本發(fā)明涉及飼料技術(shù)領(lǐng)域，且特別涉及一種微生態(tài)制劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

近年來隨著人們對食品安全意識的不斷加強，無污染無殘留的“綠色食品”成為了消費者熱衷和推崇的商品。為了解決抗生素飼料添加劑應(yīng)用的問題，各種抗生素替代品的研究已經(jīng)成為全球食品生產(chǎn)企業(yè)的研究熱點，主要包括化學(xué)益生素、益生素、酶制劑、中草藥等無污染的添加劑。

益生素又稱活菌制劑，其是在微生態(tài)學(xué)理論的指導(dǎo)下，將從動物體內(nèi)分離出的有益微生物經(jīng)過特殊工藝制成的有益活體微生物制劑，其具有無毒副作用、無耐藥性、無殘留、成本低、效果顯著、不污染環(huán)境等特點。目前常用的微生物制劑主要包括乳酸菌制劑，芽孢桿菌制劑以及真菌、活酵母類制劑。微生態(tài)制劑能夠通過促進(jìn)動物胃腸道正常微生物區(qū)系的建立來增強畜禽的免疫力，減少疾病的發(fā)生，增強畜禽的生長速度，是一種能夠代替抗生素使用的綠色飼料添加劑。但是目前國內(nèi)微生態(tài)制劑的應(yīng)用主要以芽孢桿菌為主，乳酸菌由于保存問題難以解決一直沒能得到推廣使用。

因此，需要一種以乳酸菌為主要原料制備得到的微生態(tài)飼料添加制劑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的另一目的在于提供一種微生態(tài)制劑，其具有活菌含量高，溶解性好的優(yōu)點，并富含生物活性物質(zhì)與多種低聚糖益生元。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述微生態(tài)制劑的制備方法，該方法具有工藝簡單，操作方便，成本低的優(yōu)點。

本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的。

一種微生態(tài)制劑，其包括按質(zhì)量比為45～50：1～1.5：450～500混合的乳酸菌菌粉、芽孢桿菌菌粉和低聚糖；其中乳酸菌菌粉的活菌數(shù)≥1×10¹¹cfu/g，芽孢桿菌菌粉的活菌數(shù)≥5×10¹⁰cfu/g。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實施例中，低聚糖包括果寡糖、異麥芽低聚糖和低聚木糖中的至少一種。

本發(fā)明還提供了上述微生態(tài)制劑的制備方法，其包括以下步驟：分別將乳酸菌和芽孢桿菌培養(yǎng)得到乳酸菌泥和芽孢桿菌泥，將乳酸菌泥和芽孢桿菌泥分別與凍干保護(hù)劑按1：3～4的質(zhì)量比混合，并在-50～-60℃下冷凍后真空干燥得到乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉；將乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉混合。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實施例中，以質(zhì)量百分比計，凍干保護(hù)劑包括15～18％的脫脂奶粉、1～2％的水蘇糖、0.1～0.5％的谷氨酸鈉及0.5～1％的乳糖，余量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的甘油的水溶液。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實施例中，乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉按照80～100：1的活菌數(shù)比混合。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實施例中，向混合后的乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉中加入低聚糖混合均勻，使活菌數(shù)達(dá)到1×10¹⁰～2×10¹⁰cfu/g。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實施例中，乳酸菌包括嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌中的至少一種，乳酸菌的培養(yǎng)方法是：將選取的乳酸菌分別接種于乳酸菌液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)并混合得到第一培養(yǎng)液，將第一培養(yǎng)液按0.3～0.4％的體積接種量接種于乳酸菌增菌培養(yǎng)基中培養(yǎng)28～32h后離心，得到乳酸菌泥。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實施例中，乳酸菌增菌培養(yǎng)基包括蛋白胨9.0～10g/l，牛肉膏7.0～8.0g/l，酵母粉4.0～5.0g/l，葡萄糖15.0～16.0g/l，乙酸鈉4.0～5.0g/l，檸檬酸二銨1.0～2.0g/l，tween801.0～1.5g/l，k2hpo41.0～2.0g/l，mgso4·7h2o0.4～0.6g/l，mnso4·h2o0.2～0.4g/l。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實施例中，芽孢桿菌包括枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌中的至少一種，芽孢桿菌的培養(yǎng)方法是：將選取的芽孢桿菌分別接種于芽孢桿菌液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)并混合得到第二培養(yǎng)液，將第二培養(yǎng)液按0.4～0.5％的體積接種量接種于芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～24h后離心，得到芽孢桿菌泥。

