本發(fā)明屬于農(nóng)用微生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種防治草莓白粉病的復合菌劑及方法。

背景技術(shù)：

隨著植物種類的不斷增多，植物栽培方式的不斷多樣化，植物病害日趨嚴重，而傳統(tǒng)的化學防治方法存在著許多弊端，比如：化學農(nóng)藥的大量使用引起了嚴重的環(huán)境污染，農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留也越來越嚴重，病菌抗藥性產(chǎn)生速度也越來越快等一系列對人們生活有害的影響。在當今倡導低碳經(jīng)濟、環(huán)保節(jié)約型社會中，尋求既能保護人類生活，又可增產(chǎn)的新技術(shù)十分適應(yīng)當今社會的發(fā)展。

生物防治是利用一種生物或其產(chǎn)物對付另外一種生物的方法，分為以蟲治蟲、以菌治蟲、以菌治菌三大類。它利用了生物物種間的相互關(guān)系，以一種或一類生物或其產(chǎn)物抑制另一種或另一類生物。生物防治的方法有很多，微生物防治就是其中一種。生物防治主要是利用有益的微生物，通過生物間的競爭作用、抗生作用、寄生作用、溶菌作用及誘導抗性等，來抑制某些病原物的存活和活動，其優(yōu)越性在于資源豐富、選擇性強、無殘留、無污染、成本低，兼防兼治、增產(chǎn)增收、保持生態(tài)平衡，起到長效的作用。

草莓白粉病是草莓生產(chǎn)中的主要病害。近年來，草莓白粉病的發(fā)生逐漸加重，特別是保護地草莓白粉病，發(fā)生嚴重時，病葉率在45％以上，病果率在50％以上，嚴重影響了草莓的產(chǎn)量、品質(zhì)和經(jīng)濟效益(楊聯(lián)偉.煙臺果樹，2005(3)：15-16)。

用于生物防治的微生物主要包括真菌、細菌、放線菌和酵母菌等很多生物種群，細菌主要包括乳酸菌、芽孢桿菌、醋酸桿菌等。其中，乳酸菌被廣泛應(yīng)用于酸奶行業(yè)，被證實為對人體無公害，且通過提供營養(yǎng)物質(zhì)、改善消化道微生態(tài)環(huán)境、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能等作用機制起到促進人類消化吸收、增強免疫等作用。

現(xiàn)有的白粉病防治方法：

1.農(nóng)業(yè)措施

選擇抗病品種；合理控制氮肥用量，多施磷、鉀肥，合理密植；合理進行水肥管理；施用腐熟有機肥、復合肥要適量，尤其氮肥不能施用過多，防止燒苗及旺長；適時澆水，滿足苗期對水分的需求；利用風口調(diào)節(jié)棚室內(nèi)溫、濕度；及時摘除老葉、病葉，清潔田園，增加溫室草莓的通風透光性；

2.物理措施

溫度濕度過大時應(yīng)加大放風量；草莓聲場過程中應(yīng)及時摘除老葉、病殘葉、病梗、病果，集中帶到室外深埋或燒掉，消滅菌源；

3.藥劑防治

目前防治中常用4％朵麥可水劑、50％多菌靈、30％特富靈可濕性粉劑。但是化學藥劑的長期大量使用，使各種有害病菌產(chǎn)生了抗藥性，增加了防治難度；同時化學藥劑在草莓內(nèi)有殘留，危害人們的身體健康，并且污染環(huán)境。

生防微生物對農(nóng)藥的反應(yīng)敏感，種類比較單一，抗菌譜較窄，且在植株上定殖較難，生防效果不穩(wěn)定，都限制了其在植物領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用。因此，進一步開發(fā)廣譜抗菌、生防效果穩(wěn)定的微生物資源迫在眉睫。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種防治草莓白粉病的復合菌劑及方法。所述復合菌劑能夠有效提高草莓產(chǎn)量(50％以上)及縮短出貨時間(減少5天以上)，同時，還能防治草莓白粉病，對草莓白粉病的防治效率高達85％以上。

本發(fā)明第一方面，提供一種防治草莓白粉病的復合菌劑，所述復合菌劑包括乳酸菌、酵母菌(pichiafermentans)和醋酸桿菌(acetobacterperoxydans)；所述乳酸菌為副干酪乳桿菌(lactobacillusparafarraginis)、布氏乳桿菌(lactobacillusbuchneri)、鼠李糖乳桿菌(lactobacillusrhamnosus)和哈爾濱乳桿菌(lactobacillusharbinensis)中的至少一種。作為優(yōu)選，所述乳酸菌為鼠李糖乳桿菌(lactobacillusrhamnosus)，與酵母菌(pichiafermentans)、醋酸桿菌容易聯(lián)合培養(yǎng)，且培養(yǎng)后的復合菌種能夠相互適應(yīng)，防止白粉病效果較好。

