210>29

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>29

tgctggcaaagctgcccctc20

<210>30

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<400>30

cagtgcagactgttttctaatct23

<210>31

<211>26

<212>dna

<213>人工序列

<400>31

gttttccctgttctctgacatgtggc26

<210>32

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>32

agtattggtccatgaaaatggt22

<210>33

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>33

acataaaaatggccacttggg21

<210>34

<211>26

<212>dna

<213>人工序列

<400>34

caaatgtgcacctctacacctggctt26

<210>35

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<400>35

cttgaattggccctacctga20

<210>36

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<400>36

gaccacggagagctcacaccac22

<210>37

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>37

agtcattcacacttcagtatg21

<210>38

<211>21

<212>dna

<213>人工序列

<400>38

gtcaatgtggggaggtggtaa21