本發(fā)明涉及二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物，及其在制藥中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

文獻(xiàn)報(bào)道，二氫楊梅素對(duì)白血病細(xì)胞hl-60、k562以及肝癌細(xì)胞bel-7404、腹水型肝癌h22瘤株、人鼻咽癌hk-1和人乳腺癌mcf-7細(xì)胞的增殖均有顯著的抑制作用，體內(nèi)對(duì)小鼠移植性b16黑色素瘤的生長(zhǎng)也具有顯著的抑制作用，此外還有清除自由基、鎮(zhèn)咳祛痰、降脂保肝、抗血栓、抗氧化及降血糖等作用。二氫楊梅素在藤茶等植物中含量高，來(lái)源豐富，且具有多方面的顯著功效，以其為先導(dǎo)物，克服其溶解性和穩(wěn)定性差的缺點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)療效更好的新藥，是新藥研發(fā)的一個(gè)方向。

環(huán)磷酰胺為氮芥與磷酰胺基結(jié)合而成的化合物，即能非特異性殺傷抗原敏感性小淋巴細(xì)胞，又能抑制細(xì)胞增殖，限制其轉(zhuǎn)化為免疫母細(xì)胞，可用于治療各種自身免疫性疾病。臨床上用于治療白血病，淋巴瘤和實(shí)體瘤等惡性病，但它具有膀胱毒性，需要進(jìn)一步結(jié)構(gòu)修飾，降低毒性，提高療效。

本發(fā)明將環(huán)磷酰胺結(jié)構(gòu)引入二氫楊梅素結(jié)構(gòu)中，以期獲得抗腫瘤活性高、毒性低的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物，其具有抗癌作用。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物的用途。

以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。

本發(fā)明提供的二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物，包括其立體異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，結(jié)構(gòu)如下所示：

式中，r各自獨(dú)立為h，?；谆?。

所述的二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物具體結(jié)構(gòu)實(shí)例如下：

本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法：

式中，r各自獨(dú)立為h，?；谆?。

本發(fā)明的二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物或其藥學(xué)可接受的水合物，包括其立體異構(gòu)體或互變異構(gòu)體，具有抗腫瘤作用。

通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明，但應(yīng)注意本發(fā)明的范圍并不受這些實(shí)施例的任何限制。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

中間體iia的制備

n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，溶于7ml無(wú)水dmf溶液中，加入無(wú)水552mg(2.5mmol)k2co3，緩慢加入383mg(2.7mmol)碘甲烷，40℃反應(yīng)24h，停止反應(yīng)，加1ml醋酸，過(guò)濾，減壓蒸干，回收溶劑，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=6:1），得到7,3’,4’,5’-四甲氧基二氫楊梅素中間體（iia）。收率26.2%。

中間體iib的制備：

n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，溶于7ml無(wú)水dmf溶液中，加入無(wú)水690mg(3.1mmol)k2co3，緩慢加入710mg(3.1mmol)碘甲烷，40℃反應(yīng)24h，停止反應(yīng)，加1ml醋酸，過(guò)濾，減壓蒸干，回收溶劑，硅膠柱層析純化（v石油醚：v乙酸乙酯=6:1），得到3,7,3’,4’,5’-五甲氧基二氫楊梅素中間體（iib）。收率27.0%。

中間體iic的制備：

n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，溶于7ml無(wú)水dmf溶液中，加入無(wú)水828mg(3.8mmol)k2co3，緩慢加入852mg(3.8mmol)碘甲烷，其它操作同上，得到3,7,9,3’,4’,5’-六甲氧基二氫楊梅素中間體（iic）。收率36.2%。

中間體iid的制備：

n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，加入5ml醋酐中，超聲下混勻，避光放置2天，倒入冰水中研磨，過(guò)濾，干燥，乙酸乙酯-乙醇重結(jié)晶，得到3,7,3’,4’,5’-五乙?；錀蠲匪刂虚g體（iid），收率73%，m.p.163-165℃。

中間體iie的制備：

n2下，取二氫楊梅素200mg(0.62mmol)，加入5ml醋酐中，超聲下混勻，避光放置2天，倒入冰水中研磨，過(guò)濾，干燥，乙酸乙酯-乙醇重結(jié)晶，得到3,5，7,3’,4’,5’-六乙酰基二氫楊梅素中間體（iie），收率68%，m.p.173-175℃。

