本發(fā)明涉及一種專門用于培養(yǎng)厭氧菌的裝置和方法，尤其是涉及一種用苛氧菌進(jìn)行厭氧培養(yǎng)的裝置及方法。

背景技術(shù)：

厭氧菌(anaerobicbacteria)是指一類需要生長在低氧或無氧條件下的微生物，因?yàn)閰捬跷⑸餂]有完整的代謝酶系，故以無氧發(fā)酵的方式進(jìn)行能量代謝，其生存需在較低的氧化還原電勢條件下才能進(jìn)行。動(dòng)物體內(nèi)的一些低氧化還原電勢的組織為厭氧菌的生長繁殖提供了有利條件。厭氧菌的研究一直是臨床醫(yī)學(xué)的重心。厭氧菌可進(jìn)入血液引起菌血癥、敗血癥等，嚴(yán)重威脅病人生命。近10年來研究證明，無芽胞厭氧桿菌及球菌是細(xì)菌性感染的重要原因之一，當(dāng)深部膿腫、敗血癥等常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢查陰性時(shí)，往往源于厭氧菌感染.厭氧菌感染是一種內(nèi)源性感染，病原菌遍及臨床各科，人體的各個(gè)部位，各種器官均可發(fā)生厭氧菌感染，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，10％的菌血癥可檢出厭氧菌，牙源性口面部感染病例中有94％，吸入腳市炎及肺膿腫時(shí)有93％，婦產(chǎn)科各種感染性疾病中有100％，直腸周圍膿腫有77％可檢出厭氧菌，而且有相當(dāng)一部分病例是單一的厭氧菌感染。

同時(shí)，厭氧菌是研究微觀生態(tài)平衡、失調(diào)和調(diào)整的重要部分，在消化道菌群中，99％以上為厭氧菌，它們組成了重要的消化菌群，并在生物拮抗、營養(yǎng)、免疫等方面具有不可估量的意義。另外，以消化道菌群為研究對(duì)象的微生態(tài)學(xué)已取得了大量科研成果，厭氧微生物的分離、培養(yǎng)、篩選，有利于發(fā)現(xiàn)更多有益功能的微生物，豐富微生物菌種質(zhì)資源，有利于人類進(jìn)一步揭示厭氧微生物與宿主營養(yǎng)、免疫和健康這間的關(guān)系。目前，國內(nèi)外在醫(yī)學(xué)、食品和飼料領(lǐng)域等眾多科研和企業(yè)對(duì)此領(lǐng)域產(chǎn)生了濃厚興趣。這些研究都說明了厭氧菌的研究對(duì)于人或經(jīng)濟(jì)物種的疾病防治具有重大意義。

目前常見的厭氧分離培養(yǎng)方法常采用瓊脂稀釋振蕩法(agarshakedilutionmethod)、亨蓋特滾管技術(shù)(hungateroll-tubetechnique)、厭氧罐(anaerobicjar)或厭氧袋(bio-bag)培養(yǎng)法、厭氧手套操作箱。近幾年，有些學(xué)者將應(yīng)用于好氧培養(yǎng)的高通量分選技術(shù)應(yīng)用到厭氧培養(yǎng)。

瓊脂稀釋振蕩法是將菌液進(jìn)行濃度梯度稀釋后注入50℃左右的無氧液態(tài)瓊脂培養(yǎng)基試管中，振蕩使混勻，待培養(yǎng)基凝固之后，加入石蠟密封，培養(yǎng)一段時(shí)間后可在瓊脂柱內(nèi)部或試管內(nèi)壁長出肉眼可辨菌落。該方法的缺點(diǎn)在于由于有的菌落會(huì)生長在凝固的瓊脂中，所以不利于觀察菌落形態(tài)，也給單菌落的挑取帶來不便。

