本發(fā)明屬于醫(yī)藥及保健食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及金毛狗脊粗糖聚合物(包括寡糖和多糖)、精糖聚合物(包括寡糖和多糖)及其制備方法，而且還涉及金毛狗脊糖聚合物(包括寡糖和多糖)在制備預防和/或治療骨質(zhì)疏松癥的藥物或保健食品或功能食品中的應用。

背景技術(shù)：

骨質(zhì)疏松癥是一種骨退行性病變，以骨礦物量減少、骨微結(jié)構(gòu)破壞、骨強度降低，從而導致骨的脆性增加和易于發(fā)生骨折為特征的疾病。隨著人類壽命的延長和社會老齡化的發(fā)展，骨質(zhì)疏松所導致的骨折在大大增加老年人病殘率和病死率的同時，明顯加重了社會公共衛(wèi)生的經(jīng)濟負擔?，F(xiàn)階段對骨質(zhì)疏松的藥物治療主要是鈣劑、維生素d和骨吸收抑制藥(包括雌激素、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雙膦酸鹽等)等三大類藥。但是研究表明，長期使用激素替代療法會增加患乳腺癌、冠心病等疾病的幾率，其他臨床上使用的化學合成藥物均存在一定的副作用。因此，利用中藥，尤其是補腎壯骨類中藥防治骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)成為近幾年醫(yī)藥界研究的熱點。

金毛狗脊為蚌殼蕨科植物金毛狗脊cibotiumbarometz的根莖，原產(chǎn)于熱帶及亞熱帶地區(qū)，我國華東、華南及西南地區(qū)均有分布。歷版《中國藥典》均收載其為常用中藥狗脊，其味苦、甘，性溫。具有補肝腎、強筋骨、舒經(jīng)絡、除濕痛及利尿的功能，用于腰腿酸痛、手足麻木、半身不遂、白帶遺精、血崩等癥。

中國專利申請cn103301168a公開了一種金毛狗脊加工方法，目的在于從金毛狗脊中分離多種有效物質(zhì)，該發(fā)明所采取的技術(shù)方案是按照選料、清洗、磨制、漂洗、涼曬、沉淀、濃縮、烘干、包裝工序進行加工，該發(fā)明所采取的技術(shù)方案操作簡便，運用該技術(shù)方案可獲得純度高的纖維、淀粉、鞣質(zhì)及綿馬酚等物質(zhì)，原料利用率高。

中國專利申請cn104435615a提供了一種含金毛狗脊保健藥酒，它所含的活性成分由下列重量份原料藥配比制備而成：金毛狗脊、白側(cè)耳、何首烏等和30°-50°白酒5000-10000份，除雜、粉碎，過60目篩后，放入30°-50°白酒中浸泡10-20天，濾去藥渣即得藥酒。

中國專利申請cn106190716a公開了一種高原金毛狗脊益腎養(yǎng)生滋補酒及其制備方法，特別是以金毛狗脊、鎖陽、藏紅花、雪靈芝為主要原料制成的保健酒。其活性成分原料包括金毛狗脊、鎖陽、藏紅花、雪靈芝、雪蓮花、冬蟲夏草、松露、佛手參、人參果、仙桃、綠蘿花、瑪咖、生熟地、威靈仙、肉桂、龜板、黃狗腎、蛤蚧、山茱萸、菟絲子、金櫻子、何首烏、女貞子、當歸、雞血藤、甘草、冰糖、純糧蒸餾白酒。

目前，已有報道對金毛狗脊的地上和根莖等部位的化學成分進行了研究，發(fā)現(xiàn)金毛狗脊含有淀粉，鞣質(zhì)，揮發(fā)油等物質(zhì)，水溶性酚酸類化合物，糖及苷類化合物，還含有氨基酸等化學成分。然而，對金毛狗脊粗糖聚合物、精糖聚合物及其在防治骨質(zhì)疏松癥方面的研究尚未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供金毛狗脊糖聚合物。

本發(fā)明的另一目的在于提供金毛狗脊糖聚合物的制備方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

金毛狗脊糖聚合物，所述金毛狗脊糖聚合物包括金毛狗脊糖聚合物cbp-1和金毛狗脊糖聚合物cbp-2，所述金毛狗脊糖聚合物cbp-1是由葡萄糖和甘露糖組成的糖聚物，其結(jié)構(gòu)為：

