本發(fā)明涉及病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于檢測(cè)犬副流感病毒試劑盒。

背景技術(shù)：

犬副流感是由犬副流感病毒(canineparainfluenzavirus，cpiv，下文稱之為cpiv)引起犬的一種傳染性疾病。該病流行廣泛，病毒侵害犬呼吸系統(tǒng)，引起呼吸系統(tǒng)炎癥，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咳漱、流涕，常和細(xì)菌、支原體及其他病毒混合感染，使犬病情加重。犬副流感是目前養(yǎng)犬業(yè)，尤其是寵物犬的主要傳染病之一。

cpiv是腮腺炎病毒屬，副黏病毒科成員，病毒基因組為單鏈，不分節(jié)段，負(fù)鏈rna病毒，長(zhǎng)約15kb，包含編碼8個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(np、p、v、m、sh、hn、f、l)的7段基因。其中，核衣殼蛋白(np)為病毒核衣殼的主要組成成分，含量最高，與病毒rna結(jié)合，高度保守，與病毒粒子的組裝、復(fù)制和刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答等密切相關(guān)。np蛋白在病毒感染初期即可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生強(qiáng)烈的抗體反應(yīng)并產(chǎn)生高滴度的特異性抗體。

隨著國(guó)民生活水平的提高，寵物犬飼養(yǎng)量逐年上升，因此對(duì)犬和犬主人的健康保駕護(hù)航，加強(qiáng)犬副流感的檢測(cè)及防治非常重要。迄今，國(guó)際上用于犬副流感檢測(cè)的方法可以分為抗原檢測(cè)和抗體檢測(cè)兩大類。對(duì)抗原的檢測(cè)主要包括病毒的分離鑒定，rt-pcr，膠體金試紙條等。而針對(duì)抗體的檢測(cè)方法有免疫熒光法，中和實(shí)驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)等，atp熒光檢測(cè)儀器是通過微弱熒光通過光電傳感器轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，通過模數(shù)轉(zhuǎn)換，結(jié)合單片機(jī)完成數(shù)據(jù)讀取分析，從而得出檢測(cè)結(jié)果，然而現(xiàn)有的atp熒光檢測(cè)儀器在檢測(cè)過程中，為加強(qiáng)信號(hào)傳輸，通常會(huì)設(shè)置放大電路，然而放大電路會(huì)產(chǎn)生偏置電流，引起誤差電壓，從而影響光電傳感器的檢測(cè)信號(hào)，降低了檢測(cè)精確度，同時(shí)其整體的遮光效果較差，也易影響檢測(cè)數(shù)據(jù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明用于解決上述不足，提供了一種用于檢測(cè)犬副流感病毒試劑盒，降低了檢測(cè)誤差，提高了檢測(cè)特異性。

本發(fā)明所解決的技術(shù)問題可以采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

一種用于檢測(cè)犬副流感病毒試劑盒，包括遮光檢測(cè)盒、all-readypcrbeads全預(yù)混凍干粉、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、光電檢測(cè)器，所述遮光檢測(cè)盒與所述光電檢測(cè)器配合安裝，所述光電檢測(cè)器內(nèi)設(shè)有一光電檢測(cè)模塊，所述all-readypcrbeads全預(yù)混凍干粉包括犬副流感病毒rna熒光定量pcr檢測(cè)所需的反轉(zhuǎn)錄酶、核酸擴(kuò)增酶、反應(yīng)buffer及特異性引物和探針；所述陰性對(duì)照組采用無(wú)犬副流感病毒rna的酶水，陽(yáng)性對(duì)照組為體外轉(zhuǎn)錄犬副流感病毒rna，所述光電檢測(cè)模塊包括一光電二極管，所述光電二極管陽(yáng)極端連接一誤差校對(duì)電路，所述光電二極管陰極端連接一運(yùn)算反饋電路，所述誤差校對(duì)電路另一端連接第一放大電路，所述光電二極管輸出端處連接設(shè)有第二放大電路，所述光電二極管通過測(cè)量槽與所述遮光檢測(cè)盒配合安裝，所述遮光檢測(cè)盒內(nèi)設(shè)有一檢測(cè)腔，所述檢測(cè)腔呈上下垂直貫通結(jié)構(gòu)，所述檢測(cè)腔頂端設(shè)有置樣槽，底端設(shè)有對(duì)接槽，所述對(duì)接槽與所述測(cè)量槽對(duì)應(yīng)配合。