進(jìn)一步地，在本發(fā)明較佳實施例中，芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基包括蛋白胨9.0～10.0g/l，酵母粉4.0～5.0g/l，nacl4.0～5.0g/l，caco31.5～2.0g/l，mnso4·h2o0.005～0.010g/l。

本發(fā)明實施例的微生態(tài)制劑與制備方法的有益效果是：本發(fā)明提供的微生態(tài)制劑及其制備方法，該方法工藝簡單，操作方便，成本低廉，適合大規(guī)模生產(chǎn)微生態(tài)制劑。該微生態(tài)制劑將多種乳酸菌、芽孢桿菌與低聚糖混合復(fù)配后得到粉劑產(chǎn)品，能夠有效的避免生產(chǎn)過程中菌種在低溫干燥下死亡，從而得到活菌數(shù)高達(dá)10¹⁰cfu/g的微生態(tài)制劑，且微生態(tài)制劑中含有的低聚糖具有穩(wěn)定性好、耐熱耐酸、抗霉菌和低吸濕性的優(yōu)點，并能促進(jìn)畜禽腸胃中的雙歧桿菌繁殖，從而配合生物活性物質(zhì)改善畜禽的腸胃功能。該微生態(tài)制劑可用于預(yù)防或治療動物腹瀉、提高動物免疫力、提高動物抗應(yīng)激能力、增強動物消化功能或促進(jìn)動物生長。

具體實施方式

為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

下面對本發(fā)明實施例的微生態(tài)制劑與制備方法及凍干保護(hù)劑進(jìn)行具體說明。

本發(fā)明實施例提供了一種凍干保護(hù)劑，以質(zhì)量百分比計，其包括15～18％的脫脂奶粉、1～2％的水蘇糖、0.1～0.5％的谷氨酸鈉及0.5～1％的乳糖，余量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5％的甘油的水溶液。

本發(fā)明實施例提供的凍干保護(hù)劑采用甘油的水溶液作為載體，并加入適當(dāng)?shù)拿撝谭邸⑺K糖、谷氨酸鈉及乳糖進(jìn)行配合，能夠在低溫干燥時對微生態(tài)菌種進(jìn)行保護(hù)，降低菌種低溫干燥時的失活率，提高產(chǎn)品的活菌數(shù)。其中，甘油能夠在凍結(jié)和干燥過程中防止活性組分產(chǎn)生變性；乳糖和水蘇糖能夠起到報水作用和成形作用，避免水分和有效成分快速流失；谷氨酸鈉能夠調(diào)節(jié)溶液的ph變化，避免速凍過程中ph變化產(chǎn)生影響；脫脂奶粉作為緩沖劑能夠避免溶液中的蛋白質(zhì)變性失活，其含有的蛋白質(zhì)直徑在1nm～2nm之間，脫脂奶粉的水溶液形成的膠體溶液能夠?qū)w進(jìn)行保護(hù)，由于蛋白質(zhì)分子比細(xì)菌小得多，所以細(xì)菌顆粒處于蛋白質(zhì)分子的包圍之中，既可阻止菌體聚合，又有利于菌體吸收和轉(zhuǎn)化蛋白質(zhì)，保持細(xì)菌活性。