其中n的范圍為1～30；

所述金毛狗脊糖聚合物cbp-2是由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖組成的糖聚物，其結(jié)構(gòu)為：

其中x，y，z，m的范圍分別為1～30。

金毛狗脊糖聚合物的制備方法，包括以下步驟：

s1切塊：將金毛狗脊干燥根莖切成塊，得金毛狗脊塊狀物，將上述金毛狗脊塊狀物用水洗凈，然后浸泡5～15h，得浸泡后金毛狗脊塊狀物；

s2水提：將步驟s1所得金毛狗脊塊狀物進行水提，水提時水的添加量為上述金毛狗脊塊狀物重量的5～20倍，水提時水的溫度為60～100℃，水提時間為1～10h，收集提取液，藥渣晾干；

s3堿提：將步驟s2所得藥渣浸沒于濃度為0.1～1m的naoh溶液中，naoh溶液的量為上述藥渣重量的10～20倍，室溫放置2～20h，取上清液，將上清液用濃度為0.5m的hcl溶液進行中和，使其ph為5～9，取上清液進行離心，離心速度為4500～5600r/min，離心時間為8～13min，取上清液，60℃減壓濃縮，然后加入乙醇使乙醇體積濃度為60～85％，靜置24h后離心，收集沉淀，得堿提粗糖聚合物cb4；

s4純化：利用sevag法對步驟s3所得堿提粗糖聚合物cb4進行除蛋白，將除蛋白后的堿提粗糖聚合物cb4用透析袋進行透析、凍干，即得金毛狗脊糖聚合物cb4；

s5離子交換柱層析：將步驟s4所得金毛狗脊糖聚合物cb4溶于去離子水中，上樣于deae-cellulose52柱，在不同鹽濃度的洗脫液條件下出現(xiàn)2個峰，其中峰一為水(0mnacl)洗脫部分，峰二為0.05mnacl洗脫部分，洗脫過程中使用苯酚-硫酸法跟蹤洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線分別收集糖部分，分別將所得洗脫液濃縮、冷凍干燥后，得峰一糖聚合物和峰二糖聚合物；

s6分子篩凝膠層析：將步驟s5所得峰一糖聚合物樣品，用水進行溶解，離心，取上清液，上sephadexg-75柱，用水進行洗脫，采用苯酚-硫酸法跟蹤洗脫曲線，出現(xiàn)一個單一對稱峰，收集主峰，濃縮，冷凍干燥，得金毛狗脊糖聚合物cbp-1；同樣地，將步驟s5所得峰二糖聚合物樣品，用水進行溶解，離心，取上清液，上sephadexg-75柱，用水進行洗脫，采用苯酚-硫酸法跟蹤洗脫曲線，出現(xiàn)一個單一對稱峰，收集主峰，濃縮，冷凍干燥，得金毛狗脊糖聚合物cbp-2。

進一步地，所述步驟s1浸泡12h。

進一步地，所述步驟s2水提時水的添加量為上述金毛狗脊塊狀物重量的10倍，水提時水的溫度為85℃，水提時間為2h。

進一步地，所述步驟s3中將步驟s2所得藥渣浸沒于濃度為0.3m的naoh溶液中，naoh溶液的量為上述藥渣重量的15倍，室溫放置3h，取上清液，將上清液用濃度為0.5m的hcl溶液進行中和，使其ph為7，取上清液進行離心，離心速度為5000r/min，離心時間為10min，取上清液，60℃減壓濃縮，然后加入乙醇使乙醇體積濃度為75％。

進一步地，所述步驟s4所述透析袋得截留分子量為1000da。

另外，本發(fā)明還提供了金毛狗脊中粗糖聚合物的制備方法，包括以下步驟：

(1)切塊：將金毛狗脊干燥根莖切成塊，得金毛狗脊塊狀物，將上述金毛狗脊塊狀物用水洗凈，然后浸泡5～15h，得浸泡后金毛狗脊塊狀物；

(2)水提：將步驟(1)所得金毛狗脊塊狀物進行水提，水提時水的添加量為上述金毛狗脊塊狀物重量的5～20倍，水提時水的溫度為60～100℃，水提時間為1～10h，收集提取液，藥渣晾干；