所述誤差校對(duì)電路由校對(duì)電容、校對(duì)電阻及校對(duì)pin二極管相互并聯(lián)連接構(gòu)成，所述運(yùn)算反饋電路由反饋電容、反饋電阻及反饋pin二極管相互并聯(lián)連接構(gòu)成，所述校對(duì)電容和反饋電容型號(hào)相同，所述校對(duì)電阻和所述反饋電阻型號(hào)相同，所述校對(duì)pin二極管和所述反饋pin二極管型號(hào)相同。

所述第一放大電路和所述第二放大電路均采用ad8605放大器。

所述遮光檢測(cè)盒頂端設(shè)有一遮光蓋，所述遮光蓋用于封蓋所述置樣槽。

還包括一樣品架，所述樣品架上設(shè)有若干試管孔。

本發(fā)明通過與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下有益效果：本發(fā)明通過優(yōu)化設(shè)計(jì)，結(jié)合遮光檢測(cè)盒并優(yōu)化光電檢測(cè)模塊，降低了檢測(cè)誤差，提高了檢測(cè)特異性。

本發(fā)明的特點(diǎn)可參閱本案圖式及以下較好實(shí)施方式的詳細(xì)說明而獲得清楚地了解。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的整體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明的光電檢測(cè)模塊電路結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為本發(fā)明的誤差校對(duì)電路結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4為本發(fā)明的運(yùn)算反饋電路結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5為本發(fā)明的第一放大電路結(jié)構(gòu)示意圖；

圖6為本發(fā)明的第二放大電路結(jié)構(gòu)示意圖；

圖7為本發(fā)明的遮光蓋與置樣槽安裝結(jié)構(gòu)示意圖；

圖8為本發(fā)明的對(duì)接槽與測(cè)量槽安裝剖視結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體圖示，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。

如圖1至圖8所示，本發(fā)明提供的一種用于檢測(cè)犬副流感病毒試劑盒，包括遮光檢測(cè)盒1、all-readypcrbeads全預(yù)混凍干粉、陽(yáng)性對(duì)照組、陰性對(duì)照組、光電檢測(cè)器3，遮光檢測(cè)盒1與光電檢測(cè)器3配合安裝，所述all-readypcrbeads全預(yù)混凍干粉包括犬副流感病毒rna熒光定量pcr檢測(cè)所需的反轉(zhuǎn)錄酶、核酸擴(kuò)增酶、反應(yīng)buffer及特異性引物和探針，加入提取的樣品rna并補(bǔ)足20ul體積的水后即可直接進(jìn)行熒光定量pcr檢測(cè)；所述陰性對(duì)照組采用無(wú)犬副流感病毒rna的酶水，陽(yáng)性對(duì)照組為體外轉(zhuǎn)錄犬副流感病毒rna，光電檢測(cè)器3內(nèi)設(shè)有一光電檢測(cè)模塊，光電檢測(cè)模塊包括一光電二極管，光電二極管優(yōu)選采用硅光電二極管，光電二極管陽(yáng)極端連接一誤差校對(duì)電路，光電二極管陰極端連接一運(yùn)算反饋電路，誤差校對(duì)電路另一端連接第一放大電路，光電二極管輸出端處連接設(shè)有第二放大電路，輸出端用于連接單片機(jī)，電信號(hào)通過在輸出端完成模數(shù)轉(zhuǎn)換后傳輸至單片機(jī)內(nèi)，單片機(jī)通過內(nèi)部運(yùn)算處理完成數(shù)據(jù)讀取，結(jié)合設(shè)置誤差校對(duì)電路可以降低第一放大電路和第二放大電路內(nèi)偏置電流產(chǎn)生的誤差，當(dāng)經(jīng)流放大器反相輸入端的電流為i1時(shí)，同相輸入端的電流為i2，則通過誤差校對(duì)電路和運(yùn)算反饋電路，可以得出由偏置電流引起的誤差電壓為i1*反饋電阻r4阻值-i2*校對(duì)電阻r3阻值，其可以大大降低誤差值，從而增加檢測(cè)精確度，光電二極管通過測(cè)量槽31與遮光檢測(cè)盒1配合安裝，測(cè)量槽31位于光電檢測(cè)器3上，遮光檢測(cè)盒1內(nèi)設(shè)有一檢測(cè)腔13，檢測(cè)腔13呈上下垂直貫通結(jié)構(gòu)，檢測(cè)腔13頂端設(shè)有置樣槽12，方便試樣放置，底端設(shè)有對(duì)接槽14，對(duì)接槽14與測(cè)量槽31對(duì)應(yīng)配合，對(duì)接槽14與測(cè)量槽31采用錯(cuò)位對(duì)接結(jié)構(gòu)，增加遮光效果。

