本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

鹿血系為鹿科動(dòng)物的膛中血或茸血，其性熱，味甘咸，歸肝、腎二經(jīng)，具有滋陰助陽(yáng)、益精生津、行血祛瘀、消腫療傷等作用，系一種很名貴的中藥。自古至今就是達(dá)官顯貴及宮廷皇族治病健身的良藥，深受親睞。鹿血在民間亦廣為使用，用于治療風(fēng)濕和類風(fēng)濕癥。經(jīng)近代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，鹿血除有以上作用外，在治療心悸、失眠、健忘、跌傷、及抗衰老等方面的療效也較為突出。同時(shí)，鹿血在中醫(yī)臨床醫(yī)學(xué)上也有著不容小覷的地位。

鹿血的含水量百分比為80％-81％，有機(jī)成分占16％-17％，無機(jī)成分占2％-4％，灰分占3％-4％。其主要有機(jī)成分是蛋白質(zhì)，此外，鹿血中還含有超氧化物歧化酶(sod)、脫氫酶等具有抗衰老作用的酶類。還含有19種氨基酸、脂類、固醇類、游離脂肪酸類、磷脂類、糖脂類、多糖類以及多種激素和多種維生素。鹿血中亦含有若干種有益的微量元素及痕量元素。并且，磷酸肌酸激酶、甲羥丁酸脫氫酶和磷酸肌酸激酶覆酶和心臟機(jī)能相關(guān)。運(yùn)用現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)，可加工出含水量1％以下，蛋白質(zhì)含量96％以上的新鮮鹿血粉，經(jīng)檢測(cè)比較，在提供的生物活性物質(zhì)多少方面，新鮮鹿血粉明顯優(yōu)于優(yōu)質(zhì)鹿茸，鹿血的以上成分影響著鹿血的藥理作用。近年來，鹿血的藥用、保健價(jià)值得到了國(guó)內(nèi)外的廣泛重視，對(duì)鹿產(chǎn)業(yè)的開發(fā)研究也不斷深入，并且，人們對(duì)天然綠色保健型食品和藥品的親睞給市場(chǎng)創(chuàng)造了很大的需求空間，為我國(guó)鹿業(yè)及相關(guān)醫(yī)藥、保健品產(chǎn)業(yè)的發(fā)展帶來廣闊的空間。

鹿血的主要功效

(1)治療老年人心悸：鹿心血、天冬、百合、生地、阿膠、沙參共同研磨并制成藥丸口服。

(2)治療痿吐血：將鹿血、棗仁、朱砂、研磨后與甜酒共同服用效果極佳。

治療失眠、心悸：將鹿血與黃酒同服，每日?qǐng)?jiān)持飲用5-10克即可。

(4)治療幾種常見的血液?。阂月寡?，制成鹿血含量為10％的鹿血酒，每日飲用，一日三次，一次10ml。對(duì)血小板和白細(xì)胞的減少、化學(xué)藥物性貧血以及再生障礙性貧血所引起的頭疼、頭暈、無力、牙齦出血及失眠等各種癥狀均有很好的療效。

(5)治療失眠癥：將鹿血與五味子等其他成分混合泡酒，每天服用，每天睡前堅(jiān)持服用50毫升左右,會(huì)有效改善失眠癥，并且對(duì)無明顯失眠癥狀者會(huì)提高睡眠質(zhì)量。

(6)治療陽(yáng)痿、早泄、形寒肢冷、精神不振、腰酸背痛等癥狀，婦人性冷淡、頭暈、目眩、精神不振等癥：將鹿血與蛇床子、靈仙牌等配伍浸酒。每日服用，一日3次，每次10-20ml，對(duì)緩解以上癥狀有及其明顯的功效，有效率為95％。并且沒有副作用。

(7)治療風(fēng)濕性以及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛：用鹿血調(diào)制成百分比為15％的鹿血酒。每日?qǐng)?jiān)持口服，但要注意適量。