本發(fā)明實施例還提供了一種微生態(tài)制劑的制備方法，其包括以下步驟：

s1、分別將乳酸菌和芽孢桿菌培養(yǎng)得到乳酸菌泥和芽孢桿菌泥；

其中，乳酸菌包括嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌中的至少一種，乳酸菌的培養(yǎng)方法是：將選取的乳酸菌分別接種于乳酸菌固體培養(yǎng)基上，并在36～38℃下培養(yǎng)36～48h得到培養(yǎng)菌種，將每個培養(yǎng)菌種分別接種2環(huán)于乳酸菌液體培養(yǎng)基裝載量達(dá)到800ml的1000ml三角瓶中，并在36～38℃下培養(yǎng)32～36h后等體積混合得到第一培養(yǎng)液，將第一培養(yǎng)液按0.3～0.4％的體積接種量接種于乳酸菌增菌培養(yǎng)基中于36～38℃下培養(yǎng)28～32h，并于3000～3500r/min下離心6～8min，得到乳酸菌泥。

乳酸菌固體培養(yǎng)基包含：蛋白胨8.0～10.0g/l，牛肉膏8.0～10.0g/l，酵母粉4.0～5.0g/l，葡萄糖15.0～20.0g/l，乙酸鈉4.0～5.0g/l，檸檬酸二銨1.0～2.0g/l，tween800.5～1.0g/l，k2hpo41.0～2.0g/l，mgso4·7h2o0.4～0.6g/l，mnso4·h2o0.2～0.4g/l，瓊脂15.0～18.0g/l，乳酸菌固體培養(yǎng)基的ph為6.8，且在121℃下高壓滅菌20min后使用。其中，乳酸菌固體培養(yǎng)基與乳酸菌液體培養(yǎng)基的區(qū)別在于乳酸菌液體培養(yǎng)基中不包含瓊脂。

乳酸菌增菌培養(yǎng)基包括蛋白胨9.0～10g/l，牛肉膏7.0～8.0g/l，酵母粉4.0～5.0g/l，葡萄糖15.0～16.0g/l，乙酸鈉4.0～5.0g/l，檸檬酸二銨1.0～2.0g/l，tween801.0～1.5g/l，k2hpo41.0～2.0g/l，mgso4·7h2o0.4～0.6g/l，mnso4·h2o0.2～0.4g/l，乳酸菌增菌培養(yǎng)基的ph為6.8～7.0，且在121℃下高壓滅菌20min后使用。

其中，芽孢桿菌包括枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌中的至少一種，芽孢桿菌的培養(yǎng)方法是：將選取的芽孢桿菌分別接種于芽孢桿菌固體培養(yǎng)基上，并在36～38℃下培養(yǎng)18～24h得到培養(yǎng)菌種，將每個培養(yǎng)菌種均接種2環(huán)于芽孢桿菌液體培養(yǎng)基裝載量為200ml的1000ml三角瓶中，每個培養(yǎng)菌種均制作1～5瓶，置于搖床中于150～200r/min和36～38℃培養(yǎng)18～24h后等體積混合得到第二培養(yǎng)液，將第二培養(yǎng)液按0.4～0.5％的體積接種量接種于裝載芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基中于36～38℃下培養(yǎng)20～24h，并于3000～3500r/min下離心6～8min，得到芽孢桿菌泥。

芽孢桿菌固體培養(yǎng)基包括：蛋白胨9.0～10.0g/l，酵母粉4.0～5.0g/l，nacl4.0～5.0g/l，瓊脂12.0～15.0g/l。芽孢桿菌固體培養(yǎng)基的ph為7.0，并于121℃下高壓滅菌20分鐘后使用。其中，芽孢桿菌固體培養(yǎng)基與芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的區(qū)別在于芽孢桿菌液體培養(yǎng)基中不包含瓊脂。

芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基包括蛋白胨9.0～10.0g/l，酵母粉4.0～5.0g/l，nacl4.0～5.0g/l，caco31.5～2.0g/l，mnso4·h2o0.005～0.010g/l，芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基的ph為7.0，并于121℃下高壓滅菌20分鐘后使用。

s2、將乳酸菌泥和芽孢桿菌泥分別與凍干保護(hù)劑按1：3～4的質(zhì)量比混合，并在-50～-60℃下冷凍2.5～3h后真空干燥得到乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉；

s3、將乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉混合，并加入低聚糖混合均勻。優(yōu)選的，將乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉按照80～100：1的活菌數(shù)比混合，并加入低聚糖混合使活菌數(shù)達(dá)到1×10¹⁰～2×10¹⁰cfu/g，其中低聚糖優(yōu)選采用果寡糖、異麥芽低聚糖和低聚木糖中的至少一種。

本發(fā)明實施例提供的微生態(tài)制劑的制備方法分別使用乳酸菌固體培養(yǎng)基和乳酸菌增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌中的至少一種得到乳酸菌泥，并使用芽孢桿菌固體培養(yǎng)基和芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌中的至少一種，得到芽孢桿菌泥，將乳酸菌泥和芽孢桿菌泥分別與凍干保護(hù)劑按1：3～4的質(zhì)量比混合，并在-50～-60℃下冷凍2.5～3h后真空干燥得到乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉，并將乳酸菌凍干粉和芽孢桿菌凍干粉按照比例混合后加入果寡糖、異麥芽低聚糖和低聚木糖中的至少一種組成的低聚糖，得到活菌數(shù)達(dá)到1×10¹⁰～2×10¹⁰cfu/g的微生態(tài)制劑成品，且微生態(tài)制劑成品中乳酸菌和芽孢桿菌的活菌數(shù)之比為80～100：1。該微生態(tài)制劑的制備方法能夠?qū)⒍喾N乳酸菌、芽孢桿菌分別發(fā)酵培養(yǎng)得到菌泥，并使用凍干保護(hù)劑保護(hù)后經(jīng)低溫冷凍干燥，復(fù)配混合低聚糖后得到粉劑產(chǎn)品，能夠有效的避免菌種在低溫干燥下死亡，從而得到活菌數(shù)高達(dá)10¹⁰cfu/g的微生態(tài)制劑，且微生態(tài)制劑中含有的低聚糖具有穩(wěn)定性好、耐熱耐酸、抗霉菌和低吸濕性的優(yōu)點，并能促進(jìn)畜禽腸胃中的雙歧桿菌繁殖，從而配合生物活性物質(zhì)改善畜禽的腸胃功能。該微生態(tài)制劑制備方法工藝簡單可靠，操作方便，方便進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)且生產(chǎn)成本低。

本發(fā)明還提供了使用上述微生態(tài)制劑的制備方法制備得到的微生態(tài)制劑，其包括按質(zhì)量比為45～50：1～1.5：450～500混合的乳酸菌菌粉、芽孢桿菌菌粉和低聚糖；其中乳酸菌菌粉的活菌數(shù)≥1×10¹¹cfu/g，芽孢桿菌菌粉的活菌數(shù)≥5×10¹⁰cfu/g。該微生態(tài)制劑富含生物活性物質(zhì)與多種低聚糖益生元，且其溶解性良好，可以滲入到飼料中使用，還可以直接溶解在水中使用，提高了畜禽的攝入率。

本發(fā)明還提供了上述微生態(tài)制劑的應(yīng)用，其用于制備飼料添加劑或飼料，特別是用于預(yù)防或治療動物腹瀉、提高動物免疫力、提高動物抗應(yīng)激能力、增強動物消化功能或促進(jìn)動物生長的飼料添加劑或飼料。本發(fā)明實施例提供的微生態(tài)制劑通過改善動物的腸道微生態(tài)菌群的活性來減少腹瀉帶來的應(yīng)激、通過提高動物的免疫力來抵抗各種疾病所帶來的應(yīng)激、通過微生態(tài)制劑的酸味具有的誘食性與適口性來減少由于換料帶來的應(yīng)激，在多方面配合的條件下改善動物的腸胃消化功能，提高動物的免疫力和抗應(yīng)激能管理，促進(jìn)動物生長。