亨蓋特滾管技術(shù)是美國著名的微生物學(xué)家hungate在1950年發(fā)明，后經(jīng)不斷改進(jìn)，目前應(yīng)用也較多。其原理是利用高溫加熱的銅柱消耗空氣中的氧氣反應(yīng)來獲得高純氮?dú)馀囵B(yǎng)環(huán)境，并在培養(yǎng)基配制和分裝過程中使用高純氮?dú)怛?qū)逐空氣。從培養(yǎng)基的配制到菌種的接種及培養(yǎng)等過程都在高度無氧條件下，從而保證嚴(yán)格厭氧菌的存活。該方法是將菌液進(jìn)行濃度梯度稀釋后注入50℃左右的無氧液態(tài)瓊脂培養(yǎng)基中，然后用滾管機(jī)滾管或?qū)⒃嚬芩椒胖糜诒鶋K中迅速滾動(dòng)，使含有菌的培養(yǎng)基在試管內(nèi)壁上凝固成一層勻質(zhì)的瓊脂膜。該技術(shù)與瓊脂稀釋振蕩法相比，克服了前者難以觀察單菌落的缺點(diǎn)，但單菌落的挑取仍然不容易進(jìn)行，操作繁瑣，技術(shù)要求較高。

厭氧袋是一種塑料材質(zhì)、透明而不透氣的可密封的袋子，裝入培養(yǎng)皿后，再放入產(chǎn)氣袋，使袋內(nèi)氧氣被消耗。也可抽真空/充氮?dú)夥磸?fù)進(jìn)行2-3次以排除袋內(nèi)氧氣。厭氧袋輕便易操作，是廣受推崇的厭氧培養(yǎng)容器。但該方法厭氧袋容量小，且已破損漏氣，使得環(huán)境很不恒定，培養(yǎng)批次不夠均一。

厭氧罐法是把培養(yǎng)物放進(jìn)罐中，然后抽氣/充氣(氮?dú)饣蚧旌蠚怏w，含氫氣)，其內(nèi)部的氧氣和氫氣在催化劑的作用下反應(yīng)生成水，從而清除了內(nèi)部少量的氧氣。厭氧手套操作箱的出現(xiàn)，使厭氧菌的研究得到了發(fā)展，尤其是培養(yǎng)、研究嚴(yán)格厭氧菌，其解決了長久以來使用厭氧罐或厭氧袋無法進(jìn)行厭氧操作的問題，使厭氧培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)了類似好氧培養(yǎng)的過程。該儀器采用抽真空充氮?dú)獾姆椒ㄒ耘懦龑?shí)驗(yàn)操作過程中帶入的大部分氧氣。隨后真空/充氮的技術(shù)漸漸顯現(xiàn)出不足之處。最大的缺點(diǎn)在于每次操作過程中樣品或?qū)嶒?yàn)用品放入箱內(nèi)時(shí)，都要反復(fù)進(jìn)行抽氣/充氮，過程繁復(fù)且耗費(fèi)大量氣體；真空泵磨損也會(huì)使維護(hù)成本升高。后來，有人針對(duì)這些缺陷對(duì)厭氧手套箱進(jìn)行了技術(shù)升級(jí)。實(shí)現(xiàn)了無真空充氮操作，利用鈀的催化作用將厭氧操作箱內(nèi)的氧氣與混合在氮?dú)庵械臍錃獯呋伤院谋M厭氧手套操作箱內(nèi)部的氧氣。但是需要使用的氫氣給厭氧手套操作箱的使用帶來了一定的安全隱患。厭氧手套操作箱經(jīng)過多年的改良和設(shè)計(jì)，除了運(yùn)行成本高等問題，是目前做厭氧研究最為便利有效的儀器。

自動(dòng)氧凈厭氧培養(yǎng)皿(oxyplatetm)是由美國oxyrase公司首次研發(fā)并投入生產(chǎn)。該培養(yǎng)皿專為厭氧培養(yǎng)設(shè)計(jì)，其內(nèi)含有特定的酶系，可以消除培養(yǎng)或操作過程中帶入的氧氣，并可以持續(xù)很長時(shí)間，十分利于厭氧培養(yǎng)。但目前oxyplatetm由于制作成本高，所以價(jià)格昂貴，國內(nèi)較少采用，多在臨床醫(yī)學(xué)上采用以分離厭氧致病菌，難以廣泛應(yīng)用。