(3)分級醇沉：將步驟(2)所得提取液濃縮后，加入乙醇使乙醇體積濃度為a％，靜置，收集沉淀，得粗糖聚合物cb1；將上清液再次濃縮，加入乙醇使乙醇體積濃度為b％，靜置，收集沉淀，得粗糖聚合物cb2；將上清液再次濃縮，加入乙醇使乙醇體積濃度為c％，靜置，收集沉淀，得粗糖聚合物cb3；其中10≤a＜b＜c＜100；

(4)堿提：將步驟(2)所得藥渣浸泡于濃度為0.1～1m的naoh溶液中，靜置2～20h，上清液用濃度為0.1～1m的hcl進行中和，使上清液的ph為5～9，離心，取上清，將上清濃縮，加入乙醇使乙醇體積濃度為50～90％，靜置，收集沉淀，得堿提粗糖聚合物cb4；

(5)純化：對步驟(3)所得粗糖聚合物cb1、粗糖聚合物cb2、粗糖聚合物cb3和步驟(4)所得堿提粗糖聚合物cb4進行純化，即得金毛狗脊粗糖聚合物。

進一步地，所述步驟(1)浸泡12h。

進一步地，所述步驟(2)水提時水的添加量為上述金毛狗脊塊狀物重量的10倍，水提時水的溫度為85℃，水提時間為2h。

進一步地，所述步驟(3)中10≤a＜b＜c＜100，且10≤a＜60，60＜b＜80，80＜c＜100。

進一步地，所述步驟(3)中所有所述濃縮為40～70℃減壓濃縮，所有所述靜置的時間為10～28h。

進一步地，所述步驟(4)中將步驟(2)所得藥渣浸沒于濃度為0.3m的naoh溶液中，naoh溶液的量為上述藥渣重量的15倍，室溫放置3h，取上清液，將上清液用濃度為0.5m的hcl溶液進行中和，使其ph為7，取上清液進行離心，離心速度為5000r/min，離心時間為10min，取上清液，60℃減壓濃縮，然后加入乙醇使乙醇體積濃度為75％。

進一步地，所述步驟(5)中所述純化具體操作為利用sevag法分別對粗糖聚合物cb1、cb2、cb3、cb4除蛋白，除蛋白后再經(jīng)透析袋進行透析、凍干。

進一步地，所述步驟(5)中所述透析袋的截留分子量為1000da。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述金毛狗脊糖聚合物和金毛狗脊粗糖聚合物在制備防治骨質(zhì)疏松的藥物或保健食品或功能食品中的應用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用了以上技術(shù)方案，具有如下的優(yōu)點和有益效果：

(1)與傳統(tǒng)水煮法提取糖聚合物相比，本發(fā)明采用水提分級醇沉法和堿提醇沉法的結(jié)合，乙醇濃度由低到高進行分級醇沉，對金毛狗脊糖聚合物進行初步分離，同時高濃度乙醇能將極性大、水溶性好的糖聚合物與極性小、水溶性差的糖聚合物分離，使所提取的糖聚合物組合物含有更多種類的糖聚合物成分。且本發(fā)明的制備工藝簡單，操作方便，且可以大規(guī)模生產(chǎn)。

(2)本發(fā)明利用離子交換柱層析和分子篩凝膠柱層析方法純化金毛狗脊糖聚合物，首次制備出兩種金毛狗脊精糖聚物，并且對其理化性質(zhì)、分子量、單糖組成等進行了系統(tǒng)的分析鑒定，并成功得出了該兩種糖聚合物的特征結(jié)構(gòu)。本發(fā)明提供了金毛狗脊中粗糖聚合物、精糖聚合物的制備方法及金毛狗脊糖聚合物在抗骨質(zhì)疏松方面的活性研究，為金毛狗脊糖聚合物在醫(yī)藥、保健品、食品等領(lǐng)域的應用提供依據(jù)。

(3)本發(fā)明中通過柱層析法對金毛狗脊粗糖聚合物進行分離純化，效果顯著，首次制備出兩種金毛狗脊糖聚物cbp-1和cbp-2。

(4)本發(fā)明對制備出的兩種金毛狗脊糖聚合物結(jié)構(gòu)進行了鑒定，明確了其理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)，為探究其藥理活性機制提供結(jié)構(gòu)依據(jù)。

