本發(fā)明涉及生物蛋白
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體是一種功能性蛋白肽產(chǎn)品的加工方法。
背景技術(shù)：
：隨著社會和經(jīng)濟的發(fā)展，人們的健康意識越來越強烈，對食品的品質(zhì)營養(yǎng)也越來越關(guān)注和重視。生物活性肽是源于蛋白質(zhì)的多功能化合物，在生命活動中起著重要的調(diào)節(jié)作用，易消化吸收，有促進免疫、激素調(diào)節(jié)、抗菌、抗病毒、抗氧化、降血壓、降血脂、降血糖等作用，食用安全性極高，是當(dāng)前國際食品界最熱門的研究課題和極具發(fā)展前景的功能因子。目前，功能性多肽研究已列入國家重點支持的高新
技術(shù)領(lǐng)域：
。鯽魚（學(xué)名：carassiusauratus，簡稱鯽，俗名鯽瓜子、月鯽仔、土鯽、細頭、鮒魚、寒鮒）在歐亞地區(qū)為常見淡水魚，為輻鰭魚綱鯉形目鯉科鯽屬的其中一種魚類。鯽魚主要是以植物為食的雜食性魚，喜群居而行，擇食而居。肉質(zhì)細嫩，肉營養(yǎng)價值很高，每百克肉含蛋白質(zhì)13克、脂肪11克，并含有大量的鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)。鯽魚藥用價值極高，其性平味甘，入胃、腎，具有和中補虛、除羸、溫胃進食、補中生氣之功效。鯽魚主要用于食用，在烹飪過程中鯽魚中的營養(yǎng)物質(zhì)流失較多。且因產(chǎn)量過多或體積過小，鯽魚出現(xiàn)滯銷現(xiàn)象，造成資源的浪費。從天然蛋白中提取具有營養(yǎng)性和生理活性的功能肽，并將這些功能肽應(yīng)用到保健食品和強化營養(yǎng)食品中，不但能夠全面利用食品及食品加工中的優(yōu)質(zhì)蛋白，而且能夠有效的提高來源廣泛的蛋白質(zhì)原料的附加值，同時大大提升傳統(tǒng)食品的科技含量。現(xiàn)有技術(shù)如授權(quán)公告號為cn104250285b的中國發(fā)明專利，公開了一種大黃魚魚肉抗氧化肽及用途，其特征在于：該抗氧化肽為五肽化合物，氨基酸序列為tyr-leu-met-ser-arg，esi-ms檢測給出分子量651.77da（[m+h]+652.45da）。該抗氧化肽制備方法包括勻漿、酶解、超濾和層析等步驟。制備得到的高活性抗氧化肽tyr-leu-met-ser-arg對dpph自由基、羥基自由基、abts自由基和超氧陰離子自由基具有良好的清除作用。上述抗氧化肽產(chǎn)品制備時間較長，有腥味并呈淡黃色，產(chǎn)品品質(zhì)有待提高。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種無腥味、呈白色，能促進胰臟分泌胰島素的功能性蛋白肽產(chǎn)品的加工方法。本發(fā)明針對
背景技術(shù)：
中提到的問題，采取的技術(shù)方案為：一種功能性蛋白肽產(chǎn)品的加工方法，包括以下步驟：胰凝乳蛋白酶酶解：在鯽魚魚肉糜中加入胰凝乳蛋白酶，胰凝乳蛋白酶加入量為0.1~0.3%，酶解溫度為45~55℃，ph為7.5~8.5，酶解時間為15~25min。微波輔助酶解，微波功率為100~120w，頻率為20~30khz。酶解結(jié)束后沸水浴2~5min滅酶。微波輔助酶解能大幅縮短蛋白酶酶解時間，減少時間成本和人工成本，降低生產(chǎn)成本。胰凝乳蛋白酶將粘稠的魚肉肉糜酶解成粘度和分子量較小的固液混合物，將更多的酶切位點暴露出來，為下一步酶解作準備；木瓜蛋白酶酶解：在酶解液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量為0.2~0.5%，酶解溫度為50~60℃，ph為5.0~6.5，酶解時間為15~25min。微波輔助酶解，微波功率為100~120w，頻率為20~30khz。酶解結(jié)束后滅酶。采用分步酶解方式對魚肉肉糜進行酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本。木瓜蛋白酶對胰凝乳蛋白酶酶解得到的固液混合物進行進一步酶解，鯽魚魚肉蛋白分子量進一步減小，得到大量小分子蛋白質(zhì)和多肽；等電點沉淀：過濾酶解液，取濾液，調(diào)節(jié)ph值為2.3~2.6，離心取沉淀。當(dāng)溶液ph值為2.3~2.6時，功能性蛋白肽在水中的溶解度快速下降，蛋白肽以沉淀的形式從溶液中析出，蛋白肽的活性不被破壞；脫色脫腥：在所得沉淀中加水，混合均勻后加脫色脫腥劑，攪拌，離心取上清液；純化：將上清液依次進行超濾和層析，得到功能性蛋白肽，氨基酸序列為：scasrcksrcrarrcrarcgyfgkrcickcfrc。