本發(fā)明誤差校對(duì)電路由校對(duì)電容c3、校對(duì)電阻r3及校對(duì)pin二極管pin1相互并聯(lián)連接構(gòu)成，運(yùn)算反饋電路由反饋電容c4、反饋電阻r4及反饋pin二極管pin2相互并聯(lián)連接構(gòu)成，校對(duì)電容c3和反饋電容c4型號(hào)相同，校對(duì)電阻r3和反饋電阻r4型號(hào)相同，校對(duì)電阻r3和反饋電阻r4優(yōu)選采用陶瓷電阻或薄膜電阻，校對(duì)pin二極管pin1和反饋pin二極管pin2型號(hào)相同。

本發(fā)明第一放大電路和第二放大電路均采用ad8605放大器。

本發(fā)明遮光檢測(cè)盒1頂端設(shè)有一遮光蓋11，遮光蓋11用于封蓋置樣槽12。

本發(fā)明還包括一樣品架2，樣品架2上設(shè)有若干試管孔21，方便試樣放置。

本具體實(shí)施使用時(shí)，在高效反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以rna為模板，以引物為起點(diǎn)合成與rna模板互補(bǔ)的cdna鏈。在taq酶的作用下，經(jīng)高溫變性、中文退火及延伸的循環(huán)，使特異dna片段的拷貝數(shù)放大，經(jīng)熒光素標(biāo)記的探針與擴(kuò)增的dna雜交，利用taq聚合酶的5′-3′外切活性，使熒光探針的報(bào)告基因與淬滅基因團(tuán)分離，發(fā)出特異性熒光信號(hào)，利用優(yōu)化后的熒光檢測(cè)裝置進(jìn)行特異性熒光信號(hào)的檢測(cè)，根據(jù)樣品的cq值的大小及擴(kuò)增曲線的形成情況判定結(jié)果，結(jié)合遮光檢測(cè)盒并優(yōu)化光電檢測(cè)模塊，降低了檢測(cè)誤差，提高了檢測(cè)特異性。

由技術(shù)常識(shí)可知，本發(fā)明可以通過其它的不脫離其精神實(shí)質(zhì)或必要特征的實(shí)施方案來實(shí)現(xiàn)。因此，上述公開的實(shí)施方案，就各方面而言，都只是舉例說明，并不是僅有的。所有在本發(fā)明范圍內(nèi)或在等同于本發(fā)明的范圍內(nèi)的改變均被本發(fā)明包含。