本發(fā)明涉及一株亞羅解脂酵母及其應(yīng)用，屬于工業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

亞羅解脂酵母(英文：yarrowialipolytia其它中文名稱(chēng)：解脂亞羅酵母、耶羅維亞解脂酵母、解脂亞洛酵母等)在生物制造領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。例如：cn03817060.4公開(kāi)了一種采用亞羅解脂酵母制造檸檬酸的技術(shù)；cn200910199533.6和cn201511019785.8公開(kāi)了一種利用亞羅解脂酵母生產(chǎn)γ-癸內(nèi)酯的技術(shù)；cn201210463413.4和cn201310282059.x公開(kāi)了一種用亞羅解脂酵母生產(chǎn)赤蘚糖醇的技術(shù)；cn201610304562.4公開(kāi)了一種利用亞羅解脂酵母生產(chǎn)環(huán)氧油酸的技術(shù)；cn201010578594.6和cn201310481832.5公開(kāi)了一種利用亞羅解脂酵母生產(chǎn)α–酮戊二酸的技術(shù)；cn201410243227.9公開(kāi)了一種利用亞羅解脂酵母生產(chǎn)β-胡蘿卜素的技術(shù)；cn201510599954.3公開(kāi)了一種利用亞羅解脂酵母生產(chǎn)低聚果糖的技術(shù)；cn201510600511.1公開(kāi)了一種利用亞羅解脂酵母生產(chǎn)低聚半乳糖的技術(shù)；cn200510112638.5和cn200810172116.8公開(kāi)了一種利用亞羅解脂酵母生產(chǎn)脂肪酶的技術(shù)；cn201180041064.0公開(kāi)了一種利用亞羅解脂酵母生產(chǎn)二十碳五烯酸的技術(shù)。以上已公開(kāi)的資料說(shuō)明，亞羅解脂酵母在生物制造領(lǐng)域應(yīng)用很廣泛，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

多元醇在食品、化工領(lǐng)域的應(yīng)用很廣，木糖醇和赤蘚糖醇分別屬于五碳多元醇和四碳多元醇，它們主要應(yīng)用于食品、保健品、日化等領(lǐng)域。在世衛(wèi)組織呼吁全球減糖的大背景下，木糖醇、赤蘚糖醇這些熱量低、糖尿病人適用、口感舒適且具有一定健康功能特性的產(chǎn)品受到人們的青睞。cn201310282059.x詳細(xì)公開(kāi)了一種以葡萄糖為原料利用亞羅解脂酵母發(fā)酵生產(chǎn)赤蘚糖醇的亞羅解脂酵母及工藝。雖然其質(zhì)量轉(zhuǎn)化率較之前的技術(shù)有了較大提高，最高達(dá)到63.2％，但是需要在補(bǔ)料或連續(xù)發(fā)酵的條件下才能實(shí)現(xiàn)；而且發(fā)酵至細(xì)胞密度od600值為20或以上時(shí)，還需要用酸調(diào)節(jié)ph值為3.1～4.0，步驟較為繁瑣。另外，cn201310282059.x中提到的亞羅解脂酵母不能同化利用木糖。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一株乳亞羅解脂酵母bbe-17(yarrowialipolyticabbe-17)，其于2017年1月11日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctccno:m2017027，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)?？捎糜诟咿D(zhuǎn)化率發(fā)酵生產(chǎn)赤蘚糖醇，全程無(wú)需調(diào)節(jié)ph，操作簡(jiǎn)便，并具有發(fā)酵d-木糖生產(chǎn)木糖醇的潛在可能。

所述亞羅解脂酵母bbe-17rrna基因序列如seqidno:1所示，是從土壤中通過(guò)高葡萄糖濃度培養(yǎng)基自然篩選得到的。能同化利用木糖，可以葡萄糖為原料發(fā)酵生產(chǎn)赤蘚糖醇，與現(xiàn)有技術(shù)相比轉(zhuǎn)化率高，無(wú)需調(diào)節(jié)ph，操作簡(jiǎn)便。

