本發(fā)明涉及一種ppap亞胺類化合物及其制備方法、藥物組合物和用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是世界上主要的致死性疾病之一，嚴(yán)重威脅著人類健康和生命。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院、國(guó)家癌癥中心赫捷院士，全國(guó)腫瘤登記中心主任陳萬(wàn)青教授等在ca:acancerjournalforclinicians雜志上發(fā)表的2015年中國(guó)癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，2015年中國(guó)約有429.2萬(wàn)例新腫瘤病例和281.4萬(wàn)例死亡病例。隨著人口的老齡化問題的加劇，我國(guó)癌癥的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，對(duì)我國(guó)衛(wèi)生資源及國(guó)民經(jīng)濟(jì)造成巨大負(fù)擔(dān)，癌癥控制已成為現(xiàn)今我國(guó)衛(wèi)生戰(zhàn)略的重點(diǎn)。國(guó)家科技重大專項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)制”項(xiàng)目將其列為臨床亟需藥物研發(fā)的10類(種)重大疾病之一。藤黃科(guttiferae)藤黃屬(garcinialinn)植物云南藤黃(garciniayunnanensishu)是我國(guó)的特有種，分布于云南省西南部，果實(shí)酸甜可食，木材可制作家具，其富含多環(huán)多異戊烯基間苯三酚類(polycyclicpolyprenylatedacylphloroglucinols，簡(jiǎn)稱ppaps)和口山酮類(xanthones)化合物，這兩類化合物具有新穎多變的結(jié)構(gòu)和廣泛的生物活性，研究表明ppaps和xanthones都具有抗腫瘤的作用，例如中國(guó)專利cn201210507960.8、cn201410366679.6、cn201510056911.0、cn201610914347.6等報(bào)道了ppaps類化合物在抗腫瘤方面的作用，中國(guó)專利cn201410280756.6、cn201510907922.5等報(bào)道了xanthones類化合物在抗腫瘤方面的作用。雖然ppaps已經(jīng)成為天然化合物的研究熱點(diǎn)，目前相關(guān)報(bào)道也較多，但是目前還沒有關(guān)于ppap亞胺類化合物的相關(guān)報(bào)道，更沒有ppap亞胺類化合物在抗腫瘤方面的相關(guān)報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種ppap亞胺類化合物及其制備方法、藥物組合物和用途，以促進(jìn)該類化合物在醫(yī)藥領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用。本發(fā)明所述的ppap亞胺類化合物是具有式ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、前體化合物或水合物：其中：r1、r2、r3、r4、r5各自獨(dú)立地選自氫、ora、取代或未取代的c1～c12烷基、取代或未取代的c2～c12烯基、取代或未取代的c2～c12炔基、取代或未取代的c6～c30芳基、取代或未取代的c1～c30雜芳基中的任意一種，ra為選自氫、取代或未取代的c1～c12烷基、取代或未取代的c2～c12烯基、取代或未取代的c2～c12炔基、取代或未取代的c6～c30芳基、取代或未取代的c1～c30雜芳基中的任一種。作為優(yōu)選方案，r1、r2、r3、r4各自獨(dú)立地選自h、ch3、och3、oh、x中的任意一種，r5選自h、ch3、och3、oh、x、y中的任意一種；x具有式x-1、x-2、x-3、x-4、x-5、x-6或x-7所示結(jié)構(gòu)：其中：rx1、rx2、rx3、rx4、rx5、rx6、rx7、rx8、rx9、rx10、rx12、rx13各自獨(dú)立地選自氫、甲基、甲氧基、羥基、異戊烯基中的任意一種，rx11為異戊烯基，rx14選自氫、甲基、甲氧基、異戊烯基中的任意一種，rx15、rx16各自獨(dú)立地選自氫、甲基、甲氧基、羥基、異戊烯基中的任意一種，且當(dāng)rx15、rx16中任意一個(gè)為羥基時(shí)，剩余一個(gè)不能為氫、甲氧基或羥基；y具有式y(tǒng)-1或y-2所示結(jié)構(gòu)：其中：ry1、ry2、ry3、ry4、ry5和ry6各自獨(dú)立地選自氫、甲基、甲氧基、羥基或異戊烯基。作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述ppap亞胺類化合物選自如下化合物或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、前體化合物或水合物：我們將其命名為garciyunnaniminea；我們將其命名為garciyunnanimineb；我們將其命名為garciyunnaniminec；我們將其命名為garciyunnanimined；我們將其命名為garciyunnaniminee。本領(lǐng)域人員應(yīng)理解，在得知了本發(fā)明ppap亞胺類化合物的結(jié)構(gòu)以后，可通過多種本領(lǐng)域熟知的方法、利用公知的原料，來獲得本發(fā)明的ppap亞胺類化合物，比如從植物(例如云南藤黃)中提取或化學(xué)合成(例如ppaps亞胺化反應(yīng))等。