分離嗜熱厭氧菌的高通量法是hamilton-brehm等在2012年借助功能強(qiáng)大的流式細(xì)胞儀和96孔板實(shí)現(xiàn)對(duì)嗜熱厭氧菌高通量篩選及培養(yǎng)方法，其培養(yǎng)環(huán)節(jié)在厭氧手套操作箱中進(jìn)行。該方法的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)現(xiàn)了厭氧培養(yǎng)的高通量，缺點(diǎn)是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行篩選的過程是在好氧的環(huán)境中進(jìn)行的，不利于分離嚴(yán)格厭氧菌；流式細(xì)胞儀及厭氧手套操作箱都是昂貴的大型儀器，且維護(hù)費(fèi)用高。

海藻酸鈣微球包埋法是brner等在2013年發(fā)明的一種厭氧菌培養(yǎng)方法。其利用海藻酸鹽制備微球的過程中將單個(gè)微生物細(xì)胞包埋進(jìn)微球中，然后置于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，微生物細(xì)胞通過微球攝取培養(yǎng)基的養(yǎng)分。整個(gè)過程需在厭氧手套操作箱中進(jìn)行，也可實(shí)現(xiàn)高通量。該方法與上述分離嗜熱厭氧菌的高通量法相比，優(yōu)點(diǎn)在于整個(gè)包埋、培養(yǎng)過程都可在厭氧操作箱中進(jìn)行，利于分離嚴(yán)格厭氧菌和生長較慢的菌。缺點(diǎn)也是需要流式細(xì)胞儀的分選，儀器昂貴，維護(hù)繁瑣。

以上幾種方法都存在自身難以克服的缺陷，或操作繁瑣，或設(shè)備昂貴，操作繁瑣，耗時(shí)耗材，或形成絕對(duì)無氧環(huán)境需要較長時(shí)間，或容易漏氣而使?fàn)I造的無氧環(huán)境難以長久維持等。由于這些特點(diǎn)，有關(guān)厭氧菌的試驗(yàn)研究工作，就難免受到種種技術(shù)條件的限制，不易達(dá)到目的。因此，設(shè)計(jì)一種價(jià)格低廉，方法簡便，不需催化劑的簡單實(shí)用的厭氧菌培養(yǎng)裝置就十分必要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種結(jié)構(gòu)簡單，操作方法簡便，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，適宜廣泛推廣，不僅能給臨床提供直接、有效、經(jīng)濟(jì)的診斷指標(biāo)，而且可提高厭氧菌的陽性檢出率的新型厭氧菌培養(yǎng)裝置。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種培養(yǎng)出的厭氧菌陽性率高，結(jié)果可靠，方法簡單，適合各類微生物實(shí)驗(yàn)室的厭氧菌培養(yǎng)，簡單易學(xué)，便于普及推廣的新型厭氧菌培養(yǎng)的方法。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)手段：

本發(fā)明的一種厭氧菌培養(yǎng)裝置，由鋼制罐體1以及鋼制蓋體2組成，所述的鋼制罐體1與所述的鋼制蓋體2通過螺紋緊密連接；

所述的鋼制蓋體2的頂部設(shè)有提手10、出氣閥門8以及氧氣和溫度顯示器9，鋼制蓋體2的內(nèi)部設(shè)有溫度傳感器探頭7以及氧氣檢測探頭11，溫度傳感器探頭7以及氧氣檢測探頭11與氧氣和溫度顯示器9相連；

所述的鋼制罐體1的內(nèi)部從下到上依次設(shè)置有1個(gè)儲(chǔ)液器皿3、1-3個(gè)培養(yǎng)皿擱板4、1個(gè)試管擱板6以及一個(gè)試管架5；所述的儲(chǔ)液器皿3用于盛裝亞硫酸鈉溶液；所述的培養(yǎng)皿擱板4用于放置培養(yǎng)皿；所述的試管架5上設(shè)置有多個(gè)孔，用于放入并固定試管；所述的試管擱板6用于承托試管；所述的儲(chǔ)液器皿3、培養(yǎng)皿擱板4、試管擱板6以及試管架5的邊緣由一個(gè)矩形框架12連接，拿出框架的同時(shí)可將儲(chǔ)液器皿3、培養(yǎng)皿擱板4、試管擱板6以及試管架5一并拿出；所述的鋼制罐體1的下部設(shè)有進(jìn)氣閥門13。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的鋼制蓋體2的內(nèi)部頂部設(shè)有硅膠墊，所述鋼制罐體1的罐口上邊緣設(shè)有硅膠墊，以保證蓋與管體螺紋蓋緊時(shí)起到進(jìn)一步密封的作用，已達(dá)到整個(gè)管體在使用時(shí)的氣密性。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的儲(chǔ)液器皿3的材質(zhì)為玻璃或樹脂。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的培養(yǎng)皿擱板4的材質(zhì)為鋼制或鋁合金。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的試管擱板6以及試管架5的材質(zhì)為鋁合金、樹脂或塑料。