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。

本實施例提供的乳酸菌和芽孢桿菌均購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，其中，植物乳桿菌(保藏編號cicc22703)、嗜酸乳桿菌(保藏編號cicc22150)、乳酸乳球菌(保藏編號cicc23609)、枯草芽孢桿菌(保藏編號cicc21095)、枯草芽孢桿菌(保藏編號cicc21164)、地衣芽孢桿菌(保藏編號cicc20684)、地衣芽孢桿菌(保藏編號cicc21738)。

實施例1

本實施例提供了一種微生態(tài)制劑的制備方法，其包括以下步驟：

s110、將植物乳桿菌(保藏編號cicc22703)、嗜酸乳桿菌(保藏編號cicc22150)、乳酸乳球菌(保藏編號cicc23609)菌種分別接種于乳酸菌固體培養(yǎng)基上，在37℃下培養(yǎng)40h，分別挑取各菌種2環(huán)接種于乳酸菌液體培養(yǎng)基裝載量為800ml的1000ml三角瓶中，在37℃下培養(yǎng)35h得到第一培養(yǎng)液。乳酸菌固體培養(yǎng)基按照以下方法配制：蛋白胨10.0g/l，牛肉膏10.0g/l，酵母粉5.0g/l，葡萄糖20.0g/l，乙酸鈉5.0g/l，檸檬酸二銨2.0g/l，tween801.0g/l，k2hpo42.0g/l，mgso4·7h2o0.6g/l，mnso4·h2o0.2g/l，瓊脂18.0g/l，其ph為6.8，配置后于121℃下高壓處理20min滅菌。乳酸菌固體培養(yǎng)基與乳酸菌液體培養(yǎng)基的區(qū)別在于乳酸菌液體培養(yǎng)基中不包含瓊脂。

s120、將s110得到的各個第一培養(yǎng)液混合后，按照0.4％的體積接種量接種于乳酸菌增菌培養(yǎng)基裝載量為60％的1噸厭氧發(fā)酵罐中，在37℃增菌培養(yǎng)32h后，在3500r/min下離心處理5min，獲得乳酸菌菌泥，收集乳酸菌菌泥，將凍干保護(hù)劑與乳酸菌菌泥按體積比為4：1的比例混合，在-60℃速凍4小時，隨后放入冷凍干燥機中凍干32h收集得到乳酸菌凍干菌粉。乳酸菌增菌培養(yǎng)基按照以下方法配制：蛋白胨10.0g/l，牛肉膏8.0g/l，酵母粉5.0g/l，葡萄糖15.0g/l，乙酸鈉5.0g/l，檸檬酸二銨2.0g/l，tween801.0g/l，k2hpo42.0g/l，mgso4·7h2o0.4g/l，mnso4·h2o0.2g/l，其ph為6.8～7.0，配置后于121℃下高壓處理20min滅菌。凍干保護(hù)劑包括，以質(zhì)量百分比計，包括18％的脫脂奶粉、1.5％的水蘇糖、0.3％的谷氨酸鈉、1％的乳糖，其余的為質(zhì)量濃度0.5％的甘油的水溶液。

