本發(fā)明涉及一種從芒果葉提取芒果苷的綠色化學(xué)工藝技術(shù)，尤指一種先采用超微粉碎、食用乙醇提取芒果苷，然后以d101大孔樹脂、d296陰離子樹脂分離純化芒果苷的綠色分離純化方法。

背景技術(shù)：

芒果苷，又稱莞知母寧，淡灰黃色針狀結(jié)晶（50%乙醇）。芒果苷對于治療慢性支氣管炎有較好療效，是藏茵陳治療肝炎的主要有效成分，是知母根莖中抗病毒的活性成分。芒果苷具有抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)、抗炎、抑菌、抗單純皰疹病毒hsv-2，利膽和免疫作用，能緩解hsv-2病毒引起的骶骨神經(jīng)根病，對模擬高原急性低氧肝損傷有保護作用。

芒果苷存在于漆樹科植物芒果(mangiferaindical.)的果實、葉、樹皮中。芒果葉含有多種類型的化合物，其性質(zhì)差異很大(從極性到非極性)；同一類型化合物中異構(gòu)體多，其差異性又很小，難以分離，且其中一些化合物熱敏感性強，又極易氧化、異構(gòu)、分解。

現(xiàn)有技術(shù)中已有許多從芒果葉中提取分離芒果苷的方法，如cn201710057903.7是以乙酸乙酯提取芒果葉粉除雜后再以甲醇提取，所得濾液濃縮洗滌，干燥得芒果苷粗品，或進一步結(jié)晶純化得芒果苷純品；cn200910194672.x是用堿性水溶液對芒果葉粉進行提取后，濾液用稀礦酸酸化、濃縮、加醇離心，采用sephadexlh-20凝膠柱分離，洗脫液蒸干后用醇重結(jié)晶得到芒果苷；cn201610965106.4是采用乙醇和抗氧化劑提取芒果葉粉，再采用凝膠柱和大孔吸附樹脂層析聯(lián)用制得芒果苷；cn200910175781.7是將芒果葉粉酶解后用石油醚脫脂，用乙醇提取、干燥，再用乙醇水溶液溶解、離心過濾干燥制得芒果苷；cn201010292465.0是用醇提取后濾液濃縮，再用有機溶劑萃取，水相結(jié)晶，晶體用丙酮和水的混合溶液重結(jié)晶制得芒果苷等，雖然該些方法皆能從芒果葉中分離提取芒果苷，但是并沒有將d101大孔樹脂和d296陰離子樹脂聯(lián)用來分離純化芒果苷。而cn200610079234.5，雖然提及采用單一的大孔型樹脂，優(yōu)選d101、d301、d318或d296，但是該方法是在醇提取后采用該些樹脂進行脫色，而不是進行分離純化。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以芒果葉提取芒果苷的方法，該方法以d101大孔樹脂聯(lián)用d296陰離子樹脂從芒果葉中提取芒果苷，高效、綠色安全、低成本、高得率、高純度，適用于工業(yè)生產(chǎn)。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種以芒果葉提取芒果苷的方法，其特征在于，該方法是先將芒果葉粉碎為300目以下的超微粉體，采用食用乙醇從芒果葉粉中提取芒果苷粗提物，再將芒果苷粗提物以d101大孔樹脂聯(lián)用d296陰離子樹脂進行分離純化，即得芒果苷。

上述提及的將芒果苷粗提物以d101大孔樹脂聯(lián)用d296陰離子樹脂進行分離純化是指將芒果苷粗提物以2.0bv/h～4.0bv/h的流速通過d101大孔樹脂的層析柱吸附至飽和，用1bv～3bv的50%體積濃度的乙醇溶液以1bv/h～3bv/h的流速沖洗至無色，收集洗脫液；將洗脫液上d296陰離子樹脂層析柱，用1bv～3bv的50%體積濃度的乙醇溶液以1bv/h～3bv/h流速沖洗至無色，收集洗脫液，將洗脫液在-0.05mpa～-0.09mpa、45℃～55℃條件下濃縮，回收食用乙醇，-0.05mpa～-0.09mpa、40℃～60℃真空冷凍干燥，即得。

