本發(fā)明涉及otud5的單克隆抗體在癌癥治療中的用途，屬于醫(yī)藥生物
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：泛素-蛋白酶體途徑(ubiquitin―proteasomepathway)是細(xì)胞內(nèi)一個(gè)重要的蛋白質(zhì)降解調(diào)節(jié)系統(tǒng)。通過(guò)對(duì)底物蛋白的多聚泛素化并經(jīng)蛋白酶體降解，可以影響或調(diào)節(jié)多種細(xì)胞活動(dòng)，包括：基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞受體功能及腫瘤生長(zhǎng)、炎癥過(guò)程等。該途徑也是一個(gè)被嚴(yán)格調(diào)控的可逆過(guò)程，其中去泛素化酶的調(diào)節(jié)就是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)。目前研究證實(shí)，細(xì)胞內(nèi)廣泛存在許多去泛素化酶(deubiquitinatingenzymes，dubs)，主要分為以泛素羧基末端水解酶家族和泛素特異性加工酶家族為主的5種類型。其中out(otubainprotease)家族是重要的家族成員之一。發(fā)明人在前期的研究發(fā)現(xiàn)，otud1的表達(dá)在癌癥病人中明顯的丟失。發(fā)現(xiàn)一些乳腺癌病人otud1的表達(dá)很低，這是由于otdu1基因的缺失甚至刪除，而且otud1缺失的病人往往和預(yù)后不良有關(guān)。ras活性的增加和p53表達(dá)的缺失往往是惡性腫瘤的特點(diǎn)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)hras的增加和p53的缺失能夠協(xié)同作用促進(jìn)在乳腺癌腫瘤中otud1的低表達(dá)。重要的是，otud1基因的缺失發(fā)生在很多類型的的癌癥中，例如膠質(zhì)瘤和肺癌，說(shuō)明otud1作為抑癌基因不僅僅局限于乳腺癌。otud1表達(dá)低的肺癌病人比otudi表達(dá)高的肺癌病人存活時(shí)間短。而且，在乳腺癌組織微陣列芯片分析中，otud1和smad7的表達(dá)正相關(guān)，進(jìn)一步支持了otud1能夠穩(wěn)定并調(diào)節(jié)smad7的功能。不僅如此，在異位移植的裸鼠模型中，otud1的缺失與乳腺癌腫瘤密切相關(guān)。目前，體內(nèi)和體外證據(jù)都證明otud1在tgf-p/smad誘導(dǎo)的腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的重要功能。另外，作為smad7的去泛素化酶，otud1反映了一個(gè)新穎的重要的分子機(jī)制來(lái)調(diào)節(jié)smad7的活性，從而調(diào)控tgf-p/smad信號(hào)通路。為了探究otud1在癌癥中的臨床意義，分析了toga數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)otud1在很多類型中的癌癥中都發(fā)生了缺失甚至丟失，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、黑色素瘤和肺癌中丟失的比例都超過(guò)了50％。這些結(jié)果有力的證明了otud1的丟失能夠?qū)е掳┌Y的發(fā)展。既然otud1能夠調(diào)節(jié)腫瘤轉(zhuǎn)移，otud1是一個(gè)癌癥晚期相關(guān)的基因。oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)分析表明otud1的mrna水平在多種癌癥類型的病人中高度下調(diào)，包括常見(jiàn)的乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、淋巴癌等。其中在浸潤(rùn)性導(dǎo)管乳腺癌(invasiveductalbreastcarcinoma,idbc)和肺癌(lungadenocarcinoma,la)中，otud1比正常人群下調(diào)了2倍多。利用nki295乳腺癌數(shù)據(jù)庫(kù)，我們發(fā)現(xiàn)低表達(dá)的otud1和病人的預(yù)后不良正相關(guān)。這些特征不僅在乳腺癌中，在toga數(shù)據(jù)庫(kù)中，相比于otud1高表達(dá)的膀胱癌病人，otud1低表達(dá)的膀胱癌病人有更短的生存時(shí)間。而且otud1誘導(dǎo)的致癌性反應(yīng)，從而抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移通過(guò)去除smad7的泛素化，抑制tgf-β。雖然目前研究的很充分，但是針對(duì)其他out家族的研究還沒(méi)有涉及。特別是針對(duì)otud5與癌癥的關(guān)系以及相應(yīng)的單克隆抗體還沒(méi)有涉及，發(fā)明人在此提供了一種新的高結(jié)合特異性的otud5單克隆抗體。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：根據(jù)第一方面，本發(fā)明從裸鼠體內(nèi)篩選出otud5作為一個(gè)新的乳腺癌轉(zhuǎn)移的抑制基因。本發(fā)明提供一種制備治療乳腺癌轉(zhuǎn)移的藥物用途。其中藥物未特異性的下調(diào)otud5的表達(dá)。本發(fā)明的另外一方面，所屬下調(diào)otud5的表達(dá)通過(guò)干擾或者抗體實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明另外一方面，提供一種干擾序列，其特異性的針對(duì)otud5進(jìn)行下調(diào)表達(dá)。所述的干擾序列為sirna，shrna，rnai。本發(fā)明另外提供一種單克隆抗體的制備方法。本發(fā)明另外提供一種單克隆抗體。