s130、將枯草芽孢桿菌(保藏編號cicc21095)、枯草芽孢桿菌(保藏編號cicc21164)、地衣芽孢桿菌(保藏編號cicc20684)、地衣芽孢桿菌(保藏編號cicc21738)菌種分別接種于芽孢桿菌固體培養(yǎng)基上，在37℃下培養(yǎng)24h，各菌種均挑取2環(huán)接種于芽孢桿菌液體培養(yǎng)基裝載量為200ml的1000ml三角瓶中，每株菌做5瓶，放入搖床中在200r/min下37℃培養(yǎng)24h得到第二培養(yǎng)液。芽孢桿菌固體培養(yǎng)基按照以下方法配制：蛋白胨10.0g/l，酵母粉5.0g/l，nacl5.0g/l，瓊脂15.0g/l，其ph為7.0，配置后于121℃下高壓處理20min滅菌。芽孢桿菌固體培養(yǎng)基與芽孢桿菌液體培養(yǎng)基的區(qū)別在于芽孢桿菌液體培養(yǎng)基中不包含瓊脂。

s140、將s130得到的全部第二培養(yǎng)液混合后，按照0.5％的體積接種量接種于芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基裝載量為60％的1噸發(fā)酵罐中，在37℃下培養(yǎng)20h，并在3500r/min下離心處理5min，獲得芽孢桿菌菌泥，將凍干保護(hù)劑與芽孢桿菌菌泥按體積比為4：1的比例混合，并在-60℃速凍3小時，放入冷凍干燥機中凍干32小時收集得到芽孢桿菌凍干菌粉。芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基按照以下方法配制：蛋白胨10.0g/l，酵母粉5.0g/l，nacl5.0g/l，caco32.0g/l，mnso4·h2o0.005g/l，其ph為7.0，配置后于121℃下高壓處理20min滅菌。

s150、將s120獲得的乳酸菌凍干菌粉與s140獲得的芽孢桿菌凍干菌粉按活菌量比100：1的比例混合，再與低聚糖混合，使活菌數(shù)達(dá)到1×10¹⁰cfu/g，再按照100g/袋進(jìn)行真空包裝。

經(jīng)檢測，本發(fā)明制備得到的微生態(tài)制劑中嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌的總菌數(shù)≥9.9×10⁹cfu/g，枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌的總菌數(shù)≥10⁸cfu/g。

實施例2

本實施例提供了一種微生態(tài)制劑的制備方法，其包括以下步驟：

s210、將植物乳桿菌(保藏編號cicc22703)、嗜酸乳桿菌(保藏編號cicc22150)、乳酸乳球菌(保藏編號cicc23609)菌種分別接種于乳酸菌固體培養(yǎng)基上，在36℃下培養(yǎng)48h，分別挑取各菌種2環(huán)接種于乳酸菌液體培養(yǎng)基裝載量為800ml的1000ml三角瓶中，在36℃下培養(yǎng)32h得到第一培養(yǎng)液。乳酸菌固體培養(yǎng)基按照以下方法配制：蛋白胨9.0g/l，牛肉膏9.0g/l，酵母粉4.5g/l，葡萄糖18.0g/l，乙酸鈉4.0g/l，檸檬酸二銨1.5g/l，tween801.0g/l，k2hpo42.0g/l，mgso4·7h2o0.6g/l，mnso4·h2o0.4g/l，瓊脂15.0g/l，其ph為6.8，配置后于121℃下高壓處理20min滅菌。

s220、將s210得到的各個第一培養(yǎng)液混合后，按照0.3％的體積接種量接種于乳酸菌增菌培養(yǎng)基裝載量為60％的1噸厭氧發(fā)酵罐中，在37℃增菌培養(yǎng)30h后，在3500r/min下離心處理8min，獲得乳酸菌菌泥，收集乳酸菌菌泥，將凍干保護(hù)劑與乳酸菌菌泥按體積比為3：1的比例混合，在-55℃速凍4小時，隨后放入冷凍干燥機中凍干32h收集得到乳酸菌凍干菌粉。乳酸菌增菌培養(yǎng)基按照以下方法配制：蛋白胨9.0g/l，牛肉膏8.0g/l，酵母粉5.0g/l，葡萄糖16.0g/l，乙酸鈉4.5g/l，檸檬酸二銨1.5g/l，tween800.8g/l，k2hpo42.0g/l，mgso4·7h2o0.6g/l，mnso4·h2o0.4g/l，其ph為6.8，配置后于121℃下高壓處理20min滅菌。凍干保護(hù)劑包括，以質(zhì)量百分比計，包括18％的脫脂奶粉、1.5％的水蘇糖、0.3％的谷氨酸鈉、1％的乳糖，其余的為質(zhì)量濃度0.5％的甘油的水溶液。

