本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測領域,尤其涉及一種用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物及其應用。
背景技術:
隨著蛋白質(zhì)組學研究的不斷深入,對蛋白質(zhì)組學的技術手段也提出了更高的要求。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術和傳統(tǒng)的雙向電泳技術相比,具有重復性好,鑒定蛋白數(shù)目多,操作步驟相對簡單等顯著優(yōu)點,已成為蛋白質(zhì)組學的主要研究手段。然而,利用現(xiàn)有的液質(zhì)聯(lián)用技術,一般能鑒定到的人類蛋白種類只有七千種左右,距離細胞內(nèi)預計的超過兩萬種蛋白還有很大差距。
液質(zhì)聯(lián)用蛋白質(zhì)組學的技術路線一般為,先將組織細胞裂解,釋放蛋白質(zhì)。將蛋白質(zhì)純化后,利用蛋白酶將蛋白質(zhì)水解成多肽混合物。多肽混合物經(jīng)純化后,用液相色譜分離,分離出的多肽直接接入質(zhì)譜儀的入口,在入口處通過電噴霧手段電離,質(zhì)子化多肽進入質(zhì)譜后測得準確分子量,經(jīng)數(shù)據(jù)庫檢索,就能鑒定出蛋白質(zhì)的名稱和序列。從這個技術路線可以看出,影響蛋白質(zhì)組學最終鑒定效果的因數(shù)很多。其中,多肽的質(zhì)子化效率就是影響其鑒定效果的一個重要因數(shù),很多多肽因為不能電離而無法被鑒定到。
衍生化方法在小分子化合物分析鑒定中,尤其在色譜分析和質(zhì)譜分析中,有著廣泛的應用。衍生化多肽,從而使其更易于電離的策略也有文獻報道,但這些報道多為添加固定的正電荷到多肽中,容易造成多肽所帶電荷過多,荷質(zhì)比過小而影響檢測精確度,降低鑒定效果;且這些衍生化試劑本身會嚴重干擾質(zhì)譜檢測,需要專門純化衍生化后的多肽。
現(xiàn)有技術是將多肽的氮端(n端)或者賴氨酸側(cè)鏈的伯胺進行甲基化,該方法具體為用氰基硼酸化鈉、甲醛將伯胺二甲基化,反向脫鹽柱除鹽,然后進行液質(zhì)聯(lián)用分析。該方法能有效提高多肽電離水平,且基本不增加多肽電荷數(shù)目,但是現(xiàn)有技術的解決方法需要專門的除鹽步驟,相對繁瑣。
因此,研發(fā)一種簡單的、有效的提高多肽電離水平的用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物是本領域技術人員亟待解決的技術問題。
技術實現(xiàn)要素:
有鑒于此,本發(fā)明提供了一種用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物,能有效的標記多肽并且能大大提高多肽的電離水平。
本發(fā)明還提供了一種用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物,所述化合物如式ⅰ所示,
本發(fā)明所提供的一種用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物在標記多肽中的應用。
本發(fā)明所提供的一種用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物在提高多肽電離水平中的應用。
本發(fā)明所提供的一種用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物的制備方法,包括:
1)將苯丙氨酸和氰基硼酸化鈉混合,得到初級混合物,滴加甲醛溶液至初級混合物,反應得到初級產(chǎn)物;將初級產(chǎn)物進行抽濾,將濾液中水分蒸干,得到次級產(chǎn)物。
2)次級產(chǎn)物與二甲基苯丙氨酸混合,得到次級混合物,同等摩爾數(shù)二環(huán)己基碳二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺添加到次級混合物后反應得到用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物。
本發(fā)明還提供了一種用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測試劑盒,包括用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物和質(zhì)譜檢測試劑。
本發(fā)明公開的用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物起主要結(jié)構(gòu)為甲基化的苯丙氨酸,苯丙氨酸是疏水性比較強的一類氨基酸,在質(zhì)譜電離過程中,由于分布在電噴霧表面,容易帶上電荷,同時將苯丙氨酸的氨基雙甲基化,可以明顯提高電離效率。本發(fā)明合成了一種用于蛋白質(zhì)質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物,該化合物含有二甲基化苯丙氨酸,同時含有活性基團(n-羥基琥珀酰亞胺),n-羥基琥珀酰亞胺與多肽的氮端(n端)、賴氨酸側(cè)鏈伯胺反應,反應后無需再除鹽純化,可以直接進行液質(zhì)聯(lián)用分析。
附圖說明
為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術中的技術方案,下面將對實施例或現(xiàn)有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
圖1示本發(fā)明的化合物標記樣品后的質(zhì)譜圖;
圖2示本發(fā)明的化合物標記樣品后的另一幅質(zhì)譜圖;
圖3示現(xiàn)有技術標記樣品后的質(zhì)譜圖;
圖4示本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)式。
具體實施方式
本發(fā)明提供了一種用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物,能有效的標記多肽并且能大大提高多肽的電離水平。
下面將對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述,顯然,所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例,而不是全部的實施例?;诒景l(fā)明中的實施例,本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例,都屬于本發(fā)明保護的范圍。
其中,以下實施例所使用的試劑均為市售。
其中,(met2)-phe為二甲基苯丙氨酸;(met2)-phe-nhs為二甲基苯丙氨酸活性酯;ala-ala-ala為丙氨酸三肽
實施例1
用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物的合成方法,具體步驟如下:
1)苯丙氨酸二甲基化的合成:將苯丙氨酸和氰基硼酸化鈉溶解混合,得到初級混合物,滴加甲醛溶液至初級混合物,反應得到初級產(chǎn)物;將初級產(chǎn)物進行抽濾,將濾液中水分蒸干,得到次級產(chǎn)物。
2)二甲基苯丙氨酸活性酯的合成:溶解二甲基苯丙氨酸,加入同等摩爾數(shù)dcc(二環(huán)己基碳二亞胺),nhs(n-羥基琥珀酰亞胺)后攪拌,得到本發(fā)明的用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物——二甲基苯丙氨酸活性酯(met2)-phe-nhs。
實施例2
試驗組為實施例1制備得到的二甲基苯丙氨酸活性酯(met2)-phe-nhs;對比組為現(xiàn)有技術的方法。
將等量實施例1(met2)-phe-nhs和丙氨酸三肽(ala-ala-ala)混合,得到反應物二甲基四肽(met2)-phe-ala-ala-ala。等量的ala-ala-ala(分子量231.238)和(met2)-phe-ala-ala-ala(分子量406.4)混合,通過液相色譜質(zhì)譜檢測兩條多肽的離子強度。得到質(zhì)譜圖圖1和圖2。
采用常用的現(xiàn)有技術方法檢測ala-ala-ala(分子量231.238)和(met2)-phe-ala-ala-ala(分子量406.4)的混合物,其中,(met2)-phe-ala-ala-ala為人工合成,不經(jīng)過任何處理,對混合物進行液相色譜質(zhì)譜檢測,得到質(zhì)譜圖圖3。
從圖1至圖3可以看出,圖1和圖2的231和406出的質(zhì)譜信號強度,均比圖3的強。丙氨酸三肽(ala-ala-ala)經(jīng)過本發(fā)明的用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物——二甲基苯丙氨酸活性酯(met2)-phe-nhs處理后,質(zhì)譜信號明顯增強,說明本發(fā)明的用于質(zhì)譜檢測過程中標記多肽的化合物能大大提高多肽的電離水平,提高質(zhì)譜檢測時的信號強度。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式,應當指出,對于本技術領域的普通技術人員來說,在不脫離本發(fā)明原理的前提下,還可以做出若干改進和潤飾,這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。