鹿血的藥理作用

中醫(yī)的傳統(tǒng)理論認(rèn)為，血的生理功能有二：一是營(yíng)養(yǎng)，二是滋潤(rùn)。具有良好的營(yíng)養(yǎng)滋潤(rùn)功效，在延緩衰老方面的功效，完全符合中醫(yī)養(yǎng)生學(xué)觀點(diǎn)，經(jīng)常服用確可收到預(yù)防早衰、保健防老的效果。

經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)分析，鹿血要比一副標(biāo)準(zhǔn)的同質(zhì)量梅花鹿二杠茸提供的生物活性物質(zhì)還要多,它的多種微量元素和其它營(yíng)養(yǎng)素比例適當(dāng),經(jīng)檢測(cè)證實(shí)，鹿血蛋白質(zhì)含量高達(dá)96％，富含包括色氨酸等8種人體必需氨基酸在內(nèi)的19種氨基酸；含固醇類、磷脂類、多種不飽和脂肪酸、多種維生素和微量元素，特別是其中白蛋白、免疫球蛋白等的含量均高于人體正常值的幾倍至幾十倍。這些可以補(bǔ)充人體所需的能量，促進(jìn)人體新陳代謝，保證人體正常生命活動(dòng)。鹿血因所含營(yíng)養(yǎng)成分豐富，它能迅速補(bǔ)充人體在運(yùn)動(dòng)中消耗的大量能量物質(zhì)，促進(jìn)代謝產(chǎn)物排泄，進(jìn)而達(dá)到抗疲勞作用，并明顯降低運(yùn)動(dòng)后體內(nèi)的乳酸和肌尿素氮含量。增強(qiáng)有氧運(yùn)動(dòng)能力，提高人體內(nèi)臟的運(yùn)動(dòng)耐力，對(duì)體力勞動(dòng)者及腦力勞動(dòng)者的疲勞恢復(fù)效果明顯。同時(shí)，鹿血還是臨床行之有效的補(bǔ)虛強(qiáng)壯之劑，對(duì)體弱病后有較好療效。另外，鹿血中白蛋白和免疫球蛋白含量極高，服用后可明顯提高機(jī)體免疫力和抗病能力，還能顯著升高白細(xì)胞和血小板，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，對(duì)腫瘤細(xì)胞的防治效果明顯。

(1)延緩衰老

目前關(guān)于抗衰老學(xué)說的論點(diǎn)有很多，對(duì)其研究也較為廣泛和深入，但是仍未研究出延緩衰老的秘方。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，哺乳動(dòng)物在衰老過程中，機(jī)體內(nèi)的單胺氧化酶(mao)的活性升高，超氧化物歧化酶(sod)的活性下降，脂質(zhì)的過氧化作用有所加強(qiáng)。體內(nèi)的自由基(o2、h2o2)大量積累，因其為強(qiáng)氧化劑，所以會(huì)在體內(nèi)將細(xì)胞膜的不飽和脂肪酸氧化，這就導(dǎo)致了脂質(zhì)的過氧化，從而形成過氧化脂質(zhì)(lpo)，并且其與蛋白質(zhì)結(jié)合又形成了多種酶都難以分解的脂褐素，導(dǎo)致細(xì)胞膜失去應(yīng)有的生理功能，進(jìn)而導(dǎo)致組織及器官發(fā)生老化，代謝功能降低，睪酮的合成功能受到阻礙，使血液睪酮含量下降，導(dǎo)致蛋白質(zhì)的合成功能降低，骨質(zhì)疏松，肌肉萎縮，牙齒出現(xiàn)松動(dòng)甚至脫落，性功能也出現(xiàn)不同程度的下降甚至喪失。而鹿血中的次黃嘌呤、尿喀啶和磷脂類等物質(zhì)具有抑制單胺氧化酶(mao)活性的功能，減少自由基的形成。鹿血中的無機(jī)元素錳、鎂、銅及鋅是構(gòu)成超氧化物歧化酶(sod)的核心成分，因而鹿血能夠激活sod酶的合成和活化，并能促進(jìn)sod的合成，在合成過程中促使o2轉(zhuǎn)化成h2o2，并在谷胱甘肽由還原形轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸蔚倪^程中將h2o2中的o2吸收，從而使h2o2還原成水。并在鹿血中維生素e的作用下，對(duì)細(xì)胞膜起到保護(hù)作用，進(jìn)而增強(qiáng)組織及器官的各項(xiàng)功能。同時(shí)體內(nèi)新陳代謝增強(qiáng)。肝、腦等組織器官中的過氧化脂質(zhì)(lpo)的含量亦有所降低。又因鹿血能增加血清睪酮的含量，所以鹿血不僅在提高機(jī)體性功能及保護(hù)副性征能方面功效顯著，還在多種氨基酸及鈣、磷、銅等的參與下，大大加速了鈣的沉積，從而抑制了骨骼和牙齒的松動(dòng)、脫落。所以，鹿血有延年益壽的作用。