本發(fā)明所述的ppap亞胺類化合物中式ⅱ、式ⅲ、式ⅳ化合物的分離純化方法，包括如下步驟：a)將云南藤黃粉碎后用95wt％乙醇熱回流提取3～5次，減壓蒸發(fā)提取液，得提取物；b)將步驟a)所得的提取物混懸在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，分別得到云南藤黃提取物的石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位；c)將步驟b)所得云南藤黃提取物的石油醚萃取部位通過硅膠柱分離，用石油醚和丙酮按照100：0～50：50的體積比形成的混合溶液依次梯度洗脫，每份洗脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)tlc薄層分析，將tlc薄層板上顯示的主要的點(diǎn)相同的洗脫物合并，按洗脫順序得到十六個(gè)組分；d)將步驟c)中得到的第五個(gè)組分用ods柱分離，用甲醇和水依照30：70～100：0的體積比形成的混合溶液依次梯度洗脫，每份洗脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)tlc薄層分析，將tlc薄層板上顯示的主要的點(diǎn)相同的洗脫物合并，按洗脫順序得到二十六個(gè)組分；e)將步驟d)中的第十七個(gè)組分用sphadexlh20凝膠柱分離，用甲醇洗脫，得到十個(gè)組分，其中第三個(gè)組分用制備液相色譜純化，得到式?；衔?garciyunnanimineb)；f)將步驟d)中的第十八個(gè)組分用制備液相色譜純化，得到式ⅱ化合物(garciyunnaniminea)；g)將步驟d)中的第二十三個(gè)組分用制備液相色譜純化，得到式ⅳ化合物(garciyunnaniminec)。本發(fā)明所述的ppap亞胺類化合物的制備方法，是使式ⅶ化合物在有機(jī)溶劑存在下與氨氣反應(yīng)獲得式ⅰ化合物，或者在乙酸催化劑和有機(jī)溶劑存在下與氨氣反應(yīng)獲得式ⅰ化合物，具體反應(yīng)式如下所示：其中r1、r2、r3、r4、r5如式ⅰ中的定義。作為優(yōu)選方案，所述有機(jī)溶劑為非醇溶劑，例如：二氧六環(huán)；反應(yīng)溫度為70～90℃。一種防治腫瘤的藥物組合物，所述組合物包含治療有效量的具有式ⅰ結(jié)構(gòu)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體、前體化合物、水合物中的至少一種。作為優(yōu)選方案，所述腫瘤選自肝癌、肺癌、血癌中的至少一種。本發(fā)明所述的ppap亞胺類化合物可作為活性成分用于制備預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物或保健品。作為優(yōu)選方案，所述腫瘤選自肝癌、肺癌、血癌中的至少一種。本發(fā)明所述組合物、抗腫瘤藥物的劑型可以是多種多樣的，只要是能夠使活性成分有效地到達(dá)體內(nèi)的劑型都是可以的。比如可選自：片劑、膠囊劑、粉末、顆粒劑、糖漿、溶液、懸浮液、注射劑、酊劑、口服液、氣霧劑、口含劑、沖劑、丸劑、散劑等常見劑型或納米制劑等緩釋劑型。本發(fā)明所述活性成分的有效施用劑量可隨所用的組合物、給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。本發(fā)明中所述術(shù)語(yǔ)的定義如下：術(shù)語(yǔ)“c1-c12烷基”是指具有1-12個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基或環(huán)烷基，例如：甲基、亞甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基，或類似基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“c2-c12烯基”是指具有2-6個(gè)碳原子的、具有一個(gè)或多個(gè)雙鍵的直鏈或支鏈的烯基或環(huán)烯基，例如：乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、異丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、異戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)庚烯基、1,3-環(huán)己二烯基、1,4-環(huán)己二烯基、或類似基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“c2-c12炔基”是指具有2-12個(gè)碳原子的、具有一個(gè)或多個(gè)三鍵的直鏈或支鏈的炔基，例如：乙炔基、丙炔基、或類似基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“c6～c30芳基”是指具有6～30個(gè)碳原子的芳基，包括單環(huán)或二環(huán)芳基，例如：苯基、萘基、或類似基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“c1～c30雜芳基”是指具有1～30個(gè)碳原子的雜芳基，例如：吡咯基、吡啶基、呋喃基、或類似基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“取代”是指基團(tuán)上的一個(gè)或多個(gè)氫原子被選自下組的取代基取代：c1～c10烷基、c3～c10環(huán)烷基、c1～c10烷氧基、鹵素、羥基、氨基、苯基、異戊烯基；所述的苯基包括未取代的苯基或具有1-3個(gè)取代基的取代苯基，所述的取代基選自鹵素、c1-c10烷基、氰基、羥基、硝基、c3～c10環(huán)烷基、c1～c10烷氧基、氨基或異戊烯基。