本發(fā)明涉及海洋微藻技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種實(shí)驗(yàn)室與生產(chǎn)實(shí)踐相結(jié)合的海洋微藻快速養(yǎng)殖方法。

背景技術(shù)：

海洋微藻中含有蛋白質(zhì)、氨基酸、色素、dha和epa等豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。目前廣泛被應(yīng)用于水產(chǎn)育苗方面，是魚(yú)、蝦等高檔海鮮良好的優(yōu)質(zhì)餌料。但在生產(chǎn)實(shí)踐應(yīng)用當(dāng)中，由實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)養(yǎng)藻到池塘生產(chǎn)實(shí)踐應(yīng)用過(guò)程當(dāng)中仍然存在諸多問(wèn)題，例如：藻類生長(zhǎng)緩慢、轉(zhuǎn)移到池塘中出現(xiàn)藻類停止生長(zhǎng)或者死亡現(xiàn)象，以及藻類的諸多應(yīng)激反應(yīng)等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明創(chuàng)造旨在提出一種海洋微藻的養(yǎng)殖方法，能夠解決實(shí)驗(yàn)室到生產(chǎn)實(shí)踐過(guò)度不穩(wěn)定的情況，不但實(shí)現(xiàn)了海洋微藻生長(zhǎng)緩慢的問(wèn)題，且同時(shí)保證微藻親本的活性，本發(fā)明也適合在大的養(yǎng)殖場(chǎng)所保證微藻的穩(wěn)定快速增長(zhǎng)。

本發(fā)明創(chuàng)造提供的海洋微藻的養(yǎng)殖方法，為適應(yīng)環(huán)境轉(zhuǎn)變提供三個(gè)階段的培養(yǎng)，具體分為一級(jí)培養(yǎng)、二級(jí)培養(yǎng)和三級(jí)培養(yǎng)，每個(gè)階段培養(yǎng)時(shí)間優(yōu)選為5天。

其中，所述一級(jí)培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括：fecl31.6～3mg、(nh4)6mo7o240.08～0.2mg、hcl2～3mg；所述二級(jí)培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括：mgso411～13mg、cacl20.5～2mg、h2so40.2～0.35ml；所述三級(jí)培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括：檸檬酸鐵0.01～0.1mg、mgcl12～14mg、葡萄糖0.05～0.2mg。在每個(gè)階段提供不同的主要營(yíng)養(yǎng)成分，能夠幫助海洋微藻逐步適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境至生產(chǎn)實(shí)踐環(huán)境的轉(zhuǎn)變，提高微藻抗環(huán)境干擾能力，維持生長(zhǎng)的穩(wěn)定性。

優(yōu)選的，所述一級(jí)培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；所述二級(jí)培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；所述三級(jí)培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。

進(jìn)一步，所述一級(jí)培養(yǎng)的海水經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌，優(yōu)選的滅菌條件為120℃，30min；所述二級(jí)培養(yǎng)的海水經(jīng)過(guò)中高溫滅菌，優(yōu)選的滅菌條件為90℃，10min；所述三級(jí)培養(yǎng)的海水經(jīng)過(guò)曝氣和日曬處理，優(yōu)選的曝氣和日曬時(shí)間為2h以上。海水是微藻直接接觸和存貨的直接環(huán)境因素，經(jīng)不同級(jí)別的處理，使得海水環(huán)境逐級(jí)接近于生產(chǎn)實(shí)踐的養(yǎng)殖環(huán)境，避免海水微藻在養(yǎng)殖環(huán)境驟變?cè)斐傻倪m應(yīng)不良。

進(jìn)一步，所述一級(jí)培養(yǎng)、二級(jí)培養(yǎng)和三級(jí)培養(yǎng)的接種密度均優(yōu)選為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml。

進(jìn)一步，所述一級(jí)培養(yǎng)和二級(jí)培養(yǎng)的外部環(huán)境為，光照時(shí)間：黑暗時(shí)間＝12：12，光照強(qiáng)度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，濕度為20％；所述三級(jí)培養(yǎng)的外部環(huán)境為，自然條件下，定期潑灑尿素追肥。

優(yōu)選的，所述三級(jí)培養(yǎng)的外部環(huán)境下，追肥潑灑時(shí)間每次間隔7天，濃度為0.03g/l至0.08g/l，優(yōu)選為0.05g/l。

優(yōu)選的，所述海水鹽度為30。

本發(fā)明的方法能夠解決海洋微藻的實(shí)驗(yàn)室與實(shí)際生產(chǎn)的對(duì)接關(guān)系，直接從實(shí)驗(yàn)室到自然條件下的微藻轉(zhuǎn)移過(guò)程中，容易使海洋微藻發(fā)生不適，產(chǎn)生停止生長(zhǎng)及死亡的現(xiàn)象。本發(fā)明分為三級(jí)培養(yǎng)過(guò)程，通過(guò)改變培養(yǎng)條件及培養(yǎng)基配方從而解決藻類的應(yīng)激反應(yīng)。一級(jí)培養(yǎng)貼近實(shí)驗(yàn)室全程無(wú)菌操作過(guò)程，為海洋微藻提供微量生長(zhǎng)環(huán)境保證下一步的接種量；二級(jí)培養(yǎng)為開(kāi)放式培養(yǎng)過(guò)程，保證微藻的活性以及在逐漸提高微藻的適應(yīng)能力；三級(jí)培養(yǎng)為開(kāi)放式貼近自然條件下的培養(yǎng)過(guò)程，此階段為藻大量培養(yǎng)過(guò)程以及海洋微藻的批量產(chǎn)出，在這個(gè)過(guò)程中海洋微藻基本能夠?qū)崿F(xiàn)在自然條件下的良好生長(zhǎng)。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明創(chuàng)造的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明創(chuàng)造，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明創(chuàng)造的不當(dāng)限定。