s230、將枯草芽孢桿菌(保藏編號cicc21095)、地衣芽孢桿菌(保藏編號cicc20684)、枯草芽孢桿菌(保藏編號cicc21164)、地衣芽孢桿菌(保藏編號cicc21738)菌種分別接種于芽孢桿菌固體培養(yǎng)基上，在37℃下培養(yǎng)18h，各菌種均挑取2環(huán)接種于芽孢桿菌固體培養(yǎng)基裝載量為150ml的1000ml三角瓶中，每株菌做3瓶，放入搖床中在180r/min下37℃培養(yǎng)20h得到第二培養(yǎng)液。芽孢桿菌固體培養(yǎng)基按照以下方法配制：蛋白胨9.0g，酵母粉5.0g，nacl4.5g，瓊脂15.0g，并使用蒸餾水定容至1.0l，其ph為7.0，配置后于121℃下高壓處理20min滅菌。

s240、將s230得到的全部第二培養(yǎng)液混合后，按照0.5％的體積接種量接種于芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基裝載量為60％的1噸發(fā)酵罐中，在37℃下培養(yǎng)20h，并在3500r/min下離心處理8min，獲得芽孢桿菌菌泥，將凍干保護(hù)劑與芽孢桿菌菌泥按體積比為3：1的比例混合，并在-60℃速凍3小時，放入冷凍干燥機中凍干32小時收集得到芽孢桿菌凍干菌粉。芽孢桿菌增菌培養(yǎng)基按照以下方法配制：蛋白胨9.0g/l，酵母粉4.5g/l，nacl4.5g/l，caco31.8g/l，mnso4·h2o0.01g/l，其ph為7.0，配置后于121℃下高壓處理20min滅菌。

s250、將s220獲得的乳酸菌凍干菌粉與s240獲得的芽孢桿菌凍干菌粉按活菌量比100：1的比例混合，再與低聚糖混合，使活菌數(shù)達(dá)到1×10¹⁰cfu/g，再按照100g/袋進(jìn)行真空包裝。

經(jīng)檢測，本發(fā)明制備得到的微生態(tài)制劑中嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、乳酸乳球菌的總菌數(shù)≥9.9×10⁹cfu/g，枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌的總菌數(shù)≥10⁸cfu/g。

以下對本發(fā)明實施例提供的微生態(tài)制劑進(jìn)行動物喂養(yǎng)檢測，結(jié)果如下。

1、飼喂微生態(tài)制劑對愛拔益加肉雞(aa白羽肉雞)生長的影響。

1.1、試驗材料。

微生態(tài)制劑按照實施例1中方法制備得到。

1.2、試驗方法及結(jié)果。

選擇10000只aa肉雞隨機分成2組(公母比例相同)，分別是對照組和微生態(tài)制劑組，2組日糧相同，飲水方法：1000只雞每日用量為10g，將微生態(tài)制劑干燥粉劑加入葡萄糖鹽水(糖1％、鹽0.3％)中稍微攪拌均勻后加入飲水容器中供雞飲用(加水量在2小時內(nèi)飲用完)，前4周每天飲水一次，4～7周后每隔1天飲用一次，直至出欄。每天注意觀察雞生長情況。結(jié)果如下表1所示。

表1aa白羽肉雞飼喂微生態(tài)制劑的效果

從表1可以看出，使用本發(fā)明實施例提供的微生態(tài)制劑可以每5000羽白羽肉雞節(jié)省飼料276斤，成活率提高4.6％，出欄平均體重增加0.09kg，而且欄舍中氣味得到明顯改善。