得到的功能性蛋白肽對胰島β細胞有修復(fù)作用，促進胰島素結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄形成前胰島素原的信使核糖核酸（mrna），在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核蛋白體中合成胰島素。因此，上述功能性蛋白肽產(chǎn)品對糖尿病有較好的防治效果。作為優(yōu)選，脫色脫腥劑成分及其重量份為：皂土10~15份、活性白土4~9份、堿性鈣基膨潤土20~25份和活性炭10~15份。在物理吸附和化學(xué)吸附雙重作用下，功能性蛋白肽的腥味基本去除，脫色率達92%以上，氮保留率為85%以上，活性保持度高。作為優(yōu)選，超濾步驟為：將上清液ph調(diào)至6.0~6.5，用截留分子量1~1.5kda的超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于1~1.5kda部分。通過超濾，去除分子量大于1~1.5kda的雜質(zhì)，對功能性蛋白肽作初步的純化。作為優(yōu)選，層析步驟為：將超濾液用雙蒸水配成20~30mg/ml的溶液，經(jīng)過陰離子交換樹脂分離，用雙蒸水、0.45~0.55mol/l和0.90~1.10mol/lnacl溶液進行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，并利用反相液相色譜進行純化，得到功能性蛋白肽。層析操作對功能性蛋白肽進一步純化，得到高純度功能性蛋白肽。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于：1）本發(fā)明采用微波輔助酶解，微波輔助酶解能大幅縮短蛋白酶酶解時間，減少時間成本和人工成本，降低生產(chǎn)成本；2）本發(fā)明采用分步酶解法酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本，依次采用胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，得到大量小分子蛋白質(zhì)和多肽；3）得到的功能性蛋白肽對胰島β細胞有修復(fù)作用，促進胰島素結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄形成前胰島素原的信使核糖核酸（mrna），在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核蛋白體中合成胰島素。因此，上述功能性蛋白肽產(chǎn)品對糖尿病有較好的防治效果。具體實施例下面通過實施例對本發(fā)明方案作進一步說明：實施例1：一種功能性蛋白肽產(chǎn)品的加工方法，包括以下步驟：1）胰凝乳蛋白酶酶解：在鯽魚魚肉糜中加入胰凝乳蛋白酶，胰凝乳蛋白酶加入量為0.1~0.3%，酶解溫度為45~55℃，ph為7.5~8.5，酶解時間為15~25min。微波輔助酶解，微波功率為100~120w，頻率為20~30khz。酶解結(jié)束后沸水浴2~5min滅酶。微波輔助酶解能大幅縮短蛋白酶酶解時間，減少時間成本和人工成本，降低生產(chǎn)成本。胰凝乳蛋白酶將粘稠的魚肉肉糜酶解成粘度和分子量較小的固液混合物，將更多的酶切位點暴露出來，為下一步酶解作準備；2）木瓜蛋白酶酶解：在酶解液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量為0.2~0.5%，酶解溫度為50~60℃，ph為5.0~6.5，酶解時間為15~25min。微波輔助酶解，微波功率為100~120w，頻率為20~30khz。酶解結(jié)束后滅酶。采用分步酶解方式對魚肉肉糜進行酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本。木瓜蛋白酶對胰凝乳蛋白酶酶解得到的固液混合物進行進一步酶解，鯽魚魚肉蛋白分子量進一步減小，得到大量小分子蛋白質(zhì)和多肽；3）等電點沉淀：過濾酶解液，取濾液，調(diào)節(jié)ph值為2.3~2.6，離心取沉淀。當(dāng)溶液ph值為2.3~2.6時，功能性蛋白肽在水中的溶解度快速下降，蛋白肽以沉淀的形式從溶液中析出，蛋白肽的活性不被破壞；4）脫色脫腥：在所得沉淀中加水，混合均勻后加脫色脫腥劑，攪拌，離心取上清液；5）純化：將上清液依次進行超濾和層析，得到功能性蛋白肽，氨基酸序列為：scasrcksrcrarrcrarcgyfgkrcickcfrc。