(5)本發(fā)明提供了金毛狗脊中具有抗骨質(zhì)疏松活性的成分的制備方法，并且篩選出了含量高、活性強的糖聚合物部位。

附圖說明

圖1為cbp-1的高效液相色譜圖；

圖2為cbp-1的紅外圖譜；

圖3為cbp-1的¹³cnmr圖譜；

圖4為cbp-1的¹hnmr圖譜；

圖5為cbp-1的¹h-¹hcosy圖譜；

圖6為cbp-1的hsqc圖譜；

圖7為cbp-1的hmbc圖譜；

圖8為cbp-2的高效液相色譜圖；

圖9為cbp-2的紅外圖譜；

圖10為cbp-2的¹³cnmr圖譜；

圖11為cbp-2的¹hnmr圖譜；

圖12為cbp-2的hsqc圖譜；

圖13為cbp-2的hmbc圖譜；

圖14為金毛狗脊糖聚合物對去卵巢大鼠股骨骨密度的影響；

圖15為金毛狗脊糖聚合物對去卵巢大鼠腰椎骨骨密度的影響；

圖16為金毛狗脊糖聚合物對去卵巢大鼠股骨骨礦物量的影響；

圖17為金毛狗脊糖聚合物對去卵巢大鼠腰椎骨骨礦物量的影響。

具體實施方式

以下通過具體實施方式的描述對本發(fā)明作進一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、代替、簡化、改進，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

實施例1、金毛狗脊糖聚合物

所述金毛狗脊糖聚合物包括金毛狗脊糖聚合物cbp-1和金毛狗脊糖聚合物cbp-2；

所述的金毛狗脊糖聚合物的制備方法，包括以下步驟：

s1切塊：將10kg金毛狗脊干燥根莖切成塊，得金毛狗脊塊狀物，將上述金毛狗脊塊狀物用水洗凈，然后浸泡12h，得浸泡后金毛狗脊塊狀物；

s2水提：將步驟s1所得金毛狗脊塊狀物進行水提，水提時水的添加量為上述金毛狗脊塊狀物重量的10倍，水提時水的溫度為85℃，水提時間為2h，收集提取液，藥渣晾干；

s3堿提：將步驟s2所得藥渣浸沒于濃度為0.3m的naoh溶液中，naoh溶液的量為上述藥渣重量的15倍，室溫放置3h，取上清液，將上清液用濃度為0.5m的hcl溶液進行中和，使其ph為7，取上清液進行離心，離心速度為5000r/min，離心時間為10min，取上清液，60℃減壓濃縮，然后加入乙醇使乙醇體積濃度為75％，靜置24h后離心，收集沉淀，得堿提粗糖聚合物cb4；

s4純化：利用sevag法對步驟s3所得堿提粗糖聚合物cb4進行除蛋白，將除蛋白后的堿提粗糖聚合物cb4用透析袋進行透析、凍干，所述透析袋的截留分子量為1000da，即得金毛狗脊糖聚合物cb4；

s5離子交換柱層析：將步驟s4所得金毛狗脊糖聚合物cb4溶于去離子水中，上樣于deae-cellulose52柱，在不同鹽濃度的洗脫液條件下出現(xiàn)2個峰，其中峰一為水(0mnacl)洗脫部分，峰二為0.05mnacl洗脫部分，洗脫過程中使用苯酚-硫酸法跟蹤洗脫曲線，根據(jù)洗脫曲線分別收集糖部分，分別將所得洗脫液濃縮、冷凍干燥后，得峰一糖聚合物和峰二糖聚合物；

s6分子篩凝膠層析：將步驟s5所得峰一糖聚合物樣品，用水進行溶解，離心，取上清液，上sephadexg-75柱，用水進行洗脫，采用苯酚-硫酸法跟蹤洗脫曲線，出現(xiàn)一個單一對稱峰，收集主峰，濃縮，冷凍干燥，得金毛狗脊糖聚合物cbp-1；同樣地，將步驟s5所得峰二糖聚合物樣品，用水進行溶解，離心，取上清液，上sephadexg-75柱，用水進行洗脫，采用苯酚-硫酸法跟蹤洗脫曲線，出現(xiàn)一個單一對稱峰，收集主峰，濃縮，冷凍干燥，得金毛狗脊糖聚合物cbp-2。