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種otud5-1的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：1所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：2所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種otud5-2的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：3所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：4所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種otud5-3的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：5所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：6所示。在另外一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種otud5-4的單克隆抗體，其重鏈可變區(qū)序列如seqidno：7所示，其輕鏈可變區(qū)如seqidno：8所示。另外一方面針對(duì)otud5-4的單克隆抗體的重鏈可變區(qū)進(jìn)行序列的優(yōu)化，篩選得到幾個(gè)效果更好的突變體。本發(fā)明高的另外一個(gè)方面，其中所述單克隆抗體是抗體片段。優(yōu)選的，其中所述抗體片段選自scfv片段、fab片段、f(ab’)2片段和fab’片段。附圖說(shuō)明圖1裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型實(shí)驗(yàn)流程圖2shrna干擾前后otud5mrna表達(dá)變化圖圖3shrna干擾前后otud5蛋白表達(dá)變化圖發(fā)明的有益效果本發(fā)明通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)了otud5與乳腺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移表達(dá)密切相關(guān)，otud5可以作為治療靶標(biāo)用于乳腺癌的治療中的用途。另外，發(fā)明人通過(guò)提供了改進(jìn)的otud5單克隆抗體，所述抗體均具有較好的結(jié)合特性。具體實(shí)施方式實(shí)施例1裸鼠體內(nèi)篩選出otud5作為一個(gè)新的乳腺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因1、裸鼠體內(nèi)篩選模型本研究中，我們利用裸鼠設(shè)計(jì)了體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型來(lái)篩選能夠抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移的去泛素化酶，并將它應(yīng)用于有上皮樣性狀和低轉(zhuǎn)移能力的mda-mb-231細(xì)胞.我們用了靶定75個(gè)去泛素化酶的shrna文庫(kù)(文庫(kù)通過(guò)sigmamissionlibrary以及北京傲銳東源生物科技有限公司購(gòu)買(mǎi))，每個(gè)去泛素化酶有4-6個(gè)不同的shrna，其中至少有兩個(gè)是被鑒定過(guò)有效的。首先，我們利用hek293t細(xì)胞包裝產(chǎn)生了371種不同的shrna病毒，并將它們感染到足夠數(shù)量12孔板的mda-mb-231細(xì)胞中。48小時(shí)后，我們使用濃度為2μg/ml，的puromycin篩選3天后得到371個(gè)穩(wěn)定細(xì)胞系。然后我們從每個(gè)不同的細(xì)胞系中取1萬(wàn)細(xì)胞混合在一起，將所有的細(xì)胞注射到30只裸鼠心臟中。這些乳腺癌腫瘤細(xì)胞會(huì)在血液循環(huán)過(guò)程中穿過(guò)血管壁，侵入遠(yuǎn)端組織，形成骨轉(zhuǎn)移灶或者肺轉(zhuǎn)移灶。5-6周后，我們?nèi)∠侣闶笾械墓寝D(zhuǎn)移灶，并提取這些腫瘤細(xì)胞的基因組dna，通過(guò)比對(duì)測(cè)序結(jié)果鑒定所提取腫瘤細(xì)胞的shrna靶向的去泛素化酶。這個(gè)篩選策略能夠應(yīng)用于鑒定抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的必需的去泛素化酶(圖1裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型實(shí)驗(yàn)流程)。根據(jù)上述方法，將細(xì)胞導(dǎo)入小鼠體內(nèi)5周后，這些混合的細(xì)胞系在所有裸鼠中共產(chǎn)生了13個(gè)轉(zhuǎn)移灶，包括骨轉(zhuǎn)移和肺轉(zhuǎn)移。相反，注射對(duì)照組細(xì)胞的裸鼠沒(méi)有產(chǎn)生任何的轉(zhuǎn)移灶。接下來(lái)，我們將這13個(gè)轉(zhuǎn)移灶取下，與癌細(xì)胞沒(méi)有轉(zhuǎn)移以及癌細(xì)胞幾乎沒(méi)有生長(zhǎng)的小鼠進(jìn)行直接比較，我們提取其中一個(gè)細(xì)胞增殖能力降低最多的細(xì)胞，其中含有的shrna靶向otud5。而otud5是一個(gè)含有otu結(jié)構(gòu)域的去泛素化酶，它在癌癥中的作用并沒(méi)有被報(bào)道，所以揭示otud5表達(dá)降低對(duì)于抑制腫瘤轉(zhuǎn)移具有較好的作用。實(shí)施例2otud5表達(dá)下調(diào)抑制乳腺癌肺轉(zhuǎn)移為了驗(yàn)證otud5在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用，我們利用shrna干擾技術(shù)(otud5(locusid55593)humanshrna，購(gòu)買(mǎi)自北京傲銳東源生物科技有限公司)，篩選得到了otud5敲除的mda-mb-231細(xì)胞系，從圖2可以看出，otud5的mrna表達(dá)量降低了80％，圖3的蛋白表達(dá)量通過(guò)作圖軟件計(jì)算，其蛋白表達(dá)量降低達(dá)到79％。這說(shuō)明基因敲除細(xì)胞構(gòu)建成功。將這個(gè)細(xì)胞系注射到裸鼠心臟后，每組30只，一組為沒(méi)有敲除的mda-mb-231細(xì)胞系。通過(guò)8周的反應(yīng)后，導(dǎo)入shrna的細(xì)胞系其骨轉(zhuǎn)移只有10％，而沒(méi)有導(dǎo)入shrna的細(xì)胞系其骨轉(zhuǎn)移達(dá)到66.7％，這說(shuō)明了otud5基因的下調(diào)能夠顯著地降低乳腺癌的轉(zhuǎn)移。實(shí)施例3otud5單克隆抗體的制備1.