上述提及的采用食用乙醇從芒果葉粉中提取芒果苷粗提物是指用50%～80%體積濃度且ph為5～8的食用乙醇于70℃～90℃從芒果葉粉中提取芒果苷粗提物。進一步地，是指采用50%～80%體積濃度且ph為5～8的食用乙醇，按1g芒果葉粉加8～12ml食用乙醇的比例，于芒果葉粉中加入食用乙醇在70℃～90℃下提取2次，每次提取時間為1～2h，將提取液過濾，合并濾液，即得芒果苷粗提物。

上述的提及的將芒果葉粉碎是以氣流粉碎機進行粉碎至300目以下的超微粉體，以提高破壁率。

本發(fā)明方法中，采用經(jīng)靜態(tài)吸附與解吸篩選出來的d101大孔吸附樹脂和d296陰離子樹脂吸附芒果苷，對未被大孔吸附樹脂吸附部分，經(jīng)減壓濃縮回收食用乙醇。對上述步驟中吸附在大孔吸附樹脂的芒果葉芒果苷進行洗脫回收時，先用蒸餾水洗至無色，再用食用乙醇洗脫芒果苷，得到的芒果苷的純度和得率都較高。

本方法中使用的d101大孔樹脂和d296陰離子樹脂的處理：新樹脂采用95%乙醇浸泡48h，之后用乙醇洗到無混濁，然后用蒸餾水洗至無醇味。用過的樹脂先用95%洗至無色，然后用蒸餾水洗至無醇味；用5%鹽酸洗至無色，再用水洗至中性；用5%naoh洗至無色后，用水洗至中性，備用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點是：

1、本發(fā)明采用超微粉碎芒果葉，采用超微粉體能有效的提高利用率。

2、集成采用食用乙醇安全無毒地提取芒果葉活性成分、d101大孔樹脂、d296陰離子樹脂分離純化芒果苷等方法，不僅能工業(yè)化生產(chǎn)安全有效的不同純度規(guī)格的芒果苷提取物以用于后續(xù)的保肝護肝、抗炎、抗氧化等功能產(chǎn)品的研發(fā)，而且真正地實現(xiàn)了安全、簡便、合理、經(jīng)濟的芒果葉資源的高值化利用和系列產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)，充分體現(xiàn)出綠色化學(xué)生產(chǎn)的理念和循環(huán)經(jīng)濟的策略。因而，本發(fā)明具有理論新穎、技術(shù)科學(xué)、操作及產(chǎn)品安全、工藝簡便、經(jīng)濟可行、環(huán)境友好等特點。

3、采用天然產(chǎn)物化學(xué)及現(xiàn)代化生產(chǎn)技術(shù)提取、分離純化芒果葉主要活性成分芒果苷，將其制成國際通行的各種純度規(guī)格的芒果苷提取物，較好地順應(yīng)和滿足現(xiàn)代功能食品、保健品、藥品、日化用品等健康領(lǐng)域，對其天然、安全、有效、方便的需求。

具體實施方式

實施例1

取芒果葉，將芒果葉以氣流粉碎機粉碎為300目以下的超微粉體，以50%體積濃度且ph為8的食用乙醇為提取溶劑，按1g芒果葉粉加12ml食用乙醇的比例，于芒果葉粉中加入食用乙醇在70℃下浸提2h，提取2次，將提取液過濾，合并濾液，即得芒果苷粗提物。

選用已處理的d101大孔吸附樹脂和d296陰離子樹脂作為芒果苷的分離純化樹脂。將芒果苷粗提物以2.0bv/h的流速先通過d101大孔樹脂的層析柱吸附至飽和，用1bv的50%體積濃度的乙醇溶液以1bv/h的流速沖洗至無色，收集洗脫液；再將洗脫液上d296陰離子樹脂層析柱，用1bv的50%體積濃度的乙醇溶液以1bv/h流速沖洗至無色，收集洗脫液，將洗脫液在-0.05mpa、55℃條件下濃縮，回收食用乙醇，-0.05mpa、60℃真空冷凍干燥，即得純化的芒果苷提取物，測得芒果苷得率為85%，純度為94%。