作為優(yōu)選，所述復合菌劑中乳酸菌的活菌量至少為10⁸cfu/ml。

作為優(yōu)選，所述酵母菌(pichiafermentans)的活菌量至少為10⁷cfu/ml。

作為優(yōu)選，所述醋酸桿菌(acetobacterperoxydans)的活菌量至少為10⁶cfu/ml。

所述復合菌劑的制備方法如下：使用發(fā)酵設(shè)備對乳酸菌、酵母菌和醋酸桿菌三種菌種進行聯(lián)合發(fā)酵，發(fā)酵至ph降至4以下。由于本發(fā)明采用的三種菌種類型不同，酵母菌是兼性厭氧菌，醋酸菌為異養(yǎng)需氧型菌，有氧條件下繁殖，無氧情況下不繁殖，有氧條件下發(fā)酵；乳酸菌為異養(yǎng)厭氧型，無氧條件下繁殖，有氧情況下不繁殖，無氧條件下發(fā)酵。將這三種菌在聯(lián)合發(fā)酵過程中，能夠相互適應(yīng)，篩選出能夠達到生存平衡的復合菌劑，增強菌劑在植株上的定植力，不至于陷入種類單一的局限。

本發(fā)明第二方面，提供一種基于所述復合菌劑的防治草莓白粉病的方法，在草莓開花初期，將所述復合菌劑對草莓進行噴灑或滴灌，直至草莓生長結(jié)果期結(jié)束。

進一步地，噴灑時復合菌劑與水按1：100-1：400的比例稀釋，5～7天噴灑一次。

進一步地，滴灌時復合菌劑與水按1：150-1：250的比例稀釋，7～10天滴灌一次。

本發(fā)明的特點在于，本發(fā)明提供的復合菌劑以乳酸菌為主，酵母菌(pichiafermentans)、醋酸桿菌(acetobacterperoxydans)為輔，三個主要菌種，按一定比例調(diào)配而成。酵母菌是兼性厭氧菌，醋酸桿菌為異養(yǎng)需氧型菌，有氧條件下繁殖，無氧情況下不繁殖，有氧條件下發(fā)酵；乳酸菌為異養(yǎng)厭氧型，無氧條件下繁殖，有氧情況下不繁殖，無氧條件下發(fā)酵。由于繁殖條件不同，彼此生存條件相互抑制，難以發(fā)揮抗菌抑菌效果，一般條件下本領(lǐng)域技術(shù)人員不會將這三個菌種混合在一起。這三種菌種如果能成功混合，能夠有效發(fā)揮抑菌效果，由于廣譜抗菌作用，草莓寄生菌不易產(chǎn)生抗性。

為了將這三種菌復合起來，本發(fā)明將此三種菌聯(lián)合發(fā)酵，三種菌種在同一個發(fā)酵罐內(nèi)混合聯(lián)合發(fā)酵，發(fā)酵過程中三種菌種相互適應(yīng)、相互篩選、優(yōu)勝劣汰，最終達到三種菌種的某種生存平衡的復合菌劑，生存平衡后的復合菌種中乳酸菌的活菌量不低于10⁸cfu/ml；酵母菌(pichiafermentans)的活菌量不低于10⁷cfu/ml；醋酸桿菌(acetobacterperoxydans)的活菌量不低于10⁶cfu/ml，一般平衡后乳酸菌、酵母菌與醋酸桿菌的活菌量比例為100：10：1左右。達到生存平衡的復合菌劑在植株上的定植力大大增加，能夠有效發(fā)揮廣譜抗菌作用，草莓寄生菌不易產(chǎn)生抗性。

本發(fā)明提供的復合菌劑能夠抑制麥類白粉菌、霉菌、赭曲霉菌、黃曲霉菌等病原菌的生長繁殖。所述復合菌劑能有效預(yù)防草莓白粉病的發(fā)生，實驗組草莓的病情指數(shù)遠遠低于對照組，且當解復合菌劑稀釋至400倍時，實驗組草莓的病情指數(shù)仍低于8％，防治效率高達85.1％。本發(fā)明提供的方法能較大程度的代替農(nóng)藥化肥，具有綠色環(huán)保、無公害、無殘留等特點，可有效減輕生態(tài)環(huán)境污染，對草莓無污染，人們可以放心食用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