2、麻雞飼喂微生態(tài)制劑的效果。

2.1、試驗材料。

微生態(tài)制劑按照實施例2中方法制備得到。

2.2、試驗方法及結(jié)果。

選擇2000只麻雞隨機分成2組(公母比例相同)，分別是對照組和微生態(tài)制劑組，2組日糧成相同，飲水方法：1000只雞每日用量10g，將微生態(tài)制劑干燥粉劑加入葡萄糖鹽水(糖1％、鹽0.3％)中稍微攪拌均勻后加入飲水容器中供雞飲用(加水量在2小時內(nèi)飲用完)，前30d每天飲水一次，30～90d周后每隔1天飲用一次，直至出欄。每天注意觀察雞生長情況。結(jié)果如下表2所示。

表2麻雞飼喂微生態(tài)制劑的效果

從表2可以看出，使用本發(fā)明實施例提供的微生態(tài)制劑可以每1000羽麻雞節(jié)省飼料95.2kg，成活率提高0.9％，出欄平均體重增加0.1kg。

3、飼喂微生態(tài)制劑對哺乳仔豬生長的影響。

3.1、試驗材料。

微生態(tài)制劑按照實施例1中方法制備得到。

3.2、試驗方法及結(jié)果。

選擇26窩出生間隔不超過2天的杜長大哺乳仔豬進(jìn)行試驗，隨機分成兩組，每組26窩，分別是對照組與微生態(tài)制劑組。飼喂方法：出生的前3d，每天一次，直接灌喂0.5g，4～10d將微生態(tài)制劑干粉撒在小托盤上，供小豬自由舔食，11～28d將干粉與教槽料混合飼喂，全過程供給劑量不變。分別在試驗的開始與結(jié)束進(jìn)行稱重，并記錄哺乳仔豬的采食量、生長狀況、糞便情況。

表3哺乳仔豬飼喂微生態(tài)制劑的效果

從表3可以看出，試驗組與對照組相比，腹瀉率降低3.80％，死亡率降低3.32％。

4、飼喂微生態(tài)制劑對保育豬生長性能的影響。

4.1、試驗材料。

微生態(tài)制劑按照實施例2中方法制備得到。

4.2、試驗方法及結(jié)果。

選擇84頭35日齡杜長大保育豬，隨機分成三組，分別是對照組、抗生素組(金霉素100g/t、磺胺100g/t)、微生態(tài)制劑組(微生態(tài)制劑干粉400g/t)，每組28頭，試驗28d，分別在試驗的開始與結(jié)束進(jìn)行稱重，并記錄好豬的采食量、生長狀況、糞便情況。

表4保育豬喂微生態(tài)制劑的效果

從表4可以看出，微生態(tài)制劑組與對照組相比，腹瀉率降低5.07％，日增重增加25g，料肉比降低0.1，微生態(tài)制劑組與抗生素組相比下，效果比較接近，而且微生態(tài)制劑組豬舍臭味明顯降低，飼養(yǎng)環(huán)境得到良好改善。

綜上所述，本發(fā)明提供了一種能夠有效地治療及預(yù)防動物腸道疾病、調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)平衡、增強動物免疫力和抗應(yīng)激能力的微生態(tài)制劑，本發(fā)明的微生態(tài)制劑可以通過添加到飼料中或飲水進(jìn)行飼喂，從而達(dá)到治療和預(yù)防畜禽消化道疾病，提高動物機體免疫力和抗應(yīng)激能力，促進(jìn)動物生長發(fā)育，減少抗生素的使用，提高動物的成活率。本發(fā)明實施例提供的微生態(tài)制劑的制備方法工藝簡單，操作方便，成本低廉，適合大規(guī)模生產(chǎn)使用。

以上所描述的實施例是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。本發(fā)明的實施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。