技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一類具有抗腫瘤活性的甘草查爾酮a二氫嘧啶類化合物及其合成方法。
背景技術(shù)：
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腫瘤已嚴(yán)重威脅到人類的健康，尋找有效安全、毒副作用小的抗腫瘤藥物一直是腫瘤藥物研發(fā)工作者孜孜以求的目標(biāo)。隨著藥物化學(xué)的發(fā)展，以嘧啶環(huán)為結(jié)構(gòu)母核的化合物在腫瘤治療中的作用引起廣泛關(guān)注。
甘草查爾酮a被視為脹果甘草的種屬特異性成分，其結(jié)構(gòu)如下所示。
近年來，研究發(fā)現(xiàn)甘草查爾酮a具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗腫瘤、降脂、解痙和抗瘧抗寄生蟲等多種生物活性，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有很大的開發(fā)價(jià)值。但甘草查爾酮a是平面性強(qiáng)的分子，水溶性差，所以，通過合理、安全的結(jié)構(gòu)修飾來增強(qiáng)甘草查爾酮a的水溶性，開發(fā)天然產(chǎn)物甘草查爾酮a的更多生物活性成為亟待解決的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一類具有抗腫瘤活性的甘草查爾酮a二氫嘧啶類化合物及其合成方法。
本發(fā)明的實(shí)現(xiàn)過程如下：
結(jié)構(gòu)通式(i)所示的化合物，
其中：r為c1-c4的烷基，c1-c4的烷氧基，取代或未取代的苯基，取代或未取代的芐基、硝基；
所述的取代為單取代或多取代，取代基為：鹵素、c1-c4的烷氧基、氰基、三氟甲基、苯氧基。
結(jié)構(gòu)通式(i)所示的化合物的合成方法，以甘草查爾酮a、脲類化合物為原料，以有機(jī)堿為催化劑，在甲苯作為反應(yīng)溶劑的條件下進(jìn)行合成：
具體來說，包括如下步驟，
(1)向反應(yīng)器中按摩爾比為1:1～1:1.5加入甘草查爾酮a、脲類化合物，加入有機(jī)溶劑混合均勻，加入有機(jī)堿催化劑，80℃～120℃回流反應(yīng)3～8小時(shí)；
(2)將步驟(1)反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。
步驟(1)中所述的甘草查爾酮a與硫脲類化合物的摩爾比優(yōu)選為1:1～1:1.3，有機(jī)溶劑為甲苯或dmf，反應(yīng)溫度優(yōu)選為105℃～115℃，有機(jī)堿優(yōu)選為三乙胺。
嘧啶環(huán)是很多天然化合物和合成藥物中的核心結(jié)構(gòu)單元，作為雜環(huán)化合物中的一個(gè)重要分支，嘧啶類化合物因其具有高效、低毒，以及其環(huán)上取代基可以多方位的變換而在藥物領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用。將嘧啶環(huán)引入甘草查爾酮a的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，有望增強(qiáng)其生物活性，提高選擇性，具有重要的理論價(jià)值和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：原料環(huán)保，生產(chǎn)成本低，操作安全性高，反應(yīng)條件溫和，可實(shí)現(xiàn)反應(yīng)原料的充分利用，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，解決了現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)率低的問題，同時(shí)將嘧啶環(huán)引入到甘草查爾酮a的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，對探究該類化合物的生物活性與總結(jié)構(gòu)效關(guān)系具有重要的理論價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述。這些實(shí)施例僅是出于解釋說明的目的，而不限制本發(fā)明的范圍和實(shí)質(zhì)。
一類具抗腫瘤活性的甘草查爾酮a二氫嘧啶類化合物的合成方法包括如下步驟：
(1)向反應(yīng)器中按摩爾比為1:1～1:1.5加入甘草查爾酮a、脲類化合物，加入甲苯或dmf混合均勻，其中溶劑體積小于反應(yīng)器容積的2/3，加入有機(jī)堿催化劑三乙胺，置于磁力攪拌器上攪拌，加熱到80℃～120℃，回流反應(yīng)3～8小時(shí)；
(2)反應(yīng)過程中使用薄層色譜追蹤，及時(shí)監(jiān)測反應(yīng)的進(jìn)行程度，待原料反應(yīng)完全后停止加熱，撤去冷凝裝置；
(3)將步驟(2)反應(yīng)體系的固液混合物減壓濃縮后，柱層析分離提純，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物。
本發(fā)明部分優(yōu)選實(shí)施方案中的化合物結(jié)構(gòu)式如下所示：
實(shí)施例1
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-甲基-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(1)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和56.92mg1-甲基脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)3小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末113.41mg，總收率48.65％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：8.04(2h,d),7.03(1h,s),6.83(2h,d),6.48(1h,s),6.31(1h,m),5.31(2h,s),5.06-4.95(2h,m),5.03(1h,t),3.81(3h,s),3.51(3h,s),1.97-1.61(2h,m),1.56(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.3,161.3,156.6,155.4,154.2,147.7,133.4,129.2,125.7,116.2,110.6,101.5,56.6,53.2,40.6,39.2,35.6,28.3；ms(esi)for(m+h)+:395.2.