中間體iif的制備：

n2保護(hù)下，將320mg(1.0mmol)二氫楊梅素溶于5mldmf中，加入5滴吡啶和112mg(1.1mmol)ac2o，室溫反應(yīng)10h，減壓蒸除溶劑，柱層析純化（v氯仿：v乙醇=6:1,4:1,2:1梯度淋洗），得7-乙?；錀蠲匪?。

n2保護(hù)下，將362mg(1.0mmol)7-乙?；錀蠲匪厝苡?mldmf中，加入625mg(4.4mmol)mei和607mg(4.4mmol)k2co3,室溫反應(yīng)過(guò)夜，過(guò)濾，加入10ml濃度為30%的乙二胺甲醇溶液，40℃反應(yīng)8h，減壓蒸干，柱層析純化（v氯仿：v乙醇=6:1,4:1,2:1梯度淋洗），得3,3’,4’,5’-四甲氧基二氫楊梅素（中間體iif）,收率33%。

中間體iig的制備：

n2保護(hù)下，稱取1.6g（5mmol）二氫楊梅素（含量98%)置于50ml的三角瓶中，然后依次加入15ml醋酸酐和1.2g硼酸，混勻，避光放置3天，倒入冰水中研磨，有黃色硼酸絡(luò)合物析出，過(guò)濾，將所得黃色固體物加入40ml含有10%的hc1溶液，于60℃反應(yīng)30min，除去硼酸，有黃白色固體生成，過(guò)濾，用水淋洗至中性，收集固體，干燥后即得粗品。用etoh重結(jié)晶，得白色晶體，即二氫楊梅素四乙?；a(chǎn)物(中間體iig)，產(chǎn)率89%。m.p.205-206℃。

實(shí)施例2

中間體iiia-g和8-硝基二氫楊梅素的制備:

n2下，分別將0.2ml70%hno3與10ml醋酸混合，65℃分別滴加0.5mmol中間體iia-g/250ml醋酸的溶液，滴畢，反應(yīng)2h，冷卻，反應(yīng)液倒入200ml冰水中，攪拌，析出固體，過(guò)濾，水洗，乙醇重結(jié)晶，分別得到iiia，收率70%；iiib，收率76%；iiic，收率77%；iiid，收率79%；iiie，收率81%；iiif，收率78%；iiig，收率71%。

用0.5mmol二氫楊梅素代替0.5mmol中間體iia-g，其它操作不變，得到8-硝基二氫楊梅素，收率67%。

實(shí)施例3

中間體iva-g和8-氨基二氫楊梅素的制備:

高壓釜中，分別將0.5mmol的iiia-g加入到100ml乙醇中，分別加入30mg10%的pd-c，用n2置換空氣后，通入h2，80℃反應(yīng)2h，冷卻，過(guò)濾，旋蒸出乙醇，硅膠柱層析純化，分別得到iva，收率87%；iva，收率87%；ivb，收率89%；ivc，收率89%；ivd，收率90%；ive，收率91%；ivf，收率87%；ivg，收率89%。

用0.5mmol8-硝基二氫楊梅素代替0.5mmol中間體iiia-g，其它操作不變，得到8-氨基二氫楊梅素，收率92%。

實(shí)施例4

中間體va-g和8-（3-羥基丙氨基）二氫楊梅素的制備:

n2下，分別將0.5mmol的iva-g溶于50ml丙酮，分別加入56.4mg(0.6mmol)的3-氯丙醇和82.8mg(0.6mmol)的k2co3，回流反應(yīng)7h，冷卻，過(guò)濾，蒸除溶劑，硅膠柱層析純化，分別得到va，收率67%；vb，收率71%；vc，收率69%；vd，收率72%；ve，收率67%；vf，收率65%；vg，收率69%。

用0.5mmol的8-氨基二氫楊梅素代替0.5mmol的iva-g，得到8-（3-羥基丙氨基）二氫楊梅素，收率70%。

實(shí)施例5

化合物（1-8）的制備:

n2下，分別將0.5mmol的va-g或8-（3-羥基丙氨基）二氫楊梅素溶于50ml丙酮，冷卻至0℃，分別加入141mg(0.55mmol)氮芥磷酰二氯和111mg(1.1mmol)et3n，自然升至室溫，反應(yīng)8小時(shí)，過(guò)濾，濾液濃縮，柱層析純化，分別得化合物（1-8）。