本發(fā)明還提供應(yīng)用所述亞羅解脂酵母bbe-17發(fā)酵生產(chǎn)赤蘚糖醇的方法，將亞羅解脂酵母bbe-17活化后，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于28-31℃，通風(fēng)發(fā)酵。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：葡萄糖80-120g/l，酵母粉10-15g/l，檸檬酸銨3-7g/l，硫酸鎂0.3-0.6g/l，磷酸二氫鉀0.25-0.34g/l。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，活化培養(yǎng)基組成為：葡萄糖80-100g/l、酵母粉8-12g/l。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，將亞羅解脂酵母bbe-17活化，按接種量為4-10％(v/v)接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝液量為8％-12％，轉(zhuǎn)速為220-250rpm。

本發(fā)明還提供一種應(yīng)用所述亞羅解脂酵母bbe-17發(fā)酵生產(chǎn)木糖醇的方法，將亞羅解脂酵母bbe-17活化后，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，于28-30℃，通風(fēng)發(fā)酵。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：d-木糖母液(折合固形物計(jì))130-160g/l，酵母粉10-15g/l，檸檬酸銨4-8g/l，硫酸鎂0.3-0.6g/l，磷酸二氫鉀0.25-0.55g/l。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，活化培養(yǎng)基組成為：葡萄糖80-100g/l、酵母粉8-12g/l。

在本發(fā)明的一種實(shí)施方式中，將亞羅解脂酵母bbe-17活化，按接種量為10％-20％(v/v)接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基裝液量為15％-20％，轉(zhuǎn)速為180-220rpm。

所述亞羅解脂酵母bbe-17(yarrowialipolyticabbe-17)以葡萄糖為底物，發(fā)酵48h后，發(fā)酵液中赤蘚糖醇含量為82.47g/l，赤蘚糖醇對(duì)葡萄糖的質(zhì)量轉(zhuǎn)化率為69.35％，無(wú)需補(bǔ)料或連續(xù)發(fā)酵即可實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)化率，發(fā)酵全程無(wú)需調(diào)節(jié)ph，簡(jiǎn)化了工藝操作。亞羅解脂酵母bbe-17以d-木糖母液為原料發(fā)酵生產(chǎn)木糖醇，發(fā)酵216h時(shí)，發(fā)酵液中木糖醇含量為39.50g/l，木糖醇對(duì)d-木糖的質(zhì)量轉(zhuǎn)化率為33.35％。本發(fā)明提供的亞羅解脂酵母bbe-17為利用非糧原料生物法制備多元醇，及其相關(guān)產(chǎn)品(包括有機(jī)酸、低聚糖等)提供了新的潛力途徑。

生物材料保藏

一株亞羅解脂酵母bbe-17(yarrowialipolyticabbe-17)，其于2017年1月11日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctccno:m2017027，地址：中國(guó)，武漢，武漢大學(xué)。

附圖說(shuō)明

圖1實(shí)施例2中48h后發(fā)酵液中的赤蘚糖醇情況；

圖2實(shí)施例3中木糖母液發(fā)酵液中的木糖醇情況。

具體實(shí)施方式

篩選平板培養(yǎng)基i：葡萄糖300g～500g/l、酵母粉2～10g/l、20g/l瓊脂條。

篩選平板培養(yǎng)基ii：d-木糖20～160g、20g/l瓊脂條。

發(fā)酵培養(yǎng)基i：葡萄糖50～400g/l，酵母粉2-20g/l，檸檬酸銨1～10g/l，硫酸鎂0.1～2g/l，磷酸二氫鉀0.05～1g/l；

發(fā)酵培養(yǎng)基ii：600g/l的木糖母液(折合固形物計(jì))30～300g/l，酵母粉2-20g/l，檸檬酸銨1～10g/l，硫酸鎂0.1～2g/l，磷酸二氫鉀0.05～1g/l。