實(shí)施例2
1-芐基-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(2)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和115.39mg1-芐基脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)5小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末121.79mg，總收率43.79％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.89(2h,d),7.25-7.20(5h,m),6.98(1h,s),6.90(2h,d),6.47(1h,s),6.31(1h,m),5.41(2h,s),5.03-4.97(2h,m),4.94(1h,s),4.26(2h,s),3.87(3h,s),1.87-1.62(2h,m),1.53(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.6,161.8,156.5,155.3,154.0,147.4,136.6,133.5,129.2,128.6,127.6,125.4,116.2,110.6,101.8,56.6,51.5,50.4,41.2,39.5,28.3；ms(esi)for(m+h)+:471.2.
實(shí)施例3
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-苯基-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(3)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和104.61mg1-苯基脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末130.64mg，總收率48.42％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：7.94-7.85(4h,m),7.43(3h,t),6.93(1h,t),6.85(2h,d),6.47(1h,s),6.33(1h,m),5.37(2h,s),5.03-4.98(2h,m),4.94(1h,s),3.87(3h,s),1.95-1.63(2h,m),1.59(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.6,161.3,154.9,147.3,139.5,133.2,129.0,128.1,127.5,125.8,121.6,116.0,110.1,102.8,61.3,56.6,40.4,39.8,28.3；ms(esi)for(m+h)+:457.2.
實(shí)施例4
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(鄰甲苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(4)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和115.39mg1-(鄰甲苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)8小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末136.41mg，總收率49.05％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：7.89(2h,d),7.86(2h,t),7.25(1h,t),7.08(1h,t),6.95(1h,s),6.90(2h,d),6.47(1h,s),6.32(1h,m),5.39(2h,s),5.03-4.98(2h,m),4.94(1h,s),3.82(3h,s),2.17(3h,s),1.96-1.68(2h,m),1.50(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):164.7,161.3,155.4,154.8,147.7,136.6,134.3,133.5,130.7,129.2,125.5,121.6,118.4,116.3,110.9,101.8,61.9,56.4,40.1,28.6,17.5；ms(esi)for(m+h)+:471.2.
實(shí)施例5
1-(2-氟苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(5)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和118.43mg1-(2-氟苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到120℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末140.11mg，總收率49.96％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.25(5h,m),7.01(1h,t),6.98(2h,d),6.87(2h,d),6.41(1h,s),5.35(2h,s),5.00-4.98(2h,d),4.9(1h,t),3.83(3h,s),1.91-1.66(2h,m),1.69(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.2,162.8,160.8,154.9,153.7,148.8,133.2,129.1,128.0,125.2,125.2,123.6,121.6,115.9,110.3,101.8,61.7,56.4,40.8,39.4,28.4；ms(esi)for(m+h)+:475.2.