在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述的矩形框架12的材質(zhì)為鋼制或鋁合金。

進(jìn)一步的，本發(fā)明還提出了一種使用所述的厭氧菌培養(yǎng)裝置培養(yǎng)厭氧菌的方法，包括如下步驟：

(1)制備培養(yǎng)標(biāo)本，即將擬厭氧培養(yǎng)的培養(yǎng)菌，接種到含有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或含有液體培養(yǎng)基的試管中；

(2)迅速配制2mol/l的亞硫酸鈉溶液加入儲(chǔ)液器皿內(nèi)，將步驟(1)制備的標(biāo)本樣品放置到培養(yǎng)層，固體培養(yǎng)基標(biāo)本放置在培養(yǎng)皿擱板上，液體培養(yǎng)基標(biāo)本放置在試管架上；

(3)將鋼制蓋體與鋼制罐體通過螺紋擰緊密封，擰緊進(jìn)氣閥門，打開出氣閥門，將真空泵軟管安裝在出氣閥門的出氣口，并啟動(dòng)真空泵，將培養(yǎng)罐子內(nèi)氣體抽出至罐內(nèi)壓力為200mmhg；然后將氮?dú)夤艿腊惭b于進(jìn)氣閥門，將氮?dú)馄胶庵?60mmhg，打開出氣閥門，將氮?dú)馀懦?，如此抽?充氣反復(fù)數(shù)次，殘留的氧氣由亞硫酸鈉溶液清除，觀察氧氣和溫度顯示器，當(dāng)氧氣濃度小于1％時(shí)進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)；

(4)將厭氧菌培養(yǎng)罐放置在37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，并定期觀察培養(yǎng)罐溫度和氧氣濃度，若發(fā)現(xiàn)氧氣濃度不達(dá)標(biāo)時(shí)，應(yīng)馬上進(jìn)行抽氣，并充入氮?dú)?，使培養(yǎng)罐氧氣濃度始終處于低氧或無氧的狀態(tài)。

其中，優(yōu)選的，所述的抽氣-充氣次數(shù)在5次以上，即可使容器內(nèi)氣體濃度接近通入氣的濃度。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明僅使用一鋼制培養(yǎng)罐附帶適宜的培養(yǎng)裝置和廉價(jià)的耗氧試劑(亞硫酸鈉)，即可創(chuàng)造低氧或無氧的厭氧菌培養(yǎng)環(huán)境。同時(shí)，本發(fā)明設(shè)置o2和溫度檢測裝置，可以做到對(duì)罐體內(nèi)培養(yǎng)環(huán)境實(shí)時(shí)監(jiān)測，可以保障厭氧菌培養(yǎng)良好培養(yǎng)環(huán)境。因此，其具備價(jià)格低廉，簡便實(shí)用，厭氧培養(yǎng)環(huán)境可控，無需催化劑的簡單實(shí)用的特點(diǎn)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的厭氧菌培養(yǎng)裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。

圖中：1-鋼制罐體；2-鋼制蓋體；3-儲(chǔ)液器皿；4-培養(yǎng)皿擱板；5-試管架；6-試管擱板；7-溫度傳感器探頭；8-出氣閥門；9-氧氣和溫度顯示器；10-提手；11-氧氣檢測探頭；12-矩形框架；13-進(jìn)氣閥門；14-培養(yǎng)皿；15-試管。

具體實(shí)施方式

下面主要結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)厭氧菌培養(yǎng)裝置及培養(yǎng)方法做進(jìn)一步詳細(xì)說明。