(2)補(bǔ)血功能

經(jīng)現(xiàn)代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，鹿血中的維生素e能起到保護(hù)細(xì)胞膜的作用；銅在機(jī)體內(nèi)生成的銅藍(lán)蛋白能促進(jìn)鐵的運(yùn)輸和吸收；鐵以及多種氨基酸為血細(xì)胞的成分；維生素b6、維生素b12及鈷元素能增強(qiáng)骨髓的造血功能，使白細(xì)胞和血小板的數(shù)量明顯增加。并且，針對(duì)失血性貧血鹿血有較為明顯的補(bǔ)血作用，針對(duì)鹽酸苯肼的溶血性貧血有保護(hù)作用。

(3)抗輻射作用

經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，鹿血抗鈷60的輻射能力很強(qiáng)。

(4)抗疲勞作用

通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，用鹿血灌服小鼠，可以明顯地延長(zhǎng)小鼠的活動(dòng)時(shí)間，其抗疲勞作用較為明顯。

(5)影響神經(jīng)功能

通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí),給小鼠口服鹿血后，小鼠的睡眠時(shí)間出現(xiàn)明顯的延長(zhǎng)現(xiàn)象，睡眠時(shí)間是對(duì)照組的2.5倍，從而證實(shí)鹿血對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定的抑制作用。

(6)對(duì)代謝的影響

對(duì)大鼠灌服鹿血口服液，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性無明顯影響，從而說明鹿血口服液對(duì)動(dòng)物體內(nèi)的氨基酸代謝過程無顯著影響。但在研究過程發(fā)現(xiàn)鹿血可顯著降低lpo的含量，從而證明鹿血具有降低lpo的作用和抗氧化作用。

(7)補(bǔ)腎益精作用

經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，口服鹿血能提高睪丸酮的含量和機(jī)體性功能，促進(jìn)性器官發(fā)育增長(zhǎng)，鹿血能起到性激素的作用，對(duì)性功能障礙有很好的改善和治療作用。

(8)促進(jìn)創(chuàng)傷愈合作用

鹿血中含有一種多胺類化合物，這種化合物可以激活體內(nèi)rna聚合酶活性，進(jìn)而促進(jìn)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，加快創(chuàng)傷處的肌肉再生以及傷口的愈合。鹿血中還含有鋅元素，眾所周知，機(jī)體內(nèi)100多種生物酶的組成均離不開鋅元素，它能促進(jìn)傷口的愈合及組織的修復(fù)再生，對(duì)人體內(nèi)、外部傷口的愈合起到極大地促進(jìn)作用。

活性肽類物質(zhì)的研究進(jìn)展

蛋白質(zhì)是一切生命活動(dòng)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，其在生物體內(nèi)的地位舉足輕重，生命活動(dòng)的主要表現(xiàn)形式是新陳代謝，構(gòu)成新陳代謝的所有化學(xué)反應(yīng)都需要酶作為催化劑來進(jìn)行，然而，幾乎體內(nèi)所有的酶都是蛋白質(zhì)，因而，生長(zhǎng)、免疫、呼吸、消化等一切生命活動(dòng)均是通過蛋白質(zhì)來實(shí)現(xiàn)的。因此，有關(guān)蛋白質(zhì)的研究一直以來倍受生物技術(shù)領(lǐng)域研究人員的重視。