得到的功能性蛋白肽對胰島β細胞有修復(fù)作用，促進胰島素結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄形成前胰島素原的信使核糖核酸（mrna），在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核蛋白體中合成胰島素。因此，上述功能性蛋白肽產(chǎn)品對糖尿病有較好的防治效果。脫色脫腥劑成分及其重量份為：皂土10~15份、活性白土4~9份、堿性鈣基膨潤土20~25份和活性炭10~15份。在物理吸附和化學(xué)吸附雙重作用下，功能性蛋白肽的腥味基本去除，脫色率達92%以上，氮保留率為85%以上，活性保持度高。超濾步驟為：將上清液ph調(diào)至6.0~6.5，用截留分子量1~1.5kda的超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于1~1.5kda部分。通過超濾，去除分子量大于1~1.5kda的雜質(zhì)，對功能性蛋白肽作初步的純化。層析步驟為：將超濾液用雙蒸水配成20~30mg/ml的溶液，經(jīng)過陰離子交換樹脂分離，用雙蒸水、0.45~0.55mol/l和0.90~1.10mol/lnacl溶液進行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，并利用反相液相色譜進行純化，得到功能性蛋白肽。層析操作對功能性蛋白肽進一步純化，得到高純度功能性蛋白肽。實施例2：一種功能性蛋白肽產(chǎn)品的加工方法，包括以下步驟：1）胰凝乳蛋白酶酶解：在鯽魚魚肉糜中加入胰凝乳蛋白酶，胰凝乳蛋白酶加入量為0.2%，酶解溫度為50℃，ph為8.0，酶解時間為20min。微波輔助酶解，微波功率為110w，頻率為25khz。酶解結(jié)束后沸水浴4min滅酶。微波輔助酶解能大幅縮短蛋白酶酶解時間，減少時間成本和人工成本，降低生產(chǎn)成本。胰凝乳蛋白酶將粘稠的魚肉肉糜酶解成粘度和分子量較小的固液混合物，將更多的酶切位點暴露出來，為下一步酶解作準備；2）木瓜蛋白酶酶解：在酶解液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量為0.4%，酶解溫度為55℃，ph為5.4，酶解時間為20min。微波輔助酶解，微波功率為110w，頻率為25khz。酶解結(jié)束后滅酶。采用分步酶解方式對魚肉肉糜進行酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本。木瓜蛋白酶對胰凝乳蛋白酶酶解得到的固液混合物進行進一步酶解，鯽魚魚肉蛋白分子量進一步減小，得到大量小分子蛋白質(zhì)和多肽；3）等電點沉淀：過濾酶解液，取濾液，調(diào)節(jié)ph值為2.5，離心取沉淀。當(dāng)溶液ph值為2.5時，功能性蛋白肽在水中的溶解度快速下降，蛋白肽以沉淀的形式從溶液中析出，蛋白肽的活性不被破壞；4）脫色脫腥：在所得沉淀中加水，混合均勻后加脫色脫腥劑，攪拌，離心取上清液；5）純化：將上清液依次進行超濾和層析，得到功能性蛋白肽，氨基酸序列為：scasrcksrcrarrcrarcgyfgkrcickcfrc。得到的功能性蛋白肽對胰島β細胞有修復(fù)作用，促進胰島素結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄形成前胰島素原的信使核糖核酸（mrna），在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核蛋白體中合成胰島素。因此，上述功能性蛋白肽產(chǎn)品對糖尿病有較好的防治效果。脫色脫腥劑成分及其重量份為：皂土13份、活性白土5份、堿性鈣基膨潤土23份和活性炭13份。在物理吸附和化學(xué)吸附雙重作用下，功能性蛋白肽的腥味基本去除，脫色率達93%，氮保留率為86%，活性保持度高。超濾步驟為：將上清液ph調(diào)至6.3，用截留分子量1.2kda的超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于1.2kda部分。通過超濾，去除分子量大于1.2kda的雜質(zhì)，對功能性蛋白肽作初步的純化。層析步驟為：將超濾液用雙蒸水配成24mg/ml的溶液，經(jīng)過陰離子交換樹脂分離，用雙蒸水、0.5mol/l和1mol/lnacl溶液進行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，并利用反相液相色譜進行純化，得到功能性蛋白肽。層析操作對功能性蛋白肽進一步純化，得到高純度功能性蛋白肽。實施例3：一種功能性蛋白肽產(chǎn)品的加工方法，包括以下步驟：1）胰凝乳蛋白酶酶解：在鯽魚魚肉糜中加入胰凝乳蛋白酶，胰凝乳蛋白酶加入量為0.3%，酶解溫度為50℃，ph為8.0，酶解時間為16min。