實(shí)施例6
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(2-甲氧基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(6)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和127.68mg1-(2-甲氧基苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到105℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末(141.72mg)，總收率49.28％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.84(2h,d),7.61(1h,d),7.11(2h,d),6.97(1h,t),6.86(1h,s),6.81(2h,d),6.46(1h,s),6.32(1h,m),5.40(2h,s),5.00-4.97(2h,m),4.92(1h,t),3.84(6h,s),1.97-1.68(2h,m),1.58(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):164.7,161.3,160.6,154.9,153.4,147.8,133.2,129.5,128.2,126.0,125.2,121.4,118.3116.4,112.8,110.3,103.8,61.6,55.9,40.4,39.8,28.3；ms(esi)for(m+h)+:487.2.
實(shí)施例7
1-(2-溴苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(7)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和165.23mg1-(2-溴苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到115℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末142.35mg，總收率44.98％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：7.86(2h,d),7.81(1h,d),7.65(1h,d),7.36(1h,t),7.11(1h,t),6.85(1h,s),6.78(2h,d),6.44(1h,s),6.30(1h,m),5.35(2h,s),5.04-4.98(2h,m),4.93(1h,m),3.89(3h,s),1.91-1.66(2h,m),1.57(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):164.6,161.5,154.9,153.7,148.8,140.9,133.2,131.8,129.5,128.3,125.2,122.6,121.6,116.0,110.9,103.8,60.6,56.5,40.9,39.9,28.2；ms(esi)for(m+h)+:535.1.
實(shí)施例8
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(間甲苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(8)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和115.39mg1-(間甲苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末147.88mg，總收率53.17％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.86(2h,d),7.76(1h,s),7.64(1h,d),7.31(1h,t),6.97(2h,m),6.84(2h,d),6.47(1h,s),6.32(1h,m),5.36(2h,s),5.08-4.98(2h,m),4.93(1h,t),3.82(3h,s),2.34(3h,s),1.96-1.62(2h,m),1.57(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.1,161.1,154.9,153.7,147.8,138.9,133.2,129.1,128.3,125.4,124.6,121.6,121.3,116.3,110.6,103.8,61.6,56.6,40.2,28.6,21.3；ms(esi)for(m+h)+:471.2.
實(shí)施例9
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-1-(3-羥基苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(9)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和116.90mg1-(3-羥基苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到80℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末147.31mg，總收率52.75％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：7.87(2h,d),7.35(2h,m),7.27(1h,t),6.96(1h,s),6.82(2h,d),6.71(1h,d),6.45(1h,s),6.32(1h,m),5.37(3h,s),5.04-4.98(2h,m),4.92(1h,t),3.85(3h,s),1.98(1h,m),1.57(6h,s),1.68(1h,m)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.1,161.4,158.7,154.9,153.7,147.8,141.6,133.2,130.3,129.1,128.3,125.2,121.6,120.3,116.3,114.6,110.9,106.3,101.8,61.5,56.6,40.2,28.2；ms(esi)for(m+h)+:473.2.
實(shí)施例10
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(3-(三氟甲基)苯基)-5，6-二氫嘧啶-2(1h)-酮10)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和156.85mg1-(3-(三氟甲基)苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末131.67mg，總收率42.47％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：8.34(1h,s),7.87(3h,d),7.38(2h,d),6.94(1h,s),6.83(2h,d),6.46(1h,s),6.32(1h,m),5.40(2h,s),5.05-4.95(2h,m),4.94(1h,t),3.85(3h,s),1.95-1.63(2h,m),1.54(6h,s)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.1,161.4,154.9,153.7,147.8,139.4,133.2,130.9,129.1,128.3,125.2,124.1,121.6,120.7,116.3,114.6,110.9,102.8,61.3,56.6,39.9,28.2；ms(esi)for(m+h)+:525.2.