蛋白質(zhì)分子是由19種氨基酸以肽鍵的方式連接而成的大分子物質(zhì)，其分子量約在幾萬到幾十萬da之間，蛋白質(zhì)不僅在醫(yī)藥領(lǐng)域中具有重要的加工特性，而且在生物學(xué)上也具有不容忽視的生物學(xué)功能：(1)酶的催化作用：細(xì)胞內(nèi)所有的生物化學(xué)反應(yīng)都需要酶的參與，生物體內(nèi)有上千種酶，每一種酶都催化一種化學(xué)反應(yīng)，因此，任何生物體的正常運(yùn)轉(zhuǎn)都依賴于酶的催化作用；(2)儲(chǔ)存及運(yùn)輸作用：某些蛋白質(zhì)有儲(chǔ)存及運(yùn)輸氧氣、金屬離子、葡萄糖和酯類等的作用，是生物體內(nèi)的必要物質(zhì)；(3)防御作用：許多蛋白質(zhì)可以抵抗外來物的入侵，它們能識(shí)別、沉淀或中和入侵的細(xì)菌或病毒，它們能與入侵的外來物結(jié)合，抑或?qū)⑼鈦砦锇鼑?，致其失活；某些蛋白質(zhì)還可使細(xì)胞或組織產(chǎn)生收縮，通過改變形狀來起到防御損傷的保護(hù)作用；(4)調(diào)節(jié)作用：有一些蛋白質(zhì)能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞活性，還有一些能夠影響細(xì)胞的生理功能，這類蛋白質(zhì)中最常見的是激素蛋白。其它種類的調(diào)節(jié)蛋白能夠與脫氧核糖核酸鍵結(jié)合，調(diào)節(jié)酶與核糖核酸(rna)的生物合成反應(yīng)。

生物活性肽(bioactivepeptides)是一類結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單、具有特殊生理活性的小分子蛋白物質(zhì)，也即一種具有特殊生物學(xué)功能的肽。氨基酸之間彼此以酰胺鍵相互連接而成的化合物稱作肽，跟據(jù)組成氨基酸殘基數(shù)目的多少可以分為寡肽和多肽，其中含10個(gè)以上氨基酸殘基的肽稱為多肽或大肽，其分子量區(qū)間為5000～10000；含10個(gè)以下氨基酸殘基的肽稱為寡肽(或稱低聚肽、小肽)，其分子段為180～1000。由于肽的相對(duì)分子質(zhì)量與蛋白質(zhì)相比小很多，但其生物活性卻很高，因而也稱小肽為生物活性肽。

活性肽類物質(zhì)的生理功能

生物活性肽是具有一定生理功能的肽,對(duì)機(jī)體有益，其作用主要表現(xiàn)在傳遞生理信息，此外，它在調(diào)節(jié)生命活動(dòng)的生理功能方面也起著不容小覷的作用。總之，生物活性肽在維持人體內(nèi)正常生理活動(dòng)方面作用顯著。大量研究結(jié)果表明，生物活性肽不僅能提供人體生長(zhǎng)發(fā)育所需的各類營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還能夠調(diào)節(jié)體內(nèi)的新陳代謝和免疫過程，也正是因?yàn)樗谌梭w內(nèi)分泌量的增多或減少，人類才會(huì)有由幼年、成年、老年到死亡的過程，因而，注射活性肽可以將人體內(nèi)正常的生命周期打破，延緩衰老的速度。歷年來，科學(xué)家陸續(xù)提取出了可有效清除皮膚中超氧陰離子和羥自由基的活性肽、具有抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性肽以及一系列抗菌肽。