微波輔助酶解，微波功率為110w，頻率為25khz。酶解結(jié)束后沸水浴4min滅酶。微波輔助酶解能大幅縮短蛋白酶酶解時間，減少時間成本和人工成本，降低生產(chǎn)成本。胰凝乳蛋白酶將粘稠的魚肉肉糜酶解成粘度和分子量較小的固液混合物，將更多的酶切位點暴露出來，為下一步酶解作準備；2）木瓜蛋白酶酶解：在酶解液中加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶加入量為0.5%，酶解溫度為55℃，ph為5.4，酶解時間為15min。微波輔助酶解，微波功率為110w，頻率為25khz。酶解結(jié)束后滅酶。采用分步酶解方式對魚肉肉糜進行酶解，蛋白酶的酶解效率高，降低成本。木瓜蛋白酶對胰凝乳蛋白酶酶解得到的固液混合物進行進一步酶解，鯽魚魚肉蛋白分子量進一步減小，得到大量小分子蛋白質(zhì)和多肽；3）等電點沉淀：過濾酶解液，取濾液，調(diào)節(jié)ph值為2.5，離心取沉淀。當(dāng)溶液ph值為2.5時，功能性蛋白肽在水中的溶解度快速下降，蛋白肽以沉淀的形式從溶液中析出，蛋白肽的活性不被破壞；4）脫色脫腥：在所得沉淀中加水，混合均勻后加脫色脫腥劑，攪拌，離心取上清液；5）純化：將上清液依次進行超濾和層析，得到功能性蛋白肽，氨基酸序列為：scasrcksrcrarrcrarcgyfgkrcickcfrc。得到的功能性蛋白肽對胰島β細胞有修復(fù)作用，促進胰島素結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄形成前胰島素原的信使核糖核酸（mrna），在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核蛋白體中合成胰島素。因此，上述功能性蛋白肽產(chǎn)品對糖尿病有較好的防治效果。脫色脫腥劑成分及其重量份為：皂土14份、活性白土4份、堿性鈣基膨潤土25份和活性炭12份。在物理吸附和化學(xué)吸附雙重作用下，功能性蛋白肽的腥味基本去除，脫色率達93.4%，氮保留率為85.7%，活性保持度高。超濾步驟為：將上清液ph調(diào)至6.3，用截留分子量1.2kda的超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于1.2kda部分。通過超濾，去除分子量大于1.2kda的雜質(zhì)，對功能性蛋白肽作初步的純化。層析步驟為：將超濾液用雙蒸水配成24mg/ml的溶液，經(jīng)過陰離子交換樹脂分離，用雙蒸水、0.5mol/l和1mol/lnacl溶液進行洗脫，根據(jù)280nm下的吸光度曲線收集洗脫組分，并利用反相液相色譜進行純化，得到功能性蛋白肽。層析操作對功能性蛋白肽進一步純化，得到高純度功能性蛋白肽。實施例4：選擇血糖值為12.0~14.0的50名糖尿病患者，隨機選擇25名糖尿病患者作為試驗組，讓其每次飯后服用0.2g實施例3得到的功能性蛋白肽產(chǎn)品，另外25名糖尿病患者作為對照組不服用，并且控制50名糖尿病患者的飲食相同。經(jīng)過60天的試驗，記錄試驗組每位糖尿病患者胰島素的注射頻率，并取其平均值，記錄對照組每位糖尿病患者胰島素的注射頻率，并取其平均值。表1糖尿病患者胰島素的注射頻率組名對照組試驗組胰島素平均注射頻率次/天1.80.6由表1可看出，本發(fā)明功能性蛋白肽對糖尿病有防治效果，可有效減輕糖尿病癥狀，具有良好的市場前景。本發(fā)明的操作步驟中的常規(guī)操作為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，在此不進行贅述。以上所述的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行了詳細說明，應(yīng)理解的是以上所述僅為本發(fā)明的具體實施例，并不用于限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則范圍內(nèi)所做的任何修改、補充或類似方式替代等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。sequencelisting<110>浙江豐宇海洋生物制品有限公司<120>一種功能性蛋白肽產(chǎn)品的加工方法<130>1<160>1<170>patentinversion3.5<210>1<211>33<212>prt<213>人工合成<400>1sercysalaserargcyslysserargcysargalaargargcysarg151015alaargcysglytyrpheglylysargcysilecyslyscysphearg202530cys當(dāng)前第1頁12