本發(fā)明屬于有機(jī)光化學(xué)合成技術(shù)領(lǐng)域，主要涉及利用光能進(jìn)行光化學(xué)反應(yīng)合成7-去氫膽固醇/麥角固醇內(nèi)過氧化物及其衍生物的方法及對7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物及其衍生物的用途。
背景技術(shù)：
隨著大量天然和合成的內(nèi)過氧化物被確認(rèn)有抗癌，抗瘧疾，抗炎活性后，內(nèi)過氧化物越來越引起人們的關(guān)注。其中麥角固醇內(nèi)過氧化物是最受關(guān)注的化合物之一。因為麥角固醇內(nèi)過氧化物既可以從一些食用真菌、植物、印度洋的某些海螺中的天然物質(zhì)中提取，也可以由麥角固醇合成,麥角固醇可以從一些植物、真菌中大量提取。關(guān)于麥角固醇內(nèi)過氧化物提取和合成以及其提高免疫力、抗炎、抗多種癌生物活性的相關(guān)報道已經(jīng)很多。如russo等合成了麥角固醇內(nèi)過氧化物，并證明了麥角固醇內(nèi)過氧化物可以促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞凋亡，起到抗癌作用(russoa,cardilev,piovanom,etal.chemico-biologicalinteractions,2010,184(3):352-8)。最近xiangminli等用合成的麥角固醇內(nèi)過氧化物研究了其抗肝癌的詳細(xì)機(jī)理(lix,wuq,bum,etal.oncotarget,2016,7(23):33948-33959.)
目前報道的關(guān)于麥角固醇內(nèi)過氧化物的合成主要是通過光化學(xué)方法實現(xiàn)的，即麥角固醇與單線態(tài)氧發(fā)生環(huán)加成反應(yīng)生成內(nèi)過氧化物。傳統(tǒng)的合成方法通常采用二氯甲烷和苯，氯仿作為反應(yīng)溶劑。二氯甲烷和氯仿均屬于易揮發(fā)液體，受熱或者見光易分解出有劇毒的光氣，不僅對人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)有極大的危害，具有麻醉作用，還會損傷人體的其他的器官如心、肝，腎等。苯本身有毒，為iarc第一類致癌物。因此，尋找一種低毒的反應(yīng)溶劑成為麥角固醇內(nèi)過氧化合成中一個需要迫切解決的問題。
7-去氫膽固醇是維生素d3的前體,它存在于人類的皮膚中，能夠與單重態(tài)氧發(fā)生[4+2]的加成反應(yīng)生成橋環(huán)過氧化合物，其結(jié)構(gòu)與麥角固醇內(nèi)過氧化物十分相似。有研究表明，7-去氫膽固醇的衍生物具有生物活性。xu等表明7-去氫膽固醇氧化產(chǎn)生的羥固醇還原后的混合物對成神經(jīng)細(xì)胞瘤neuro2a表現(xiàn)出與細(xì)胞毒素4-羥基-2-壬烯醛相似的細(xì)胞毒性(xul,koradez,porterna.journaloftheamericanchemicalsociety,2010,132(7):2222-32)。korade等研究了7-去氫膽固醇衍生的羥固醇在史李歐綜合征方面的應(yīng)用，表明，7-去氫膽固醇衍生的羥固醇以劑量和時間依賴的方式降低neuro2a細(xì)胞的活性(koradez,xul,sheltonr,etal.journaloflipidresearch,2010,51(11):3259-69)。7-去氫膽固醇廣泛存在于人類的皮膚中，與麥角固醇內(nèi)過氧化物相比，7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物在臨床上不存在攝入異物和外排困難等問題。但是，由于7-去氫膽固醇不能在天然產(chǎn)物中提取，只能由膽固醇經(jīng)過多步合成，因此目前關(guān)于7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物的合成及其生理活性的報道還未見到。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一是針對上述問題，利用一種內(nèi)浸上行鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器，優(yōu)化反應(yīng)條件，提供一種光化學(xué)合成7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物及其衍生物的方法。
本發(fā)明的目的之二是改進(jìn)以往麥角固醇內(nèi)過氧化物合成中使用劇毒性的苯，二氯甲烷或者氯仿作為反應(yīng)溶劑的缺點(diǎn)，改用正己烷和甲醇的混合液作為反應(yīng)溶劑，較高產(chǎn)率得到了麥角固醇內(nèi)過氧化物。
此外，本發(fā)明還選用麥角固醇內(nèi)過氧化物作為參比對照，進(jìn)行細(xì)胞實驗，探究7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物在抗癌方面的生物活性。
本發(fā)明是首先通過光化學(xué)方法合成7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物，合成路線如反應(yīng)式(1)所示，并對反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。本發(fā)明還利用優(yōu)化后的條件合成了7-去氫膽固醇衍生物的內(nèi)過氧化物，并且將該合成條件應(yīng)用于麥角固醇內(nèi)過氧化物的合成，改進(jìn)了麥角固醇內(nèi)過氧化物合成中存在的劇毒性溶劑問題，如反應(yīng)式(2)所示。