小肽將人們?nèi)粘Ｋ车母鞣N營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)輸送到人體的各個(gè)部位，充分發(fā)揮了其作為生物體內(nèi)載體和運(yùn)輸工具的功能，而且，小肽作為生物體內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，為一些反應(yīng)過程傳遞信息。小肽具有極強(qiáng)的活性和多樣性，可多方面對(duì)人體的生理功能進(jìn)行一定的調(diào)節(jié)，從而增強(qiáng)人體內(nèi)的生理活性。小肽能促進(jìn)對(duì)人體有益的多種菌類的生長(zhǎng)，例如，酵母菌、乳酸菌、雙岐桿菌等，小肽的該方面作用能在很大程度上影響人體對(duì)食物中營(yíng)養(yǎng)的消化和吸收。經(jīng)科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，有些小肽除具有以上作用外，還具有蛋白質(zhì)或其他組成氨基酸所沒有的對(duì)機(jī)體很重要的生理機(jī)能。

活性肽的吸收機(jī)制與氨基酸有很大差異，它們是兩種相互獨(dú)立的完全不同的吸收機(jī)制。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為，蛋白質(zhì)先在體內(nèi)被水解成為氨基酸，然后進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，之后被轉(zhuǎn)運(yùn)至機(jī)體的各個(gè)組織、器官，以上是蛋白質(zhì)參與代謝的過程，其各種生物學(xué)活性就是在此過程中得到發(fā)揮的。自從1952年研究者首次觀察到活性肽的一個(gè)特性之后，生物學(xué)界對(duì)小肽的研究便有了一個(gè)新的認(rèn)識(shí)，該發(fā)現(xiàn)被總結(jié)為腸道能夠完整地吸收雙甘肽并將其轉(zhuǎn)運(yùn)到機(jī)體的各個(gè)組織。1960年小肽能夠被完整吸收得到了證實(shí)；1984年科學(xué)家在小腸粘膜上發(fā)現(xiàn)了一種能夠轉(zhuǎn)運(yùn)小肽的載體蛋白；1994年與1996年分別克隆出了能夠轉(zhuǎn)運(yùn)小肽的ⅰ型載體蛋白和ⅱ型載體蛋白。至此，小肽能夠被腸道直接并完整吸收的觀點(diǎn)才被生物學(xué)家所接受。

活性肽的制備方法

活性肽是指具有生物活性的多肽，這些多肽小到只含有2個(gè)氨基酸的二肽，大到復(fù)雜的長(zhǎng)鏈或環(huán)狀多肽。近代生物技術(shù)的發(fā)展為人們從食品蛋白質(zhì)中提取特殊的活性肽提供了一定的條件，人們獲得活性肽的來源有：生物體內(nèi)的各類天然活性肽(酶抑制劑、激素類等)；化學(xué)合成法(液相或固定相)；酶合成法；重組dna技術(shù)；由體內(nèi)消化過程或體外水解蛋白質(zhì)過程產(chǎn)生。

化學(xué)合成法

根據(jù)介質(zhì)的狀態(tài)不同，化學(xué)合成法可分為“液相合成”和“固相合成”。液相合成法主要用于合成小分子肽，在合成多肽濃縮片段方面也較為常用，固相合成法在某些方面優(yōu)于液相合成法，譬如，固相的載體有利于固定肽鏈和環(huán)化肽鏈，而且其自動(dòng)化生產(chǎn)過程較為簡(jiǎn)易，然而，由于相關(guān)操作過程及實(shí)驗(yàn)用品在規(guī)?；a(chǎn)上的局限性，截至現(xiàn)在，固相合成法主要在快速建立多肽庫(kù)方面有施展的空間?；瘜W(xué)合成法的缺點(diǎn)是：特別在利用固相合成法時(shí)，我們要采取相關(guān)措施保護(hù)肽側(cè)鏈上的一些基因；合成過程中需要的鏈接試劑需過量，酰基載體的用量也較大；鏈接試劑有一定的毒性。

重組dna法

如果能夠建立起來一個(gè)重組dna體系，那么就可以利用廉價(jià)的原料經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)出大量的活性肽，然而迄今為止，利用此法制備小分子肽的嘗試也沒有取得成功。