化合物（1）：收率80%；esi-ms(m/z):578[m]⁺；¹hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.86(m,2h),3.15(m,2h),3.34(m,4h),3.68(m,4h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.57(s,1h),5.87(s,1h),7.40(s,2h),8.19(s,1h),8.90(s,2h),10.07(s,1h),11.85(s,1h)。

化合物（2）：收率84%；esi-ms(m/z):634[m]⁺；¹hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.85(m,2h),3.16(m,2h),3.34(m,4h),3.68(m,4h),3.91(s,9h),3.94(s,3h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.56(s,1h),5.86(s,1h),7.40(s,2h),11.85(s,1h)。

化合物（3）：收率83%；esi-ms(m/z):648[m]⁺；¹hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.86(m,2h),3.15(m,2h),3.35(m,4h),3.44(s,3h),3.68(m,4h),3.91(s,9h),3.94(s,3h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.86(s,1h),7.40(s,2h),11.85(s,1h)。

化合物（4）：收率81%；esi-ms(m/z):662[m]⁺；¹hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.86(m,2h),3.16(m,2h),3.35(m,4h),3.44(s,3h),3.68(m,4h),3.91(s,12h),3.94(s,3h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.86(s,1h),7.40(s,2h)。

化合物（5）：收率81%；esi-ms(m/z):788[m]⁺；¹hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.85(m,2h),2.28(s,6h),2.30(s,6h),2.35(s,3h),3.15(m,2h),3.35(m,4h),3.68(m,4h),5.82(m,1h),4.45(m,2h),5.93(m,1h),6.96(s,1h),7.40(s,2h),11.37(s,1h)。

化合物（6）：收率85%；esi-ms(m/z):830[m]⁺；¹hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.85(m,2h),2.28(s,6h),2.30(s,6h),2.35(s,6h),3.15(m,2h),3.35(m,4h),3.68(m,4h),5.82(m,1h),4.45(m,2h),5.93(m,1h),6.96(s,1h),7.40(s,2h)。

化合物（7）：收率77%；esi-ms(m/z):634[m]⁺；¹hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.86(m,2h),3.16(m,2h),3.35(m,4h),3.44(s,3h),3.68(m,4h),3.91(s,6h),3.94(s,3h),4.42(d,j=11hz,1h),4.45(m,2h),4.93(d,j=11hz,1h),5.86(s,1h),7.40(s,2h),10.02(s,1h)11.85(s,1h)。

化合物（8）：收率76%；esi-ms(m/z):746[m]⁺；¹hnmr（300mhz，dmso-d6）δ1.85(m,2h),2.28(s,6h),2.30(s,6h),3.15(m,2h),3.35(m,4h),3.68(m,4h),5.82(m,1h),4.45(m,2h),5.93(m,1h),6.96(s,1h),7.40(s,2h),10.01(s,1h)11.85(s,1h)。

實(shí)施例6

分別將1mmol化合物（1-8）加入含水丙酮溶液中，攪拌2h，過(guò)濾，干燥，分別得到化合物（1-8）的一水合物。

實(shí)施例7

二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物抗腫瘤活性研究

化合物體外抗腫瘤活性用ic50值評(píng)定：將細(xì)胞按一定密度接種于含10體積%小牛血清的rpmi1640培養(yǎng)基（內(nèi)含適量青霉素、鏈霉素和谷氨酰胺）的96孔板中，5wt%co2，37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)后，換用不同濃度授試藥物（用pbs配制成1μg/ml工作液，使用時(shí)按需要用培養(yǎng)基稀釋）的新鮮培養(yǎng)基，不同稀釋濃度的陽(yáng)性對(duì)照藥5-氟尿嘧啶藥液為陽(yáng)性對(duì)照，每組設(shè)6個(gè)平行孔，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。取出96孔培養(yǎng)板，每孔加入20μl5mg/ml的mtt，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。取出培養(yǎng)板，倒出培養(yǎng)基，每孔加入200μldmso，平板搖床震搖5分鐘，待結(jié)晶溶解后，置酶聯(lián)檢測(cè)儀，于570nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的od值。用bliss法求出半數(shù)抑制濃度ic50。

二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物對(duì)hl60（白血病細(xì)胞）、mcf-7（人乳腺癌）、hela（人宮頸癌）、sgc-803（胃癌）和hepg2（肝癌）腫瘤細(xì)胞株的抑制活性如表1所示。結(jié)果顯示，二氫楊梅素環(huán)磷酰胺衍生物具有好的抗癌活性。