純度檢測：將上述獲得的糖聚合物cbp-1配成2％濃度(w/v)的水溶液，hpgpc法測得保留時間。

經(jīng)離子交換和凝膠過濾法分離純化后得到的組分cbp-1呈單一峰，說明cbp-1為均一糖聚合物。

下面以上述實施例中提取的cbp-1、cbp-2作進一步的結(jié)構(gòu)分析。

實施例2、金毛狗脊糖聚合物的結(jié)構(gòu)分析

(1)單糖組成分析

由完全酸水解產(chǎn)物采用pmp-柱前衍生高效液相色譜法測得圖譜，結(jié)果如圖1所示。圖1a為混合單糖標準品圖譜，其中1-9分別為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、巖藻糖。圖1b為cbp-1單糖組成圖譜，對照可知，cbp-1由葡萄糖和甘露糖組成。

(2)紅外光譜檢測

cbp-1的紅外光譜檢測結(jié)果如圖2所示，檢測結(jié)果顯示，cbp-1含有糖的特征吸收峰為：3390.82cm^-1為糖中o-h伸縮振動的特征吸收峰，2925.97cm^-1為糖中c-h伸縮振動的特征吸收峰，1637.92cm^-1為o-h彎曲振動吸收峰。在1740cm^-1區(qū)間未見吸收峰，說明cbp-1不含糖醛酸。1000-1200cm^-1的特征吸收峰是由于糖環(huán)上醚鍵的不對稱伸縮振動產(chǎn)生。934.30cm^-1和763.07cm^-1為吡喃糖的非對稱伸縮振動和對稱伸縮振動。

(3)甲基化分析

樣品經(jīng)甲基化，水解、還原，乙?；骻c-ms分析，結(jié)果表明，cbp-1含有→4)-α-d-glc-(1→、→1)-β-d-glc-(6→和→3,6)-α-d-man-(1→和α-d-glc-(1→糖殘基。

(4)糖聚合物的核磁共振分析

將均一糖聚合物cbp-1樣品置于核磁管中，用d2o溶解后測譜，所得結(jié)果

如圖3～7所示。

根據(jù)上述圖3～7的核磁圖譜可知各個碳和氫的歸屬，結(jié)果如表1所示。

表1：cbp-1核磁共振分析結(jié)果

經(jīng)上述完全酸水解、甲基化分析、紅外光譜檢測及核磁分析，結(jié)果顯示，cbp-1是一種由葡萄糖和甘露糖組成的糖聚物，從甲基化分析說明其含有→4)-α-d-glc-(1→、→1)-β-d-glc-(6→和→3,6)-α-d-man-(1→和α-d-glc-(1→糖殘基，不同糖殘基之間的連接順序由二維核磁hmbc譜圖分析得出，由以上分析得出cbp-1的結(jié)構(gòu)為：

其中n的范圍為1～30。

同理，對糖聚合物cbp-2的結(jié)構(gòu)進行上述同樣的分析：完全酸水解-pmp柱前衍生-高效液相色譜法(圖8)、甲基化分析、紅外光譜檢測(圖9)及核磁分析(圖10～13所示)，獲得以下信息：

糖聚合物cbp-2：單糖組成分析cbp-2由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖組成。甲基化分析顯示是由→4)-α-d-glc-(1→、→1)-β-d-gal-(6→、→3,6)-α-d-man-(1→、→3)-α-l-ara-(1→、→3)-α-l-rha-(1→和α-d-glca-(1→糖殘基組成，不同糖殘基之間的連接順序由二維核磁hmbc譜圖分析得出，由以上分析得出cbp-2的結(jié)構(gòu)為：

其中x，y，z，m的范圍分別為1～30。

試驗例一、狗脊糖聚合物的抗骨質(zhì)疏松作用研究

1、實驗材料：糖聚合物cb1、糖聚合物cb2、糖聚合物cb3和糖聚合物cb4。

2、實驗對象：3月齡未交配雌性sd大鼠70只，spf級(由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供)。