如圖1所示一種厭氧菌培養(yǎng)裝置，包括：鋼制罐體1、鋼制蓋體2、儲(chǔ)液器皿3、培養(yǎng)皿擱板4、試管架5、試管擱板6、溫度傳感器探頭7、出氣閥門8、氧氣和溫度顯示器9、提手10、氧氣檢測探頭11、鋼制矩形框架12、進(jìn)氣閥門13。

本發(fā)明的厭氧菌培養(yǎng)裝置由鋼制罐體1以及鋼制蓋體2組成，所述的鋼制罐體1與所述的鋼制蓋體2通過螺紋緊密連接，鋼制蓋體2的內(nèi)部頂部設(shè)有硅膠墊，鋼制罐體1的罐口上邊緣設(shè)有硅膠墊，以達(dá)到鋼制蓋體2與鋼制罐體1通過螺紋緊密連接時(shí)起到進(jìn)一步密封的作用，保證整個(gè)罐體在使用時(shí)的氣密性；鋼制蓋體2的頂部設(shè)有提手10、出氣閥門8以及氧氣和溫度顯示器9，鋼制蓋體2的內(nèi)部設(shè)有溫度傳感器探頭7以及氧氣檢測探頭11，溫度傳感器探頭7以及氧氣檢測探頭11與氧氣和溫度顯示器9相連；鋼制罐體1的內(nèi)部從下到上依次設(shè)置有1個(gè)玻璃或樹脂材質(zhì)的儲(chǔ)液器皿3，厭氧菌培養(yǎng)時(shí)在儲(chǔ)液器皿3內(nèi)現(xiàn)配濃度為2mol/l的亞硫酸鈉溶液，鋼制或鋁合金材質(zhì)的2個(gè)培養(yǎng)皿擱板4，鋁合金、樹脂或塑料材質(zhì)的1個(gè)試管擱板6以及一個(gè)試管架5；所述的培養(yǎng)皿擱板4用于放置培養(yǎng)皿14；所述的試管架5上設(shè)置有多個(gè)孔，用于放入并固定試管15；所述的試管擱板6用于承托試管15；所述的儲(chǔ)液器皿3、培養(yǎng)皿擱板4、試管擱板6以及試管架5的邊緣由一個(gè)鋼制矩形框架12連接，通過該框架使得罐體內(nèi)部成為一個(gè)整體，拿出框架的同時(shí)可將儲(chǔ)液器皿3、培養(yǎng)皿擱板4、試管擱板6以及試管架5一并拿出，可以很方便的加入取樣劑，放置預(yù)培養(yǎng)器皿；鋼制罐體1的下部設(shè)有進(jìn)氣閥門13。

使用所述的厭氧菌培養(yǎng)裝置培養(yǎng)厭氧菌的方法，包括如下步驟：

(1)制備培養(yǎng)標(biāo)本，即將擬厭氧培養(yǎng)的培養(yǎng)菌，接種到含有固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或含有液體培養(yǎng)基的試管中；

(2)迅速配制2mol/l的亞硫酸鈉溶液加入儲(chǔ)液器皿內(nèi)，將步驟(1)制備的標(biāo)本樣品放置到培養(yǎng)層，固體培養(yǎng)基標(biāo)本放置在培養(yǎng)皿擱板上，液體培養(yǎng)基標(biāo)本放置在試管架上；

(3)將鋼制蓋體與鋼制罐體通過螺紋擰緊密封，擰緊進(jìn)氣閥門，打開出氣閥門，將真空泵軟管安裝在出氣閥門的出氣口，并啟動(dòng)真空泵，將培養(yǎng)罐子內(nèi)氣體抽出至罐內(nèi)壓力為200mmhg；然后將氮?dú)夤艿腊惭b于進(jìn)氣閥門，將氮?dú)馄胶庵?60mmhg，打開出氣閥門，將氮?dú)馀懦?，如此抽?充氣反復(fù)數(shù)次，殘留的氧氣由亞硫酸鈉溶液清除，觀察氧氣和溫度顯示器，當(dāng)氧氣濃度小于1％時(shí)進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)；

(4)將厭氧菌培養(yǎng)罐放置在37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，并定期觀察培養(yǎng)罐溫度和氧氣濃度，若發(fā)現(xiàn)氧氣濃度不達(dá)標(biāo)時(shí)，應(yīng)馬上進(jìn)行抽氣，并充入氮?dú)?，使培養(yǎng)罐氧氣濃度始終處于低氧或無氧的狀態(tài)。