可控酶解法

目前，研究者們已用木瓜蛋白酶酶解鰱魚制得降血壓肽及用胰蛋白酶酶解紫貽貝制得對(duì)于病原菌botryiscinerea的抑菌率達(dá)70％以上的酶解液。然而由于目前商業(yè)用酶的來源局限性，研究者們常常要從大量的酶中進(jìn)行篩選，雖然酶的專一性及原料蛋白的組成可以作為參考依據(jù)，但是這種選擇仍存在較大的隨機(jī)性。隨著酶工程技術(shù)的發(fā)展，研究者們可以根據(jù)活性肽的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用酶工程技術(shù)來生產(chǎn)所需的單一種酶或復(fù)合酶系。盡管可控酶解法因其安全系數(shù)高、廉價(jià)且容易推廣成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)，但酶反應(yīng)體系畢竟是一個(gè)十分復(fù)雜的體系，復(fù)合酶的共同作用機(jī)制仍處于探索中。

此外，酶在水相中存在的問題也較為顯著，主要是副反應(yīng)多以及許多氨基酸的衍生物在水中不穩(wěn)定。而且，蛋白酶水反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生苦味肽，其強(qiáng)弱程度是決定水解物能否在食品工業(yè)中應(yīng)用的關(guān)鍵因素。

直接提取法

直接提取分離法制備活性肽就是直接提取天然生物體中原有的各種原生肽類，該提取過程在很大程度上需要各種分離純化技術(shù)的參與與配合，但是，因?yàn)檫@種原生肽在生物體中的含量不高，所以要把其從生物體中純化出來獲得較高純度的單體化合物，較為復(fù)雜的抽提過程是避免不了的，同時(shí)，其精制過程也很復(fù)雜，這無疑會(huì)大大增加實(shí)驗(yàn)成本。目前，直接提取分離法主要應(yīng)用于海洋資源方面，它的最大用途是為蛋白質(zhì)酶解法以及肽合成法制備活性肽提供先導(dǎo)化合物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明涉及一種鹿血肽的制備方法及其抗疲勞作用。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案是，包括下列步驟：

(1)、鹿血的干燥：采用噴霧干燥機(jī)，調(diào)節(jié)入口溫度180℃，出口溫度80℃，轉(zhuǎn)速為26000～30000轉(zhuǎn)/min；

(2)鹿血蛋白水解：鹿血蛋白的濃度為3％，采用堿性蛋白酶進(jìn)行水解，水解的條件為：溫度53℃、時(shí)間5.5h、ph9.5、酶量1272u/g；

(3)鹿血肽的純化：膜濾

將鹿血蛋白水解液透過0.45μm微濾膜，收集一次透過液，再將一次透過液過10000d的超濾膜，收集分子量小于10000d的部分；

凝膠層析

將膜濾二次透過液，采用sephadexg-25、sephadexg-15凝膠層析反復(fù)層析，凝膠柱規(guī)格為2.0cmx120cm，緩沖液為0.1mol/l的檸檬酸-檸檬酸鈉，洗脫速度為10ml/h，收集到管中，為分子量1000d的多肽。

鹿血肽在制備具有抗疲勞作用的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明采用小鼠抗疲勞實(shí)驗(yàn)對(duì)鹿血肽進(jìn)行活性研究。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，利用最佳水解工藝生產(chǎn)的多肽能顯著延長(zhǎng)小鼠的游泳時(shí)間和低壓耐缺氧能力，肝糖原含量明顯高于對(duì)照組，血乳酸含量明顯低于對(duì)照組；表明鹿血肽具有較好的抗疲勞效果。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

包括下列步驟：

(1)、鹿血的干燥：采用噴霧干燥機(jī)，調(diào)節(jié)入口溫度180℃，出口溫度80℃，轉(zhuǎn)速為26000轉(zhuǎn)/min；

(2)鹿血蛋白水解：鹿血蛋白的濃度為3％，采用堿性蛋白酶進(jìn)行水解，水解的條件為：溫度53℃、時(shí)間5.5h、ph9.5、酶量1272u/g；

(3)鹿血肽的純化：膜濾

將鹿血蛋白水解液透過0.45μm微濾膜，收集一次透過液，再將一次透過液過10000d的超濾膜，收集分子量小于10000d的部分；

凝膠層析

將膜濾二次透過液，采用sephadexg-25、sephadexg-15凝膠層析反復(fù)層析，凝膠柱規(guī)格為2.0cmx120cm，緩沖液為0.1mol/l的檸檬酸-檸檬酸鈉，洗脫速度為10ml/h，收集到管中，為分子量1000d的多肽。

