本發(fā)明涉及一種復(fù)合微生態(tài)制劑領(lǐng)域，尤其是一種污水脫氮除磷微生態(tài)制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前，我國(guó)水環(huán)境污染相當(dāng)嚴(yán)重，全國(guó)七大江河水系中，40％左右水質(zhì)劣于五類標(biāo)準(zhǔn)；全國(guó)75％的湖泊出現(xiàn)不同程度的富營(yíng)養(yǎng)化；城市河段污染突出；沿海河口地區(qū)和城市附近海域污染污染嚴(yán)重，赤潮發(fā)生頻次增加，面積擴(kuò)大。水環(huán)境的污染已直接威脅著城市飲用水的安全和人民的健康。所以，對(duì)受污染的江河湖泊水體進(jìn)行修復(fù)，已是社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展及生態(tài)環(huán)境建設(shè)的迫切需要。
水體富營(yíng)養(yǎng)化(eutrophication)指的是水體中n、p等營(yíng)養(yǎng)鹽含量過多而引起的水質(zhì)污染現(xiàn)象。其實(shí)質(zhì)是由于營(yíng)養(yǎng)鹽的輸入輸出失去平衡性，從而導(dǎo)致水生態(tài)系統(tǒng)物種分布失衡，單一物種瘋長(zhǎng)，破壞了系統(tǒng)的物質(zhì)與能量的流動(dòng)，使整個(gè)水生態(tài)系統(tǒng)逐漸走向滅亡。
氮和磷是生物的重要營(yíng)養(yǎng)源，目前化肥、洗滌劑和農(nóng)藥使用普遍，天然水體中氮、磷含量急劇增加，導(dǎo)致水體富營(yíng)養(yǎng)化，水體中藍(lán)藻、綠藻大量繁殖，水體缺氧并產(chǎn)生毒素，使水質(zhì)惡化，對(duì)水生生物和人體健康產(chǎn)生很大的危害。
使用微生物進(jìn)行水體凈化是目前應(yīng)用較多的水質(zhì)凈化方法，常用于江河湖泊水體凈化、污水治理及修復(fù)的生物產(chǎn)品，由多種微生物菌群組成，采用生物工程手段對(duì)自然微生物進(jìn)行改性、強(qiáng)化、馴化培養(yǎng)而成的高效專用微生物應(yīng)用于水體凈化方面。
國(guó)內(nèi)目前使用微生物凈水方面的應(yīng)用日益被接受和重視，但研究?jī)H于起步階段。在應(yīng)用方面，國(guó)內(nèi)獨(dú)立開發(fā)的主要是一些單一菌株，如光合細(xì)菌、芽孢桿菌、蛭弧菌等；復(fù)合制劑主要是仿制或引進(jìn)國(guó)外的商品，且多數(shù)是對(duì)生長(zhǎng)速率、餌料轉(zhuǎn)化率、存活率等方面的數(shù)據(jù)，還沒有用更科學(xué)的研究手段和內(nèi)容評(píng)價(jià)作用機(jī)理和使用效果。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種用于凈化富營(yíng)養(yǎng)化水體的復(fù)合微生態(tài)制劑，具體是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
以枯草芽孢桿菌及約氏不動(dòng)桿菌為主要菌群，以乳酸桿菌、酵母菌為輔助菌群配置微生態(tài)制劑；其中枯草芽孢桿菌40-60％，約氏不動(dòng)桿菌20-40％，乳酸桿菌10-20％，酵母菌10-20％。
具體制備方法：
(1)原菌種斜面培養(yǎng)：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動(dòng)桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅰ中，之后于28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)5-7天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅱ中，接著于25℃-28℃下好氧培養(yǎng)3-5天得約氏不動(dòng)桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅲ中，接著于37℃下厭氧培養(yǎng)1-2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培養(yǎng)3天得酵母菌原菌液；
(3)一級(jí)種子培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動(dòng)桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌40-60％，約氏不動(dòng)桿菌20-40％，乳酸桿菌10-20％，酵母菌10-20％的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地：先接種約氏不動(dòng)桿菌原菌液、酵母菌原菌液并于28℃-30℃下好氧培養(yǎng)3天，然后再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；
(4)二級(jí)種子培養(yǎng)：將所得的一級(jí)種子按5％的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ中，并于28℃-30℃下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子；
(5)成品培養(yǎng)：將所得的二級(jí)種子按5％的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培養(yǎng)3-5天再厭氧培養(yǎng)3-5天，獲得所述復(fù)合微生態(tài)制劑的成品；
其中，步驟(2)中所用液體培養(yǎng)基i-iv分別為：
液體培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中所用發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(4)中所用發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(5)中所用發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水。
優(yōu)選的步驟(1)中所述的枯草芽孢桿菌、約氏不動(dòng)桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌在斜面中活化的具體操作分別為：
步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅰ上，之后于28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)5-7天；所述斜面培養(yǎng)基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為15min；且該斜面培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2。
步驟(1)中約氏不動(dòng)桿菌在斜面中活化的具體操作為：制備斜面培養(yǎng)基ⅱ，并將斜面培養(yǎng)基ⅱ置于121℃下滅菌20min，之后用接種環(huán)將約氏不動(dòng)桿菌接種于斜面培養(yǎng)基ⅱ上，然后于25℃-28℃下好氧培養(yǎng)3-5天；所述斜面培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然。
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅲ上，之后于37℃下厭氧培養(yǎng)1-2天；所述斜面培養(yǎng)基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為20min；且該斜面培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5。
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將酵母菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為30min；且該斜面培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂15-20克、水1000ml、ph自然。