本發(fā)明公開了一種利用一種內(nèi)浸式光化學(xué)反應(yīng)器合成7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物及其衍生物的方法，同時利用該方法改進(jìn)了麥角固醇內(nèi)過氧化物傳統(tǒng)合成中所存在毒性溶劑的問題，并且證實了7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物具有很好的抗癌方面的生物活性。
本發(fā)明提供的合成7-去氫膽固醇/麥角固醇內(nèi)過氧化物及其衍生物的方法，包括：
提供光敏劑和底物的混合溶液，然后在氧氣存在的條件下進(jìn)行光氧化反應(yīng)，制得相應(yīng)的過氧化物；所述底物為7-去氫膽固醇、7-去氫膽固醇的衍生物、麥角固醇或其衍生物。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，所述的光敏劑為選自四苯基卟啉(tpp)，血卟啉(hematoporphyrin)和曙紅y(eosiny)中的一種或多種。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，所述混合溶液中底物的濃度為0.1mm-10m。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要選擇合適的底物濃度。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，配制所述混合溶液的溶劑包括正己烷、甲醇、吡啶、苯和二氯甲烷中一種或多種。當(dāng)考慮安全性時，可以選擇正己烷、甲醇或者其混合溶液作為溶劑，混合溶液的比例可以根據(jù)需要進(jìn)行改變。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，配制所述混合溶液的溶劑中正己烷與甲醇的體積比為3:1。
為了使混合溶液更加均勻，可采用超聲溶解混合均勻制成反應(yīng)液，在必要時升溫以使得溶質(zhì)分解均勻。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，光氧化反應(yīng)時間為1～3h。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，所述光化學(xué)反應(yīng)器為內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器，所述內(nèi)浸式光化學(xué)反應(yīng)器由硼硅玻璃制成，中間設(shè)有一個硼硅玻璃夾套式的沉阱，所述沉阱中安裝有高壓汞燈，沉阱外壁設(shè)置有濾光片，所述的夾套裝置有冷卻水的進(jìn)出口。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，光氧化反應(yīng)在波長大于400nm的光照射下進(jìn)行。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，光氧化反應(yīng)的光源為可見光。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，光氧化反應(yīng)溫度為30～35℃或-5～5℃(更優(yōu)選0℃)。
作為上述方法的進(jìn)一步優(yōu)選，所述7-去氫膽固醇的衍生物具有如下式所示的結(jié)構(gòu)，其中r為ch3co-、ch3ch2co-或(ch3)3csi(ch3)2。
本發(fā)明還提供了7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物作為細(xì)胞抑制劑的應(yīng)用。
作為上述應(yīng)用一種更好的選擇，所述抑制劑對應(yīng)的靶細(xì)胞包括乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞和宮頸癌細(xì)胞。
本發(fā)明制備的7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物用作細(xì)胞抑制劑的應(yīng)用可以通過mtt比色法檢測7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物對細(xì)胞的作用進(jìn)行驗證，一種典型的驗證方法如下
人體細(xì)胞在含有10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后，加入含有不同藥物濃度的培養(yǎng)基，培養(yǎng)一定時間后，加入mtt，對照實驗同時進(jìn)行。最后用thermomk3酶標(biāo)儀測定490nm處的吸收，計算得到不同條件下細(xì)胞的存活率，從而計算得到不同條件下藥物對細(xì)胞的抑制率。
本發(fā)明選擇了人體癌細(xì)胞，如乳腺癌細(xì)胞株skov-3，前列腺癌細(xì)胞株du145，肺癌細(xì)胞a549和宮頸癌細(xì)胞hela，細(xì)胞以每孔2×105的濃度種在96孔板中。所用藥物為7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物和麥角固醇內(nèi)過氧化物，藥物濃度為0～96μm，培養(yǎng)時間為48h?？梢缘玫?-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物濃度為48μm時，乳腺癌細(xì)胞株skov-3，前列腺癌細(xì)胞株du145，肺癌細(xì)胞a549細(xì)胞基本上全部死亡?？刂圃谠摑舛确秶鷮θ梭w正常細(xì)胞l-02進(jìn)行培養(yǎng),藥物濃度為0～48μm，培養(yǎng)時間48h。這表明了本發(fā)明的7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物可以用作細(xì)胞抑制劑。