實(shí)施例11
1-(4-氟苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(11)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和118.43mg1-(4-氟苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末129.11mg，總收率46.04％。
褐色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6):7.88(2h,d),7.74(2h,d),7.22(2h,t),6.95(1h,s),6.86(2h,d),6.46(1h,s),6.32(1h,m),5.37(2h,s),5.02-4.98(2h,m),4.92(1h,t),3.85(3h,s),1.93(1h,m),1.57(6h,s),1.68(1h,m)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):165.1,162.5,161.6,154.9,153.7,148.8,134.7,133.2,129.4,125.2,123.2,121.6,115.9,110.7,103.8,61.4,56.4,40.2,28.2；ms(esi)for(m+h)+:475.2.
實(shí)施例12
1-(4-氯苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(12)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和131.07mg1-(4-氯苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末140.22mg，總收率48.32％。
棕色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：7.83(2h,d),7.82(2h,d),7.47(2h,d),6.85(2h,d),6.41(1h,s),6.30(1h,m),5.34(3h,s),5.02-4.98(2h,m),4.92(1h,t),3.81(3h,s),1.95(1h,m),1.73(6h,s),1.57(1h,m)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):164.2,161.3,154.9,153.7,147.8,134.2,133.2,128.9,125.4,121.6,116.0,110.8,103.8,61.3,56.1,40.2,28.0；ms(esi)for(m+h)+:491.2.
實(shí)施例13
1-(4-氨基苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(13)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和116.15mg1-(4-氨基苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末139.67mg，總收率50.12％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：7.85(2h,d),7.05(2h,d),6.95(1h,s),6.85(2h,d),6.61(2h,d),6.41(1h,s),6.30(1h,m),6.27(2h,s),5.35(2h,s),5.00-4.98(2h,m),4.9(1h,t),3.83(3h,s),1.94(1h,m),1.63(6h,s),1.69(1h,m)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):164.2,161.3,154.9,153.7,149.0,144.2,133.4,132.2,129.0,127.7,125.4,121.8,116.4,110.9,104.0,61.3,56.6,40.2,28.3；ms(esi)for(m+h)+:472.2.
實(shí)施例14
6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-1-(4-甲氧基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(14)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和127.68mg1-(4-甲氧基苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末136.83mg，總收率47.58％。
棕黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：7.96(1h,d),7.82(2h,d),6.92(3h,m),6.86(2h,d),6.46(1h,s),6.31(1h,t),5.38(2h,s),5.03-4.98(2h,m),4.92(1h,t),3.85(3h,s),1.93(1h,m),1.63(6h,s),1.59(1h,m)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δppm):164.2,161.3,159.0,154.9,153.8,148.9,133.2,131.6,129.2,128.5,125.4,122.8,121.9,116.2,114.7,111.0,103.9,61.3,55.9,40.2,28.3；ms(esi)for(m+h)+:487.2.
實(shí)施例15
1-(2,4-二甲基苯基)-6-(4-羥基-2-甲氧基-5-(2-甲基丁-3-烯-2-基)苯基)-4-(4-羥基苯基)-5,6-二氫嘧啶-2(1h)-酮(15)的制備。
在反應(yīng)器中加入200mg甘草查爾酮a和126.16mg1-(2,4-二甲基苯基)脲，加50ml甲苯和5mldmf作反應(yīng)溶劑，加入0.5ml三乙胺作為催化劑，電熱套加熱到100℃，磁力攪拌回流反應(yīng)6小時(shí)。薄層色譜追蹤反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，減壓濃縮，柱層析，脫干得到棕色粉末(142.12mg)，總收率49.62％。
黃色結(jié)晶性粉末固體。1hnmr(400mhz,dmso-d6)：7.89(2h,d),7.61(2h,d),7.08(1h,s),7.01(1h,d),6.82(2h,d),6.46(1h,s),6.30(1h,m),5.35(2h,s),5.03-4.98(2h,m),4.9(1h,t),3.83(3h,s),2.34(3h,s),2.29(3h,s),1.91(1h,m),1.69(6h,s),1.66(1h,m)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ(ppm):164.2,161.0,154.9,153.5,148.9,143.6,134.2,133.2,131.3,129.3,128.3,126.4,125.1,121.7,116.1,111.0,104.0,61.6,55.9，40.2,28.3,21.9,17.3；ms(esi)for(m+h)+:485.2.