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”是指所述化合物與藥學(xué)上可接受的無機(jī)酸或有機(jī)酸所形成的鹽，所述的無機(jī)酸包括：鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸；所述的有機(jī)酸包括：甲酸、乙酸、丙酸、丁二酸、萘二磺酸(1,5)、亞細(xì)亞酸、草酸、酒石酸、乳酸、水楊酸、苯甲酸、戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、庚二酸、己二酸、馬來酸、蘋果酸、氨基磺酸、苯丙酸、葡糖酸、抗壞血酸、煙酸、異煙酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸、檸檬酸，以及氨基酸。術(shù)語(yǔ)“互變異構(gòu)體”是指因分子中某一原子在兩個(gè)位置迅速移動(dòng)而產(chǎn)生的官能團(tuán)異構(gòu)體，例如：烯醇與相應(yīng)的酮。術(shù)語(yǔ)“立體異構(gòu)體”是指由分子中原子在空間上排列方式不同所產(chǎn)生的異構(gòu)體，例如：順反異構(gòu)體、對(duì)映異構(gòu)體、構(gòu)象異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體等。術(shù)語(yǔ)“前體化合物”是指在體外無活性，但能夠在生物體內(nèi)進(jìn)行代謝或化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的活性成分，從而發(fā)揮其藥理作用的化合物。術(shù)語(yǔ)“組合物”是指在組合物中，除了含有主要活性成分之外，還可含有少量的且不影響有效成分的次要成分和/或藥學(xué)上可接受的載體。例如，可以含有甜味劑以改善口味、抗氧化劑以防止氧化，以及各種制劑所必要的輔料。術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的”是指適用于人而無過度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))，即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下顯著性有益效果：本發(fā)明的研究結(jié)果顯示：本發(fā)明所述的具有通式ⅰ結(jié)構(gòu)的ppap亞胺類化合物能明顯抑制人肝癌細(xì)胞hepg2、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞a549和人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株rpmi-822672增殖的活性，這說明本發(fā)明所述的具有通式ⅰ結(jié)構(gòu)的ppap亞胺類化合物具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，可以用于制備預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物或保健品，具有廣泛應(yīng)用前景。附圖說明圖1是式ⅱ化合物的1hnmr和13cnmr的數(shù)據(jù)；圖2是式ⅲ化合物的1hnmr和13cnmr的數(shù)據(jù)；圖3是式ⅳ化合物的1hnmr和13cnmr的數(shù)據(jù)；圖4是式ⅴ化合物的1hnmr和13cnmr的數(shù)據(jù)；圖5是式ⅵ化合物的1hnmr和13cnmr的數(shù)據(jù)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。下列實(shí)施中，云南藤黃選用云南省德宏傣族景頗族自治州云南藤黃的果、枝和葉；mci柱選用chp20pmcigel(75-150μm，mitsubishichemical；coparation，japan)；硅膠柱層析選用青島海洋化工有限公司柱層析硅膠(200-300目)；tlc薄層分析選用煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司hsgf254薄層層析硅膠板；ods中壓制備色譜柱選用reversed-phasec18silicagel(50μm，ymc，kyoto，japan)；凝膠柱選用sephadexlh-20(gehealthcarebio-sciencesab，sweden)為填料；質(zhì)譜為watersacquityuplc/synaptg2-sims超高效液相色譜/電噴霧四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用，所用色譜柱為watersacquitybehc18(2.1mm*100mm，1.7μm)；制備hplc為waters2535，制備色譜柱為xbridgeprepc18obdcolumn(19×250mm，5μm)，分析用hplc色譜柱為xbridgec18column(4.6×250mm,5μm)；旋光測(cè)試儀器為autopolvipolarimeter；紫外分光光度計(jì)為uv-2401pcspectrophotometer；紅外光譜使用perkin-elmer577spectrometer測(cè)試；核磁使用brukerav-400spectrometer測(cè)試；液相用乙腈為色譜級(jí)，水為蒸餾水，甲酸為分析級(jí)；質(zhì)譜用乙腈為質(zhì)譜級(jí)，水為經(jīng)mill-q處理的蒸餾水，甲酸為質(zhì)譜級(jí)；ods中壓和凝膠用甲醇為分析級(jí)，水為蒸餾水；其他試劑均為合成級(jí)。