進(jìn)一步優(yōu)選方案選用納米多孔材料作為基質(zhì)將本微生態(tài)制劑制成固體制劑，優(yōu)選二氧化硅。二氧化硅粒徑小，比表面積大，表面吸附力強(qiáng)，表面能大，分散性能好，能使活菌寄居多孔結(jié)構(gòu)內(nèi)，減少環(huán)境對(duì)活菌的影響，并在水體中緩慢釋放菌體，延長(zhǎng)微生態(tài)制劑在水中起效的時(shí)間。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明創(chuàng)造的技術(shù)效果體現(xiàn)在：
采用所述復(fù)合微生態(tài)制劑對(duì)富營(yíng)養(yǎng)化的水體進(jìn)行凈化，通過枯草芽孢桿菌的氨化、硝化、反硝化作用及約氏不動(dòng)桿菌的聚磷作用，可以有效降低水體中的氨氮和亞硝酸鹽濃度、磷酸鹽濃度，從而降低水體中的n、p兩種元素的含量，大幅減少水體的富營(yíng)養(yǎng)化程度，達(dá)到對(duì)富營(yíng)養(yǎng)化水體全面凈化的效果。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體的實(shí)施方式來對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的限定，但要求保護(hù)的范圍不僅局限于所作的描述。
實(shí)施例1
一種微生態(tài)制劑，通過如下步驟制備：
(1)原菌種斜面培養(yǎng)：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動(dòng)桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅰ中，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅱ中，接著于27℃下好氧培養(yǎng)4天得約氏不動(dòng)桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅲ中，接著于37℃下厭氧培養(yǎng)2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅳ中，之后于29℃下好氧培養(yǎng)3天得酵母菌原菌液；
(3)一級(jí)種子培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動(dòng)桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌50％，約氏不動(dòng)桿菌30％，乳酸桿菌10％，酵母菌10％的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地：先接種約氏不動(dòng)桿菌原菌液、酵母菌原菌液并于29℃下好氧培養(yǎng)3天，然后再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；
(4)二級(jí)種子培養(yǎng)：將所得的一級(jí)種子按5％的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ中，并于29℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子；
(5)成品培養(yǎng)：將所得的二級(jí)種子按5％的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)3-5天，獲得所述復(fù)合微生態(tài)制劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅰ上，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天；所述斜面培養(yǎng)基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為15min；且該斜面培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動(dòng)桿菌在斜面中活化的具體操作為：制備斜面培養(yǎng)基ⅱ，并將斜面培養(yǎng)基ⅱ置于121℃下滅菌20min，之后用接種環(huán)將約氏不動(dòng)桿菌接種于斜面培養(yǎng)基ⅱ上，然后于27℃下好氧培養(yǎng)4天；所述斜面培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅲ上，之后于37℃下厭氧培養(yǎng)2天；所述斜面培養(yǎng)基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為20min；且該斜面培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將酵母菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅳ上，之后于29℃下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為30min；且該斜面培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(5)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
所述各培養(yǎng)基的百分比均為質(zhì)量百分比。
實(shí)施例2
一種微生態(tài)制劑，通過如下步驟制備：
(1)原菌種斜面培養(yǎng)：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動(dòng)桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅰ中，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅱ中，接著于27℃下好氧培養(yǎng)4天得約氏不動(dòng)桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅲ中，接著于37℃下厭氧培養(yǎng)2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅳ中，之后于29℃下好氧培養(yǎng)3天得酵母菌原菌液；
(3)一級(jí)種子培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動(dòng)桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌40％，約氏不動(dòng)桿菌40％，乳酸桿菌10％，酵母菌10％的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地：先接種約氏不動(dòng)桿菌原菌液、酵母菌原菌液并于29℃下好氧培養(yǎng)3天，然后再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；
(4)二級(jí)種子培養(yǎng)：將所得的一級(jí)種子按5％的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ中，并于29℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子；
(5)成品培養(yǎng)：將所得的二級(jí)種子按5％的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ中，并于29℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，獲得所述復(fù)合微生態(tài)制劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅰ上，之后于28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天；所述斜面培養(yǎng)基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為15min；且該斜面培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動(dòng)桿菌在斜面中活化的具體操作為：制備斜面培養(yǎng)基ⅱ，并將斜面培養(yǎng)基ⅱ置于121℃下滅菌20min，之后用接種環(huán)將約氏不動(dòng)桿菌接種于斜面培養(yǎng)基ⅱ上，然后于27℃下好氧培養(yǎng)4天；所述斜面培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅲ上，之后于37℃下厭氧培養(yǎng)2天；所述斜面培養(yǎng)基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為20min；且該斜面培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將酵母菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為30min；且該斜面培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(5)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