實(shí)施例16本發(fā)明化合物的抗腫瘤活性測試
對本發(fā)明的化合物進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn),試驗(yàn)方法采用常規(guī)的mtt法。
細(xì)胞株選用：人前列腺癌(pc-3)，人胃腺癌細(xì)胞(sgc-7901)，人肺癌細(xì)胞(a-549)。培養(yǎng)液為dmem+15％nbs+雙抗。
樣品液的配制：用dmso(merck)溶解后，加入pbs(-)配成的100μmol/l的溶液或者均勻的混懸液，然后用dmso的pbs(-)稀釋，最終濃度分別為0.1,1,10,20,40,60,80,100μmol/l。
將抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶(5-fu)以同樣的條件配成對照品溶液。
細(xì)胞培養(yǎng)：貼壁生長腫瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)于含10％滅活新生牛血清和青霉素、鏈霉素(各100萬u/l)的1640培養(yǎng)液中，置于37℃，5％co2，飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞貼壁生長，每2～3天傳代1次，傳代時(shí)首先倒出培養(yǎng)液，pbs洗2次，胰酶消化后，加入新鮮的培養(yǎng)液吹打均勻，調(diào)整細(xì)胞至適當(dāng)濃度移入新的培養(yǎng)瓶中，添加培養(yǎng)液至適量。取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
mtt法檢測細(xì)胞活性及ic50的測定：
實(shí)驗(yàn)原理：活細(xì)胞線粒體中脫氫酶能將黃色的mtt還原成不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物甲臜(mttformazan),并沉積在細(xì)胞中，生成的量與活細(xì)胞數(shù)目成正比，而死細(xì)胞沒有這種功能。dmso能溶解藍(lán)紫色結(jié)晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標(biāo)儀測定的光吸收值可反映細(xì)胞存活率。
實(shí)驗(yàn)方法：取對數(shù)生長期細(xì)胞，消化、計(jì)數(shù)，以3×105/ml的密度接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100μl。培養(yǎng)24小時(shí)后，將待測化合物以0.1,1,10,20,40,60,80,100μmol/l濃度處理細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，以含0.4％dmso的培養(yǎng)液作對照。藥物作用48小時(shí)后，去上清，每孔加入100μlmtt(2-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-3,5-二苯基-2h-四唑氫溴酸鹽)(1mg/ml)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，棄上清，每孔加入100μldmso，振蕩混勻，用酶標(biāo)儀在570nm處測定吸光度值，采用ic50計(jì)算軟件求出半數(shù)抑制濃度(ic50)。
試驗(yàn)結(jié)果詳見表1，其中，樣品是指相應(yīng)實(shí)施例中制備的甘草查爾酮a二氫嘧啶類衍生物，樣品編號對應(yīng)制備實(shí)施例中所得到的化合物的具體編號。
表1化合物對不同腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度ic50(單位：μmol/l)
表1結(jié)果顯示，化合物1-15在所測試的3種細(xì)胞株中均表現(xiàn)出了不同程度的抗腫瘤活性,其中化合物11、12和5的活性較好，對細(xì)胞呈現(xiàn)較強(qiáng)的抑制效果，在特定細(xì)胞株中抗腫瘤活性優(yōu)于或等同于5-氟尿嘧啶，對不同腫瘤細(xì)胞株具有明顯選擇性。綜上，本發(fā)明的甘草查爾酮a二氫嘧啶類衍生物可作為抗腫瘤候選藥物進(jìn)一步進(jìn)行臨床前研究，也可以做為抗腫瘤先導(dǎo)化合物進(jìn)一步研究。