實(shí)施例1從云南藤黃中分離純化式ⅱ(garciyunnaniminea)、式ⅲ(garciyunnanimineb)、式ⅳ(garciyunnaniminec)化合物：a)52kg干燥的云南藤黃(包括果實(shí)12kg，枝34kg和葉6kg)粉碎后經(jīng)過提取罐提取，每次用10倍量的95wt％乙醇(520l)熱回流提取1小時(shí)，重復(fù)提取3次，減壓蒸發(fā)提取液，得提取物；b)將步驟a)所得的提取物混懸在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，分別得到云南藤黃提取物的石油醚萃取部位(2.5kg)、乙酸乙酯萃取部位(3.3kg)；c)將步驟b)所得云南藤黃提取物的石油醚萃取部位通過硅膠柱分離(300-400目硅膠用作分離，6kg；100-200目硅膠拌樣，1.8kg)，用石油醚和丙酮按照100：0～50：50的體積比形成的混合溶液依次梯度洗脫，每份洗脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)tlc薄層分析，將tlc薄層板上顯示的主要的點(diǎn)相同的洗脫物合并，按洗脫順序得到十六個(gè)組分；d)將步驟c)中得到的第五個(gè)組分用ods柱分離，用甲醇和水依照30：70～100：0的體積比形成的混合溶液依次梯度洗脫，洗脫液每次收集2000ml，每份洗脫液減壓蒸發(fā)后經(jīng)tlc薄層分析，將tlc薄層板上顯示的主要的點(diǎn)相同的洗脫物合并，按洗脫順序得到二十六個(gè)組分；e)將步驟d)中的第十七個(gè)組分用sphadexlh20凝膠柱分離，用甲醇洗脫，得到十個(gè)組分，其中第三個(gè)組分用制備hplc純化(乙腈：0.1％甲酸水＝65：35，v/v)，得到式ⅲ化合物garciyunnanimineb(淺黃色膠狀固體，6mg)；f)將步驟d)中的第十八個(gè)組分用制備hplc純化(乙腈：0.1％甲酸水＝72：28，v/v)，得到式ⅱ化合物garciyunnaniminea(淺黃色膠狀固體，10mg)；g)將步驟d)中的第二十三個(gè)組分用制備hplc純化(乙腈：0.1％甲酸水＝77：23，v/v)，得到式ⅳ化合物garciyunnaniminec(淺黃色膠狀固體，9mg)。式ⅱ化合物garciyunnaniminea的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)：[α]20d11.7(c0.03,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)255(4.03),317(3.85),350(3.78)nm；ecd(c4.99×10-4m,meoh)λmaxnm(δε)208(+13.22),257(–3.39),282(2.70),305(–3.36)；ir(kbr)νmax3258,2969,2922,2857,1715,1639,1577,1442,1376,1281,1202,1115,1048,1024,1003,822,762,735,688cm-1；hresimsm/z602.3850[m+h]+(calcdforc38h52no5,602.3845)；1hnmr(dmso-d6,400mhz)和13cnmr(dmso-d6,100mhz)的數(shù)據(jù)見圖1所示。式?；衔飃arciyunnanimineb的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)：[α]20d–69.0(c0.035,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)257(4.45),322(3.94),352(3.90)nm；ecd(c3.99×10-4m,meoh)λmaxnm(δε)230(+5.17),265(–0.94),287(+16.73),320(–5.90)；ir(kbr)νmax3237,3068,2968,2919,1715,1637,1577,1524,1442,1391,1373,1282,1114,1048,1024,1003,887,862,762cm-1；hresimsm/z602.3845[m+h]+(calcdforc38h52no5,602.3845)；1hnmr(dmso-d6,400mhz)和13cnmr(dmso-d6,100mhz)的數(shù)據(jù)見圖2所示。