本發(fā)明利用內(nèi)浸上行鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器，首次光化學(xué)合成并提純了7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物及其衍生物，該反應(yīng)所用條件可應(yīng)用于麥角固醇內(nèi)過氧化物的合成，改善了麥角固醇內(nèi)過氧化物傳統(tǒng)合成中采用劇毒性反應(yīng)溶劑的弊端，并且產(chǎn)率稍有提高。通過mtt實驗可以證實7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物不僅比麥角固醇內(nèi)過氧化物具有更高的抗癌活性，而且具有很好地癌細(xì)胞選擇性，即選擇性殺傷癌細(xì)胞，對正常細(xì)胞細(xì)胞毒性很小。本發(fā)明中不涉及劇毒性溶劑，對環(huán)境友好，反應(yīng)速度快，產(chǎn)物易于分離純化，產(chǎn)物收率高達(dá)80.8％，是一種理想的工業(yè)生產(chǎn)工藝。
具體實施方式
如下為本發(fā)明的實施例，其僅用做對本發(fā)明的的解釋而并非限制。
實施例1
將1.50g7-去氫膽固醇和0.003gtpp溶于100ml正己烷和甲醇的混合溶劑(正己烷/甲醇為3:1)中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。光照反應(yīng)過程中控制反應(yīng)溫度30～35℃之間，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間2h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物0.89g，產(chǎn)率為54.8％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定其結(jié)構(gòu)。
實施例2
將1.50g7-去氫膽固醇和0.003gtpp溶于100ml正己烷和甲醇的混合溶劑(正己烷/甲醇為3:1)中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物1.31g，產(chǎn)率為80.8％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定其結(jié)構(gòu)。
實施例3
將1.50g7-去氫膽固醇和0.003gtpp溶于100ml苯中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間2h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物0.93g，產(chǎn)率為57.7％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定其結(jié)構(gòu)。
實施例4
將1.50g7-去氫膽固醇和0.003gtpp溶于100ml吡啶中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物1.03g，產(chǎn)率為63.4％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定其結(jié)構(gòu)。
實施例5
將1.50g7-去氫膽固醇和0.003gtpp溶于100ml二氯甲烷中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物0.69g，產(chǎn)率為42.8％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定其結(jié)構(gòu)。
實施例6
將1.50g7-去氫膽固醇和0.003ghematoporphyrin溶于100ml正己烷和甲醇的混合溶劑(正己烷/甲醇體積比為3:1)中,超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物0.97g，產(chǎn)率為59.7％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定為7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物純品。
實施例7
將1.50g7-去氫膽固醇和0.003geosiny溶于100ml正己烷和甲醇的混合溶劑(正己烷/甲醇體積比為3:1)中,超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物0.94g，產(chǎn)率為58.0％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定為7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物純品。
實施例8