實(shí)施例一

一級(jí)培養(yǎng)的海水為經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌(120℃，30min)，海水用量200～500ml，藻的接種量為100ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml)，培養(yǎng)基為：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；二級(jí)培養(yǎng)的海水為經(jīng)過(guò)(90℃，10min)處理，海水量為500～5000ml，藻的接種量為300ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml),培養(yǎng)基為：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；三級(jí)培養(yǎng)的海水經(jīng)過(guò)曝氣和日曬兩個(gè)小時(shí)以上，海水量為5000ml以上，藻的接種量為500ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml),培養(yǎng)基為：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。一級(jí)培養(yǎng)和二級(jí)培養(yǎng)的外部環(huán)境為：光照：黑暗時(shí)間＝12：12，光照強(qiáng)度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，濕度為20％；三級(jí)培養(yǎng)為自然條件下，定期潑灑尿素追肥，潑灑時(shí)間每次間隔7天，濃度為0.05g/l。

采用的藻種為海鏈藻，藻的增長(zhǎng)率為50.7％。

實(shí)施例二

一級(jí)培養(yǎng)的海水為經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌(120℃，30min)，海水用量200～500ml，藻的接種量為100ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml)，培養(yǎng)基為：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；二級(jí)培養(yǎng)的海水為經(jīng)過(guò)(90℃，10min)處理，海水量為500～5000ml，藻的接種量為300ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml),培養(yǎng)基為：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；三級(jí)培養(yǎng)的海水經(jīng)過(guò)曝氣和日曬兩個(gè)小時(shí)以上，海水量為5000ml以上，藻的接種量為500ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml),培養(yǎng)基為：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。一級(jí)培養(yǎng)和二級(jí)培養(yǎng)的外部環(huán)境為：光照：黑暗時(shí)間＝12：12，光照強(qiáng)度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，濕度為20％；三級(jí)培養(yǎng)為自然條件下，定期潑灑尿素追肥，潑灑時(shí)間每次間隔7天，濃度為0.06g/l。

采用的藻種為叉邊金藻，藻的增長(zhǎng)率為41.％。

實(shí)施例三

一級(jí)培養(yǎng)的海水為經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌(120℃，30min)，海水用量200～500ml，藻的接種量為100ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml)，培養(yǎng)基為：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；二級(jí)培養(yǎng)的海水為經(jīng)過(guò)(90℃，10min)處理，海水量為500～5000ml，藻的接種量為300ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml),培養(yǎng)基為：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；三級(jí)培養(yǎng)的海水經(jīng)過(guò)曝氣和日曬兩個(gè)小時(shí)以上，海水量為5000ml以上，藻的接種量為500ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml),培養(yǎng)基為：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。一級(jí)培養(yǎng)和二級(jí)培養(yǎng)的外部環(huán)境為：光照：黑暗時(shí)間＝12：12，光照強(qiáng)度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，濕度為20％；三級(jí)培養(yǎng)為自然條件下，定期潑灑尿素追肥，潑灑時(shí)間每次間隔7天，濃度為0.05g/l。

采用的藻種為赤潮異彎藻，藻的增長(zhǎng)率為38％。

實(shí)施例四

一級(jí)培養(yǎng)的海水為經(jīng)過(guò)高溫高壓滅菌(120℃，30min)，海水用量200～500ml，藻的接種量為100ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml)，培養(yǎng)基為：fecl32.6mg、mncl20.72mg、h3bo467.2mg、edta90mg、kh2po440mg、nano2200mg、zncl20.42mg、cocl20.4mg、(nh4)6mo7o240.18mg、cuso40.4mg、hcl2.5mg、維生素b120.02mg、維生素b10.4mg、生物素0.02mg；二級(jí)培養(yǎng)的海水為經(jīng)過(guò)(90℃，10min)處理，海水量為500～5000ml，藻的接種量為300ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml),培養(yǎng)基為：nacl29.2mg、mgso412.3mg、kcl0.75mg、cacl21.11mg、nano31.2mg、k2hpo40.17mg、h3bo42.86mg、znso40.66mg、namoo40.063mg、h2so40.3ml、mncl25.43mg、cuso40.24mg；三級(jí)培養(yǎng)的海水經(jīng)過(guò)曝氣和日曬兩個(gè)小時(shí)以上，海水量為5000ml以上，藻的接種量為500ml(密度為10⁶個(gè)細(xì)胞/ml),培養(yǎng)基為：檸檬酸鐵0.05mg、mgcl13.66mg、nano30.2mg、kcl0.018mg、nah2po40.022mg、葡萄糖0.1mg、nasio30.1mg。一級(jí)培養(yǎng)和二級(jí)培養(yǎng)的外部環(huán)境為：光照：黑暗時(shí)間＝12：12，光照強(qiáng)度為800～1500lux，溫度為25.5～28.5℃，濕度為20％；三級(jí)培養(yǎng)為自然條件下，定期潑灑尿素追肥，潑灑時(shí)間每次間隔7天，濃度為0.03g/l。

采用的藻種為扁藻，藻的增長(zhǎng)率為22.2％。

以上所述僅為本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明創(chuàng)造，凡在本發(fā)明創(chuàng)造的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明創(chuàng)造的保護(hù)范圍之內(nèi)。