實(shí)施例2

包括下列步驟：

(1)、鹿血的干燥：采用噴霧干燥機(jī)，調(diào)節(jié)入口溫度180℃，出口溫度80℃，轉(zhuǎn)速，轉(zhuǎn)數(shù)為28000轉(zhuǎn)/min，鹿血粉得率為10.607％；

(2)鹿血蛋白水解：鹿血蛋白的濃度為3％，采用堿性蛋白酶進(jìn)行水解，水解的條件為：溫度53℃、時(shí)間5.5h、ph9.5、酶量1272u/g，通過五次平行實(shí)驗(yàn)得到實(shí)際水解率為22.13％，與理論值相差0.33％；

(3)鹿血肽的純化：膜濾

將鹿血蛋白水解液透過0.45μm微濾膜，收集一次透過液，再將一次透過液過10000d的超濾膜，收集分子量小于10000d的部分；

凝膠層析

將膜濾二次透過液，采用sephadexg-25、sephadexg-15凝膠層析反復(fù)層析，凝膠柱規(guī)格為2.0cmx120cm，緩沖液為0.1mol/l的檸檬酸-檸檬酸鈉，洗脫速度為10ml/h，收集到管中，為分子量1000d的多肽。

實(shí)施例3

包括下列步驟：

(1)、鹿血的干燥：采用噴霧干燥機(jī)，調(diào)節(jié)入口溫度180℃，出口溫度80℃，轉(zhuǎn)速為30000轉(zhuǎn)/min；

(2)鹿血蛋白水解：鹿血蛋白的濃度為3％，采用堿性蛋白酶進(jìn)行水解，水解的條件為：溫度53℃、時(shí)間5.5h、ph9.5、酶量1272u/g，通過五次平行實(shí)驗(yàn)得到實(shí)際水解率為22.13％，與理論值相差0.33％。

(3)鹿血肽的純化：膜濾

將鹿血蛋白水解液透過0.45μm微濾膜，收集一次透過液，再將一次透過液過10000d的超濾膜，收集分子量小于10000d的部分；

凝膠層析

將膜濾二次透過液，采用sephadexg-25、sephadexg-15凝膠層析反復(fù)層析，凝膠柱規(guī)格為2.0cmx120cm，緩沖液為0.1mol/l的檸檬酸-檸檬酸鈉，洗脫速度為10ml/h，收集到管中，為分子量1000d的多肽。

鹿血肽抗疲勞活性實(shí)驗(yàn)

(1)小鼠游泳實(shí)驗(yàn)

表1鹿血肽對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響

與對(duì)照組比較：﹡p>0.05,﹡﹡p<0.01

由表1可見，與對(duì)照組相比，高劑量和中劑量組中小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間均明顯增加(p<0.01)；低劑量組與對(duì)照組的負(fù)重游泳時(shí)間差異不明顯(p>0.05)

(2)小鼠耐低壓缺氧實(shí)驗(yàn)

表2鹿血肽對(duì)小鼠耐低壓缺氧實(shí)驗(yàn)的影響

與對(duì)照組比較：﹡p>0.05,﹡﹡p<0.01

由表2可見，三個(gè)高中低劑量組與空白組比較，高劑量組耐低壓缺氧能力顯著增強(qiáng)(p<0.01)；低、中劑量組與對(duì)照組差異不明顯(p>0.05)。

(3)小鼠肝糖原、血乳酸的測(cè)定

表3鹿血肽對(duì)小鼠肝糖原、血乳酸的影響

與對(duì)照組比較：﹡p>0.05,﹡﹡p<0.01

由表3可見，與對(duì)照組相比，高劑量組的小鼠肝糖原含量明顯增加(p<0.01)，低劑量組差異不顯著(p>0.05)；而血乳酸含量則是高劑量組均明顯低于對(duì)照組(p<0.01)，中、低劑量組差異不顯著(p>0.05)。