3、實驗方法：

3.1、實驗設計與分組：

3月齡未交配雌性sd大鼠70只，spf級(由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供)，按體重對等原則隨機分為7組，各組動物數(shù)和給藥方法見表2，其中，陽性對照組e2為17β-雌二醇，模型組ovx與假手術(shù)組sham為蒸餾水灌胃給藥。手術(shù)后每天灌胃給藥，每周稱重一次，按體重變化調(diào)整相應給藥量，連續(xù)灌胃90d。

表2：實驗設計與分組

3.2、大鼠去卵巢手術(shù)方法：

將大鼠以45mg/kg劑量的戊巴比妥鈉溶液(4％)腹腔注射麻醉，腹位固定。在其最末肋骨下，腋中線與距脊柱外側(cè)約1cm之交叉處，去毛暴露手術(shù)視野。先任取一側(cè)進行手術(shù)，以聚維酮碘溶液消毒，切開皮膚、背部肌肉和肌膜，以小鑷子輕輕將白色發(fā)亮脂肪團拉出切口外，分離脂肪團，便可見到卵巢。將卵巢下端輸卵管用手術(shù)縫合線結(jié)扎，然后摘除卵巢。切口縫合后，外部敷以消炎粉(青霉素鈉)，同法摘除另一側(cè)卵巢。假手術(shù)組(sham)的處理方法同上，只是切除小塊脂肪組織，不摘除卵巢。術(shù)后置于溫暖環(huán)境，看護觀察。

3.3、取材與保存：

具體操作如下：

(1)稱重、麻醉；

(2)從腹部解剖大鼠暴露內(nèi)臟，貼近背部肌肉處用鑷子夾住動脈取2ml血液于肝素鈉管中，立即換普通取血管取全血(靜置lh后，經(jīng)3000rmp離心10min后取血清，-80℃冰凍保存?zhèn)溆?。

3)取右側(cè)脛骨、股骨和第五腰椎，置裝有4％pbs多聚甲醛溶液的尿杯中，待24h后更換70％的乙醇溶液。-20℃冷凍保存。

4)取左側(cè)股骨、脛骨和第三、四腰椎，生理鹽水紗布包裹并用錫箔紙外包裹，于密封袋中，分裝置于-80℃冰凍保存。

3.4、大鼠骨密度測定：

采用雙能x線骨密度儀hologicdiscoverywi85003dxa檢測第四腰椎骨(l4)和左股骨的全骨密度(bonemineraldensity，bmd)、前端股骨骨密度(1cm)、末端股骨骨密度(2cm)和骨礦物含量(bonemineralcontent，bmc)。

3.5、骨生物力學測試：

測試時，將-80℃保存的股骨和椎骨置于-20℃預解凍，而后常溫解凍，用生理鹽水復濕。采用mini858bionix材料測試系統(tǒng)分析左股骨(三點彎曲實驗)的生物力學性能。測試時mts試驗機上，用1mm直徑的壓頭，加載速度為6mm/min，跨距(l)是15mm，傳感器為500n。儀器自動記錄每個時刻點的載荷和橈度變化值，繪制載荷-橈度曲線，并獲得相應的參數(shù)。

4、實驗結(jié)果：

4.1、金毛狗脊糖聚合物對去卵巢雌性大鼠體重影響：

分析金毛狗脊糖聚合物對去卵巢雌性大鼠體重的影響。與sham組比較，ovx大鼠去卵巢七周后，體重明顯增加(p<0.01)，提示去卵巢使得大鼠體重明顯增加，造模成功。與ovx組相比，金毛狗脊糖聚合物cb1、cb2、cb3和cb4給藥組自第七周后，體重增加開始減輕(p<0.05)，陽性對照組第十周后體重增加的趨勢也出現(xiàn)明顯抑制。說明給藥組與陽性組e2均能抑制去卵巢大鼠體重的增加。

4.2、金毛狗脊糖聚合物對去卵巢雌性大鼠子宮系數(shù)的影響：

分析金毛狗脊糖聚合物對去卵巢雌性大鼠子宮系數(shù)的影響。與sham組比較，ovx大鼠去卵巢后子宮系數(shù)明顯減小(p<0.01)，提示去卵巢手術(shù)使得大鼠子宮萎縮，重量減輕。與ovx組相比，cb1、cb2、cb4給藥組與陽性組e2能明顯增加去卵巢大鼠子宮重量。說明這三個給藥組與陽性組能使去卵巢大鼠子宮萎縮得到改善。