實(shí)施例1亞羅解脂酵母(cctccno:m2017027)的自然選育

在山東省滕州市微山湖濕地紅荷旅游風(fēng)景區(qū)的楊樹(shù)林中收集了3份土樣，分別標(biāo)號(hào)tw-1、tw-2、tw-3。然后各取1g，分別加入3個(gè)含有100ml350g/l葡萄糖的1l三角瓶中富集培養(yǎng)3天。然后分別稀釋至10^-8在篩選平板培養(yǎng)基i上進(jìn)行涂布，共得到3978株單菌落。得到的單菌落再分別涂布在篩選平板培養(yǎng)基ii上，共得到27株可以d-木糖為碳源進(jìn)行生長(zhǎng)的菌株。

分別以發(fā)酵培養(yǎng)基i和發(fā)酵培養(yǎng)基ii進(jìn)行發(fā)酵選育，發(fā)酵3天后，各取1ml發(fā)酵液，5000rpm離心5min，取上清稀釋至1bx，用hplc進(jìn)行檢測(cè)。hplc采用示差折光檢測(cè)器，糖柱shim-packscr-101c，柱溫75℃，流動(dòng)相為純水，流速0.6ml/min。從27株菌種選出1株既可以利用發(fā)酵培養(yǎng)基i生產(chǎn)赤蘚糖醇，又可以利用發(fā)酵培養(yǎng)基ii生產(chǎn)木糖醇的菌株，鑒定為亞羅解脂酵母(yarrowialipolytica)，于2017年1月11日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctccno:m2017027。

實(shí)施例2亞羅解脂酵母(cctccno:m2017027)發(fā)酵生產(chǎn)赤蘚糖醇

將保藏于-80℃甘油管中的出發(fā)菌株亞羅解脂酵母(yarrowialipolyticabbe-17)在150ml三角瓶中進(jìn)行活化，裝液量為25ml，接種量為2％(v/v)，活化培養(yǎng)基組成為：葡萄糖100g/l、酵母粉10g/l?；罨囵B(yǎng)24h后，接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的1l擋板三角瓶中，裝液量為100ml，接種量為4％(v/v)，轉(zhuǎn)速為220rpm。發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：葡萄糖120g/l，酵母粉10g/l，檸檬酸銨5g/l，硫酸鎂0.5g/l，磷酸二氫鉀0.25g/l。發(fā)酵48h后，通過(guò)hplc測(cè)定赤蘚糖醇含量為82.47g/l，圖1中出峰時(shí)間11.643min對(duì)應(yīng)的是赤蘚糖醇，赤蘚糖醇對(duì)葡萄糖的質(zhì)量轉(zhuǎn)化率為69.35％。

實(shí)施例3亞羅解脂酵母(cctccno:m2017027)發(fā)酵生木糖醇

將保藏于-80℃甘油管中的出發(fā)菌株亞羅解脂酵母(yarrowialipolyticabbe-17)在150ml三角瓶中進(jìn)行活化，裝液量為25ml，接種量為2％(v/v)，活化培養(yǎng)基組成為：葡萄糖100g/l、酵母粉10g/l?；罨囵B(yǎng)24h后，接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的500ml普通三角瓶中，裝液量為50ml，接種量為2％(v/v)，轉(zhuǎn)速為180rpm。發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：d-木糖母液(折合固形物計(jì))150g/l，酵母粉10g/l，檸檬酸銨5g/l，硫酸鎂0.5g/l，磷酸二氫鉀0.25g/l。在發(fā)酵216h時(shí)，通過(guò)hplc測(cè)定木糖醇含量為39.50g/l，木糖醇對(duì)d-木糖的質(zhì)量轉(zhuǎn)化率為33.35％。

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<110>江南大學(xué)

<120>一株亞羅解脂酵母及其應(yīng)用

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<213>亞羅解脂酵母

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