其中，所述的抽氣-充氣次數(shù)在5次以上，即可使容器內(nèi)氣體濃度接近通入氣的濃度。

實(shí)施例1、產(chǎn)氣莢膜梭菌分離培養(yǎng)

1.1病料采集

采集表現(xiàn)典型下瀉癥狀雞的直腸內(nèi)容物；對(duì)病情嚴(yán)重或?yàn)l死雞則撲殺后剖檢，取小腸黏膜和內(nèi)容物。

樣品采集后標(biāo)記并迅速裝入冰盒，如果不能當(dāng)天帶回實(shí)驗(yàn)室處理則放入冰箱保存，運(yùn)輸過程要保證冰盒里溫度夠低，適宜放入些冰袋。

1.2細(xì)菌分離與純化

1.2.1增菌培養(yǎng)

取0.1～0.2g樣品放入已滅菌的含有ft液體培養(yǎng)基的試管內(nèi)。迅速配制2mol/l的亞硫酸鈉溶液加入儲(chǔ)液器皿3內(nèi)，將上接種病料的含有ft液體培養(yǎng)基的試管插入試管架5的孔洞中，底部與下方的試管擱板6接觸。將鋼制蓋體2蓋到鋼制罐體1上并擰緊，擰緊進(jìn)氣閥門13，打開出氣閥門8，將真空泵軟管安裝在出氣閥門13的出氣口，并啟動(dòng)真空泵，將罐體內(nèi)氣體抽出至罐內(nèi)壓力為200mmhg。然后將氮?dú)夤艿腊惭b于進(jìn)氣閥門13，將氮?dú)馄胶庵?60mmhg，打開出氣閥門8，將氮?dú)馀懦?，如此抽?充氣反復(fù)數(shù)次(在實(shí)際應(yīng)用中，若抽氣-充氣次數(shù)≥5，即可使容器內(nèi)氣體濃度接近通入氣的濃度)，殘留的氧氣由亞硫酸鈉溶液清除。觀察o2和溫度顯示器9，使o2濃度小于1％即可進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)。將經(jīng)過上述步驟處理的樣品及厭氧菌培養(yǎng)罐放置在37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)并定期觀察o2和溫度顯示器9。若發(fā)現(xiàn)o2濃度不達(dá)標(biāo)時(shí)，應(yīng)馬上進(jìn)行抽氣，并充入氮?dú)?。使培養(yǎng)罐內(nèi)o2濃度始終處于低氧或無氧的狀態(tài)。

1.2.2純化培養(yǎng)

將上接種病料的ft液體培養(yǎng)基的試管，37℃培養(yǎng)18h。增菌培養(yǎng)后，每個(gè)樣品分別稀釋至10^-2、10^-3和10^-4，取每個(gè)稀釋梯度200μl于tsc(含卵黃)平板上，用三角玻璃棒涂布均勻，將平板放入?yún)捬跖囵B(yǎng)罐中的平面培養(yǎng)層上后，重復(fù)1.2.1抽負(fù)壓、充氣的步驟，以達(dá)到厭氧菌培養(yǎng)所需要求。37℃培養(yǎng)18h后，挑取周圍有乳白色渾濁暈環(huán)的疑似菌落，因產(chǎn)氣莢膜梭菌分解卵黃中的卵磷脂導(dǎo)致在含有卵黃的瓊脂平板上菌落周圍會(huì)出現(xiàn)乳白色渾濁圈。在tsc(不含卵黃)平板上用三線法劃板，在厭氧培養(yǎng)裝置培養(yǎng)18h，再挑取菌落中心為黑色的菌落，反復(fù)純化培養(yǎng)2-3次。將中心為黑色的單菌落接種于裝有ft液體培養(yǎng)基的試管中，重復(fù)1.2.1步驟，即可得到產(chǎn)氣莢膜梭菌純培養(yǎng)物。

以上說明對(duì)本發(fā)明而言只是說明性的，而非限制性的，本領(lǐng)域技術(shù)人員理解，在不脫離權(quán)利要求限定的精神和范圍的情況下，可作出許多修改、變化或等效，但都將落入發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。