4.3、金毛狗脊糖聚合物對去卵巢雌性大鼠股骨與腰椎骨骨密度的影響：

金毛狗脊糖聚合物對去卵巢雌性大鼠股骨與腰椎骨骨密度(bmd，bonemineraldensity)的影響見圖14、15，與sham組比較，ovx去卵巢大鼠的股骨(圖14)與腰椎骨(圖15)骨密度出現(xiàn)明顯減小(p<0.01)，提示去卵巢大鼠成功復制原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。與ovx組相比，e2組只能增加去卵巢大鼠末端股骨(圖14)的骨密度，而cb4給藥組能明顯增加去卵巢大鼠的總股骨、前端股骨、末端股骨(圖14)和腰椎骨(圖15)骨密度(p<0.05)，說明cb4給藥組能夠有效的防治大鼠的骨質(zhì)疏松癥狀，甚至效果優(yōu)于e2組。cb1，cb2，cb3和e2組與ovx組相比雖然沒有顯著增加股骨和腰椎骨骨密度，但是可以看出均有不同程度改善。

4.4、金毛狗脊糖聚合物對去卵巢雌性大鼠股骨與腰椎骨骨礦物量的影響：

金毛狗脊糖聚合物對去卵巢雌性大鼠股骨與腰椎骨礦物量的影響見圖16、17，與sham組比較，ovx大鼠股骨與腰椎骨礦物量出現(xiàn)明顯減小(p<0.01)，提示去卵巢大鼠成功復制原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。與ovx組相比，cb4給藥組與陽性組e2均能明顯增加去卵巢大鼠股骨礦物量(p<0.01)，而cb1、cb3只能明顯增加前端股骨礦物量(p<0.05)(見圖16)；cb4給藥組還明顯增加去卵巢大鼠腰椎骨礦物量(p<0.01)(見圖17)，上述結(jié)果說明，金毛狗脊cb4給藥組能明顯增加去卵巢大鼠股骨與腰椎骨骨礦物量，而cb1、cb2、cb3給藥組均有不同程度的改善。

4.5、金毛狗脊糖聚合物對股骨生物力學的影響：

金毛狗脊糖聚合物對股骨生物力學的影響如表3所示。

表3：金毛狗脊糖聚合物對股骨生物力學的影響

表中所有數(shù)值均為平均值±sd.^*p<0.05，^**p<0.01vs.ovx；^#p<0.05，^##p<0.01vs.sham。

由表3可以看出，與sham組相比，ovx大鼠股骨生物力學相關(guān)參數(shù)均出現(xiàn)減小，提示去卵巢后大鼠生物力學性能下降；與ovx組相比，給藥組均能有效改善去卵巢大鼠生物力學性能，其中cb4給藥組效果最為顯著。

本發(fā)明所提取的金毛狗脊糖聚合物中，cb4給藥組對于防治骨質(zhì)疏松癥效果最為顯著，其中由cb4中分離純化而來的精糖聚物cbp-1、cbp-2可能是發(fā)揮上述抗骨質(zhì)疏松作用的有效成分，也具有顯著增加去卵巢大鼠股骨與腰椎骨密度以及骨礦物量的作用，其明顯改善骨生物力學性能的作用機制有待進一步研究。

5、結(jié)論：

雌性大鼠的卵巢切除后，雌激素水平降低、骨代謝活躍、骨轉(zhuǎn)換增強、骨礦物量丟失，是經(jīng)典的模仿婦女絕經(jīng)時高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥的模型。本實驗研究表明，通過上述方法提取的各個部位的金毛狗脊糖聚合物均能顯著增加去卵巢大鼠股骨與腰椎骨密度以及骨礦物量，明顯改善骨生物力學性能，從而發(fā)揮其治療模型大鼠骨質(zhì)疏松癥的作用。

后續(xù)需對金毛狗脊糖聚合物的抗骨質(zhì)疏松機制進行研究，而均一糖聚合物的結(jié)構(gòu)鑒定將為探究金毛狗脊糖聚合物抗骨質(zhì)疏松的機制提供有力依據(jù)。