穩(wěn)定表達(dá)otud5抗原的cho細(xì)胞的產(chǎn)生根據(jù)nm_001136157序列，設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增出人的全長(zhǎng)otud5cdna，連接到表達(dá)載體pcdna3.1(+)，構(gòu)建真核表達(dá)載體pcdna3.1(+)-otud5。(2)轉(zhuǎn)染cho細(xì)胞于3.5cm組織培養(yǎng)皿中接種3x105cho細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)至90％-95％融合時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染:取質(zhì)粒10μg(pcdna3.1(+)-otud5)和20μ1lipofectamine2000reagent(invitrogen公司產(chǎn)品)分別溶于500μ1無(wú)血清dmem培養(yǎng)基，室溫靜置5分鐘，將以上2種液體混合，室溫孵育20分鐘以使dna-脂質(zhì)體復(fù)合物形成，其間用3m1無(wú)血清的dmem培養(yǎng)基替換培養(yǎng)皿中的含血清培養(yǎng)基，然后將形成的dna-脂質(zhì)體復(fù)合物加入到板中，co:孵箱培養(yǎng)4小時(shí)后補(bǔ)加2m1含10％fbs的dmem完全培養(yǎng)基，置于co2孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染進(jìn)行24h后細(xì)胞換含600pg/mlg418的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)2周。(3)分選陽(yáng)性細(xì)胞取上述轉(zhuǎn)染細(xì)胞，加入fitc-5814℃孵育45min，洗細(xì)胞2遍后用流式細(xì)胞分選術(shù)facsvantage(bdbiosciences,sanjose,ca).來(lái)分選高表達(dá)otud5的陽(yáng)性細(xì)胞。2.小鼠抗人otud5單克隆抗體的制備(1)免疫小鼠用1x107上述陽(yáng)性細(xì)胞腹腔注射免疫6-8周齡balb/c小鼠，共免疫3-4次，每隔二周免疫一次，細(xì)胞數(shù)均為1x107/只，融合前3-5天，用1x107細(xì)胞/只尾靜脈注射進(jìn)行加強(qiáng)免疫。(2)細(xì)胞融合及培養(yǎng)無(wú)菌取小鼠脾細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，將1x107上述陽(yáng)性細(xì)胞和1x108免疫脾細(xì)胞混合于50ml離心管中，1000rpm，離心10min，50％peg作融合劑，融合用25m1完全培養(yǎng)基將細(xì)胞懸起，滴加于兩塊96孔培養(yǎng)扳，置37℃7％co2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。細(xì)胞融合后，先在完全培養(yǎng)基中作適應(yīng)性培養(yǎng)，24h后加hat選擇培養(yǎng)基作選擇性培養(yǎng)，第三天或第十天改為ht培養(yǎng)基。(3)篩選陽(yáng)性克隆雜交瘤陽(yáng)性克隆的篩選一般是融合后培養(yǎng)7-10天，取細(xì)胞培養(yǎng)上清用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)，篩選高表達(dá)克隆:將cho-otud5細(xì)胞用1％fcs-pbs重懸成1x106cells/ml，分別加入上述雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清，置于4℃孵育60min，用1％fcs-pbs洗細(xì)胞2遍，然后再加入fitc一羊抗鼠igg(h+l)4℃孵育30min，洗細(xì)胞2遍后用fcm分析，比較各個(gè)克隆的最大熒光強(qiáng)度。(4)抗體亞型的檢測(cè)利用小鼠抗體亞型檢測(cè)試劑盒檢測(cè)上述篩選出的陽(yáng)性克隆的亞型。(按照試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作)(5)抗體的純化將篩選得到的高表達(dá)克隆用無(wú)血清培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，用proteing親和柱分離純化抗體。將純化抗體用pbs進(jìn)行透析，最后以紫外吸收法定量。3.小鼠抗人otud5單克隆抗體的抗原結(jié)合活性鑒定(1)用透析標(biāo)記法標(biāo)記抗體用0.025mph9.5的碳酸鹽緩沖液將預(yù)標(biāo)記的抗體稀釋成1％濃度，裝入透析袋中。用同一緩沖液將fitc配成0.1mg/ml的溶液盛于小燒杯中，使透析袋浸沒(méi)于fitc溶液中，在40c避光攪拌24h。取出透析袋中標(biāo)記液，用sephadexg-50過(guò)柱，去除游離熒光素，收集熒光抗體備用。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)抗原結(jié)合活性將kg-la細(xì)胞用1％fcs-pbs重懸成1x106cells/ml，分別加入不同稀釋度的單克隆抗體和作為對(duì)照的商品化抗otud5的單克隆抗體(h00055593-m，購(gòu)自艾美捷科技有限公司)，置于4℃孵育60min，用1％fcs-pbs洗細(xì)胞2遍后用fcm分析，計(jì)算染色陽(yáng)性細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度并比較各抗體的相對(duì)親和力。這里相對(duì)親和力定義為染色陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)達(dá)到50％時(shí)所對(duì)應(yīng)的抗體濃度。具體的，篩選得到4個(gè)單克隆抗體，其分別都是igg1亞型，其結(jié)合能力，如下表1所示，其中抗體的重鏈、輕鏈可變區(qū)序列通過(guò)測(cè)序確定：抗體名稱重鏈、輕鏈可變區(qū)序列kd(nm)kon(m-1sec-1)otud5-1seqidno：1-225.44.52×106otud5-2seqidno：3-420.43.29×106otud5-3seqidno：5-633.55.97×106otud5-4seqidno：7-819.86.64×106h00055593-m對(duì)照86.11.02×104實(shí)施例4改進(jìn)的單克隆抗體的制備首先按照本領(lǐng)域常規(guī)的試驗(yàn)方法通過(guò)本領(lǐng)域常規(guī)的重疊pcr技術(shù)，分別在重鏈可變區(qū)seqidno：7的區(qū)域中進(jìn)行突變?nèi)〈?