將1.66g7-去氫膽固醇乙酸酯和0.003gtpp溶于100ml正己烷和甲醇的混合溶劑(正己烷/甲醇為3:1)中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇乙酸酯的內(nèi)過氧化物1.39g，產(chǎn)率為78.2％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定其結(jié)構(gòu)。
實施例9
將1.77g7-去氫膽固醇丁酸酯和0.003gtpp溶于100ml正己烷和甲醇的混合溶劑(正己烷/甲醇為3:1)中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇丁酸酯內(nèi)過氧化物1.45g，產(chǎn)率為76.5％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定其結(jié)構(gòu)。
實施例10
將1.94g7-去氫膽固醇叔丁基二甲硅醚和0.003gtpp溶于100ml正己烷和甲醇的混合溶劑(正己烷/甲醇為3:1)中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為3:1。得到7-去氫膽固醇叔丁基二硅醚內(nèi)過氧化物1.65g，產(chǎn)率為80.1％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定其結(jié)構(gòu)。
實施例11
將1.54g麥角固醇和0.003gtpp溶于100ml正己烷和甲醇的混合溶劑(正己烷/甲醇為3:1)中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間1h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為5:1。得到麥角固醇內(nèi)過氧化物1.12g，產(chǎn)率為67.4％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定為麥角固醇內(nèi)過氧化物。
實施例12
將1.55g麥角固醇和0.003gtpp溶于100ml苯中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間1h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為5:1。得到麥角固醇內(nèi)過氧化物0.88g，產(chǎn)率為52.8％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定為麥角固醇內(nèi)過氧化物。
實施例13
將1.55g麥角固醇和0.003gtpp溶于100ml吡啶中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，利用tlc檢測反應(yīng)進(jìn)程，光照時間1h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為5:1。得到麥角固醇內(nèi)過氧化物0.97g，產(chǎn)率為58.2％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定為麥角固醇內(nèi)過氧化物。
實施例14
將1.54g麥角固醇和0.003gtpp溶于100ml二氯甲烷中，超聲混合均勻制成反應(yīng)液。將上述100ml光反應(yīng)液傾入所述的內(nèi)浸鼓泡式光化學(xué)反應(yīng)器中，向光反應(yīng)器中通入氧氣，并保持氣體鼓泡均勻穩(wěn)定。接通冷凝水，500w高壓汞燈置于玻璃冷阱中作為光源，冷阱外置一濾光片濾掉波長400nm以下的光。反應(yīng)在冰水浴中進(jìn)行，光照時間3h。反應(yīng)結(jié)束后，旋蒸除去溶劑，過硅膠柱分離純化產(chǎn)物，洗脫劑為正己烷：乙酸乙酯為5:1。得到麥角固醇內(nèi)過氧化物0.73g，產(chǎn)率為43.97％。通過核磁，質(zhì)譜，cosy，hmbc確定為麥角固醇內(nèi)過氧化物。
實施例15
人體乳腺癌細(xì)胞skov3解凍后，培養(yǎng)在含有10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度37℃，co2濃度為5％。癌細(xì)胞以每孔2×105的濃度種在96孔板中，培養(yǎng)24h。將7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物和麥角固醇內(nèi)過氧化物分別溶解在微量dmso中，然后加入無血清dmem培養(yǎng)基中配制成含有不同藥物濃度(0～96μm)的培養(yǎng)基。將藥物培養(yǎng)基加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)48h后加入mtt-dmem培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4h，4h后加入dmso/ch3oh，用thermomk3酶標(biāo)儀測定490nm處的吸收，計算得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物(濃度為96μm)對人體乳腺癌細(xì)胞skov-3的抑制率為99.9％，麥角固醇內(nèi)過氧化物(濃度為96μm)對人體乳腺癌細(xì)胞skov-3的抑制率為51.9％。
實施例16