所述各培養(yǎng)基的百分比均為質(zhì)量百分比。
實(shí)施例3
一種微生態(tài)制劑，通過如下步驟制備：
(1)原菌種斜面培養(yǎng)：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動(dòng)桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅰ中，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅱ中，接著于27℃下好氧培養(yǎng)4天得約氏不動(dòng)桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅲ中，接著于37℃下厭氧培養(yǎng)2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅳ中，之后于29℃下好氧培養(yǎng)3天得酵母菌原菌液；
(3)一級(jí)種子培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動(dòng)桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌60％，約氏不動(dòng)桿菌20％，乳酸桿菌10％，酵母菌10％的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地：先接種約氏不動(dòng)桿菌原菌液、酵母菌原菌液并于29℃下好氧培養(yǎng)3天，然后再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；
(4)二級(jí)種子培養(yǎng)：將所得的一級(jí)種子按5％的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ中，并于29℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子；
(5)成品培養(yǎng)：將所得的二級(jí)種子按5％的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，獲得所述復(fù)合微生態(tài)制劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅰ上，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天；所述斜面培養(yǎng)基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為15min；且該斜面培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動(dòng)桿菌在斜面中活化的具體操作為：制備斜面培養(yǎng)基ⅱ，并將斜面培養(yǎng)基ⅱ置于121℃下滅菌20min，之后用接種環(huán)將約氏不動(dòng)桿菌接種于斜面培養(yǎng)基ⅱ上，然后于27℃下好氧培養(yǎng)4天；所述斜面培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅲ上，之后于37℃下厭氧培養(yǎng)2天；所述斜面培養(yǎng)基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為20min；且該斜面培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將酵母菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅳ上，之后于29℃下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為30min；且該斜面培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(5)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
所述各培養(yǎng)基的百分比均為質(zhì)量百分比。
實(shí)施例4
一種微生態(tài)制劑，通過如下步驟制備：
(1)原菌種斜面培養(yǎng)：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動(dòng)桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅰ中，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅱ中，接著于27℃下好氧培養(yǎng)4天得約氏不動(dòng)桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅲ中，接著于37℃下厭氧培養(yǎng)2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅳ中，之后于29℃下好氧培養(yǎng)3天得酵母菌原菌液；
(3)一級(jí)種子培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動(dòng)桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌40％，約氏不動(dòng)桿菌20％，乳酸桿菌20％，酵母菌20％的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地：先接種約氏不動(dòng)桿菌原菌液、酵母菌原菌液并于29℃下好氧培養(yǎng)3天，然后再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；
(4)二級(jí)種子培養(yǎng)：將所得的一級(jí)種子按5％的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ中，并于29℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子；
(5)成品培養(yǎng)：將所得的二級(jí)種子按5％的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，獲得所述復(fù)合微生態(tài)制劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅰ上，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天；所述斜面培養(yǎng)基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為15min；且該斜面培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動(dòng)桿菌在斜面中活化的具體操作為：制備斜面培養(yǎng)基ⅱ，并將斜面培養(yǎng)基ⅱ置于121℃下滅菌20min，之后用接種環(huán)將約氏不動(dòng)桿菌接種于斜面培養(yǎng)基ⅱ上，然后于27℃下好氧培養(yǎng)4天；所述斜面培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅲ上，之后于37℃下厭氧培養(yǎng)2天；所述斜面培養(yǎng)基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為20min；且該斜面培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將酵母菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅳ上，之后于29℃下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為30min；且該斜面培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(5)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