式ⅳ化合物garciyunnaniminec的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)：[α]20d11.4(c0.041,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)255(4.16),317(3.97),352(3.92)nm；ecd(c4.37×10-4m,meoh)λmaxnm(δε)206(+10.48),259(–1.97),282(+1.83),302(–2.73)；ir(kbr)νmax3214,2967,2915,2857,1716,1639,1577,1441,1376,1280,1114,1048,1024,1003,823,763cm-1；hresimsm/z670.4471[m+h]+(calcdforc43h60no5,670.4471)；1hnmr(dmso-d6,400mhz)和13cnmr(dmso-d6,100mhz)的數(shù)據(jù)見圖3所示。實(shí)施例2化學(xué)合成法制備式ⅱ化合物garciyunnaniminea：向反應(yīng)器中加入guttiferonek(20mg，0.033mmol)，0.5m氨氣的二氧六環(huán)溶液(13.3ml，6.6mmol，200equiv.)，乙酸(1.89ml，0.033mmol，1equiv.)，于80℃保溫反應(yīng)四小時(shí)，結(jié)束反應(yīng)，反應(yīng)液冷卻至室溫后將其減壓濃縮除去反應(yīng)溶劑，濃縮物用甲醇溶解后，采用制備hplc液相，使用流速為20ml/min的乙腈-0.1％甲酸水(80：20，v/v)洗脫，得到式ⅱ化合物(淺黃色膠狀固體，13.2mg)，產(chǎn)率66％。所得式ⅱ化合物的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)與實(shí)施例1中的對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)相一致。實(shí)施例3化學(xué)合成法制備式?；衔飃arciyunnanimineb：向反應(yīng)器中依次加入garcinol(20mg，0.033mmol)，0.5m氨氣的二氧六環(huán)溶液(13.3ml，6.6mmol，200equiv.)，乙酸(1.89ml，0.033mmol，1equiv.)，在80℃下攪拌反應(yīng)四小時(shí)，反應(yīng)液冷卻至室溫后將其減壓濃縮除去反應(yīng)溶劑，濃縮物用甲醇溶解后，采用制備hplc液相，使用流速為20ml/min的乙腈-0.1％甲酸水(80：20，v/v)洗脫，得到式?；衔?淺黃色膠狀固體，13.8mg)，產(chǎn)率69％。所得式?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)與實(shí)施例1中的對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)相一致。實(shí)施例4化學(xué)合成法制備式ⅳ化合物garciyunnaniminec：向反應(yīng)器中依次加入oblongifolinc(20mg，0.030mmol)，0.5m氨氣的二氧六環(huán)溶液(14.8ml，7.3mmol，200equiv.)，乙酸(2.10ml，0.030mmol，1equiv.)，在80℃下攪拌反應(yīng)四小時(shí)，反應(yīng)液冷卻至室溫后將其減壓濃縮除去反應(yīng)溶劑，濃縮物用甲醇溶解后，采用制備hplc液相，使用流速為20ml/min的乙腈-0.1％甲酸水(80：20，v/v)洗脫，得到式ⅳ化合物(淺黃色膠狀固體，14.2mg)，產(chǎn)率71％。所得式ⅳ化合物的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)與實(shí)施例1中的對(duì)應(yīng)數(shù)據(jù)相一致。實(shí)施例5化學(xué)合成法制備式ⅴ化合物garciyunnanimined：向反應(yīng)器中依次加入oblongifolina(20mg，0.033mmol)，0.5m氨氣的二氧六環(huán)溶液(13.3ml，6.6mmol，200equiv.)，乙酸(1.89ml，0.033mmol，1equiv.)，于80℃下攪拌反應(yīng)四小時(shí)，反應(yīng)液冷卻至室溫后將其減壓濃縮除去反應(yīng)溶劑，濃縮物用甲醇溶解后，采用制備hplc液相，使用流速為20ml/min的乙腈-0.1％甲酸水(68：32，v/v)洗脫，得到式ⅴ化合物(淺黃色膠狀固體，12.4mg)，產(chǎn)率62％。式ⅴ化合物garciyunnanimined的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)：[α]20d25.4(c0.04,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)255(4.48),317(3.94),352(3.90)nm；ecd(c6.66×10-4m,meoh)λmaxnm(δε)202(+14.90),251(–3.13),282(+3.10),314(–2.71)；ir(kbr)νmax3207,2970,2913,1718,1640,1577,1525,1441,1375,1283,1114,1048,1025,1004,877,823,762,682cm-1；hresimsm/z602.3844[m+h]+(calcdforc38h52no5,602.3845)；1hnmr(dmso-d6,400mhz)和13cnmr(dmso-d6,100mhz)的數(shù)據(jù)見圖4所示。實(shí)施例6化學(xué)合成法制備式ⅵ化合物garciyunnaniminee：向反應(yīng)器中依次加入oblongifolinb(20mg，0.033mmol)，0.5m氨氣的二氧六環(huán)溶液(13.3ml，6.6mmol，200equiv.)