，通過(guò)400多個(gè)取代以及檢測(cè)，共發(fā)現(xiàn)了6個(gè)取代形式可以導(dǎo)致單克隆抗體的效果顯著提升，其余多種均沒(méi)有提高或者效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)差于原始抗體，在此不一一列舉。按照本領(lǐng)域常規(guī)的抗體活性檢測(cè)方式，分別檢測(cè)各個(gè)單克隆抗體的活性，結(jié)果如表2所示：從表2可以看出，經(jīng)過(guò)改造后的單克隆抗體具有較好的親和性，比原始抗體具有性能上的改進(jìn)優(yōu)勢(shì)。通過(guò)elisa法檢測(cè)以上抗體與otud5蛋白的結(jié)合特性，其最低檢測(cè)濃度為0.5pg，具有較好的檢測(cè)效果。實(shí)施例5乳腺癌抑制試驗(yàn)將人乳腺癌細(xì)胞株接種于rpmi-1640培養(yǎng)液中，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)傳代，接種于96孔培養(yǎng)板，加入溶解于乙醇生理鹽水混合液的單克隆抗體(濃度為30ug.ml-1、50ug.ml-1、100ug.ml-1)48h后mtt法測(cè)定生長(zhǎng)抑制率。發(fā)現(xiàn)在30ug.ml-1時(shí)otud5-4，otud5-4-1，otud5-4-2，otud5-4-3，otud5-4-4，otud5-4-5，otud5-4-6，otud5-1，otud5-2，otud5-3，otud5-4，h00055593-m對(duì)照的細(xì)胞抑制率分別為76.1％，76.9％，77.4％，76.4％，80.5％，76.8％，79.3％，75.1％，75.0％，74.5％，73.8％，40.5％。試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明的單克隆抗體對(duì)乳腺癌細(xì)胞有明顯的抑制作用。盡管本發(fā)明的具體實(shí)施方式已經(jīng)得到詳細(xì)的描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解。根據(jù)已經(jīng)公開(kāi)的所有教導(dǎo)，可以對(duì)那些細(xì)節(jié)進(jìn)行各種修改和替換，這些改變均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的全部范圍由所附權(quán)利要求及其任何等同物給出。序列表〈110〉蘇州立豪生物科技有限公司〈120〉otud5的單克隆抗體制備及其在癌癥治療中的用途〈210〉1<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralaserglnservalsertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleuvalserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpserserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105<210>2<212>prt<213>人工序列<400>輕鏈可變區(qū)gluvalgluleuglugluserglyglyglyleuvalglnproglyglysermetlysleu15101520sercysvalalaserglymetthrpheserasnglytrpmetasntrpvalargglnser25303540proglulysglyleuglutrpvalalagluileargserileserasnasntyrvalpro45505560histyralagluservallysglyargphethrileserargaspaspserlysserser65707580valtyrleuglnmetasnasnleuargalagluaspthrglyiletyrtyrcysserphe859095100glyasnserpheasntyrtrpglyglnglythrleuvalthrvalserala105110115〈210〉3<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralaserglyservalsertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleutrpserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpserserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105<210>4<212>prt<213>人工序列<400>輕鏈可變區(qū)gluvalgluleuglugluserglyglyglyleuvalglnproglyglysermetlysleu15101520sercysvalalaserglymetilepheserasnglytrpmetasntrpvalargglnser25303540proglulysglyleuglutrpvalalagluileargserileserasnasntyrvalpro45505560histyralagluservallysglyargphethrileserargaspaspserlysserser65707580valtyrleuglnmetasnasnleuargalagluaspthrglyiletyrtyrcysserphe859095100serasnserpheasntyrtrpglyglnglythrleuvalthrvalserala105110115〈210〉5<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralaserserserleusertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleuthrasnasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpserserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105<210>6<212>prt<213>人工序列<400>輕鏈可變區(qū)gluvalgluleuglugluserglyglyglyleuvalglnproglyglysermetlysleu15101520sercysvalalaserglymetthrpheserargglytrpmetasntrpvalargglnser25303540proglulysglyleuglutrpvalalagluileargserileserasnasntyrvalpro45505560histyralagluservallysglyargphethrileserargaspaspserlysserser65707580valtyrleuglnmetasnasnleuargalagluaspthrglyiletyrtyrcysserphe859095100glyasnthrpheasntyrtrpglyglnglythrleuvalthrvalserala105110115〈210〉7<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralaserserserprosertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleuserserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpserserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105<210>8<212>prt<213>人工序列<400>輕鏈可變區(qū)gluvalgluleuglugluserglyglyglyleuvalglnproglyglysermetlysleu15101520sercysvalalaserglymetthrpheserasnglytrpmetasntrpvalargglnser25303540proglulysglyleuglutrpvalalagluileargserileservalasntyrvalpro45505560histyralagluservallysglyargphethrileserargaspaspserlysserser65707580valtyrleuglnmetasnasnleuargalagluaspthrglyiletyrtyrcysserphe859095100valasnserpheasnglytrpglyglnglythrleuvalthrvalserala105110115〈210〉9<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralasersergluvalsertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleuthrserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnlystrpserserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105〈210〉10<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralaserserserprosertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrilethrserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpserserasnproleuglypheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105〈210〉11<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralaserserlysvalsertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleuthrserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnphetrpserserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105〈210〉12<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralaserleuservalsertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleuthrserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnsertrpserserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105〈210〉13<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralasersersermetsertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleugluserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglnproserserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105〈210〉14<212>prt<213>人工序列<400>重鏈可變區(qū)glnilevalleuthrglnserproalaleumetseralaserproglyglulysvalthr15101520metthrargseralasersersermetsertyrmettyrtrptyrglnglnlysproarg25303540serserprolysprotrpiletyrleutyrserasnleualaserglyvalproalaarg45505560pheserglyserglyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu65707580aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpglyserasnproleuthrpheglyalagly859095100thrlysleugluleulys105當(dāng)前第1頁(yè)12