1、本發(fā)明提供的復合菌劑，在一定配比范圍內(nèi)表現(xiàn)出明顯的增效或相加作用，組合物對病菌的防治效果比單劑有了明顯提高，降低了農(nóng)藥化肥的使用劑量，減少了用藥次數(shù)，降低了用藥成本，減少了農(nóng)藥化肥對生態(tài)環(huán)境的不利影響。

2、本發(fā)明提供的復合菌劑，三種有效菌種的組合，擴大了殺菌譜，彌補了單種菌劑使用時的缺陷和局限性。

3、本發(fā)明提供的復合菌劑，藥效發(fā)揮迅速，持效期長，使用成本低，使用方便，省時省力，其推廣應(yīng)用有著巨大的經(jīng)濟效益和社會效益。

4、本發(fā)明所使用的復合菌劑能夠抑制麥類白粉菌、霉菌、赭曲霉菌、黃曲霉菌等病原菌的生長繁殖。所述復合菌劑能有效預(yù)防草莓白粉病的發(fā)生，實驗組草莓的病情指數(shù)遠遠低于對照組，且當解復合菌劑稀釋至400倍時，實驗組草莓的病情指數(shù)仍低于8％，防治效率高達85.1％。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步詳細說明，但本發(fā)明并不局限于以下技術(shù)方案。

實施案例：復合菌劑對草莓白粉病防治效果的驗證試驗

1、復合菌劑制備

使用大型發(fā)酵設(shè)備對三種菌種(醋酸桿菌、酵母菌和鼠李糖乳桿菌，購買于株式會社gslbio公司)進行聯(lián)合發(fā)酵，當ph降至4以下時即是發(fā)酵成功，此時，復合菌劑中鼠李糖乳桿菌的活菌量10⁸cfu/ml以上，酵母菌(pichiafermentans)的活菌量為10⁷cfu/ml以上，醋酸桿菌(acetobacterperoxydans)的活菌量為10⁶cfu/ml以上。聯(lián)合發(fā)酵的營養(yǎng)成分為復合菌劑種子液、海鹽、糖漿、葡萄糖、水、復合氨基酸、復合維生素和醋酸鈉，培養(yǎng)溫度為25～30℃。

2、試驗地點：昆明市西山區(qū)自耕農(nóng)場

3、試驗方法

1)試驗組和對照組設(shè)立：兩組試驗組(試驗1組、試驗2組)，每組試驗組2壟草莓(一壟、二壟)，共400棵，每個處理組之間設(shè)立保護行；一組對照組，對照組設(shè)2壟草莓，共400棵；以上試驗組及對照組均在昆明市西山區(qū)自耕農(nóng)場5號大棚中。

噴灑：草莓開花初期，對試驗組采取葉面施肥，試驗1組將復合菌劑按1：100的比例稀釋，試驗2組將復合菌劑按1：400的比例稀釋。每周一次，直至草莓果期結(jié)束。對照組則使用未加入復合菌劑的清水進行噴灑以作對照。噴灑一個月后，檢查草莓白粉病的發(fā)病情況。

滴灌：將復合菌劑按1：200的比例稀釋，并按日常滴灌量對草莓試驗1組和2組進行滴灌，對照組使用未加入復合菌劑的清水進行滴灌，一個月后，檢查草莓白粉病的發(fā)病情況。

結(jié)果及分析

草莓白粉病葉部分級標準：0級：葉片無病斑；1級：病斑面積占整個葉面積的5％以下；2級：病斑面積占整個葉面積的6％-15％；3級：病斑面積占整個葉面積的16％-25％；4級：病斑面積占整個葉面積的26％-50％；5級：病斑面積占整個葉面積的50％以上。草莓白粉病果部分級標準：0級：果實無病斑；1級：病斑面積占整個果實面積的5％以下；2級：病斑面積占整個果實面積的6％-15％；3級：病斑面積占整個果實面積的16％-25％；4級：病斑面積占整個果實面積的26％-50％；5級：病斑面積占整個果實面積的50％以上。

病情指數(shù)＝[∑(病級值*該級發(fā)病葉數(shù))/(調(diào)查總?cè)~數(shù)*最高病級值)]*100％

防治效率的計算公式＝[1-(處理的病情指數(shù)/對照的病情指數(shù))]*100％。

以spss統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析，結(jié)果如表1所示：

表1復合菌劑對草莓白粉病的預(yù)防效果

綜上，本發(fā)明所使用的復合菌劑能夠抑制麥類白粉菌的生長繁殖。從而能有效預(yù)防草莓白粉病的發(fā)生，實驗組草莓的病情指數(shù)遠遠低于對照組，且當解復合菌劑稀釋至400倍時，實驗組草莓的病情指數(shù)仍低于8％，防治效率高達85.1％。