實施例2

取芒果葉，將芒果葉以氣流粉碎機粉碎為300目以下的超微粉體，以70%體積濃度且ph為7的食用乙醇為提取溶劑，按1g芒果葉粉加10ml食用乙醇的比例，于芒果葉粉中加入食用乙醇在80℃下浸提1.5h，提取2次，將提取液過濾，合并濾液，即得芒果苷粗提物。

選用已處理的d101大孔吸附樹脂和d296陰離子樹脂作為芒果苷的分離純化樹脂。將芒果苷粗提物以3.0bv/h的流速先通過d101大孔樹脂的層析柱吸附至飽和，用2bv的50%體積濃度的乙醇溶液以2bv/h的流速沖洗至無色，收集洗脫液；再將洗脫液上d296陰離子樹脂層析柱，用2bv的50%體積濃度的乙醇溶液以2bv/h流速沖洗至無色，收集洗脫液，將洗脫液在-0.07mpa、50℃條件下濃縮，回收食用乙醇，-0.07mpa、50℃真空冷凍干燥，即得純化的芒果苷提取物，測得芒果苷得率為83%，純度為93%。

對比實施例1

取芒果葉粉碎，以70%體積濃度且ph為7的食用乙醇為提取溶劑，按1g芒果葉粉加10ml食用乙醇的比例，于芒果葉粉中加入食用乙醇在80℃下浸提1.5h，提取2次，將提取液過濾，合并濾液，即得芒果苷粗提物。

選用已處理的d101大孔吸附樹脂作為芒果苷的分離純化樹脂。將芒果苷粗提物以3.0bv/h的流速先通過d101大孔樹脂的層析柱吸附至飽和，用2bv的50%體積濃度的乙醇溶液以2bv/h的流速沖洗至無色，收集洗脫液；將洗脫液在-0.07mpa、50℃條件下濃縮，回收食用乙醇，-0.07mpa、50℃真空冷凍干燥，即得純化的芒果苷提取物，測得芒果苷得率為67%，純度為50%。

對比實施例2

取芒果葉粉碎，以70%體積濃度且ph為7的食用乙醇為提取溶劑，按1g芒果葉粉加10ml食用乙醇的比例，于芒果葉粉中加入食用乙醇在80℃下浸提1.5h，提取2次，將提取液過濾，合并濾液，即得芒果苷粗提物。

選用已處理的d296陰離子樹脂作為芒果苷的分離純化樹脂。將芒果苷粗提物以3.0bv/h的流速先通過d296陰離子樹脂的層析柱吸附至飽和，用2bv的50%體積濃度的乙醇溶液以2bv/h的流速沖洗至無色，收集洗脫液；將洗脫液在-0.07mpa、50℃條件下濃縮，回收食用乙醇，-0.07mpa、50℃真空冷凍干燥，即得純化的芒果苷提取物，測得芒果苷得率為55%，純度為32%。

實施例3

取芒果葉，將芒果葉以氣流粉碎機粉碎為300目以下的超微粉體，以80%體積濃度且ph為5的食用乙醇為提取溶劑，按1g芒果葉粉加8ml食用乙醇的比例，于芒果葉粉中加入食用乙醇在90℃下浸提1h，提取2次，將提取液過濾，合并濾液，即得芒果苷粗提物。

選用已處理的d101大孔吸附樹脂和d296陰離子樹脂作為芒果苷的分離純化樹脂。將芒果苷粗提物以4.0bv/h的流速先通過d101大孔樹脂的層析柱吸附至飽和，用3bv的50%體積濃度的乙醇溶液以3bv/h的流速沖洗至無色，收集洗脫液；再將洗脫液上d296陰離子樹脂層析柱，用3bv的50%體積濃度的乙醇溶液以3bv/h流速沖洗至無色，收集洗脫液，將洗脫液在-0.09mpa、45℃條件下濃縮，回收食用乙醇，-0.09mpa、40℃真空冷凍干燥，即得純化的芒果苷提取物，測得芒果苷得率為82%，純度為91%。