所述各培養(yǎng)基的百分比均為質(zhì)量百分比。
實(shí)施例5
一種微生態(tài)制劑，通過如下步驟制備：
(1)原菌種斜面培養(yǎng)：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動(dòng)桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養(yǎng)皿中進(jìn)行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；
(2)原菌種液體培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅰ中，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動(dòng)桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅱ中，接著于27℃下好氧培養(yǎng)4天得約氏不動(dòng)桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅲ中，接著于37℃下厭氧培養(yǎng)2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養(yǎng)基ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培養(yǎng)3天得酵母菌原菌液；
(3)一級(jí)種子培養(yǎng)：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動(dòng)桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌50％，約氏不動(dòng)桿菌30％，乳酸桿菌10％，酵母菌10％的菌量比接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ中進(jìn)行培養(yǎng)，具體地：先接種約氏不動(dòng)桿菌原菌液、酵母菌原菌液并于29℃下好氧培養(yǎng)3天，然后再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養(yǎng)3天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的一級(jí)種子；
(4)二級(jí)種子培養(yǎng)：將所得的一級(jí)種子按5％的接種量接種于已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ中，并于28℃-30℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，得復(fù)合微生態(tài)制劑的二級(jí)種子；
(5)成品培養(yǎng)：將所得的二級(jí)種子按5％的接種量接種至已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培養(yǎng)4天再厭氧培養(yǎng)4天，獲得所述復(fù)合微生態(tài)制劑的成品；
其中：步驟(1)中枯草芽孢桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將枯草芽孢桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅰ上，之后于29℃厭氧鎢絲燈光照培養(yǎng)6天；所述斜面培養(yǎng)基ⅰ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為15min；且該斜面培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、ph7.0-7.2；
步驟(1)中約氏不動(dòng)桿菌在斜面中活化的具體操作為：制備斜面培養(yǎng)基ⅱ，并將斜面培養(yǎng)基ⅱ置于121℃下滅菌20min，之后用接種環(huán)將約氏不動(dòng)桿菌接種于斜面培養(yǎng)基ⅱ上，然后于25℃-28℃下好氧培養(yǎng)4天；所述斜面培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、瓊脂50克、水1000ml、ph自然；
步驟(1)中乳酸桿菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將乳酸桿菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅲ上，之后于37℃下厭氧培養(yǎng)2天；所述斜面培養(yǎng)基ⅲ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為20min；且該斜面培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、瓊脂15克、水1000ml、ph6.5；
步驟(1)中酵母菌在斜面中活化的具體操作為：用接種環(huán)將酵母菌接種于已滅菌的斜面培養(yǎng)基ⅳ上，之后于29℃下好氧培養(yǎng)3天；所述斜面培養(yǎng)基ⅳ的滅菌溫度為121℃、滅菌時(shí)間為30min；且該斜面培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、瓊脂18克、水1000ml、ph自然；
步驟(2)中液體培養(yǎng)基ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、水1000ml、ph7.0-7.2；
液體培養(yǎng)基ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、ph自然；
液體培養(yǎng)基ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、ph6.5；
液體培養(yǎng)基ⅳ的組分：馬鈴薯200克、蔗糖20克、水1000ml、ph自然；
步驟(3)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅰ的組分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(4)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅱ的組分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.1％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
步驟(5)中發(fā)酵培養(yǎng)基ⅲ的組分：桔水5％、氯化銨0.2％、氯化鈉0.05％、磷酸二氫鉀0.1％、硫酸鎂0.05％、硫酸鋅0.025％、硫酸亞鐵0.025％，余量為水；
所述各培養(yǎng)基的百分比均為質(zhì)量百分比；
將步驟(5)中制得的復(fù)合微生態(tài)制劑成品烘干研磨過100目篩后與二氧化硅混合，制成固體微生態(tài)制劑。
將實(shí)施例5與實(shí)施例1進(jìn)行對(duì)比，實(shí)施例5將復(fù)合微生態(tài)制劑成品烘干研磨過100目篩后與二氧化硅混合，制成固體微生態(tài)制劑，持續(xù)時(shí)間更久，抗環(huán)境干擾能力更強(qiáng)，但是起效速度降低，凈化效率也有少許降低。
將各個(gè)實(shí)施例所得微生態(tài)制劑各取400ml分散于需要凈化的水10l，通氣培養(yǎng)14小時(shí)，分散于1000立方米水中，充分反應(yīng)后取樣。
將實(shí)施例1-4進(jìn)行對(duì)比：
對(duì)比可知，枯草芽孢桿菌脫氮作用明顯，約氏不動(dòng)桿菌除磷效果明顯，乳酸桿菌與酵母菌聯(lián)用則對(duì)水體透明度有較好效果。
最后，應(yīng)當(dāng)指出，以上實(shí)施例僅是本發(fā)明較有代表性的例子。顯然，本發(fā)明的技術(shù)方案并不限于上述實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。