，乙酸(1.89ml，0.033mmol，1equiv.)，在80℃下攪拌反應(yīng)四小時(shí)，反應(yīng)液冷卻至室溫后將其減壓濃縮除去反應(yīng)溶劑，濃縮物用甲醇溶解后，采用制備hplc液相，使用流速為20ml/min的乙腈-0.1％甲酸水(80：20，v/v)洗脫，得到式ⅵ化合物(淺黃色膠狀固體，11.8mg)，產(chǎn)率59％。式ⅵ化合物garciyunnaniminee的結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)：[α]20d15.6(c0.047,meoh)；uv(meoh)λmax(logε)255(4.11),317(3.92),352(3.85)nm；ecd(c7.82×10-4m,meoh)λmaxnm(δε)207(+5.83),263(+3.11),307(–92)；ir(kbr)νmax3255,2970,2916,2856,1716,1639,1578,1525,1441,1393,1282,1115,1024,1003,822,762cm-1；hresimsm/z602.3852[m+h]+(calcdforc38h52no5,602.3845).；1hnmr(dmso-d6,400mhz)和13cnmr(dmso-d6,100mhz)的數(shù)據(jù)見圖5所示。實(shí)施例7式ⅱ、式ⅲ、式ⅳ、式ⅴ、式ⅵ化合物抑制人腫瘤細(xì)胞增殖試驗(yàn)：7.1實(shí)驗(yàn)材料a549(人肺腺癌細(xì)胞)，rpmi-8226(多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞)購(gòu)于atcc和中國(guó)科學(xué)院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所細(xì)胞庫(kù)；細(xì)胞置放于37℃、5％co2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞傳至8到15代時(shí)用于體外活性測(cè)試；cck-8試劑盒購(gòu)自日本同仁化學(xué)研究所(dojindo)。7.2細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞懸液以每孔180μl加入96孔板中，37℃、5％co2培養(yǎng)過夜，使細(xì)胞貼壁；次日將已配制好的粗提物或者化合物溶液加入相應(yīng)孔中；培養(yǎng)72h后，吸棄培養(yǎng)基，加入含10％cck-8的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h；于酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(mds，sunnyvale，ca450nm)波長(zhǎng)下測(cè)定每孔光吸收值。細(xì)胞抑制率計(jì)算公式如下：抑制率(％)＝(oddmso-od試驗(yàn)組)/oddmso×100％；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示。7.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果garciyunnaniminea(式ⅱ化合物)、garciyunnanimineb(式ⅲ化合物)、garciyunnaniminec(式ⅳ化合物)、garciyunnanimined(式ⅴ化合物)、garciyunnaniminee(式ⅵ化合物)作用于多種人腫瘤72h的ic50如表1所示。表1化合物的ic50值(μm)化合物a549hepg2rpmi-8226garciyunnaniminea3.9±0.54.7±1.03.5±0.4garciyunnanimineb4.4±0.210.1±2.31.7±0.1garciyunnaniminec7.7±0.823.7±3.43.5±1.9garciyunnanimined6.8±1.815.0±3.51.9±0.3garciyunnaniminee8.2±1.512.8±2.75.8±0.9etoposide9.2±1.411.7±1.5＜0.25由表1可見，新化合物garciyunnaniminea(式ⅱ化合物)、garciyunnanimineb(式?；衔?、garciyunnaniminec(式ⅳ化合物)、garciyunnanimined(式ⅴ化合物)、garciyunnaniminee(式ⅵ化合物)對(duì)于人肝癌細(xì)胞hepg2、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞a549和人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株rpmi-8226均具有顯著的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照藥etoposide(依托泊甙)，具有潛在的抗腫瘤作用，可以作為預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物或保健品。最后需要在此指出的是：以上僅是本發(fā)明的部分優(yōu)選實(shí)施例，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容做出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)12