人體前列腺癌細(xì)胞du145解凍后，培養(yǎng)在含有10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度37℃，co2濃度為5％。培養(yǎng)24h。癌細(xì)胞以每孔2×105的濃度種在96孔板中，培養(yǎng)24h。將7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物和麥角固醇內(nèi)過氧化物分別溶解在dmso中，然后加入無血清dmem培養(yǎng)基中配制成含有不同藥物濃度(0～96μm)的培養(yǎng)基。將藥物培養(yǎng)基加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)細(xì)胞48h后加入mtt-dmem培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4h，4h后加入dmso/ch3oh，用thermomk3酶標(biāo)儀測定490nm處的吸收，計算得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物(濃度為96μm)對人體前列腺癌細(xì)胞du145的抑制率為99.4％，麥角固醇內(nèi)過氧化物(濃度為96μm)對人體前列腺癌細(xì)胞du145的抑制率為74.4％。
實施例17
人體肺癌細(xì)胞a549解凍后，培養(yǎng)在含有10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度37℃，co2濃度為5％。培養(yǎng)24h。癌細(xì)胞以每孔2×105的濃度種在96孔板中，培養(yǎng)24h。將7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物和麥角固醇內(nèi)過氧化物分別溶解在dmso中，然后加入無血清dmem培養(yǎng)基中配制成含有不同藥物濃度(0～96μm)的培養(yǎng)基。將藥物培養(yǎng)基加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)細(xì)胞48h后加入mtt-dmem培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4h，4h后加入dmso/ch3oh，用thermomk3酶標(biāo)儀測定490nm處的吸收，計算得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物(濃度為96μm)對人體肺癌細(xì)胞a549的抑制率為99.7％，麥角固醇內(nèi)過氧化物(濃度為96μm)對人體肺癌細(xì)胞a549的抑制率為42.2％。
實施例18
人體宮頸癌細(xì)胞hela解凍后，培養(yǎng)在含有10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度37℃，co2濃度為5％。培養(yǎng)24h。癌細(xì)胞以每孔2×105的濃度種在96孔板中，培養(yǎng)24h。將7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物和麥角固醇內(nèi)過氧化物分別溶解在dmso中，然后加入無血清dmem培養(yǎng)基中配制成含有不同藥物濃度(0～96μm)的培養(yǎng)基。將藥物培養(yǎng)基加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)細(xì)胞48h后加入mtt-dmem培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4h，4h后加入dmso/ch3oh，用thermomk3酶標(biāo)儀測定490nm處的吸收，計算得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物(濃度為96μm)對人體宮頸癌細(xì)胞hela的抑制率為82.7％，麥角固醇內(nèi)過氧化物(濃度為96μm)對人體宮頸癌細(xì)胞hela的抑制率為77.3％。
實施例19
人體正常肝細(xì)胞l-02解凍后，培養(yǎng)在含有10％胎牛血清的dmem培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱溫度37℃，co2濃度為5％。培養(yǎng)24h。細(xì)胞以每孔2×105的濃度種在96孔板中，培養(yǎng)24h。將7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物和麥角固醇內(nèi)過氧化物分別溶解在dmso中，然后加入無血清dmem培養(yǎng)基中配制成含有不同藥物濃度(0～48μm)的培養(yǎng)基。將藥物培養(yǎng)基加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)細(xì)胞48h后加入mtt-dmem培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4h，4h后加入dmso/ch3oh，用thermomk3酶標(biāo)儀測定490nm處的吸收，計算得到7-去氫膽固醇內(nèi)過氧化物(濃度為48μm)對人體肝細(xì)胞抑制率為3.3％，麥角固醇內(nèi)過氧化物(濃度為48μm)對人體肝細(xì)胞存活率為32.8％。
最后所應(yīng)說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制。盡管參照實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，都不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。